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समय पाठ्यक्रम indocyanine ग्रीन एंजियोग्राफी द्वारा आयु से संबंधित धब्बेदार अध: पतन के एक माउस मॉडल में रंजितपटल संबंधी vasculature में असामान्यताएं का पता लगाने के

Published: February 19, 2014 doi: 10.3791/51061
Automatic Translation
1, 1, 1, 1,2
1Department of Ophthalmology & Visual Sciences, University of Utah Health Sciences Center, 2Department of Neurobiology & Anatomy, University of Utah Health Sciences Center

Summary

पूंछ नस में इंजेक्शन द्वारा प्रदर्शन indocyanine ग्रीन एंजियोग्राफी (या ICGA) माउस रंजित में असामान्यताएं चिह्नित करने के लिए उच्च गुणवत्ता ICGA समय पाठ्यक्रम चित्र प्रदान करता है.

Abstract

Indocyanine ग्रीन एंजियोग्राफी (या ICGA) choroidal और ऐसी उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन (AMD) के रूप में विभिन्न नेत्र रोगों की रेटिना vasculature की असामान्यताओं का पता लगाने के लिए नेत्र रोग विज्ञानियों द्वारा निष्पादित एक तकनीक है. ICGA कारण इसकी अवरक्त स्पेक्ट्रम के साथ रंजित परत के माध्यम से मर्मज्ञ की अपनी क्षमता को आँख के पीछे choroidal vasculature छवि के लिए विशेष रूप से उपयोगी है. ICGA समय पाठ्यक्रम जल्दी, मध्य, और देर चरणों में विभाजित किया जा सकता है. तीन चरणों आंख की समस्याओं की विकृति पर बहुमूल्य जानकारी प्रदान करते हैं. नसों में से समय पाठ्यक्रम ICGA (चतुर्थ) के इंजेक्शन को व्यापक रूप से रंजित समस्याओं के निदान के प्रबंधन के लिए क्लिनिक में इस्तेमाल किया जाता है, ICGA intraperitoneal इंजेक्शन (आईपी) द्वारा आमतौर पर पशु अनुसंधान में प्रयोग किया जाता है. यहाँ हम पूंछ नस इंजेक्शन और confocal स्कैनिंग लेजर ophthalmoscopy द्वारा चूहों में उच्च संकल्प ICGA समय पाठ्यक्रम छवियों को प्राप्त करने के लिए तकनीक का प्रदर्शन किया. हम choroidal Le छवि के लिए इस तकनीक का इस्तेमालउम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन के एक माउस मॉडल में वजहें. यह आईपी द्वारा माउस vasculature को भारतीय तट रक्षक लागू करने के लिए बहुत आसान है, हमारे डेटा यह आईपी ICGA से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य ICGA समय पाठ्यक्रम छवियों को प्राप्त करना कठिन है कि संकेत मिलता है. इसके विपरीत, पूंछ नस में इंजेक्शन के माध्यम से ICGA मानव अध्ययन करने के लिए तुलनीय उच्च गुणवत्ता ICGA समय पाठ्यक्रम चित्र प्रदान करता है. इसके अलावा, हम ICGA pigmented चूहों पर किया है कि अधिक से choroidal जहाजों का स्पष्ट चित्र देता सूरजमुखी मनुष्य चूहों पर किया है कि दिखाया. हम उस समय पाठ्यक्रम चतुर्थ ICGA पशु मॉडल पर आधारित AMD अनुसंधान के क्षेत्र में एक मानक अभ्यास हो जाना चाहिए सुझाव देते हैं.

