Summary
Indocyaningrönt Angiografi (eller ICGA) utförs av svansvenen injektion ger ICGA tidskurs bilder med hög kvalitet för att karakterisera avvikelser i mus åderhinnan.
Abstract
Indocyaningrönt Angiography (eller ICGA) är en teknik som utförs av ögonläkare för att diagnostisera abnormiteter i den koroidala och retinala vaskulaturen av olika ögonsjukdomar, såsom åldersrelaterad makuladegeneration (AMD). ICGA är särskilt användbart för att avbilda den posteriora koroidala vaskulaturen i ögat på grund av dess förmåga att tränga igenom det pigmenterade skiktet med dess infrarödspektrum. ICGA tidsförloppet kan delas in i början, mitten och sena faser. De tre faserna ger värdefull information om patologi ögonproblem. Även om tidsförlopp ICGA genom intravenös (IV) injektion används ofta i kliniken för diagnos och hantering av koroidea problem, ICGA genom intraperitoneal injektion (IP) används ofta i djurförsök. Här har vi visat att teknik för att få ICGA tidskurs bilder med hög upplösning i möss med svans-ven injektion och konfokala scanning laser oftalmoskopi. Vi använde denna teknik för att avbilda choroidal leserna i en musmodell av åldersrelaterad makuladegeneration. Även om det är mycket lättare att införa ICG till musen vaskulaturen efter IP, våra data tyder på att det är svårt att få reproducerbara ICGA tidsförlopps bilder genom IP-ICGA. Däremot ICGA via injektion i svansvenen tillhandahåller högkvalitativa ICGA tidsförlopps bilder jämförbara med humanstudier. Dessutom visade vi att ICGA utförs på albino möss ger tydligare bilder av koroidala fartyg än den som utförs på pigmenterade möss. Vi föreslår att tidsförlopp IV-ICGA bör bli ett standardförfarande i AMD forskning baserad på djurmodeller.
Introduction
Indocyaningrönt angiografi (ICGA) är ett diagnostiskt test för att bild problem relaterade till blodkärl i ögat. Absorptionsspektrumet av ICG sträcker 790-805 nm medan emissionsspektrumet sträcker 770-880 nm med emissionstopp vid 835 nm 1. Detta skiljer sig från de andra populära färgämnet, natrium-fluorescein, vars spektrum faller inom det synliga området. Det infraröda spektret möjliggör ICG att tränga igenom näthinnans pigmentepitel (RPE), serosanguineous vätska och lipid utsöndringar, som alla lätt kan blockera visualisering genom natrium-fluorescein baserad fluoresceinangiografi (FA). ICG är 98% proteinbundet i kärlsystemet vilket resulterar i mindre extravasation, vilket gör att förbättrad avbildning av koroidala fartyg och koroidala lesioner 1,2. ICGA är nästan det enda valet för att visualisera koroidal kärlsystemet, vilket är posteriort RPE. Figur 1 visar en jämförelse av ICGA och FA i avbildning kärlsystemet i mus ögon. FA kan be som används för att bilden näthinnans kärl bra men inte den koroidala kärlsystemet. I motsats härtill kan ICGA användas för att avbilda både retinal och koroidal kärlbädden. ICGA utförs med högupplösta digitala bildsystem eller scanning laser oftalmoskop (SLO) tillsammans med IR-känsliga videokameror, som vi kommer att använda i denna studie.
På kliniken har ICGA rekommenderats i diagnostisera ett antal chorioretinal störningar som involverar den koroidala vaskulaturen inklusive Polypoidal Choroidal vaskulopati (PCV), retinal Angiomatous Proliferation (RAP), angioid strimmor vitelliform macular dystrophy, central serös chorioretinopathy, koroidal hemangiom, hemorrhaging retinal arteriolära macroaneurysms, koroidala tumörer och vissa former av bakre uveit 1,3. Kombinationen av ICGA med FA och optisk koherens tomografi (OCT) ger kraftfulla verktyg för kliniker i diagnostik och behandling av exudative åldersrelaterad makuladegeneration (AMD) 4-10. ICGA är särskilt användbart för att diagnostisera förhållanden där åderhinnan. I själva verket är ICGA vara den gyllene standarden för att diagnostisera PCV, en variant av exsudativ AMD 11-13. PCV kännetecknas av ett nätverk av förgrenade kärl med terminal polypoidal dilations i koroidala kärl 11-13. PCV är ofta förenat med återkommande serosanguineous avdelningar av RPE och näthinnan med läckage och blödning från polypoidal komponenterna 11,14,15. Vi rapporterade nyligen genereringen av den första PCV djurmodell genom transgent uttrycker human HTRA1, ett multifunktionellt serinproteas, i mus retinal pigmentepitel (RPE) 16. Vi visade att ökad HTRA1 framkallade karakteristiska dragen i PCV, t.ex. polypoidal lesioner.
