Summary
Couramment utilisés, des méthodes très accessibles pour examiner la migration cellulaire et l'invasion in vitro sont décrits. La première méthode est la fermeture de la plaie dosage de cellules qui mesure la motilité cellulaire. La deuxième méthode est la migration et l'invasion essai transwell qui évalue la capacité chimiotactique et invasif des cellules.
Introduction
La motilité est une caractéristique essentielle de cellules vivantes. La migration cellulaire est impliquée dans la conception de la vie, le développement embryonnaire, la réponse immunitaire, et de nombreux processus pathologiques, tels que les métastases du cancer et l'inflammation 9.1. Par conséquent, les méthodes pour étudier le comportement migratoire cellule sont des outils de recherche très utiles pour un large éventail de disciplines en sciences biomédicales, biologie, bio-ingénierie, et des domaines connexes.
L'étude de la migration cellulaire dans la recherche sur le cancer est d'un intérêt particulier comme la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer est lié à la progression métastatique. Pour le cancer de se propager et diffuser dans tout le corps, les cellules cancéreuses doivent migrer et envahir par la matrice extracellulaire (ECM), intravasate dans la circulation sanguine, attacher à un site distant, et enfin s'extravaser pour former foyers distants 1,10-12. Diverses méthodes biologiques peuvent être utilisés pour étudier ces événements en détail. La culture cellulaire enroulé une fermetured la migration transwell et d'invasion des essais sont largement utilisés dans la communauté scientifique 1,10. Ces tests peuvent fournir les données nécessaires pouvant permettre une compréhension de la façon dont un type cellulaire particulier peut spontanément migrer ou répondre à une chimio-attractif et directionnelle migrer vers elle. Plusieurs phénotypes migratoires ont été décrits. Les cellules peuvent migrer dans une forme de cellule unique tel que vu dans mésenchymateuses ou mouvement amiboïde comme ou par le mouvement multicellulaire marqué la migration ou de la cellule collective streaming 13. Procédé de mouvement utilisée dans les cellules mobiles peut être facilement observée à l'aide de la culture cellulaire essai de fermeture de plaie.
Parmi les nombreuses façons d'étudier la migration cellulaire, l'essai de fermeture de plaie de la cellule est l'un des plus simples. Cette méthode est utile pour déterminer la capacité de migration des masses de cellules entières. Lorsque franchi une nouvelle étape, il peut être utilisé pour observer les caractéristiques morphologiques de cellules individuelles pendant la migration 14. Suite à l'analyse de la fermeture de la plaie de nombreux phénotypes peuvent être révélés. Mesure de la distance fermé au fil du temps lorsque l'on compare à un contrôle peut révéler des changements de migration spécifiques ou un phénotype migratoire avec facultés affaiblies qui était inconnu auparavant. En outre, seule la formation de lamellipode cellulaire, la queue rentrée, et le mouvement directionnel peuvent donner des indices pour ce qui peut être altérée ou renforcée dans les cellules d'intérêt 14.
La migration des dosages transwell et d'invasion peuvent être utilisées pour analyser la capacité des cellules à répondre de manière directionnelle simples à divers chimio-attractants si elles sont des chimiokines, des facteurs de croissance, des lipides, ou des nucléotides 4,5,8,15,16. On peut également évaluer la capacité migratoire différentielle due à la surexpression d'un récepteur de 1,14. Ces dosages peuvent également être utilisées pour identifier et caractériser les régulateurs clés de la migration cellulaire, tels que la famille Rho des petites GTPases 2. Suite à ces court et facilement accessibles essais, le mode de la migration cellulaire et la capacité d'une cellule à envahir en une matrice 3-D peuvent également être déterminées.
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Protocol
1. Culture cellulaire fermeture de la plaie Assay
- Détacher les cellules de la plaque de culture de tissu en utilisant 0,25% de solution de trypsine-EDTA. cellules à granules dans un tube conique de 15 ml par centrifugation, aspirer le surnageant et les cellules dans un milieu de culture re-suspension. Plate le nombre approprié de cellules dans une plaque à 6 puits à 100% de confluence dans les 24 heures.
