Abstract
Böcekler sağkalım (örneğin, gıda, arkadaşları, tehditler) için önemli olaylar ile bu uyaranlara ilişkilendirerek deneyim yoluyla uyaranlara verdikleri tepkileri değiştirmek. Bir böcek belirgin dernekler öğrenir ve bu olaylar onları ilgilidir hangi aracılığıyla çeşitli davranışsal mekanizmalar vardır. Bu tarım için faydalı olan böceklerin yardımcı doğru amaçlayan programları için bu davranış plastisiteyi anlamak önemlidir. Bu anlayış, ayrıca hastalık ve zararlılara vektörleri olarak hareket böcekler tarafından oluşturulan biyomedikal ve tarımsal sorunlara çözüm keşfetmek için kullanılabilir. Burnumun Extension Tepki (PER) Klima protokolü onlar nasıl algıladıklarını incelemek ve nektar ve polen Kaynaklar hayatta kalmak için bir koloni ihtiyaçlarını işaret çiçek kokuları, öğrenmek için 50 yıl önce bal arılarının (Apis mellifera) için geliştirilmiştir. BAŞINA işlem birkaç farklı ekolojik ilgili mekanizmalrın incelemek için sağlam ve kolay istihdam çerçeve sağlardavranışsal plastisite thyroxine. Bu çeşitli diğer böcek türleri ve diğer davranış refleksleri ile kullanım için kolayca adapte edilebilir. Bu protokoller, hali hazırda, ya da hedef nöromodülatör yolları değiştirmek için ya da bio elektrofizyoloji vasıtasıyla MSS nöral aktivitesinin izlenmesi için çeşitli araçlar ile bağlantılı olarak kullanılabilir. Hızla çevresel stres, toksinler veya böcek ilaçları kaynaklanan davranış sub-öldürücü etkilerini tespit etmek için sağlam bir testtir.
Biz PER protokol iki prosedürlerini kullanarak uygulamak için basit olduğunu göstermek. Bir öğrenci veya deneysel bir tedavi etkisi çabuk deneyleri için bir laboratuvar egzersiz olarak uygundur. Diğer davranış şartlandırma çalışmaları için önemli olan değişkenlerin daha ayrıntılı bir kontrol sağlar. Biz hypothese test etmek için kullanılabilir ikili evet / hayır gecikme ve hortum uzatma süresi gibi daha sürekli değişken arasında değişen davranışsal yanıt için nasıl çeşitli tedbirler göstermeks. Ve, biz ilk kez yordamı kullandığınızda araştırmacılar sıklıkla karşılaştıkları bazı tuzaklar tartışmak.
Introduction
Birçok böcekler, ekolojik ilgili uyaranlara hakkında bilgi ve daha sonra kendi ortamında yeni akıllı ilişkilere uyum amacıyla bu uyaranlara kendi davranışsal tepkileri değiştirmek. Birçok farklı mekanizmalar bu davranışsal plastisite altında yatan (örneğin, nonassociative, çağrışımlı / Pavlovyan ve edimsel / 1 enstrümantal). Plastisite Bu tür uyaranlar veya davranışlar gibi gıda geçtiği, bir arkadaşı ya da tehlike gibi önemli olaylar ile ilişkili nasıl farklıdır. Plastisite bu formları anlamak sinir sistemi yeni anılar 2 kodlamak için nasıl değiştirdiği, temel araştırma için çok önemlidir. Bu bitkisel üretim (bal arıları) ya da zararlıları gibi, ya da tarım açısından önemli olan önemli bir hastalığın vektörleri (örneğin, Çeçe ve sivrisinek) ve böcekler böceklerin adaptif davranışlarını anlamak için önemlidir.
Herhangi Deriden davranışsal plastisite incelenmesiark alanında 1 başarılamayabilir olan değişken bir dizi deney üstü bir kontrol düzeyi gerektirir. Daha kontrollü şartlar altında kullanılabilir, ancak yine de doğal koşullar altında davranışı için önemli olan sağlam bir klima protokol geliştirilmesini gerektirmektedir. Bal arısı (Apis mellifera) davranışsal plastisite 3,4 kontrollü analizler gerçekleştirmek için bir protokol geliştirmek için nasıl bir mükemmel bir model. Bal arılarında Hortum Uzatma Yanıt (PER) bal arısı bir şeker çözeltisi ile antennal uyarılmaya karşılık olarak proboscis uzandığı doğal bir davranış refleks. Bal arısı çiçekte nektar bulduğunda, normal toplayıcı davranış sırasında, BAŞINA oluşur. Neyse ki, bal arıları kolaylıkla laboratuvarda bu basit ve kolayca ölçülebilir davranışı sergiler. Bu kontrollü bir ortamda, çalışma mümkün kılar, bu ekolojik ilgili davranışlarını 5 etkileyen mekanizmaları. BAŞINA can da plastikliğini 6 altında yatan davranışsal ve nöral mekanizmaları ortaya çıkarmak için tasarlanmış değişik tedavi koşulları altında uyaran algılama ve öğrenme ve hafıza araştırmak için bir klima protokol dahilinde kullanılacaktır.
Kuwabara 7 tarafından ilk çalışmalardan beri, BAŞINA klima yaygın nonassociative, birleşmeli ve bal arıları 8 davranışsal plastisite altında yatan edimsel mekanizmaları ortaya çıkarmak için kullanılır olmuştur. Bu mekanizmalar arasındaki serbest bal arılarının 9 çalışmalarda gösterilen ile aynıdır. Özgürce uçan bal arılarının çalışmaların aksine, BAŞINA klima protokoller elektrofizyoloji 10,11 veya beynin canlı hücre floresan görüntüleme 12-14 ile birleştiğinde olabilir. Ayrıca, PER protokolleri, Neur gibi ağın belirli bileşenlerinin rolleri hakkında hipotezleri test etmek için farmakolojik veya moleküler genetik tedaviler aracılığıyla nöral yolları deneysel manipülasyon için izinomodulators 15,16. BAŞINA protokolleri de çevre koşullarının yanı sıra sağlık üzerine toksinlerin ve bal arılarının 17 toplayıcı verimlilik öldürücü etkilerini değerlendirmek için önemli bir yol sağladı.
Bu prosedür paralel iki koku teslim yöntem açıklanır. Yöntem 1 koku ve sakaroz ödül sunmak için ucuz ve teknik olarak basit bir yöntem sağlar koku ve koşulsuz uyarıcı (sakaroz) teslim bir sürümüdür. Bu yöntem, temel eğitim için iyi ve otomasyon mümkün olmadığında. Bu bir sınıf ya da öğretim laboratuara bu tekniği tanıtmak için mükemmel bir yoldur. Daha zor görevler ve koku algı, öğrenme, ya da hafıza birleştiğinde fizyolojik değerlendirmelerini içeren deneyleri için klima sırasında, doğru ve kesin uyaranların başlangıcı, süresi teslimat zamanlaması düzenleyen çok önemlidir. En güvenilir uyaran sağlanması için, koku teslim a otomatik bir araç kullanımınd ödül doğum hassas bir yöntem. Yöntem 2 koku teslimatı ve daha hassas sakaroz teslim otomatik çalışmaktadır. Bu teknik daha sofistike ve Yöntem 1 den ilk kurulum için daha fazlasını gerektirir, ancak önemli ölçüde klima için kullanılan uyarıların zamanlaması ve miktarının tutarlılığını artırır ve mümkün olduğunca kullanılmalıdır.
Protocol
1. Koku (Koşullu uyarıcı) Kartuş Kurulum
- Kondisyonlama denemeler için gerekli tüm farklı kokulara deney kurulumu çok koku kartuşu başında.
- Koku seyreltme ve koku kartuşu hazırlanması için bir davlumbaz kullanın. Kokular laboratuvara genelinde hızla yayıldı ve potansiyel klima önce koku bal arıları gösterecektir beri bu davlumbaz dışında kokuların asla açık şişe,. Koku kartuşlarını kurarken Ayrıca, eldiven giymek ve onları tutarken kokulara bal arıları maruz kalmasını önlemek için iyice daha sonra yıkayın.
- Her koku kartuş açıkça ilk kullanıldığı için koku bir renk kodlu etiketle işaretlenmiş olduğundan emin olun. Kartuşu üzerinde kalan, koku olabileceğinden yok Birden fazla koku için bir koku kartuşu (şırınga haznesi ya da basma) kullanılır.
- Hazırlama Kokular ve Koku Karışımları
- D, heksan ya da mineral yağ ya da kokuları seyreltinesired konsantrasyonu.
NOT: koku konsantrasyonu değiştirilmesi veya arılar kokuları algılayabilir ve klimalı dernek öğrenmek nasıl ek yönlerini soruşturma için izin verebilirsiniz iki veya daha fazla koku karışımlarını sunulması. Koku karışımları doğal koku uyaranı taklit birkaç koku olarak 50:50 ikili karışımı gibi basit ya da karmaşık olabilir. Koku konsantrasyonunu azaltmak da görevin zorlaştırır.- Kokular, kartuşun yeniden kullanımı (Şekil 2) ile tükenmiş olur. Tükenmesi sorunlar her 10-12 kullanan yeni bir kartuş geçmek edebilmek için yeterli kartuşları yapmak önlemek için.
- D, heksan ya da mineral yağ ya da kokuları seyreltinesired konsantrasyonu.
- Koku Kartuşları hazırlanması
- Yöntem 1
- Bu yöntem için, koku kartuşlar için, pistonun kauçuk ucuna tutturulmuş bir filtre kağıdı, 15 mm çapındaki bir daire ile 20 ml'lik plastik şırınga kullanın.
- Şırınga pistonu çıkarın ve filte parçasını takmak için bir iğnenin kullanınpistonun ucuna r kağıdı.
- Filtre kağıdı üzerine koku 10 ul koyun ve bir şırınga ağzına pistonu takın bir mikropipet kullanın. Şırınga varil üzerinde 15 ml işaretine pistonu itin.