Introduction

Indocyanine हरी एंजियोग्राफी (ICGA) आंख में रक्त वाहिकाओं से संबंधित छवि समस्याओं के लिए एक नैदानिक ​​परीक्षण है. उत्सर्जन स्पेक्ट्रम 770-880 एनएम से 835 एनएम 1 में चोटी उत्सर्जन के साथ पर्वतमाला जबकि भारतीय तट रक्षक के अवशोषण स्पेक्ट्रम 790-805 एनएम से चलता है. इस जिसका स्पेक्ट्रम दिखाई रेंज में पड़ता अन्य लोकप्रिय डाई, सोडियम fluorescein, से अलग है. अवरक्त स्पेक्ट्रम आसानी से सोडियम fluorescein आधारित fluorescein एंजियोग्राफी (एफए) ने दृश्य को ब्लॉक कर सकते हैं, जो सभी के रेटिना वर्णक उपकला (RPE), serosanguineous तरल पदार्थ, और लिपिड exudates, के माध्यम से प्रवेश करने के लिए भारतीय तट रक्षक सक्षम बनाता है. भारतीय तट रक्षक choroidal वाहिकाओं और choroidal घावों 1,2 बढ़ाया इमेजिंग की अनुमति, 98% प्रोटीन बाध्य कम परिस्त्राव में जिसके परिणामस्वरूप vasculature में है. ICGA लगभग RPE को पीछे है जो choroidal vasculature, कल्पना करने के लिए ही पसंद है. चित्रा 1 माउस आँखों में इमेजिंग vasculature में ICGA और एफए की तुलना से पता चलता है. एफए कर सकते हैं खछवि को रेटिना वाहिका संरचना अच्छी तरह से नहीं बल्कि choroidal vasculature उपयोग किए गए ई. इसके विपरीत, ICGA रेटिना और choroidal vasculature दोनों छवि के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. ICGA एक साथ हम इस अध्ययन में इस्तेमाल करेगा जो अवरक्त के प्रति संवेदनशील वीडियो कैमरा, के साथ उच्च संकल्प डिजिटल इमेजिंग सिस्टम या लेजर स्कैनिंग ophthalmoscopes (SLO) के साथ किया जाता है.

क्लिनिक में, ICGA Polypoidal रंजितपटल संबंधी Vasculopathy (PCV), रेटिना वाहिकार्बुदीय प्रसार (आरएपी), रक्तवाहिकाभ धारियाँ, vitelliform धब्बेदार डिस्ट्रोफी, केंद्रीय तरल chorioretinopathy, choroidal रक्तवाहिकार्बुद, ख़ून का बहाव रेटिना सहित choroidal vasculature को शामिल chorioretinal विकारों के एक नंबर के निदान में सिफारिश की गई है arteriolar macroaneurysms, choroidal ट्यूमर, और पीछे के कुछ रूपों 1,3 Uveitis. एफए और ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (अक्टूबर) के साथ ICGA के संयोजन स्त्रावी उम्र से संबंधित धब्बेदार का निदान और प्रबंधन में चिकित्सकों के लिए शक्तिशाली उपकरण प्रदानअध: पतन (AMD) 4-10. ICGA रंजित शामिल स्थितियों के निदान के लिए विशेष रूप से उपयोगी है. वास्तव में, ICGA PCV, स्त्रावी AMD 11-13 का एक संस्करण के निदान के लिए स्वर्ण मानक माना जाता है. PCV choroidal vasculature 11-13 में टर्मिनल polypoidal dilations साथ जहाजों शाखाओं में बंटी के एक नेटवर्क की विशेषता है. PCV अक्सर रिसाव और polypoidal घटकों 11,14,15 से खून बह रहा है के साथ RPE और रेटिना के आवर्तक serosanguineous टुकड़ी के साथ जुड़ा हुआ है. हमने हाल ही में transgenically माउस रेटिना वर्णक उपकला (RPE) 16 में, मानव HTRA1, एक बहुआयामी सेरीन प्रोटीज व्यक्त की पहली PCV पशु मॉडल की पीढ़ी की सूचना दी. हम वृद्धि हुई HTRA1 PCV की विशेषता सुविधाओं, जैसे polypoidal घावों प्रेरित दिखाया.

यहाँ हम हमारे HTRA1 माउस मॉडल का उपयोग AMD अनुसंधान में पूंछ नस में इंजेक्शन द्वारा समय पाठ्यक्रम ICGA के उपयोग का प्रदर्शन किया. हमारे आंकड़े बताते हैं किचतुर्थ ICGA आईपी (या चमड़े के नीचे (अनुसूचित जाति)) वर्तमान में रंजित में घावों निस्र्पक के लिए क्षेत्र 17,18 में उपयोग किया जाता है कि ICGA से बेहतर है.