Remarque: Les essais peuvent être nécessaires pour déterminer le moment et le nombre de cellules d'atteindre 100% de confluence en raison du type de cellule et de la taille de l'être bien utilisée (par exemple, 1 x 10 6 cellules B16F10 de mélanomes sont ensemencées dans un puits d'une plaque à 6 puits 24 heures avant la génération de la plaie). En variante, des plaques à 12 puits ou à 24 puits peuvent être utilisées.
Remarque: Si possible, les cellules peuvent être ensemencées dans une culture-insertion (à partir LLC ibidi) sur un tissu plaque de culture traité faisant la plaie pré-coulé. Une culture-Insert peut protéger la surface de la plaque de culture de tissu des dommages causés par l'embout de pipette. Si une culture-Insérer permet pas omettre le1.2. - Dans un environnement stérile (généralement une hotte de sécurité biologique), utilisez une pointe de pipette 200 ul d'appuyer fermement contre le haut de la plaque de culture de tissus et de faire rapidement une plaie verticale à travers la monocouche cellulaire. Un embout de pipette de taille différente peut être utilisée pour rendre la taille de la plaie que l'on souhaite. Ne pas utiliser une force excessive contre la plaque de culture de tissu avec la pointe de la pipette, cela pourrait endommager la surface. Si la plaie est pré-coulé, cette étape peut être omise.
- Aspirer délicatement les médias et les débris cellulaires. Lentement, ajouter suffisamment de milieux de culture contre la paroi du puits pour couvrir le fond du puits et éviter détacher des cellules supplémentaires. Suite à la génération et à l'inspection de la plaie une image initiale doit être prise. Placer la plaque de culture tissulaire dans un incubateur réglé à la température appropriée et la concentration de CO 2 (typiquement 37 ° C et 5% CO 2).
- À plusieurs moments, par exemple toutes les 3 heures, retirer la plaque du incubatou et le placer sous un microscope inversé pour prendre une photo de l'instantané et de vérifier la fermeture de la plaie. Si la microscopie time-lapse est disponible, prendre une photo tous les X minutes (généralement à partir de toutes les 5 minutes) pour une durée de temps dans une température et CO 2 chambre contrôlée. Selon le type cellulaire, le temps de fermeture de plaie peut varier.
- Pour analyser les résultats de l'instantané des photos, mesurer la distance d'un côté de la plaie à l'autre en utilisant une barre d'échelle. Analyser et bien présents fermeture de la plaie au cours du temps en utilisant un nuage de points ou graphique à barres, par exemple, la figure 1.
- Pour analyser les photos time-lapse, importer les photos dans le logiciel ImageJ (disponible gratuitement à http://rsb.info.nih.gov/ij/) à faire une vidéo. Pour ce faire, ImageJ ouvert, cliquez sur Fichier, Importer, et une séquence d'images. Trouver le fichier avec des images; cliquez sur la première photo dans le fichier. Enregistrement de vidéos en sélectionnant Fichier, Enregistrer sous, et AVI. Cellules migrantes simples peuvent être observés à characterize mouvement directionnel. En outre, les caractéristiques morphologiques telles que la formation de lamellipodes et bord de fuite de rétraction peuvent être étudiées ainsi (Figure 2 et vidéo supplémentaire).
2. Transwell migration cellulaire et l'invasion de dosage
- Dans un environnement stérile (typiquement une hotte de biosécurité) détacher les cellules de la plaque de culture de tissu en utilisant un tampon non-enzymatique de dissociation de cellules ou de 0,25% de solution de trypsine-EDTA, un culot de cellules par centrifugation, et aspirer le support existant en laissant le culot cellulaire. Re-suspendre les cellules dans des milieux de culture cellulaire sans sérum contenant 0,1% de BSA (albumine de sérum bovin).
Remarque: En fonction de la lignée cellulaire étant étudiée 0,25% de trypsine-EDTA peut influer sur la migration et l'invasion cellulaire en raison de la coupure de différents récepteurs sur la surface de la cellule 17.