- Yöntem 2
- Bu yöntem için, 1 cc'lik cam ya da plastik tüberkülin şırıngaları (ya da benzer bir hacmi ve şekli değiştirilmiş pipetler) içindeki bir filtre kağıdı şeridi ve koku kartuşlar için, şırınga haznesinin geniş ucunda bir kauçuk ya da silikon sınırlayıcı kullanmak.
- 1 cc tüberkülin şırınga varil Plenseri. Şırınga aksamı olarak kullanılan koku kartuşunun gövdesi olacaktır.
- , Şırınga pistonunun ikinci ucu siyah lastik çıkarın ve kauçuk ucu kapalı olan bir ucunu kesti.
NOT: Bu kauçuk halka zamanından önce kartuşun ve ölçülü bal arısı üzerinde koku çekecek arenada hava akımı, emiş azaltmak için bir kısıtlama olarak hareket edecektir. Alternatif olarak, silikon tüp (4.8 mm oute5 mm kesit halinde kesilmiş r çap) restrictors olarak çalışıyorum.
- Şırınga varil ve% 70 etanol ile kauçuk / silikon debi sınırlama içini durulayın (önceki kullanımdan kalan kokunun çok kaldırmak için) ve onlara hava kurumaya bırakın.
- Kağıt çıkan açılmanın dışında açılma 1-2 cm uzanır böylece namlunun olarak geniş açıklık içine bir filtre kağıdı 0.2 x 4 sm şerit yerleştirin.
- Koku, şırınga haznesinin ucuna temas izin vermeden filtre kağıdı üzerine kokunun 3-10 ul yerleştirmek için bir mikropipet kullanın. Pipet aynı koku için yeniden, ama sonraki koku kurmak için yeni bir ipucu kullandığınızdan emin olun olabilir.
- Filtre kağıdı tüp içine hızlı bir şekilde kayarak yukarı kadar şırınga haznesinin geniş açıklığına çevirin. , Şırınga haznesinin olarak geniş açıklık içine kısıtlayıcı yerleştirin.
- Her bir koku kartuşu açıkça ilk için kullanılan koku renk kodlu bir etiket ile etiketlenmiş olduğundan emin olun. Bir koku kartuşunu (şırınga varil veya restr asla kullanmayınictor) birden fazla koku için beri üzerinde kalan, koku olabilir.
- Tüy bırakmayan bir doku sonuna kadar top,% 70 etanol ile ıslatın ve iyice kartuşun dışında kalan kokuyu gidermek için kartuşun dış yüzeyini silmek için kullanabilirsiniz.
- Yöntem 1
2. Toplama, frenleyici ve Arılar Besleme
- Arı frenleyici Harness hazırlanıyor
- (Tüm iç çapı yaklaşık 0.9 cm ve 1-2 mm et kalınlığına sahip) plastik soda payet, sert plastik boru, ya da işlenmiş metal borudan dışarı bal arıları için basit yasaklama koşumları olun. Ameliyat ilgili işlemlerde dayanıklı koşumları kullanın.
- Boru için yaklaşık 3 cm kesitler halinde kesilmiştir. Sonra, kısmen demetini tespit ederken daha kolay yerinde arı tutmak için yapmak için koşum üst 1 cm uzakta yaklaşık yarısını kırpın.
- Koli bandı 0,2 x 6 cm şerit kesin ve arı koşum, lea bir tarafında bir ucunuücretsiz diğer ucunu Ving.
- İşçi Bees Toplama
- Onlar koloniden ayrılmadan önce duraklar gibi koloni girişinde işçileri toplayın ya da kazarak dönmek gibi.
NOT: işçi arılar boyunca emeklemek için giriş aşağı dönen işçileri yavaşlatır ve koloni girmeden önce daha kolay onları yakalamak için yapar üzerinde, sadece yeterince büyük delikli, tel örgü bir parça yerleştirilmesi. - Bunun içine uçar kadar arı üzerinde bir parıldama ampulünün yerleştirin. Arı şişeden dışarı uçmak değil bu yüzden açılış yatay veya kapak takılır ise aşağı bakacak flakon tutun. Her flakon tek bir arı yerleştirin. Kapak yeterli gaz değişimini sağlayacak bir delik olduğundan emin olun.
- Onlar şişelerde harcadığınız zamanı en aza indirmek için hızlı arılar toplayın. Gölgede küçük bir kutu içinde onları arılar ile şişeleri tutun.
- Laboratuara şişelerde ve arılar ile kutuyu aktarın ve bir buz-su sl içine şişeleri yerleştirmekurry arılar kadar hareketli durdurmak. Bir arı hareketsiz bir kez, soğuğa aşırı maruz önlemek için hemen buz flakonun çıkarılması ve bir kısıtlayıcı demeti içine arı yerleştirin.
NOT: arılar soğuğa aşırı maruz kalma sonucu, hareketsiz hale ne zaman izlemek zordur beri buzdolabında veya derin dondurucuda arılar yerleştirerek önermiyoruz. 10'dan fazla arıları yararlanarak zaman, her seferinde su-buz karışımına sadece birkaç arılar aktarın.
- Onlar koloniden ayrılmadan önce duraklar gibi koloni girişinde işçileri toplayın ya da kazarak dönmek gibi.
- Arılar frenleyici
- Sadece, borunun üst seviyesinde, oyuk boru bölümünü ve başını dönük dorsal göğüs ile demetindeki arı yerleştirin. Onun ağız parçaları boru kenarından dışarı uzanan çok hafifçe tüpün yakın arı basın. Baş ve arı sırt tarafında toraks arasında kanal bant şerit kaydırın ve sıkıca koşum tarafına serbest ucunu takın.
- Emin koşum bant pürüzsüz ve gergin olduğundan emin olun. Hiçbir bildirilecek olmalıarı koşum ön ve bant ve bant arasındaki ceable boşluklar koşum üstünde düz durmalıdır. Boşluklar varsa arı doğru düzgün burnumun uzatmak mümkün olmayabilir ya da kaçabilir. Ayrıca, arı ön bacakları koşum ön ve kanal bant arasında çıkıntılı olmadığından emin olun.
- Sadece, borunun üst seviyesinde, oyuk boru bölümünü ve başını dönük dorsal göğüs ile demetindeki arı yerleştirin. Onun ağız parçaları boru kenarından dışarı uzanan çok hafifçe tüpün yakın arı basın. Baş ve arı sırt tarafında toraks arasında kanal bant şerit kaydırın ve sıkıca koşum tarafına serbest ucunu takın.
- Klima Aralığı'na arılar ve Besleme Hayvan Besleme
- Kemerler aşağıdaki yaklaşık 30 dk - arılar ilk kurulum kurtarıldı sonra - arılar (suda) 3-4 ul 0.5 M sukroz doyurmaya. Bu miktar 3-4 saatte bir besleme-to-klima aralığı için yeterli olacaktır.
- Genel olarak, arılar henüz aralığını hayatta klimalı ilişkiyi öğrenmek için motive edilmelidir klima başında yeterince aç sağlamak için beslenme ve klima arasındaki bekleme süresi yaklaşık her saat için 1 ul 0.5 M sukroz doyurmaya. Bir laboratuvarda bir ılık sıcaklığında veya u eğer tuttusükroz değişik konsantrasyona şarkı beslenen miktarı buna göre zaman aralığını ayarlamak.
NOT: 24 saat condition aralığında bir beslenme ile, klima başlayacak önce tüm arılar 0.5 veya 1 M sükroz en az 24 saat ile doygunluğuna beslenen emin olun. Bir klima protokolde de cevap verecek motive önce, oda sıcaklığında, yaklaşık olarak 24 saat arı gerektirir.
Not: öğrenme performansını düşürebilir 18 klima sırasında kullanılan sükroz konsantrasyonu, daha az duyarlı hale gelmesini önlemek için havalandırma arıları sırasında bir ödül olarak kullanılan konsantrasyona göre arıları beslemek için sukroz çözeltisi daha düşük bir konsantrasyonda kullanın. - De uzak eğitim alanından bir alanda arılar besleyin. Klima önce klima bağlamda koşulsuz uyarıcı (sakaroz) maruz koku sonraki klima etkileyebilir.
- Genel olarak, arılar henüz aralığını hayatta klimalı ilişkiyi öğrenmek için motive edilmelidir klima başında yeterince aç sağlamak için beslenme ve klima arasındaki bekleme süresi yaklaşık her saat için 1 ul 0.5 M sukroz doyurmaya. Bir laboratuvarda bir ılık sıcaklığında veya u eğer tuttusükroz değişik konsantrasyona şarkı beslenen miktarı buna göre zaman aralığını ayarlamak.
- Besleme ve c arasındaki aralıktaonditioning gereksiz rahatsızlığı önlemek için laboratuar sakin bir alanda tezgah üzerinde arılar yerleştirin. Laboratuar düşük ortam neme sahip ise, o zaman aralığı boyunca ıslak kağıt havlu ile plastik bir kap içerisinde arılar yerleştirin. Onlar uzun süreler boyunca düşük neme maruz eğer arılar ölebilir, çünkü bu kuruma önler.
NOT: Bir deney içinde kullanımını ve beslenme protokolü değişiklik yapmayın! Kurma ve arılar beslenme ve arılar hepsi tam aynı şekilde tedavi edilir böylece her bir deney için klima başlayan arasında sadece belirli bir zaman aralığı kullanınız.
- Kemerler aşağıdaki yaklaşık 30 dk - arılar ilk kurulum kurtarıldı sonra - arılar (suda) 3-4 ul 0.5 M sukroz doyurmaya. Bu miktar 3-4 saatte bir besleme-to-klima aralığı için yeterli olacaktır.
3. Klima
- Sukroz Duyarlılık Test
- Klima başlamadan önce bir kaç dakika, 0.5 M sukroz çözeltisi (beslenmesi sırasında, aynı yoğunlukta), küçük bir damlacık ile anten dokunarak beslemek için raflarından motivasyon test edin. Onları bu test sırasında doyurmaya izin vermeyin. Onlar EXTE tarafından cevap veriyorsaonların burnumun nding, muhtemelen öğrenmek için yeterince motive ve protokolü için kullanılabilir.