Här vi visat att användning av tid-kurs ICGA genom svansvenen injektion i AMD forskning med hjälp av vår HTRA1 musmodell. Våra data tyder på attIV-ICGA är överlägsen IP (eller subkutan (SC))-ICGA som för närvarande används inom området 17,18 för karakterisering av lesioner i åderhinnan.
Uttalande om djurförsök
Djurexperiment utfördes enligt protokoll som godkänts av Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC), och har utförts i enlighet med det ARVO uttalande för användning av djur i ögon och Vision Research.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Beredning av Instrument
- Förfarandet utföres i ett förfarande rum i en djuranläggning.
- Bär ansiktsmasker, hår motorhuvar, operationsrockar, sterila mul-covers, och handskar innan experimentet.
- Värm vatten i en bägare till ~ 40 ° C på en värmeplatta.
- Placera en steril blå dyna ovanpå en värmedyna som kommer att användas senare för att upprätthålla musens kroppstemperatur under avbildning. Sätt på värmedyna.
- Förbered Imaging System:
- Ta bort dammskyddet och slå på lasern.
- Ta ut 55 ° objektiv och montera den på maskinen.
- Öppna bildprogram från datorn och mata in informationen på musen för avbildning under ett nytt patients blad (t.ex. genotyp, ålder, osv.). Under "Typ av enhet", välj Infraröd (IR)-läge.
OBS: Det har rapporterats att användningen of en extern dubbel asfäriska linsen kan förbättra bildkvaliteten 17-20 även om vi har inga problem med att få bilder av hög kvalitet med IV-ICGA utan att använda externa linser (se representativa resultat, figur 1-4).
2. Injektion i svansvenen av ICGA
- Dilate mus ögon med 1% tropikamid ögondroppar och vänta 5 min.
- Väg musen för att bestämma mängden av anestesi (ketamin / xylazin / Acepromazin 65-100/10-20/1-3 mg / kg) behövs.
- Hämta en steril 1 ml-spruta tillsammans med en 32 G nål. Injicera mus intraperitonealt med anestetika (13 mg / ml ketamin, 2,6 mg / ml xylazin, 0,3 mg / ml acepromazin i steril PBS). Vänta till dess att musen är helt bedövad (~ 5 min).
- Placera musen svans i 40 ° C varmt vatten för att orsaka vasodilatation av venen.
- Hämta en 1 ml spruta med en 32 G nål. Drag upp den önskade mängden av ICG, typiskt 50 pl av 1 mg / ml ICG, som är steril filtrerades med ett 0,2 | iM sprutfilter in i ett sterilt rör, för en 25 g mus (2 mg / kg). Var noga med att inte införa någon luft i sprutan.
- Torka av svansen med en alkoholbomullstopp för att sterilisera det område som skall injiceras.
- Håll i svansen med en hand så att den laterala svansvenen är uppåt. Med avfasning av nålen vänd uppåt, injicera nålen ~ 2 mm i venen på en minimal vinkel. Var noga med att inte perforera venen. Rita tillbaka sprut något och leta efter spår av blodflödet i nålnavet, vilket indikerar att nålen framgångsrikt införd i venen.
- Injicera långsamt ICG i venen. Det bör vara minimalt motstånd när du injicerar. Ta bort nålen och tillämpa en spritsudd direkt till injektionsstället för ~ 5-10 sekunder för att stoppa blödning. Musen är därefter färdigt för avbildning. För att fånga den tidiga fasen (0-4 minuter efter injektion), är det Essential till bild musen snabbt.
OBS: Mouse ögon kan lätt få torr och kan utveckla grå starr under narkos. Det är viktigt att hålla ögat fuktigt genom applicering steril PBS under förfarandet. Torka bort överflödigt PBS med en steril bomullspinne innan ICGA inspelning. Andra laboratorier har använt en kontaktlins för att undvika uttorkning av hornhinnan 17-20.