Note: Le nombre de cellules par ml dépend de la taille des cellules. D'autres tests peuvent être nécessaires pour trouver une densité de semis que proVides les meilleurs résultats. Typiquement 1 x 10 6 cellules / ml est un bon point de départ pour la plupart des types de cellules en utilisant la 24 puits TRANSWELL insérer. Il existe une gamme de transwell tailles de plaquettes et le nombre de cellules ajoutées doit être ajustée en conséquence. - Plaque 100 pl de solution de cellules sur le dessus de la membrane filtrante dans un insert Transwell et incuber pendant 10 minutes à 37 ° C et 5% de CO2 pour permettre aux cellules de se déposer vers le bas.
Remarque: La taille des pores particulière de la membrane Transwell utilisée dépend de la taille individuelle des cellules dans l'échantillon. Par exemple, si les cellules sont trop petites, elles peuvent passer à travers les pores sans la nécessité de faciliter la migration ou s'ils sont trop gros, ils peuvent ne rentre pas par les pores. Il existe plusieurs inserts Transwell avec des tailles de pores allant de 3 um, 5 pm et 8 pm pour des essais de migration cellulaire. Les inserts Transwell sont disponibles commercialement auprès des sociétés telles que Corning.
Remarque: Le transwell mdosage de igrations peut être facilement modifié pour réaliser le dosage de l'invasion cellulaire. Pour ce faire, ajoutez la matrice extracellulaire (ECM) des matériaux sur le dessus de la membrane transwell puis ajouter les cellules au-dessus de l'ECM. Par exemple, le Matrigel est décongelé sur de la glace et liquéfié, puis de 30 à 50 ul de Matrigel est ajouté à un 24 puits transwell insérer et solidifié dans un incubateur à 37 ° C pendant 15 à 30 minutes pour former une couche mince de gel. Cell solution est ajoutée sur le dessus de la couche de Matrigel pour simuler invasion à travers la matrice extracellulaire.
Remarque: Il ya des différences entre la migration des cellules transwell et les essais d'invasion de cellules transwell. La détermination de la migration cellulaire Transwell mesure la capacité chimiotactique des cellules vers un chimio-attractant. Le dosage de l'invasion de cellules Transwell, cependant, mesure à la fois la chimiotaxie de cellules et l'invasion des cellules à travers la matrice extracellulaire, un processus qui se trouve couramment dans les métastases du cancer ou du développement embryonnaire. - Avec une pipette, très atmosully ajouter 600 ul de la chimio-attractant souhaitée dans le fond de la chambre inférieure dans une plaque à 24 puits. Ajouter la chimio-attractif sans déplacer l'insert transwell et éviter de générer des bulles. Assurez-vous que le liquide de chimio-attractant dans le fond du puits est en contact avec la membrane dans le puits supérieur afin de former un gradient chimiotactique. Le temps d'incubation dépend du type de cellule et la chimio-attractant est utilisé.
Note: D'autres essais peuvent être nécessaires pour déterminer la période d'incubation.
Remarque: Pour les cellules adhérentes, les cellules ayant migré se fixer sur l'autre côté de la membrane 1,8. La quantification des cellules ayant migré peut être effectuée en suivant les étapes 2.4 à 2.8 (2.4 à 2.8 étapes n'ont pas besoin d'être exécuté dans un environnement stérile). Pour les cellules non-adhérentes, les cellules ayant migré vont baisser dans les médias à la chambre basse. Le nombre de cellules ayant migré peut être compté en utilisant un hémocytomètre ou cytomètre en flux 5. - Retirez le cache du transwell de la plaque. Utilisez un coton-tige autant de fois que nécessaire pour retirer soigneusement les médias et les cellules restantes qui n'ont pas migré à partir du haut de la membrane sans l'endommager.
- Ajouter 600-1,000 ul d'éthanol à 70% dans un puits d'une plaque de 24 puits. Placer l'insert Transwell dans l'éthanol à 70% pendant 10 minutes pour permettre la fixation des cellules. Retirer transwell insert de la plaque de 24 puits et utiliser un coton-tige pour enlever le reste d'éthanol à partir du haut de la membrane. Laisser la membrane transwell sécher (en général 10-15 minutes).