- Deney Tasarımı
NOT: Bu protokol bal arıların öğrenme ve hafıza yetenekleri birçok yönlerini araştırmak amacıyla öğrenme protokollerin geniş bir dizi uyacak şekilde modifiye edilebilir. Inter-deneme aralığı, inter-uyaran aralığı, tipi ve konsantrasyonu ve kokuların, türü ve koşulsuz uyarıcı konsantrasyonu, sayısı ve sırası sayısı, belirli bir zamanda eğitimli arıların sayısı: ayarlanabilir birçok parametre arasında olan çalışmaların (Şekil 1; Tablo 1) 19-21. Her klima deneme için tam protokolünü tasarlarken, bireylerin tutarlı arası deneme aralığını tutmak çok önemlidir. Arıların 'performansı düşeceğinden çok uzun veya tutarsız, çok kısa bir inter deneme aralığı. Bu konu tam bir tedavi için tartışma bakın.
NOT: Arıs daha hızlı bir şekilde sıcak bir ortamda iseniz görevi öğreneceksiniz. Bu nedenle, antrenman ortam sıcaklığını tutarlı ve sıcak (29-30 ° C mümkünse) tutun. - Koku teslim (Stimulus Büfe)
- Yöntem 1
- Koku Dağıtım Sistemi Kurma
- Istikrarlı ve küçük ucunu arının antenleri doğrudan bakacak şekilde koku muamele filtre kağıdı yüklü plastik 20 ml şırınga monte edin. 15 ml işaretine pistonu ayarlayın ve piston kolayca erişilebilir yüzden şırınga yerleştirin.
- Koku Stimulus sunulması
- Antenlerinin koku kartuşa doğru doğrudan işaret her denemenin başında, klima arenada çiviye koşum arı yerleştirin. Arı koku uyaran sırasında görsel ortamda ani değişiklik nedeniyle bozulmasını azaltmak için koku uyaran başlamadan önce 15-25 saniye boyunca arena gelmesini sağlar.
- Arı klima arenada yerleştirilir hemen sonra koku kartuşa yanıt başlarsa, kartuşun ucunda koku olabilir. % 70 etanol batırılmış tüysüz bir doku ile kartuşu yıkayarak kirletici koku çıkarın. Bu sorunu çözmezse, kartuşu değiştirin.
- Piston tam olarak 4 saniye içinde bastırılır böylece sabit bir oranda şırınga pistonu basın. Koşulsuz uyaran sunmadan önce koku arının yanıtını izlemek.
- Her denemenin ardından, arı başka bir 15-25 saniye boyunca klima arenada dinlenmeye bırakın. Deneme aşağıdaki çok yakında arı Hareketli ölçüde her klima davanın etkinliğini azaltacaktır.
- Antenlerinin koku kartuşa doğru doğrudan işaret her denemenin başında, klima arenada çiviye koşum arı yerleştirin. Arı koku uyaran sırasında görsel ortamda ani değişiklik nedeniyle bozulmasını azaltmak için koku uyaran başlamadan önce 15-25 saniye boyunca arena gelmesini sağlar.
- Koku Dağıtım Sistemi Kurma
- Yöntem 2
- Koku Dağıtım Sistemi Kurma
- Hava akımı Kaynak ve Debi
- Koku iletimi için kaynak Hava akışılaboratuvar onunla donatılmış olup olmadığını, bir akvaryum havalandırıcı pompa veya laboratuar tezgah basınçlı hava beslemesini kullanabilirsiniz.
NOT: Tipik bir akvaryum havalandırıcı pompası 400 ml / dk yakınlarındaki bir hava akışı oranı (7 ml / sn) sahip olacaktır; 4 saniye koku uyaran üzerinde, hava 28 mi, 1 ml kartuş akacaktır. - Hava besleme akış hızını düzenlemek için hava besleme aygıtının boru ile paralel bir akış ölçeri kullanarak. Akış hızı 400 ml / dak kadar akış ölçeri ayarlayın. Ayrı bir saati ile koku kartuşunun açılışında akış hızını kontrol edin.
- Plastik boru ve valf sistemi vasıtasıyla koku kartuşa hava akışı bağlanır.
NOT: aşağıda tarif zamanlama cihazı denemede uygun bir zamanda valfleri açılır. Plastik konnektörleri kartuşun şırınga varil Luer tipi eki aracılığıyla koku kartuşa hava akımı sistemi takın. - Ne olursa olsun hava akımı kaynağı, ma periyodik akış hızını kontrolke emin hattı ile faal olduğu ve akış hızı, istenen hızda tutulur.
- Koku iletimi için kaynak Hava akışılaboratuvar onunla donatılmış olup olmadığını, bir akvaryum havalandırıcı pompa veya laboratuar tezgah basınçlı hava beslemesini kullanabilirsiniz.
- Hava akımı Kaynak ve Debi
- Otomatik Koku Gönderme
- Koku teslim otomatikleştirmek için bir programlanabilir lojik kontrolör (PLC) kullanın.
NOT: PLC, küçük bir hoparlör aracılığıyla, (bir düğmeye basarak başlatılan) programı başlatıldıktan sonra koku teslim hava akış 6 sn vanalarını açıp 4 saniye boyunca açık vanaları tutmak ve sesli bir besleme sinyalini ses programlanmıştır koku uyaranın başlangıcından sonra 3 sn sukroz teslim deneyci sinyal. - Her duruşma sırasında koku uyaran zamanlama belirtmek için küçük bir LED kullanın. Onlar iyi göremiyorum böylece arıların fotoreseptör kısa [uv] dalga boyu daha uzun [kırmızı] dalga boylarından gelen ve doğru kayınca beri Mümkünse, bir kırmızı LED kullanın. Işık yanlışlıkla klimalı hale gelen uyaran olmayacak şekilde, kendi görüş alanının dışında, arkasında ve arı altındaki LED yerleştirin.
NOT: light de PLC'nin düzgün çalıştığını doğrulamak yardımcı olur ve test denemeleri sırasında arıların cevaplarının video kayıtlarını analiz yararlıdır.
- Koku teslim otomatikleştirmek için bir programlanabilir lojik kontrolör (PLC) kullanın.
- Egzoz Sistemi
- Arı geçmiş havayı çekin ve kokunun her sunum için ayrı bir takvim korumak için klima arenada koku yüklü havayı tahliye için yardımcı arı arkasında bir egzoz sistemi kurun.
Not: Laboratuarda bir vakum sistemi vardır, vakum noktasını değiştirmek ve arıtma arena boşaltılması için gerekli olan hava akımı oluşturmak için kurutucu bir boru kanalını ekleyin. Bir vakum sistemi var değilse, kurutma boru ile paralel olarak yerleştirilmiş bir küçük elektrikli fan duman başlığı ya da bir pencere yeterli olacaktır ile olmuştur.
- Arı geçmiş havayı çekin ve kokunun her sunum için ayrı bir takvim korumak için klima arenada koku yüklü havayı tahliye için yardımcı arı arkasında bir egzoz sistemi kurun.
- Her günün başlangıcında, koku dağıtım sistemi ve egzoz sisteminin elektrik ve hava bağlantılarını kontrol edin. Koku dağıtım sistemi üzerinde start düğmesine basınız ve presleme arasındaki zaman izlemekdüğmesi ve açık valfler (sessiz tıklama ve LED ışığı yanar) ve isteka koşulsuz uyaran sunmak için zaman (bir sinyal sesi) duyulur. Koku kartuşa bağlı olacaktır konektörün önünde nemli bir parmak yerleştirerek hava çıkışı kontrol edin. Vanalarının açık sadece güçlü bir hava akımı olmalıdır. Emin hava akımı düzgün klima arenada havayı tahliye için yeterince güçlü olduğundan emin olmak için egzoz sisteminin açılması tüy bırakmayan bir doku up tutarak egzoz sistemini kontrol edin.
- Koku Dağıtım Sistemi Kurma
- Koku kartuş montaj
- Egzoz sisteminin önünde doğrudan arı ve koku kartuşunu yerleştirmek için stand tezgah üzerinde veya küçük bir pleksiglas üzerine ya bazı modelleme kil yerleştirin. Kil, cam koku şırınga yerleştirin ve geniş sonunda açılış arının kafasına işaret edilmektedir şekilde ayarlayın. Şırınganın ucu arı 1-2 cm olmalıdır. Bu aralıkta bir mesafe almak ve sabit.
- Güvenli şırınganın dar buzlu cam ucuna hava tüpü ve valf sistemi için kartuş bağlantı rakoru yerleştirin.
- Koku Stimulus sunulması
- Antenlerinin koku kartuşa doğru doğrudan işaret her denemenin başında, klima arenada çiviye koşulmuş arı yerleştirin. Onun yeni ortama alışmış izin koku uyaran başlamadan önce 15-25 saniye arenada arı dinlensin.
NOT: arı hemen klima arenada konulduktan sonra koku kartuşa yanıt başlarsa, kartuşun ucunda koku olabilir. % 70 etanol batırılmış tüysüz bir doku ile kartuşu yıkayarak kirletici koku çıkarın. Bu sorunu çözmezse, kartuşu değiştirin. - Koku teslimat için zamanlama mekanizmasını başlatmak için start düğmesine basın. Uyaranın sonra koku arının yanıtını izlemekbaşlangıçlı ve koşulsuz uyarıcının sunulmasından önce.
- Her denemenin ardından, arı ilk bellek oluşumu için izin vermek için bir 15-25 saniye boyunca klima arenada dinlenmeye bırakın. Deneme aşağıdaki çok yakında arı Hareketli ölçüde her klima davanın etkinliğini azaltacaktır.