3. ICG-angiografi
- Börja med att ta bilder 30-40 sek efter ICG injektion, vilket gör det möjligt att fånga den tidiga fasen av koroidala fyllning tills retinala och koroidala upplagor är på maximal ljusstyrka (0-4 min). Den retinal kärl är bäst visualiseras i fokus ~ 35-45 dioptrier och koroidala kärl visualiseras på 10-15 dioptrier.
OBS: Under den första undersökningen av en djurmodell, rekommenderas att ta bilder från alla vinklar (nasal, tidsmässiga, rygg-och ventrala) för att identifiera alla möjliga abnormalities i kärlsystemet. Under den tidiga fasen, är både medelstora och stora koroidala artärer och vener väl visualiseras. I djurmodell som används i detta protokoll, kan koroidala lesioner (t.ex. polypoidal dilations) börjar dyka 1 minut in i den tidiga fasen. - Ställ in bildfokus på kärlsystemet. Kontroll för ljusstyrka och fokus med hjälp av kontrollmodulen och fokus knopp, respektive. Dessa värden är justerbara digitalt och lätt kan hållas konstant. Håll avståndet från mus öga till kameralins konstant för att säkerställa bildkvalitet är reproducerbart med användning av tekniken som följer.
OBS: Eftersom enheten kan bara bild en del av den bakre ögat, vi försöker hålla fokus, ljusstyrka, och avståndet mellan kameralinsen och musen ögat konstant som vi bild hela bakre ögat från olika vinklar. Nyckeln till detta är att anpassa den cirkelformade luminiscens avges av ICG genom ögat med området view från kameran. Detta åstadkommes genom att göra vänster-till-höger, upp-och-ner, och in-och-ut justering av kamerans position tills hela bilden har inga mörka områden. När luminescens och synfältet hos kameran är uppradade kommer avståndet från ögat till linsen vara reproducerbar för nästa uppsättning av bilder, samt vid ett optimalt avstånd för bildkvalitet. - När kärlen är i fokus, fånga bildrutor genom att trycka på den runda svarta knappen på förvärvsmodulen. Den runda svarta knappen kan också användas för att minska eller öka signalen från ICG för bästa bildkvalitet.
- Bestäm optimal betraktningsvinkel och fokusera djup till bild koroidala lesioner. Det är viktigt att behålla den positionen i ögat, fokuseringsdjupet, och andra enhetsinställningar som fastställts för hela tidsförloppet ICGA. Bilderna sparas genom att förvärva knapp på pekskärmen panel förvärvsmodulen.
- Förvärva bilder i mellanfasen på 6-15 min akteruter injektion.
Notera: Både choroidal och retinala kärl blir mindre distinkt. Choroidal vaskulatur visas som diffus fluorescens. Koroidala lesioner uppvisar hyperfluorescence framträda i kontrast till fädning omgivande normal bakgrundsfluorescens. - Förvärva bilder i den sena fasen på 17-25 minuter efter injektionen.
OBS: Hyperfluorescence bleknar. Både koroidala och retinala kärl inte längre syns. Synnervshuvudet blir svart. Hyperfluorescent koroidala lesioner har maximal kontrast med den blekna bakgrunden. - Efter att ha avslutat förvärvet av bilder, tillämpa en tydlig smörjmedel eye gel för mus ögon och lämna musen på en värmedyna för återvinning.
- Återgå möss till sina burar och hålla området. Exportera bilder som TIFF-eller JPEG-filer för vidare analys.