- Ajouter 600-1,000 ul de 0,2% de cristal violet dans un puits d'une plaque à 24 puits et la position de la membrane en elle pour la coloration. Incuber à température ambiante pendant 5 à 10 minutes.
- Retirez délicatement le cristal violet du haut de la membrane avec une pointe de pipette ou coton applicateur incliné. Très soigneusement, pour éviter de rincer les cellules fixes, tremper la membrane dans de l'eau distillée autant de fois que nécessaire pour éliminer les cristaux viole excèst. Laisser la membrane transwell sécher.
- Vue sous un microscope inversé et compter le nombre de cellules dans les différents champs de vision pour obtenir une somme moyenne de cellules qui ont migré à travers la membrane vers le chimio-attractant et fixés sur la face inférieure de la membrane (Figure 3).
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Representative Results
L'essai de fermeture de plaie et la détermination de la migration cellulaire Transwell présentées ici ont été effectuées en utilisant des cellules de souris B16F10 de mélanome comme un système modèle. Dans l'essai de fermeture de plaie, B16F10 cellules ont été ensemencées dans une plaque de culture tissulaire à 6 puits et cultivées jusqu'à 100% de confluence dans les 24 heures. Une plaie d'environ 700 um de large a été générée à l'aide d'une pointe de pipette et la fermeture de la plaie (migration cellulaire) a été enregistré en utilisant la microscopie time-lapse. Alternativement, fermeture de la plaie peut également être étudiée en prenant des photos instantanés à différents points dans le temps si la microscopie time-lapse n'est pas disponible 1. Quatre photos de la série time-lapse à 0, 4, 8, et les points de temps de 12 heures sont présentés dans la figure 1. Basé sur la largeur de la plaie, nous avons calculé la distance de migration et de la vitesse de la migration cellulaire à 40.42 pm / h (figure 1B). Les photos time-lapse ont également été assemblés dans une vidéo à l'aide du programme ImageJ (voir vidéo supplémentaire). Thprocessus de migration cellulaire dynamique e pourrait être étudiée. Comme le montre la figure 2, la morphologie des cellules migrant avec lamellipodes (bord d'attaque) et les queues (bord de fuite) ont été clairement observée.
Dans le dosage de migration cellulaire Transwell, inserts de 24 puits de Corning ont été utilisés. Des cellules de mélanome B16F10 ont été remises en suspension à la concentration de 1 x 10 6 cellules / ml dans le tampon de migration constitué de milieu DMEM et 0,1% de BSA sans sérum. Les milieux conditionnés provenant de cellules de fibroblastes NIH3T3 cultivées dans du milieu DMEM contenant 10% de sérum de veau fœtal a été utilisé comme la chimio-attractif. 100 ul de cellules B16F10 ont été ajoutés au sommet de la membrane Transwell dans la chambre supérieure et de 600 ul de chimio-attractant a été ajouté à la chambre inférieure ou le même volume de tampon de migration ajoutés en tant que témoin négatif. La migration cellulaire a été effectué comme décrit dans la procédure. Le nombre de cellules ayant migré peut être quantifiée par comptage sous un microscope ou dans l'photos prises (figure 3B). Comme le montre la figure 3, il y avait une augmentation de 15 fois dans les cellules qui migrent vers le chimio-attractant par rapport au tampon de migration de commande (Figure 3C). Le dosage de transwell examine chimiotactisme cellulaire, la migration cellulaire directionnelle vers chimio-attractif.