- Antenlerinin koku kartuşa doğru doğrudan işaret her denemenin başında, klima arenada çiviye koşulmuş arı yerleştirin. Onun yeni ortama alışmış izin koku uyaran başlamadan önce 15-25 saniye arenada arı dinlensin.
- Yöntem 1
- Sevkiyat Sakaroz (koşulsuz uyarıcı)
- Yöntem 1
- Bu yöntem için, sukroz teslim etmek için bir kürdan.
NOT: Bu ahşap kürdan klimalı uyarana arıların yanıtları etkileyecektir bir koku var çünkü plastik kürdan kullanmak en iyisidir. - Sukroz çözeltisi içine kürdan ucu batırın ve bu koşulsuz uyaran sunmak için zaman zaman, arının önünde kürdan tutun ve arı yaklaşık 1 saniye boyunca kürdan gelen sukroz yalamak için izin verir.
- Su'nun oluşumunu önlemek için düzenli kürdan değiştirinCrose.
- Bu yöntem için, sukroz teslim etmek için bir kürdan.
- Yöntem 2
- Sukroz Dağıtım Sistemi
Not: koşulsuz uyaran sunmak için daha kesin bir yolu doğru bir şekilde az miktarda sükroz ödül (bir mikrolitre onda biri) sağlayabilir mikrometre şırıngalarının kullanımıdır.- Lütfen mümkün olduğu kadar şırınga mikrometre sarın. Sükroz solüsyonu ile mikrometre bir şırınga gövdesi içinde yükleyin. Emin cam kısmında hava kabarcığı olmadığından emin olun ve şırınga monte. Şırınga haznesinin dar ucuna yerleştirmeden önce sakaroz çözeltisi ile iğnenin hub doldurun. Emin iğne sıvı iğnesini yıkamadan su sakaroz ve aslında yapmak için, deney başlamadan önce ileri 1-2 ul mikrometre sarın.
- Sukroz Dağıtım Sistemi
- Sukroz Sunum
- Koku sunulmasına rağmen, yaklaşık 2 cm arı iğne ucu tutun. Önlemek için eğitim arena kenarını kullanınhareket olarak şırınga sallayarak arı dikkatini edebilirsiniz. Bu da erken sakaroz koku gelen arının dikkatini kayacak yana, besleme sinyalinin beklentisiyle çok yakın iğne alamadım.
- Arı, burnumun uzanır kadar kısa sürede besleme sinyal sesi gibi, hafifçe antenleri dokunun, ardından arı doyurmaya. Bu anten sadece çok hafif bir dokunuş ya da iki gerektirir.
- 0.2 ve 0.8 ul arasında bir ödül miktarını kullanın. Arı kolayca koşulsuz uyaran (~ 1-2 sn) için ayrılan süre içinde tüm damlacığı tüketmek gerekir. Arı birkaç saniye boyunca beslenir ama tamamen tüketmek değil büyük bir damlacık gelen besleme "istenildiği kadar" kullanmayın.
- Ödül sonraki sunumlar için arının tepkisini azaltacaktır anten, üzerine inşa sakaroz için izleyin. Bu oluşursa besleme işlemi değiştirin.
- Koku doğru eşleştirme sağlamak içinisteka ve sükroz ödül, sesinden sonra kısa sürede arı sukroz çözeltisi damlacık sunmak için emin olun.
NOT: CS (koku) ve ABD (sakaroz) başlangıcı arasındaki zamanlama önemlidir. İdeal olarak, koku sunum ve sükroz sunum kısaca üst üste gelmelidir. Daha bir kaç saniye CS sonu ve ABD'nin teslimi arasındaki süre geçerse, klima performansı azalacaktır.
- Yöntem 1
4. Test
- Klima kullanımı donatısız testi denemelerden sonra arılar öğrendim ne kadar iyi değerlendirmek ve / veya klimalı ilişkiyi hatırlamak için.
NOT: klima çalışmalarda performans ve test denemeleri ve test kokuların sayısı amacıyla bir açıklama 'Arıların yanında Katkısız test çalışmalarda yanıtları' Arıların analiz önemini ayrıntılı bir açıklama için tartışma bakın. - Konsolidasyon Zaman
- Aşağıdakiklima, hemen bir deneme deneme yönetmek veya arılar bir konsolidasyon dönemi boyunca dinlenmeye bırakın ya.
Not: Konsolidasyon süresinin uzunluğu, havalandırma ve test arasındaki zaman aralığı, deneyin amacı bağlıdır. Amaçlı öğrenme farklılıkları veya kısa-süreli hafıza araştırmak için ise test denemeleri üzerine arıların performansı hemen ardından ya da şartlandırma birkaç saat sonra değerlendirilebilir. Deney uzun vadeli bellek araştıran içeriyorsa, test eden çalışmalar klima sonunda sonra en az 24 saat verilmelidir. - Test denemeleri klima Aşağıdaki fazla 24 saat ise, test çalışmalarda önce 12-24 saat kadar daha sonra günde en az bir kez klima sonra 0.5 M sukroz ile doygunluğuna arıları beslemek ve.
- Onların antene dokunmadan artık tepki olarak burnumun uzatmak kadar onları her birkaç farklı kez doyurmaya, arılar doyma ulaşmış emin olmak içinsakaroz ile e. Onlar doyma ulaşmak 40'a kadar ul tüketebilir.
- Konsolidasyon döneminde kendi desike ve ölüyor engellemek için nemlendirilmiş bir kapta arılar tutun.
- Aşağıdakiklima, hemen bir deneme deneme yönetmek veya arılar bir konsolidasyon dönemi boyunca dinlenmeye bırakın ya.
- Testi Denemeler
- Test için yalnızca yeni hazırlanan koku kartuşlarını kullanın.
NOT: Test uyaran nedenle, denemeler, kokular, ve bireysel arılar arasında tutarlı olmayacak ve böylece edinimi için kullanılan kartuşlar farklı olarak önemli ölçüde sonuçların tutarlılığını ve sağlamlığını etkileyebilecek, tükenmiş olabilir. - Deneyin koşullandırma aşamasında kullanılan test sırasında, aynı deneme arası aralığı ve diğer parametreleri sürdürmek.
- Bir ödül varlığı, şartlandırılmış uyarana arıların yanıtı değiştirebilir potansiyel Klima protokolü veya bir tedavinin daha ince maskeleme efektleri beri test denemeleri sırasında koşulsuz uyaran sunmak etmeyin.
- Tüm rekor videoları otest çalışmalarda f sonra koku (ler) için birden fazla Yönleri arıların tepkilerini ölçmek mümkün.
- Test için yalnızca yeni hazırlanan koku kartuşlarını kullanın.
5. Arıların Cevapları Kayıt
- PER ikili (varlığı / yokluğu) Puanlama
- Klima denemeler sırasında ve test denemeleri sırasında PER bir ikili puanlama sistemi kullanın. Pozitif ya da negatif olarak yanıtlar Skor; Bu tedavi grubu başına 20-40 arıların bir örneklem büyüklüğü ile analizler birçok türde için tatmin edicidir. Tepkilerinin tam topolojisi 22 karmaşık olabilir. Bunu görmek ve olumlu bir yanıt kriter puan için kolay kurmak için önemlidir.
- Arı açılan altçenelerinin ipuçları bağlayarak yapılan hattının ötesine burnumun uzandığında pozitif (+) gibi bir arının yanıt Skor. Arı koku başlangıcından sonra ancak ofset koku öncesi burnumun uzandığında sadece olumlu bir yanıt puan.
- Negatif bir arının yanıt Skor (-) herhangi bir e olduğundahortum koku verici ofset sonra uzatılır veya eğer duruşma sırasında burnumun xtension.
- Kısmi yanıtları puanı çalışıyor kaçının. Arıların davranışlarında daha ince ayrımlar yapmak için, aşağıda belirtilen video analiz tekniği kullanın.
- Klima denemeler sırasında ve test denemeleri sırasında PER bir ikili puanlama sistemi kullanın. Pozitif ya da negatif olarak yanıtlar Skor; Bu tedavi grubu başına 20-40 arıların bir örneklem büyüklüğü ile analizler birçok türde için tatmin edicidir. Tepkilerinin tam topolojisi 22 karmaşık olabilir. Bunu görmek ve olumlu bir yanıt kriter puan için kolay kurmak için önemlidir.
- Ek BAŞINA Ölçümleri Video Analizi (Film 1)
- Bir koku, bir arının tepkilerinin videoları analiz ederek davranış testlerinden ek bilgi toplayın.
NOT: Tedavi grupları arasında PER varlığı / yokluğu puanlamada bir fark yok özellikle bu ölçümler de, kokulara arıların tepkilerin incelenmesi için bir yüksek temporal çözünürlük sağlayabilir. - Video kaydederken
- Daima video kayıtları için Katkısız testi veya söndürme denemeleri kullanın. Ödül varlığı hortum uzatma süresini değiştirerek, koku arıların tepkisini değiştirecektir.
- Eğitim arenada üzerinde bir tripod üzerinde bir video kamera ayarlayın ve arının başının önündeki kamerayı odaklamak, böylece antenleri ve hortum keskin odak vardır.
- Koku başlamasını ve analiz sırasında ofset tanımlamak için kullanmak için video görünür arının arkasında bir alanda, koku uyaran sunum gösterir küçük bir LED ışığı, yerleştirin.
- Koku başlamadan önce 20 saniye kayıt başlayın ve koku arı rahatsız öncesi ofset sonra en az 20 saniye boyunca kayda devam.
- Video Analiz
- Videoda belirli çerçeveler arasındaki zaman aralıklarını ölçme yeteneği ile, bu tür iMovie veya Final Cut Pro gibi video düzenleme yazılımı içine videoları, yükleyin.
- Koku uyaran (örneğin, 10 veya 20 saniye) başlangıcında başlayan bir ayrık süre için koku arıların tepki analiz.
- PER değerlendirmek için aşağıdaki ortak ölçümleri kullanın:
- Tedbirhortum (yukarıda açıklanan) mandibula-to-mandibula hattının ötesine uzanan toplam zamanı hortum uzatma, süresi.