पशु अनुसंधान पर वक्तव्य

पशु प्रयोगों संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार आयोजित की गई, और नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में पशुओं के उपयोग के लिए ARVO विवरण के अनुसार में प्रदर्शन किया गया.

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Protocol

1. साधनों की तैयारी

  1. प्रक्रिया एक जानवरों की सुविधा में एक प्रक्रिया के कमरे में किया जाता है.
  2. प्रयोग की शुरुआत से पहले facemasks, बाल bonnets, सर्जिकल गाउन, बाँझ फुट कवर, और दस्ताने पहनते हैं.
  3. एक hotplate पर एक बीकर ~ 40 डिग्री सेल्सियस में गर्मी पानी.
  4. इमेजिंग के दौरान माउस के शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए बाद में इस्तेमाल किया जाएगा कि एक हीटिंग पैड के शीर्ष पर एक बाँझ नीले पैड रखें. हीटिंग पैड पर मुड़ें.
  5. इमेजिंग सिस्टम तैयार करें:
    1. धूल कवर निकालें और लेजर पर बारी.
    2. 55 ° लेंस बाहर ले जाओ और मशीन पर माउंट.
    3. कंप्यूटर और इनपुट एक नया मरीज ​​की चादर के नीचे इमेजिंग के लिए माउस की जानकारी (जैसे जीनोटाइप, उम्र, आदि.) से इमेजिंग सॉफ्टवेयर खोलें. "युक्ति प्रकार" के तहत, इन्फ्रारेड (आईआर) मोड का चयन करें.

नोट: यह बताया गया है कि उपयोग ओहम (प्रतिनिधि परिणाम देखने, 1-4 आंकड़े) बाहरी लेंस का उपयोग किए बिना चतुर्थ ICGA द्वारा उच्च गुणवत्ता के चित्र प्राप्त करने में कोई समस्या नहीं है, हालांकि च एक बाहरी डबल लेंस aspheric छवि गुणवत्ता 17-20 सुधार कर सकते हैं.

2. ICGA की पूंछ नस इंजेक्शन

  1. 1% Tropicamide नेत्र समाधान के साथ माउस आँखें चौड़ा करना और 5 मिनट इंतज़ार करो.
  2. संज्ञाहरण की जरूरत (Ketamine / xylazine / acepromazine 65-100/10-20/1-3 मिलीग्राम / किग्रा) की राशि का निर्धारण करने के लिए माउस वजन.
  3. एक 32 जी सुई के साथ एक बाँझ 1 मिलीलीटर सिरिंज निकालते हैं. निश्चेतक (13 मिलीग्राम / एमएल Ketamine, 2.6 मिलीग्राम / मिलीलीटर xylazine, बाँझ पीबीएस में 0.3 मिलीग्राम / एमएल acepromazine) के साथ intraperitoneally माउस इंजेक्षन. माउस को पूरी तरह से anesthetized है जब तक रुको (~ 5 मिनट).
  4. नस की vasodilatation पैदा करने के लिए 40 डिग्री सेल्सियस गर्म पानी में माउस पूंछ रखें.
  5. एक 32 जी सुई के साथ एक 1 मिलीलीटर सिरिंज निकालते हैं. आईसी के वांछित राशि वापस लेजी, आम तौर पर एक 25 ग्राम माउस (2 मिलीग्राम / किग्रा) के लिए, एक बाँझ ट्यूब में एक 0.2 माइक्रोन सिरिंज फिल्टर के साथ फ़िल्टर्ड बाँझ है जो 1 मिलीग्राम / एमएल भारतीय तट रक्षक के 50 μl. सिरिंज में किसी भी हवाई परिचय नहीं सावधान रहो.
  6. इंजेक्शन जा क्षेत्र बाँझ एक शराब झाड़ू के साथ पूंछ साफ कर लें.
  7. पार्श्व पूंछ नस ऊपर की ओर है, इसलिए है कि एक हाथ से पूंछ पकड़. ऊपर की ओर का सामना करना पड़ सुई का उठाव के साथ, एक न्यूनतम कोण पर नस में ~ 2 मिमी सुई इंजेक्षन. नस छेदना के प्रति सावधान रहें. थोड़ा सिरिंज पर वापस खींचना और सुई सफलतापूर्वक नस में सम्मिलित किया गया था, जो इंगित करता सुई हब, में रक्त के प्रवाह के निशान के लिए लग रही है.
  8. धीरे धीरे नस में भारतीय तट रक्षक इंजेक्षन. इंजेक्शन लगाने जब न्यूनतम प्रतिरोध किया जाना चाहिए. सुई निकालें और किसी भी रक्तस्राव को रोकने के लिए ~ 5-10 सेकंड के लिए इंजेक्शन साइट के लिए सीधे एक शराब झाड़ू लागू होते हैं. माउस इमेजिंग के लिए फिर तैयार है. प्रारंभिक चरण (इंजेक्शन के बाद 0-4 मिनट) को पकड़ने के लिए, यह ESSE हैजल्दी छवि के लिए माउस ntial.