Figure 1. B16F10 cellules de mélanome fermeture de la plaie essai. (A) pendant une 16 heure de fermeture de la plaie dosage photos ont été prises toutes les 5 minutes en utilisant un microscope time-lapse. Des images représentatives de 0, 4, 8 et 12 heures sont indiqués et les barres d'échelle (400 pm) sont ajoutés pour la mesure de la largeur de la plaie. (B) la distance de la plaie a été mesurée en microns. Un nuage de points a été utilisé pour afficher la largeur de la plaie au cours du temps et le taux de fermeture de la plaie a été calculé. Pour gèneévaluer la valeur de r 2, une régression linéaire a été effectuée sur les données de largeur de la plaie en utilisant le logiciel GraphPad Prism (version 5.0, GraphPad Software, Inc.). S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 2. Morphologie de la migration des cellules B16F10 de la microscopie time-lapse de l'essai de fermeture de la plaie. Pendant un 16-heures de fermeture de la plaie dosage photos ont été prises toutes les 5 minutes. Toutes les images ont été assemblées en une vidéo à l'aide du programme ImageJ (5 images / seconde). La migration cellulaire impliquant polarisation cellulaire, extension de lamellipodes, et le bord de fuite de rétraction a été observée. Photos de 34,6, 36,6 points de, et de 38,6 secondes le temps de la vidéo ont été présentés (heure de vidéo correspondant à la durée de la migration time-lapse réelle (h: min: sec) 34,6 secondes, 14:20:00; 36,6 secondes, 15:10:00; et 38,6 secondes, 16:00:00, respectivement). Barre d'échelle 50 um. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 3. Transwell dosage de la migration des cellules de mélanome B16F10. (A) Un schéma de l'appareil d'insert Transwell utilisé pour mesurer la migration cellulaire et l'invasion. (B) des images représentatives de B16F10 migration cellulaire Transwell. tampon de migration cellulaire et NIH3T3 milieu conditionné de cellules ont été ajoutés à la chambre inférieure en tant que contrôle négatif et le chimio-attractant, respectivement. Après la migration des cellules et coloration au cristal violet comme décrit dans la procédure, des photos des cellules ayant migré (de teinté violet) ont été prises avec un MICRoscope avec un objectif 10x (100x de grossissement total). Pores des membranes peuvent aussi être observés comme les nombreuses petites, rondes et sombres points de couleur dans l'image. (C) Quantification des cellules qui migrent vers le tampon de migration ou chimio-attractif (moyenne des 5 champs d'image à 100x de grossissement total). S'il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Complémentaire vidéo. Time-lapse vidéo d'un test de fermeture de plaie de cellules de mélanome B16F10. Les photos ont été prises toutes les 5 minutes pendant 16 heures pour générer les images 193. Toutes les images ont été assemblées en une vidéo à l'aide du programme ImageJ (5 images / seconde). Voir le "Supplementary_Video_JOVE.avi" dossier complémentaire sous Téléchargements.
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Discussion
La migration cellulaire est un aspect important d'étudier en recherche sur le cancer et il peut également être appliquée à des études de guérison de développement, immunologiques et la plaie. La culture cellulaire enroulé essai de fermeture et la migration des cellules transwell et invasion tests révèlent des informations détaillées sur les comportements migratoires des cellules et peut être utilisée pour étudier les mécanismes moléculaires de la migration des cellules 1,2,10,14. Notre étude a utilisé ces tests de motilité cellulaire pour déterminer les capacités d'une lignée de cellules de mélanome B16F10 vitesse de migration et d'invasion.
L'essai de fermeture de plaie de la cellule porte sur la capacité d'une lignée cellulaire particulière de migrer et ensuite fermer une plaie faite d'une plaque de cellules confluentes. Ce test est très accessible pour les groupes avec un équipement de base et par rapport aux méthodes existantes est un moyen simple de mesurer la migration cellulaire. Une certaine variation dans le dosage de fermeture de plaie peut être trouvée dans les groupes de traitement individuels, mais il existe plusieurs étapes qui may être prises pour aider à diminuer il. Une méthode potentiel pour réduire la variation est à l'assiette de chaque échantillon avec le même nombre de cellules pour atteindre la confluence synchrone et maintenir l'état de cellule saine au début de chaque expérience. Plusieurs essais d'expériences de culture cellulaire peuvent être nécessaires pour déterminer le nombre exact de placage qui est nécessaire pour atteindre la confluence invariable et l'état des cellules saines dans des échantillons indépendants. En outre, l'augmentation de la taille de l'échantillon permettra également de réduire la variation. Pour les lignées cellulaires migrateurs lents qui nécessitent plus de 24 heures de temps d'incubation d'observer une migration importante, il est commode d'utiliser aphidicoline ou un autre inhibiteur de la prolifération pour prévenir nombre de cellules des changements qui pourraient influer sur le résultat de l'analyse.