OBS: Tidpunkten för varje fas är inte absolut. Vi fann att tidpunkten för each fasen kan ändras beroende på mängden av ICG injiceras. Mer ICG tenderar att förlänga varje fas. Det bästa sättet att definiera en fas är enligt de viktigaste funktionerna i varje fas anges ovan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi utförde ICGA tidsförloppet i HTRA1 transgena möss och kontroll WT kullsyskon, som båda är på CD1 bakgrunden. Den albino CD1 bakgrund valdes för att underlätta indocyaningrönt angiografi (ICGA) imaging (se diskussion). Vissa aneurism som dilations började dyka upp i den tidiga fasen i HTRA1 musen (Figur 2, en röd pil indikerar utvidgning på spetsen av ett fartyg och en röd cirkel indikerar en klunga typ polypoidal lesion). Koroidala kärl syns tydligt i både WT och HTRA1 möss under denna tidiga utfyllnads skede av ICG färgämne. I mitten fasen hyperfluorescent lesioner i den tidiga fasen blev tydligare och fler lesioner börjat dyka upp medan de koroidala fartygen började avta i HTRA1 mus (gula cirklar indikerar uppkomsten av fler lesioner). I den sena fasen, koroidala skador i HTRA1 musen blev mer "distinkt" eftersom alla fartyg bleknat bort i bakgrunden. Synnerven huvudet var mörkt i både WT och HTRA1 möss (gröna pilar). De viktigaste funktionerna i de tre faserna liknar den ICGA tidsförloppet i mänskliga AMD-patienter (tidig fas, 0-3 min, mellersta fas, 5-15 min, sen fas, 18-22 min) 1.
Figur 1. Jämförelse mellan FA och ICGA i bildbehandling mus retinal och koroidal kärlsystemet. WT CD1 möss avbildas av IV-FA och IV-ICGA använda en multimodalitet Imaging System. Retinala kärl kan ses i både FA och ICGA. Koroidala kärl kan endast ses i ICGA. Klicka här för att visa en större bild .
/ 51061fig2highres.jpg "src =" / files/ftp_upload/51061/51061fig2.jpg "/>
Figur 2. ICGA tidsförloppet av HTRA1 transgena möss genom intravenös injektion. En WT-kontroll och en HTRA1 transgen mus avbildades av ICGA (med svansvenen injektion). En röd pil indikerar utvidgning på spetsen av ett kärl (enda polyp) och en röd cirkel indikerar en klunga typ polypoidal skada, som dök upp i tidig fas. Gula cirklar indikerar flera lesioner som dök upp i mitten fasen. Gröna pilarna pekar till den mörka papillen i både WT och HTRA1 möss. Observera att polypoidal skador visas i den tidiga fasen av ICGA och bli tydligare i mitten fasen som i humanstudier 21-24. Diskreta dot skador visas i mitten fas och blir klar i slutet av faserna (t.ex. den största gula cirkeln anger tre dot lesioner). Klicka här för att visa en större bild . 
Figur 3. ICGA tidsförloppet för HTRA1 transgena möss genom IP-injektion. HTRA1 transgena möss avbildades 5, 12 och 20 min efter IP-injektion av ICG. Bilderna av de två panel rader togs från två olika HTRA1 transgena möss. Observera att den koroidala kärl är mestadels osynlig även 5 min efter injektion (12 min för musen i de nedre panelerna). Klicka här för att visa en större bild .
Figur 4. ICGA tidsförloppet för ett pigmented (C57BL6) och en albino (CD 1) mus genom intravenös injektion Notera skillnaden i klarhet koroidala kärl mellan pigmente och albinomöss.. Klicka här för att visa en större bild .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denna studie visade vi användningen av ICGA till bild koroidala lesioner i HTRA1 transgena möss. Egenskaperna för den tidiga, mellersta och sena faser av ICGA i vår musmodell matcha tidsförloppet väl i humanstudier 1. Det är viktigt att göra bättre jämförelser mellan mänskliga patologi-och djur fenotyper, som är ovärderliga för forskning om patofysiologiska mekanismer och behandlingsstrategier av villkor i samband med åderhinnan såsom AMD.
Vi uruppfördes ICGA i möss med IP-injektion och fann att tiden kursen var mycket varierande från mus till mus, troligen på grund av den varierande absorption av ICG färgämne från kroppen hålrum i buken (Figur 3). Detta gör det svårt att jämföra med humanstudier utförda av IV-injektion. Dessutom har de angiografiska funktioner i olika faser av IV-ICGA är mycket användbara för att karakterisera olika typer av koroidala lesioner i djur modeller. De flesta väljer att undvika IV injektion (t.ex. i FA) för möss på grund av den tekniska utmaningen att utföra svansvenen injektion (mus svans vener är liten). Dock är ansträngningen väl spenderade med tanke på reproducerbar karaktären av denna teknik och mängden information som erhållits. När vi behärskar tekniken att svansvenen injektion, de andra stegen är ganska lik IP-ICGA. Det är värt att nämna att man måste få allt förberett i förväg (t.ex. Imaging System) för att fånga den mycket korta tidiga fasen (0-4 min). Vi jämförde IP-ICGA vs IV-ICGA för att studera olika HTRA1 transgena möss. Vi har gjort ~ 100 möss för varje metod. Slutsatsen är att IV-ICGA är överlägsen IP-ICGA för karakterisering av lesioner i åderhinnan. Time-kurs IV-ICGA har blivit vår standard praxis att undersöka AMD musmodeller. Av samma skäl föreslår vi att forskare bör överväga att utföra IV-FA för djurförsök.