NOT: Bir arı uzatmak ve 10-20 sn zaman penceresi sırasında burnumun birden çok kez geri olabilir. Tek tek her hortum uzantısı ölçün ve toplam süresini hesaplayın. Her hortum uzantısı sayısını ve süresini analiz de değerli bilgiler sağlayabilir. - LED ışığı geldiğinde, koku başlangıcı arasındaki zaman hortum uzatma, ve ilk hortum uzantısı gecikme ölçmek.
- Toplamı ve koku verici madde başlangıcından ilk uzama veya başka zamanlama parametreleri nispi zaman Glossal uzantıları.
- Ayrıca karakteristik koku odaklı değişiklikleri göstermek Antennal hareketleri 23, izlemek.
NOT: Film 1'de, antennal hareketler antennal hareketlerinde değişiklik göstermek video izleme yazılımı ile takip edilmiştir ibir koku yanıtı uyaran n.
- Tedbirhortum (yukarıda açıklanan) mandibula-to-mandibula hattının ötesine uzanan toplam zamanı hortum uzatma, süresi.
- Bir koku, bir arının tepkilerinin videoları analiz ederek davranış testlerinden ek bilgi toplayın.
Representative Results
Yukarıda tarif edilen BAŞINA protokollerin kullanımı iki örneğini sunuyoruz. Yöntem 2 ilk örneği yapılmış kullanımı bal arılarının CS 5,24,25 olarak kullanılan koku için moleküler benzerlik bir fonksiyonu olarak farklı kokuyu nasıl algıladıklarını incelemek için. İkinci Yöntem 1 ve araştırma laboratuvarında koşullama deneyleri PER kullanmaya başlarken alınması gereken tedbirler bazı kullanımının bir örnektir.
Bu gibi çalışmalar 13 veya elektrofizyolojik 26 analizleri Biyogörüntüleme ile birlikte bal arıları ve kelebekler koku 'algısal alan' tanımlamak için kullanılmıştır. Bal arılarının (n = 20) 12 ileri eşleştirme klima çalışmalarda (Şekil 3A) üzerinde sukroz takviye ile Odorant desanal ilişkilendirmek için klimalı edildi. Bal arılarının yaklaşık% 10 normaldir ilk deneme, üzerinde 'kendiliğinden' yanıtını verdi. Bundan sonra responde yüzdesibal arılarının% 100, beşinci deneme ve sonraki her deneme cevap verene kadar önümüzdeki birkaç çalışmalarda üzerinde artış d. Çeşitli çalışmalar yanıt olarak bu artış birçok önemli kontrol prosedürleri 3 için ileri eşleştirme durumda (Şekil 1) nisbetle için özel olduğunu göstermiştir. Edinim aşaması, sonra, her bir bal arısı koku CS ve sistematik olarak molekül yapılarında CS farklı birçok koku maruz katılan takviye edilmemiş test çalışmalarda bir dizi (Şekil 3B) 'e tabi tutulmuştur. Bal arıları CS en güçlü yanıt verdi. Diğer koku karşı tepkileri CS gibi en koku en düşük tepkiler ile yapısal olarak sistematik değişikliklerin bir fonksiyonu olarak düşmüştür.
Şekil 4, öğrenciler ilk kez öğrendiği bir son atölyeden sonuçları, nasıl gösterilmektedir Yöntem 1 kullanarak bal arıları şartlandırılması. Öğrenciler köknar t sukroz takviye (Şekil 4A) ile ileriye doğru eşleştirme methycyclohexanone (AÇS) veya oktanolde (OKT) ile bal arıları klimalı. Yüzde yanıtları ilk deneme düşük ve arılar koku-sakaroz dernek öğrendim belirten sonraki çalışmalar artmıştır. Arılar öğrencilerin farklı gruplar arasında şartlanmış ilişkiyi öğrendiği derecede farklılıklar vardı. Bizim tecrübelerimize göre, farklılıkların bu tür yöntemle (Yöntem 1) de kesin elemanları, ya da deneycilerden eğitim seviyesine, CS olarak kullanılan koku nedeniyle olabilir. Üçüncü durumda, performans hızlı deneyselciler 'artan tecrübe ile daha tutarlı hale gelir. Klima sonra, her bal arısı her koku ile iki kez test edildi. Ekim veya AÇS ileri eşleştirme ile klimalı olmuştu bal arılarının gruplar halinde, yanıt olarak, klimalı koku (Şekil 4B) güçlü bekleniyordu.
ent "> Ekim için eşleştirmesini ileri deneyimli bal arıları ikinci grup koku Ekim geriye sakaroz ile eşleşmiş oldu başka bir gruba paralel olarak klimalı edildi. Geriye eşleştirme göstermek için kontrol prosedürlerinin çeşitli türlerinden biridir verdiği yanıtta artış Geriye eşleştirme için, sakaroz ABD ve koku CS Şekil 1'de gösterilmiştir ne ters sunulmaktadır bu anlayışın gelen spesifik olmayan uyarılma olarak, eşleştirmeyi iletmek özgü ve başka bir işlem nedeniyle değildir.. Toplama verileri geriye eşleştirme vardır CR sakaroz sunumundan sonra koku CS sunum derecelendirilirler olamaz çünkü gösterilmemiştir. birleşmeli klima için tahmin edilebileceği gibi, Ekim için tepki düzeyleri geriye grubunda (Şekil 4C) için ileri eşleştirilmiş grup göreli olarak yüksek bulunmuştur.7fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Şekil klima için deneysel tasarım 1. Diyagramlarına ileri eşleştirmeyi kullanarak. Bak bu şekilde kullanılan terimlerin tanımları için Tablo 1. (A) CS (koku) öncesinde ve ABD (sakaroz / su çözeltisi) ile örtüşmektedir. Gösterilen CS ve ABD arasındaki ilişki klima bal arıları ve kelebekler için en uygunudur. Ama optimum ISI klima protokol ve hayvan türlerinin 1 güvenebilirsiniz. (B) tamir ve CS, CR, ABD ve UR göreli zamanlama. ABD sunum öncesi veya Katkısız 'test' denemeler sırasında birinin meydana CR Deneysel protokollerin bağımlı ölçüdür.
Şekil 2. kartuşları yeniden kullanım ile Koku tükenmesi. Bu veriler için, koku kartuşları vardıkurulum hekzanol ile metinde anlatıldığı gibi. Heksanol yaygın BAŞINA çalışmalarda CS olarak kullanılır; Bununla birlikte, tükenmesi gerçek oranı, koku ve solvente bağlıdır. Kartuşları sonra 4 sn (40 kullanımları eşit olur standart deneyde 5 bal arılarının / deneme varsayarak) 8 çalışmalarda üzerinde her dakika için bir kez kullanıldı. BAŞINA deneyler nispeten standart vardı belirtilen solven içinde dilüsyonlar, 2.0 M (A) ve 0.2 M (B) idi. (A, B), birinci ve koku, bir katı faz üzerine adsorpsiyon ile sekizinci denemeden sonra numune alındı daha sonra bir gaz kromatografisinde üzerine kusturulmuş edildi mikroekstraksiyon (SPME) lif. Zirveleri altında göreceli alanlar, hem çözücülere sekizde ilk deneme akrabası sonra hem konsantrasyonları daha yüksek bulunmuştur (Wilcoxon eşleştirilmiş çiftler işaretli sıra testi p <0.05 [*] veya daha fazla), daha az koku kartuştan teslim olduğunu gösterir Kartuş bir kaç kez. (C, D) sadece sekizinci tr gösteren aynı veri kullanıldıktan sonra genişletilmiş y-ekseni ile ial. Bu tükenme mineral yağ heksan edebilmesi için biraz daha fazla, ancak sadece düşük bir konsantrasyonda olduğunu göstermektedir.
Şekil 3. Toplama ve test CS ve klima yöntem 2 olarak desanal kullanarak. (A) Deneme-by-deneme 12 ileri eşleştirme denemeleri (Şekil 1) tepkinin (CR). Veri 5 bal arılarının her dört grupta klimalı n = 20 bal arıları vardır. ISI 3 saniye olmuştur ve ITI 6 dakika olmuştur. (B), C-zincir uzunlukları ve / veya karbonil karbon pozisyonu ile dekanal farklılık kokuları ile Katkısız testleri. Kokular dört gruba genelinde bir randomize dizi sunuldu ve CR tükenme önlemek amacıyla desanal (her iki-üç denemeler) ile takviyeli çalışmalar ile serpiştirilmiş edildi.
Bir atölye Şekil 4. Veri sırasında öğrenciler (sırasıyla n = 23 ve 15 Gps 1 ve 2) oktanol şartına bal arılarının üç grup yöntemi BAŞINA 1. (A) Toplama verileri kullanarak bal arıları kondisyon için eğitilmiştir olarak mezun ve metilsikloheksanon (n = 10) (B) iki kokuları ile Katkısız testleri sırasında CRs.; Dört grup arasında rastgele seride sunulmaktadır denemeler. (C) bal arılarının, ileri eşleştirilmiş biri iki grupta hem kokuları ile Takviyesiz testleri (Gp 1, n = 23) ve bir geri (n = 25) eşleştirilmiş.
| Dönem (kısaltma) | Tanımı | İlgili Örnek |
| Klimalı Uyarıcı (CS) | Birİlk az ya da hiç tepki ortaya çıkaran ve ABD sinyalleri uyaran | KOKU |
| Klimalı Yanıt (CR) | ABD ile dernek sonra CS tepki | Burnumun Extension |
| Koşulsuz uyarıcı (ABD) | Bir yanıt uyandıran bir biyolojik olarak önemli bir uyarıcı | SAKKAROZ / SU ÇÖZÜM |
| Şartsız Tepki (UR) bir | ABD tepkisi | Burnumun Extension |
| Inter-Uyarıcı Aralığı (ISI) | ABD CS başlangıcı ve başlangıcı arasındaki süre | SÜKROZ aralığına KOKU |
| Inter-Deneme Aralığı (ITI) | Tek bir hayvan için ardışık CS-ABD eşleşmeleri arasındaki süre | KOKU için KOKU (deneme n) (deneme n + 1) aralık |
Tablo 1. Important Terminoloji. derneklerin diğer türleri için rağmen, CR ve UR aynıdır klima BAŞINA için., bu terimlerin bir örnek için Şekil 1'e bakın ve CR ve UR farklılık refleksleri.