Après avoir maîtrisé la possibilité d'étudier la vitesse de migration des cellules en utilisant le test de fermeture de la plaie de la cellule, une évaluation détaillée des comportements migratoires de cellules individuelles peuvent également être remplie 14. En outre, suite à une wound cellules d'essai de fermeture peuvent être fixés et diverses protéines impliquées dans la structure du cytosquelette et de la dynamique peuvent être considérés et évalués en utilisant l'immunocytochimie 2. Cette analyse peut conduire à des altérations biochimiques détaillées précédemment inconnus. Le dosage de la fermeture de la plaie de la cellule est également prête très bien à temps réel imagerie des cellules vivantes pour étudier la dynamique de migration en utilisant time-lapse de microscopie par fluorescence. Par exemple, l'actine-GFP, la tubuline-GFP, et des protéines de fusion GFP-paxillin peuvent être exprimés dans des cellules vivantes pour afficher la localisation des protéines à différents points dans le temps dans la migration cellulaire ou 18,19 adhérence. Certaines limitations de l'essai de fermeture de plaie qui comprennent, par exemple, il ne convient pas pour les cellules non adhérentes et ne mesure pas le chimiotactisme de cellules. De plus, certaines lignées de cellules ont tendance à se détacher de la plaque immédiatement après la blessure est faite (par exemple des cellules HEK293T). Pour les lignées cellulaires, il est préférable d'utiliser des plaques de la plaie pré-moulées ou la transwell test de migration décrit ci-dessous.
La migration des cellules transwell et le dosage de l'invasion fournit une analyse approfondie de la capacité des cellules à détecter une chimio-attractif particulier et migrer à travers une barrière physique à son égard. Ce test peut être en outre utilisé pour étudier l'invasion des cellules par addition d'une couche de matrice extracellulaire ou d'une couche de cellules endotheliales sur le dessus de la membrane Transwell pour imiter le processus d'invasion et de l'extravasation de 1,10 ECM. En outre, suite à l'invasion à travers le Matrigel, une coloration immunologique des protéines du cytosquelette, en combinaison avec la microscopie de fluorescence peut être utile pour l'étude morphologique lors de l'invasion 3-D. Une limitation de l'utilisation de l'analyse de l'invasion des cellules transwell est que les données time-lapse de l'invasion des cellules est difficile à atteindre avec la microscopie conventionnelle et vivre imagerie cellulaire de ce processus est complexe.
Pour obtenir des résultats précis, il ya plusieurs étapes essentielles au cours de la transwell migration cellulaire et d'invasion des dosages qui sont d'importance. Tout d'abord, étant donné que la vitesse de migration des cellules peut varier largement entre différents types cellulaires de plusieurs expériences préliminaires doivent être effectuées à adopter un laps de temps de migration spécifique qui sera utilisé dans la procédure. Deuxièmement, la chimio-attractif doit également être applicable au type de cellule d'intérêt. Une large gamme de chimio-attractants doit être examiné dans des expériences précédentes, avant la mesure de la migration finale et la capacité d'invasion d'un type de cellule particulier. Moyen fibroblastes conditionné est couramment utilisé comme un chimio-attractif fort pour une large gamme de types de cellules. Si un seul chimio-attractif purifiée est utilisée s'assurer que les récepteurs de la chimio-attractif sont exprimés dans le type cellulaire d'intérêt. Enfin, pour le dosage de l'invasion des cellules s'assurer que le revêtement de Matrigel ou une autre matrice extracellulaire est homogène de manière à minimiser la variation expérimentale. En conclusion, bien qu'il existe certaines limites, le trèsessais de migration de cellules accessibles décrites ici sont utiles pour un large éventail d'études biologiques.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) | Gibco | 11995-073 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gemini | 100106 | |
| Bovine serum albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A4503-50G | |
| Trypsin EDTA 0.25% | Gibco | 25200-056 | |
| Dulbecco’s phosphate buffered saline (DPBS) | Gibco | 14190-250 | |
| Crystal violet | Sigma | C0775-100G | Dissolved in water at 0.2% |
| Cell disassociation buffer | Gibco | 13151-014 | |
| Cell culture incubator | Thermo Fisher Scientific | Model # 3145 | |
| SterilGARD biosafety hood | The Baker Company, Inc. | Model # VBM-600 | |
| EVOS Fl inverted microscope | Thermo Fisher Scientific | Model # AMF-4302-US | |
| Tissue culture plate | Becton Dickinson | 353046 | Catalog number varies depending on the type of culture plate |
| Corning Transwell insert | Fisher | 07-200-150 | Catalog number varies depending on the pore size of the membrane |
References
- Castellone, R. D., Leffler, N. R., Dong, L., Yang, L. V. Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor. Cancer Lett. 312 (2), 197-208 (2011).