t "> Förutom injektionsvägen, märkte vi att pigmentfärg påverkar också kvaliteten på ICGA. Tidigare studier rapporterade också detta" pigmenteeffekten "18,25. Dock finns ingen information om påverkan av pälsfärg på olika faser av ICGA. Vi jämförde ICGA mellan pigmenterad möss (C57BL6) och albino möss (CD 1) med tidsförloppet IV-ICGA. Stora koroidala kärl blir suddiga och mindre tydlig medan de små fartygen är svåra att se i C57BL6 möss, vilket står i skarp kontrast till de betydligt skarpare bilder av både stora och små koroidala fartyg i CD 1-möss (Figur 4). var den största skillnaden observerades i den tidiga fasen även mitt fasen påverkas också. Det finns ingen stor skillnad i den sena fasen ICGA grund blekning av ICG-signalen i den koroidala kärl. Tydligen ICG fluorescens kan delvis blockerad av RPE och melanocyter i åderhinnan i pigmenterade möss. Som ett förslag, kan man överväga att breeding sina AMD-modeller i CD1 bakgrunden för att med hög upplösning ICGA.Även om FA är mer allmänt används på AMD djurmodeller, är ICGA viktigt att upptäcka avvikelser i den koroidala kärlsystemet. Möjligheten att observera musen koroidal kärl med hög upplösning i realtid kan vara till stor hjälp forskare karakterisera AMD musmodeller och korrelera med histopatologiska data. Kombinationen av ICGA, FA och oktober kommer att vara extremt användbar vid karakterisering av fenotypen av AMD-modeller som i diagnosen av AMD i humana patienter. Eftersom musen är för närvarande den mest använda djurmodell för AMD forskning 26-29, kan tid-kurs IV-ICGA spela en större roll i forskarsamhället.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
YF är en uppfinnare av två väntande patent som är relevanta för AMD musmodell som används i detta arbete. SK, ZB, och ADJ har inget att lämna ut.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av NIH bidrag 1R01EY022901, Career Development Award från Forskning kring att förebygga blindhet (RPB), CMReeves & MA Reeves Foundation, E. Matilda Ziegler Foundation for the Blind, Tempelherreorden Eye Foundation, och en obegränsad bidrag till Institutionen för oftalmologi vid universitetet i Utah från RPB. Vi tackar Balamurali Ambati för tekniskt stöd på Spectralis multimodalitet Imaging System och Tao Zhang för diskussioner och kommentarer på manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Spectralis Multi-Modality Imaging System | Heidelberg Engineering, Germany | SPECTRALIS HRA+OCT | |
| Tropicamide ophthalmic solution (1%) | Bausch & Lomb | NDC 24208-585-64 | for dilation of pupils |
| GenTeal Gel | Genteal | NDC 58768-791-15 | clear lubricant eye gel |
| Ketamine | Vedco Inc | NDC 50989-996-06 | |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA 139-236 | |
| Acepromazine | Vedco Inc | NDC 50989-160-11 | |
| 32-G Needle | Steriject | PRE-32013 | |
| 1-ml syringe | BD | 309659 | |
| Indocyanine Green | Pfaltz & Bauer | I01250 |
References
- Duane, T. D., Tasman, W., Jaeger, E. A. Chapter 4a, Indocyanine Green Angiography. Duane's clinical ophthalmology on CD-ROM. , Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia. (2002).
- Alfaro, D. V. Age-related macular degeneration : a comprehensive textbook. , Lippincott Williams & Wilkins. (2006).
- Yannuzzi, L. A. Indocyanine green angiography: a perspective on use in the clinical setting. Am. J. Ophthalmol. 151, 745-751 (2011).