Film 1. bir koku yanıt vermek için klimalı edildikten sonra PER yapan bir bal arısı bir video. Yaklaşık 1.5 sn koku başlangıcından sonra arının PER yanıtını unutmayın. Izleme yazılımı koku sunumuna karşılık olarak antennal hareketleri çizilmiştir. Videonun sağ üst köşedeki çizilen çizgiler gerçek antennal hareketlerini tasvir. X (sol) ve Y ekranda göstermek antennal hareketlerinin altındaki iki grafik (sağ) koordine eder. Videoda gösterilen grafikteki dikey çizgiler, sağa, ışık ON, PER sol işaret ışığı yanmıyor ve tekzip fil hortumu.
Discussion
Bu protokol BAŞINA prosedürü kullanarak klima için iki güvenilir yöntem sundu. Bu başarılı bir şekilde 27, 21 kullanılmıştır çeşitli yöntemler arasında yer alır. Biz sürekli olarak güvenilir olduğu gibi hatta farklı deneyselciler karşısında, PER kullanan tüm deneysel çalışmalar için Yöntem 2 kullanır.
Aynı temel yordam farklı klima uyaranlara ve farklı davranış refleksleri kullanımı dahil bal arıları, yapılan çalışmalarda birçok farklı türde adapte edilmiştir. Ayrıca 28,29, beyinde 13,14,30 koku alma algı ve bellek fizyolojik karşılıklarını öğrenme farklılıkları genetik temeli soruşturmaları bağlantılı edilmiş ve davranış 15,16,31 modülatuar ve moleküler genetik temelleri . Çünkü 100 yıl önce Karl von Frisch tarafından ilk çalışmalar başladı bal arıları için koku öğrenme ekolojik alaka gelişmiş bilgi, yorum
Genel olarak yapılması da aynı zamanda diğer türlerde sorunlarını ortaya koymak için uygulanabilir olması ile güçlüdür. İki güve türü, Manduca sexîa ve Spodoptera littoralis, koku tanımlama ve her türün koku öğrenme yetenekleri 32,33 nöral temelini araştırmak için BAŞINA çalışmalarda kullanılmıştır. Meyve sinekleri ile BAŞINA deneyler chemosensation ve 34 öğrenme katılan moleküler sinyal silsileleri içine birçok anlayışlar sağladı. Ve PER son zamanlarda pire (Rhondnius prolixus) olarak alışmasını 35, önemli bir hastalık vektörü incelemek için kullanılır olmuştur.
Genel olarak, işlem yöntemi değişikliklere sağlamdır; d kullanımıifferent yöntem tedavi grupları arasında aynı nispi farkı olasılıkla üretecektir. Nispeten basit bir prosedür olmasına rağmen, çeşitli sorunlar kez koku-sükroz dernek öğrenme bal arıları önleyebilirsiniz de. Aşağıdaki konular protokol ve PER klima sırasında ortaya çıkabilecek daha yaygın bazı sorunların olası değişiklikler vardır.
Klima Protokolde sayısı hakkında düşünceler ve Denemeleri Türü
Herhangi bir öğrenme protokol edinim aşamasında çalışmaların bir dizi arıların pozlama gerektirir. Bu sayı büyük ölçüde görevin zorluk bağlıdır. Bal arıları, tek bir yargılamadan sonra basit bir görevi öğrenebilir, fakat uzun süreli bellek oluşumunu teşvik etmek için en az üç denemeleri gerekir. Beklendiği gibi, bal arıları yeterince zor bir görev öğrenmek için önemli ölçüde daha fazla çalışmalar gerektirmektedir. Genel olarak, arılar artık önemli ölçüde daha iyi hale ötesinde denemelerinin bir sayısı olduğuir performans. Bu en fazla belirli bir görev olarak, koku türleri ve konsantrasyonları ve sükroz konsantrasyonuna bağlıdır.
Farklı deneme kokuları ile birden fazla tipini kullanırken, koku sunumlar basit bir dizisini ezberlemek yerine kokuları 36 arasındaki farkları öğrenme arıları tutmak için bir psödo-rastlantısal dizinin farklı türlerini test sunar. Bu yalancı rasgele dizileri olarak, koku tiplerinin her birisi için çalışmalarda eşit sayıda olmalıdır. Ayrıca, bir koku tipi bir deneme olasılığı öncesinde ve aynı koku, ardından ya da diğer herhangi bir koku tüm kokularına eşit olmalıdır edilir. ABBABAAB: İki kokulardan - - A ve B aşağıdaki sırasını kullanabilirsiniz. Sekiz çalışmalarda üzerinde her koku dört kez sunulmaktadır. Her koku için çalışmaların istenen rakama denk dizileri bağlamak.
Ne olursa olsun deneysel tasarım, kalması gereken birkaç parametre vardıröğrenmeyi optimize etmek için sabit. CS ve ABD arasındaki örtüşme etkili klima için önemlidir. Arası deneme aralığı (Şekil 1, Tablo 1) sabit ve usulsüzlük veya çok kısa veya çok uzun arası deneme aralığı önemli ölçüde klima protokolünün 1 etkinliğini etkileyebilir çünkü optimize edilmesi gerekmektedir.
Davranış Test Denemeler Önemi ve Tasarım üzerine Hususlar
CS ve ABD birlikte sunulmaktadır bir deney, bir 'satın alma aşamasında' sırasında kaydedilen tepkiler, yararlı olabilir. Ancak, koku sunum şartları çalışmasının bir türden diğerine farklılık olabilir dikkatli olun. Takviyeli çalışmalar sırasında, sukroz tarafından takip koku arının cevabı etkileyebilir görsel uyaranın (sakaroz damlacık teslim için cihazın hareketi) ile birlikte sunulmaktadır. Ve arılar sadece üç saniye vars bir yanıt (Şekil 1, dört koku uyarımı saniye eksi sakaroz sunumu ile bir saniye örtüşme) göstermek. Deney iki kokuları ayırt etmek için öğrenme arıların içeriyorsa (örneğin, güçlendirilmiş ve takviye), alternatif çalışmalarda sunulan Katkısız koku ödül sunumun görsel uyaran olmadan gerçekleşir ve arılar yanıt tam dört saniyeniz var. Bu nedenle, iki kokulara tepkiler edinimi sırasında tamamen karşılaştırılabilir değildir. Herhangi bir klima protokol ile, satın alma eğriler 1 güvenmeyin. Daha iyi arı öğrendikleri belirlemek için, her test uyarıcının aynı koşullar altında gerçekleşmesi garanti edilmiştir de koku takviye edilen boyunca takviye edilmemiş test çalışmalarda bir dizi, getirmektedir.
Deneyin belirli amacına bağlı olarak, test şartlandırılmış koku ya da klimalı od denemeler bir dizi tek test çalışmalarda oluşabilirya da ya da koşullandırılmış ve yeni kokuların bir kombinasyonu olabilir. Klimalı koku Bir tek test deneme arılar 'şartına koku olmadığını hatırlıyorum basit bir tahlil sağlar. Ancak, ilk test deneme cevap arıların motivasyon düzeyini yanı sıra klimalı koku onların hatırlama yansıtıyor olabilir. Test çalışmalarda bir dizi, şartlandırılmış koku ya da duruma getirilmiş ve bir veya daha fazla yeni kokuların tek bir dizi test yok çalışmalar arasında bir dizi ya da bellek değerlendirmek için de kullanılabilir. Söndürme çalışmaların serisi arılar 'şartına ilişkiyi hatırlamak ne kadar güçlü değerlendirebiliriz. Şartlı tepki söndürmek için gerekli çalışmaların daha fazla sayıda hatırlama güçlü. Koşullanmış ve yeni kokuların tek bir dizi test de Özgünlük şartlandırılmış koku arıların hafızasını değerlendirebiliriz.
Bu durum ve kontrol ve aynı zaman noktalarında tedavi gruplarının her ikisi de test etmek zorunludur. Comparyakında daha uzun süreler için tutulan arılar için klima sonra arıların performansını ing çünkü doygunluğuna arıların beslenmesi ile sakaroz ABD maruz sorunludur. Örneğin, uzun bir aradan sonra performansında bir düşüş bellek çürüme nedeniyle olabilir ya da sonuçlar muğlak hale nedeniyle ABD Katkısız maruz tarafından uyarılan motivasyon devlet ve / veya öğrenme değişikliklere olabilir. Bu nedenle, bir tedavi grubu performans zaman durumunu ve aynı zaman noktalarında, test edilen kontrol grubuna göre karar verilmelidir.
Koku Konsantrasyon ve Bütünlük
Koku (CS) konsantrasyonu ve bütünlüğü tehlikeye hangi çeşitli yolları vardır. Koku teslimat ile en yaygın sorun, aşırı koku kartuşları tükenmesi (Şekil 2). Bu tuzaktan kaçınmak için kartuşlarını 10-12 kullanımlarını (5 bal arılarının grupları ile her 2 veya 3 deneme) değiştirin. Aynı zamanda, kullanımı için kritikKullanılmış kartuşları diferansiyel tükenmiş olabilir çünkü test çalışmalarda taze kartuşları ve böylece mevcut eşitsiz koku uyaranlar. Başka bir yaygın sorun tamamen temizlik olmadan birden fazla koku için kartuşu kullanarak nedeniyle koku kartuş kirliliktir. Kirli veya kontamine hava akışı da istemeden ek koku uyaran (aktif karbon filtreli arka plan kirlenmesini önlemek olabilir) tanıtabilirsiniz. Koku fizyolojik yanıtlar ölçümleri ile tatbik edilen şartlama BAŞINA birleştiği zaman, bu özellikle sorunludur. Bal arılarının deneme koku uyaran alakayı azaltır, başlamadan önce koku maruz kaldığından sızdıran koku kartuşları bir sorun mevcut. Valf yapay amaçlanan koku raflarından tepki azaltılmış olur, açıldığında koku verilmesi için hava kaynağı üzerindeki gevşek çok az ya da hiç koku iletim sağlayabilir.