- Hall, A. The cytoskeleton and cancer. Cancer Metastasis Rev. 28, (2009).
- Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. Cell migration: a physically integrated molecular process. Cell. 84 (3), 359-369 (1996).
- Peter, C., et al. Migration to apoptotic "find-me" signals is mediated via the phagocyte receptor G2A. J. Biol. Chem. 283 (9), 5296-5305 (2008).
- Radu, C. G., Yang, L. V., Riedinger, M., Au, M., Witte, O. N. T cell chemotaxis to lysophosphatidylcholine through the G2A receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101 (1), 245-250 (2004).
- Buul, J. D., Hordijk, P. L. Signaling in leukocyte transendothelial migration. Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. (5), 824-833 (2004).
- Yang, L. V., Heng, H. H., Wan, J., Southwood, C. M., Gow, A., Li, L. Alternative promoters and polyadenylation regulate tissue-specific expression of Hemogen isoforms during hematopoiesis and spermatogenesis. 228 (4), 606-616 (2003).
- Yang, L. V., Radu, C. G., Wang, L., Riedinger, M., Witte, O. N. Gi-independent macrophage chemotaxis to lysophosphatidylcholine via the immunoregulatory GPCR G2A. Blood. 105 (3), 1127-1134 (2005).
- Yoshida, M., Yoshida, K. Sperm chemotaxis and regulation of flagellar movement by Ca2+. Mol. Hum. Reprod. 17 (8), 457-465 (2011).
- Albini, A. Tumor and endothelial cell invasion of basement membranes. The matrigel chemoinvasion assay as a tool for dissecting molecular mechanisms. Pathol. Oncol. Res. 4 (3), 230-241 (1998).
- Fidler, I. J. Critical determinants of metastasis. Semin. Cancer Biol. 12 (2), 89-96 (2002).
- Steeg, P. S. Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nat. Med. 12 (8), 895-904 (2006).
- Roussos, E. T., Condeelis, J. S., Patsialou, A. Chemotaxis in cancer. Nat. Rev. Cancer. 11 (8), 573-587 (2011).
- Zhang, Y., et al. Comparative study of 3D morphology and functions on genetically engineered mouse melanoma cells. Integr. Biol. (Camb. 4 (11), 1428-1436 (2012).
- Junger, W. G. Purinergic regulation of neutrophil chemotaxis. Cell. Mol. Life Sci. 65 (16), 2528-2540 (2008).
- Lazennec, G., Richmond, A. Chemokines and chemokine receptors: new insights into cancer-related inflammation. Trends Mol. Med. 16 (3), 133-144 (2010).
- Huang, H. L., et al. Trypsin-induced proteome alteration during cell subculture in mammalian cells. J. Biomed. Sci. 17, (2010).
- Cortesio, C. L., Boateng, L. R., Piazza, T. M., Bennin, D. A., Huttenlocher, A. Calpain-mediated proteolysis of paxillin negatively regulates focal adhesion dynamics and cell migration. J. Biol. Chem. 286 (12), 9998-10006 (2011).
- Wehrle-Haller, B., Imhof, B. A. Actin microtubules and focal adhesion dynamics during cell migration. Int. J. Biochem. Cell Biol. 35 (1), 39-50 (2003).