- Destro, M., Puliafito, C. A. Indocyanine green videoangiography of choroidal neovascularization. Ophthalmology. 96, 846-853 (1989).
- Scheider, A., Schroedel, C. High resolution indocyanine green angiography with a scanning laser ophthalmoscope. Am. J. Ophthalmol. 108, 458-459 (1989).
- Guyer, D. R., et al. Digital indocyanine-green angiography in chorioretinal disorders. Ophthalmology. 99, 287-291 (1992).
- Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J. A., Guyer, D. R., Orlock, D. A. Digital indocyanine green videoangiography and choroidal neovascularization. Retina. 12, 191-223 (1992).
- Regillo, C. D., Benson, W. E., Maguire, J. I., Annesley, W. H. Indocyanine green angiography and occult choroidal neovascularization. Ophthalmology. 101, 280-288 (1994).
- Scheider, A., Kaboth, A., Neuhauser, L. Detection of subretinal neovascular membranes with indocyanine green and an infrared scanning laser ophthalmoscope. Am. J. Ophthalmol. 113, 45-51 (1992).
- Kuck, H., Inhoffen, W., Schneider, U., Kreissig, I. Diagnosis of occult subretinal neovascularization in age-related macular degeneration by infrared scanning laser videoangiography. Retina. 13, 36-39 (1993).
- Imamura, Y., Engelbert, M., Iida, T., Freund, K. B., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy: a review. Surv. Ophthalmol. 55, 501-515 (2010).
- Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy. Ophthalmol. Clin. N. Am. 15, 537-554 (2002).
- Spaide, R. F., Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J., Orlach, D. A. Indocyanine green videoangiography of idiopathic polypoidal choroidal vasculopathy. Retina. 15, 100-110 (1995).
- Coppens, G., Spielberg, L., Leys, A. Polypoidal choroidal vasculopathy, diagnosis and management. Bull. Soc. belge d'Ophtalmol.. , 39-44 (2011).
- Tsujikawa, A., et al. Pigment epithelial detachment in polypoidal choroidal vasculopathy. Am. J. Ophthalmol. 143, 102-111 (2007).
- Jones, A., et al. Increased expression of multifunctional serine protease, HTRA1, in retinal pigment epithelium induces polypoidal choroidal vasculopathy in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 14578-14583 (2011).
- Alex, A. F., Heiduschka, P., Eter, N. Retinal fundus imaging in mouse models of retinal diseases. Methods Mol. Biol. 935, 41-67 (2013).
- Seeliger, M. W., et al. In vivo confocal imaging of the retina in animal models using scanning laser ophthalmoscopy. Vision Res. 45, 3512-3519 (2005).
- Fischer, M. D., Zhour, A., Kernstock, C. J. Phenotyping of mouse models with OCT. Methods Mol. Biol. 935, 79-85 (2013).
- Jian, Y., Zawadzki, R. J., Sarunic, M. V. Adaptive optics optical coherence tomography for in vivo mouse retinal imaging. J. Biomed. Opt. 18, 56007 (2013).
- Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Huang, S. J., Costa, D. L., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy. Surv. Ophthalmol. 49, 25-37 (2004).
- Sasahara, M., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy with choroidal vascular hyperpermeability. Am. J. Ophthalmol. 142, 601-607 (2006).
- Silva, R. M., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy and photodynamic therapy with verteporfin. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 243, 973-979 (2005).
- Yannuzzi, L. A., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy masquerading as central serous chorioretinopathy. Ophthalmology. 107, 767-777 (2000).
- Janssen, A., et al. Abnormal vessel formation in the choroid of mice lacking tissue inhibitor of metalloprotease-3. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2812-2822 (2008).
- Ding, X., Patel, M., Chan, C. C. Molecular pathology of age-related macular degeneration. Prog. Retin. Eye Res. 28, 1-18 (2009).
- Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. Animal models of choroidal and retinal neovascularization. Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).
- Pennesi, M. E., Neuringer, M., Courtney, R. J. Animal models of age related macular degeneration. Mol. Aspects Med. 33, 487-509 (2012).
- Elizabeth Rakoczy, P., Yu, M. J., Nusinowitz, S., Chang, B., Heckenlively, J. R. Mouse models of age-related macular degeneration. Exp. Eye Res. 82, 741-752 (2006).