Sakaroz Çözüm ve koşulsuz uyarıcı (Ödül)
Birmount, ABD olarak kullanılan sukroz çözeltisi konsantrasyonu ve bütünlüğü deney başarısı için hayati önem taşımaktadır. Klima ABD 37 olarak kullanılan ve miktarı sükroz su çözeltisi konsantrasyonunun bir fonksiyonudur. Yöntem 2'de kullanılan mikrometre şırıngalar ABD teslimat çok hassas (aşağı 0,2 ul) kontrolü için, izin ve biz açıklanan her iki yöntem için bunları kullanmanızı öneririz. Kürdan (Yöntem 1) kullanımı, ya da daha düşük bütçelerle alanında geniş öğrenci grupları, çalışmalarını eğitim yılında, gibi pahalı şırıngalar kullanılamaz hangi şartlar için yeterli. Zamanlama sukroz oluşumunu (ve teslim konsantrasyonu) önlemek için kürdan düzenli değiştirilmesi ile korunur gibi Yöntem 1 dikkatli uygulanması sürece gayet iyi. Ancak, kürdan kullanarak doğru bir kontrol ve iklimlendirme çalışmaları 1 için önemli olan miktarı ve ABD'nin büyüklüğünü teslim, tahmin etmek daha zordur. Için gerekli sukroz konsantrasyonugörevin zorluk ve arıların iç durumu ve yılın zamanına bağlı olabilir klimalı ilişkiyi öğrenmek için motive arılar tutmak için yeterli bir ödül vermek. Daha zor görevler arılar 'başarıyla görev öğrenmek için bir yüksek sükroz çözüm gerektirir. Deney sırasında arıların sağlığını ve ödül algısını etkileyen, çözümün bütünlüğünü bozar hatta 5 ° C'de sukroz solüsyonunun kalıp teneke birikmesi. Her birkaç gün çözüm yerine, en iyisidir.
Hassas, Zamanlama ve CS ve ABD Teslimat tutarlılığı
Uygun bir BAŞINA prosedürün uygulanması, ya da bu konuda herhangi bir şartlandırma prosedürü hakkında en kritik konu hassas, zamanlama ve CS tutarlılığı ve ABD teslimatı (Şekil 1) içerir. Prosedüre yeni Müfettişler sık sık bir veya iki uyarıcının teslim konusunda kesin vardır. ISI enBu CS örtüşme sağlamak için başarısız ve ABD, zayıf bakım performans sağlar. PLC deneyci koku teslim başlangıcından sonra sakaroz 3 sn sunmak için sesli sinyal otomatik. Müfettişler sinyalinden sonra hızlı teslimat için arı yakın sükroz / su damlasını tutmak gerekir. Bu prosedürler tutarlı ISI sürüklemek yardımcı olur. Klima arenada bir kronometre yerleştirmeden önce ve uyaranlara doğumdan sonra her iki arenada arıların zamanı izleme yanı sıra davanın uygun bir zaman yerleştirme için izin verir. Bu şekilde ITI nispeten tutarlı olabilir ve tüm prosedür kontrollü bir tempoda koşmak olabilir. Çok kısa ITI, en çok uzun, örneğin en az 1 dakika, ya da zayıf bakım performansına 1 yol açabilir.
Honey Bee Performansına, mevsimsel çevresel ve Bağlamsal Etkileri
Bal, arıların performansını önemli ölçüde çevresi tarafından etkilemiş olabiliröncesinde ve klima sırasında her iki. Sık sık, değişen mevsim ile gelen sıcaklık ve gıda kullanılabilirliği dalgalanmalar öğrenmek için arıların motivasyonunu değiştirecektir. Çiçekler çiçek olduğunda, arıların motivasyon laboratuarda klimalı dernek 38 azalır öğrenmek için. Koloni vurguladı zaman - aşırı sıcaklıklara, gıda kıtlığı, ya da hastalıkla ilgili stresten - arılar 'içinde kendi öğrenme performansında bir azalma gösterecektir. Bal arıları bir süre için de öğrenebiliriz bir uçuş odada muhafaza, ama orada çok hastalığın stres ve zamanla onların öğrenme performansını düşürür yaşlanma. Klima sırasında bağlamı da arıların performansını düşürebilir. Herhangi bir yabancı kokular, hareket ve diğer uyaranlara deneysel uyaranlara arı azalabilir. Bu sorunu önlemek için, makul, tutarlı, basitleştirilmiş görsel bir bağlam korumak.
Genotip ve Deneyim BAŞINA Performansı etkiler
<p class = "jove_content"> Bal arısı işçiler nedeniyle görev uzmanlaşma, genotip, ya da diğer çevresel faktörlere 20 için herhangi bir klima prosedür üzerinde performans önemli ölçüde farklı olabilir. Bu nedenle, mümkün olduğunca, standardize etmek, amacıyla bir deneyde kullanılan hayvan türleri bireyler arası varyasyonu azaltmak için çok önemlidir. O çok farklı dronlar ile evlendirilen anlamına açık evlendirilen kraliçe tarafından yönetilen bir kolonisinde, işçiler baba genotipi farklı olacaktır. Genetik plan dramatik duyusal yanıt 39 farklılıkları ve performansını 29 öğrenme yol açabilir. Sazın tek uçaklardan 28 sperm tarafından tohumlama kraliçeleri tarafından liderliğindeki koloniler kullanarak bu bireyler arası varyasyonu azaltır.Yukarıda tarif edilen protokoller, yuva girişinde işçi bal arısı toplanması için bir yöntemi de içerir. Bununla birlikte, bu bal arıları yaş veya davranışsal görev ile ilgili olarak birbirinden farklıdır. Onlar (inexperien genç olabilirmiş) veya daha büyük (daha tecrübeli) yem. Onlar ilk oryantasyon uçuşlarını yaparak genç bal arıları olabilir. Ya da bekçi arılar olabilir. Değişkenliği azaltmak için, hızlı kuruyan emaye boya veya işaretleme etiketleri ile arıların işaretlemek ya da yetişkinler (yaş kontrol) ve olarak ortaya gibi / veya (deneyimi için kontrol) kazarak başlar gibi. Sonra, birkaç gün sonra, şartlandırma için işaretli arıları toplamak. Hemşirelik davranışlarda bulunan İşçi kovan içinde çerçevelerin alınabilir. Onlar içinde larva için yem ve bakım için bir kuluçka hücreye başlarını eklediğinizde Hemşireler pozitif tespit edilebilir.
BAŞINA İklimlendirme Virgin Queens veya Drones kullanma
Işçi bal arılarının yanı sıra, bakire bal arısı kraliçeler ve uçağı kolayca performansını 28 öğrenmede farklılık bal arılarının genetik hatları geliştirmeye yönelik çalışmalar için bir BAŞINA prosedür klimalı edilebilir. Virgin kraliçeler th hemen sonra alınmalıdırey pupa ortaya ve anesthetization olmadan yasaklama koşum içine doğrudan yerleştirilir. Koloninin içine damızlık tarak toplanan Genç, olgunlaşmamış uçağı genellikle öğrenmek için motive değildir. Onlar uçuşlar çiftleşme başladıktan sonra, uçağı kolayca BAŞINA görevleri 28 öğrenirler. Onlar kraliçeler yetiştirmek için kullanılan bir koloni küçük bir kafes içinde gecede bir çiftleşme uçuş dönmek ve hakimiyet tahsil edilmelidir. Onlara klima bir gün önce koşum çalışmayın; onlar koşum gecede iyi hayatta yok. Klima öncesinde saat uçağı kafeslerden toplanan ve anesthetization olmadan kısıtlayıcı koşum içine yerleştirilebilir bir çift.
Sonuçlar
Bu BAŞINA prosedür, yöntemlerin şekilde, PER deney tasarımı için bir başlangıç noktası tutarlar. En BAŞINA protokolleri bir şekilde değiştirilebilir özetlenen prosedürü deney ve dostu konaklama belirli hedefleri uygulamak için gerektirecektirE birden fazla tedavi gruplar. Bu uygulamak kolaydır. Ancak, doğru uygulama detay ve uygulamaya da dikkat gerektirir. Bir kez farklı böcek türleri ile bazı temel ve uygulamalı araştırma programları için bir araştırma aracı olarak eklemek için güçlü bir prosedür olabilir hakim.
Acknowledgments
(; BH Smith ko-PI J Trumble PI) ve Arizona Devlet Üniversitesi Bu araştırma NIH NCRR (BHS için R01 RR014166), NIH NIDCD tarafından (R01 DC011422 BHS ko-PI), ABD Tarım Departmanı fon tarafından desteklenmiştir. Öğrenciler (Şekil 4 veri) eğitmek için atölye için finansman Şili bilimi vakıf tarafından sağlandı.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | S9378-1KG | |
| Odorant Compounds (for example) | |||
| 1-hexanol | Sigma-Aldrich | 471402-100ML | For additional examples |
| 2-octanone | Sigma-Aldrich | W280208-800G-K | of odorants, see any of |
| heptanol | Sigma-Aldrich | 51778-5ML | the papers on olfactory |
| gerianol | Sigma-Aldrich | 163333-25G | processing from the |
| nonanal | Sigma-Aldrich | 131210-100ML | Smith lab. |
| Hexane | Sigma-Aldrich | 296090-1L | |
| Heavy mineral oil | Sigma-Aldrich | 330760-1L | Make sure it’s odorless. |
| Ethanol | Sigma-Aldrich | 459836-1L | |
| Scintillation vials | Sigma-Aldrich | Z190535-1PAK | Use a small drill bit to bore a small hole in the cap of the vials. |
| Bee harness | Custom-made from 0.9 cm diameter plastic soda straws or hard plastic/metal tubing. | ||
| Duct tape | |||
| Kimwipes | Sigma-Aldrich | Z188956-1PAK | |
| Wash bottles | Sigma-Aldrich | Z560847-3EA | For the 70% ethanol. |
| Dryer tubing | |||
| FOR METHOD 1 ONLY | |||
| 20 ml disposable plastic syringes | Cole-Parmer | WU-07945-18 | |
| 15 mm filter paper circles | Sigma-Aldrich | Z274844-1PAK | |
| Pushpins | |||
| Toothpicks | |||
| FOR METHOD 2 ONLY | |||
| Gilmont Micrometer syringe, 0.2 ml | Cole-Parmer | EW-07840-00 | |
| Gilmont micrometer syringe tip | Cole-Parmer | EW-07841-00 | |
| 26 G 3/8” Leur hub hypodermic needles | Fisher Scientific | 14-826-10 | |
| 1 cc tuberculin syringes (plastic/glass) | Sigma-Aldrich | Z181641-1EA OR Z192090-200EA | Glass tuberculin syringes are available, but plastic syringes are much less expensive and will work well for a limited number of uses. |
| Small rubber/silicone restrictors | Cole-Parmer | EW-95702-02 | Made from 4.8 mm outer diameter silicone tubing or the rubber tips of the 1 cc syringe plungers. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Parafilm | Sigma-Aldrich | P7793-1EA | |
| 75 x 100 mm filter paper | Sigma-Aldrich | Z695106-500EA | |
| Direct Logic 05 Programmable Logic Controller |  Koyo Electronics Industries Co, Ltd |
||
| 1 mm, 4 mm, & 6 mm inner diameter PVC or silicone tubing | Cole-Parmer | Various | Cole-Parmer has a wide selection of suitable tubing. |
| Polypropylene connectors & leur fittings | Cole-Parmer | Various | Cole-Parmer has a wide selection of connectors and fittings for many tube sizes. |
| 65 mm Correlated Flowmeter | Cole-Parmer | EW-03216-08 | Aluminum with glass float; for liquids and gases, with valve. |
| OR | |||
| Tetra Whisper 300 (Tetratek DW96-2) Aquarium Air Pump | Aquacave |
AE-TETRA-300 | |
| LIF series Solenoid Valves for .042 " ID Tubing, Configuration "E" | The Lee Company |
LFAA1200118H | Neoprene, 430 SS, 302 SS, 280 mW |
| PC-Board 12VDC 70dB Piezo Buzzer | RadioShack |
273-074 | |
References
- Rescorla, R. A. Behavioral studies of Pavlovian conditioning. Annu Rev Neurosci. 11, 329-352 (1988).
- Martin, S. J., Grimwood, P. D., Morris, R. G. Synaptic plasticity and memory: an evaluation of the hypothesis. Annu Rev Neurosci. 23, 649-711 (2000).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera). Journal of Comparative Psychology. 97, 107-119 (1983).
- Giurfa, M., Sandoz, J. C. Invertebrate learning and memory: Fifty years of olfactory conditioning of the proboscis extension response in honeybees. Learn Mem. 19, 54-66 (2012).
- Smith, B. H., Wright, G. A., Daly, K. S. The Biology of Floral Scents. Dudareva, N., Pichersky, E. , CRC Press. 263-295 (2006).
- Menzel, R., Giurfa, M. Dimensions of cognition in an insect, the honeybee. Behav Cogn Neurosci Rev. 5, 24-40 (2006).
- Kuwabara, M. Bildung des bedingten Reflexes von Pavlovs Typus bei der Honigbiene, Apis mellifera. Journal of the Faculty of Science, Hokkaido University, Zoology. 13, 458-464 (1957).
- Menzel, R. The honeybee as a model for understanding the basis of cognition. Nat Rev Neurosci. 13, 758-768 (2012).
- Menzel, R. Neurobiology of comparative cognition. Kesner, R. P., Olton, D. S. , Lawrence Erlbaum. 237-292 (1990).
- Hammer, M., Menzel, R. Learning and memory in the honeybee. Journal of Neuroscience. 15, 1617-1630 (1995).
- Strube-Bloss, M. F., Nawrot, M. P., Menzel, R. Mushroom body output neurons encode odor-reward associations. J Neurosci. 31, 3129-3140 (2011).
- Szyszka, P., Galkin, A., Menzel, R. Associative and non-associative plasticity in kenyon cells of the honeybee mushroom body. Front Syst Neurosci. 2, (2008).
- Fernandez, P. C., Locatelli, F. F., Person-Rennell, N., Deleo, G., Smith, B. H. Associative conditioning tunes transient dynamics of early olfactory processing. J Neurosci. 29, 10191-10202 (2009).
- Locatelli, F. F., et al. Nonassociative plasticity alters competitive interactions among mixture components in early olfactory processing. Eur J Neurosci. 37, 63-79 (2013).
- Farooqui, T., Robinson, K., Vaessin, H., Smith, B. H. Modulation of early olfactory processing by an octopaminergic reinforcement pathway in the honeybee. Journal of Neuroscience. 23, 5370-5380 (2003).
- Mussig, L., et al. Acute disruption of the NMDA receptor subunit NR1 in the honeybee brain selectively impairs memory formation. J Neurosci. 30, 7817-7825 (2010).
- Hladun, K. R., Smith, B. H., Mustard, J. A., Morton, R. R., Trumble, J. T. Selenium toxicity to honey bee (Apis mellifera L.) pollinators: effects on behaviors and survival. PLoS One. 7, e34137 (2012).
- Wiegmann, D. D., Smith, B. H. International Journal of Comparative Psychology. 22, 141-152 (2009).
- Drezner-Levy, T., Shafir, S. Parameters of variable reward distributions that affect risk sensitivity of honey bees. J Exp Biol. 210, 269-277 (2007).
- Drezner-Levy, T., Smith, B. H., Shafir, S. The effect of foraging specialization on various learning tasks in the honey bee (Apis mellifera). Behavioral Ecology & Sociobiology. 64, 135-148 (2009).
- Shafir, S., Menda, G., Smith, B. H. Caste-specific differences in risk sensitivity in honeybees, Apis mellifera. Animal Behaviour. 69, 859-868 (2005).
- Smith, B. H., Menzel, R. An analysis of variability in the feeding motor program of the honey bee; the role of learning in releasing a modal action pattern. Ethology. 82, 68-81 (1989).
- Erber, J., Pribbenow, B., Kisch, J., Faensen, D. Operant conditioning of antennal muscle activity in the honey bee (Apis mellifera L). Journal of Comparative Physiology A-Sensory Neural & Behavioral Physiology. 186, 557-565 (2000).
- Smith, B. H., Menzel, R. The use of electromyogram recordings to quantify odorant discrimination in the honey bee, Apis mellifera. Journal of Insect Physiology. 35, 369-375 (1989).
- Stopfer, M., Bhagavan, S., Smith, B. H., Laurent, G. Impaired odour discrimination on desynchronization of odour-encoding neural assemblies. Nature. 390, 70-74 (1997).
- Daly, K. C., Christensen, T. A., Lei, H., Smith, B. H., Hildebrand, J. G. Learning modulates the ensemble representations for odors in primary olfactory networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 10476-10481 (2004).
- Matsumoto, Y., Menzel, R., Sandoz, J. C., Giurfa, M. Revisiting olfactory classical conditioning of the proboscis extension response in honey bees: a step toward standardized procedures. J Neurosci Methods. 211, 159-167 (2012).
- Chandra, S. B., Hosler, J. S., Smith, B. H. Heritable variation for latent inhibition and its correlation with reversal learning in honeybees (Apis mellifera). Journal of Comparative Psychology. 114, 86-97 (2000).
- Chandra, S. B., Hunt, G. J., Cobey, S., Smith, B. H. Quantitative trait loci associated with reversal learning and latent inhibition in honeybees (Apis mellifera). Behavior Genetics. 31, 275-285 (2001).
- Hammer, M. The neural basis of associative reward learning in honeybees. Trends in Neurosciences. 20, 245-252 (1997).
- Frisch, K. The Dance Language and Orientation of Bees. , Harvard University Press. (1965).
- Daly, K. C., Smith, B. H. Associative olfactory learning in the moth Manduca sexta. J Exp Biol. 203, 2025-2038 (2000).
- Fan, R. J., Anderson, P., Hansson, B. Behavioural analysis of olfactory conditioning in the moth spodoptera littoralis (Boisd.) (Lepidoptera: noctuidae). J Exp Biol. 200. 23 (Pt 23), 2969-2976 (1997).
- Paranjpe, P., Rodrigues, V., VijayRaghavan, K., Ramaswami, M. Gustatory habituation in Drosophila relies on rutabaga (adenylate cyclase)-dependent plasticity of GABAergic inhibitory neurons. Learn Mem. 19, 627-635 (2012).
- Vinauger, C., Lallement, H., Lazzari, C. R. Learning and memory in Rhodnius prolixus: habituation and aversive operant conditioning of the proboscis extension response. J Exp Biol. 216, 892-900 (2013).
- Smith, B. H., Abramson, C. I., Tobin, T. R. Conditional withholding of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera) during discriminative punishment. Journal of Comparative Psychology. 105, 345-356 (1991).
- Smith, B. H. An analysis of blocking in odorant mixtures: an increase but not a decrease in intensity of reinforcement produces unblocking. Behav Neurosci. 111, 57-69 (1997).
- Gerber, B., et al. Honey bees transfer olfactory memories established during flower visits to a proboscis extension paradigm in the laboratory. Animal Behaviour. 52, 1079-1085 (1996).
- Rueppell, O., et al. The genetic architecture of sucrose responsiveness in the honeybee (Apis mellifera L). Genetics. 172, 243-251 (2006).