नोट: माउस आंखों आसानी से शुष्क प्राप्त कर सकते हैं और संज्ञाहरण के तहत मोतियाबिंद विकसित कर सकते हैं. यह प्रक्रिया के दौरान बाँझ पीबीएस लगाने से नम नजर रखने के लिए महत्वपूर्ण है. ICGA रिकॉर्डिंग से पहले एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ अतिरिक्त पीबीएस से साफ कर लें. अन्य प्रयोगशालाओं कॉर्निया 17-20 के निर्जलीकरण से बचने के लिए एक संपर्क लेंस का इस्तेमाल किया है.

3. भारतीय तट रक्षक एंजियोग्राफी

  1. रेटिना और choroidal परिसंचरणों अधिकतम चमक (0-4 मिनट) पर कर रहे हैं जब तक छवियों choroidal भरने के प्रारंभिक चरण का कब्जा परमिट जो भारतीय तट रक्षक इंजेक्शन के बाद 30-40 सेकंड लेने के लिए शुरू. रेटिना वाहिका संरचना सबसे अच्छा फोकस ~ 35-45 diopters और choroidal vasculature 10-15 diopters में कल्पना है पर कल्पना है.

    नोट: एक पशु मॉडल की पहली परीक्षा के दौरान, यह सब संभव abno की पहचान करने के लिए सभी कोण (नाक, लौकिक, पृष्ठीय और उदर) से छवियों पर कब्जा करने के लिए सिफारिश की हैvasculature में rmalities. प्रारंभिक चरण के दौरान, मध्यम और बड़े choroidal धमनियों और शिराओं दोनों अच्छी तरह कल्पना कर रहे हैं. इस प्रोटोकॉल में प्रयोग किया जाता पशु मॉडल में, choroidal घावों (जैसे polypoidal dilations) प्रारंभिक चरण में 1 मिनट प्रकट करने के लिए शुरू हो सकता है.
  2. वाहिका संरचना पर छवि ध्यान केंद्रित किया. चमक के लिए नियंत्रण और क्रमशः, नियंत्रण मॉड्यूल और ध्यान केंद्रित घुंडी का उपयोग ध्यान केंद्रित. ये मान समायोज्य डिजिटल रूप से कर रहे हैं और आसानी से स्थिर रखा जाता है. इस प्रकार है कि तकनीक का उपयोग कर छवि गुणवत्ता प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है यह सुनिश्चित करने के लिए कैमरे के लेंस स्थिर करने के लिए माउस आंख से दूरी रखें.

    नोट: डिवाइस केवल छवि, हम कैमरे के लेंस और निरंतर माउस आंख के बीच फोकस, चमक, और दूरी रखने के पीछे आंख के एक हिस्से की कोशिश कर सकते हैं के बाद से हम छवि अलग कोण से पूरे पीछे आंख के रूप में. इस कुंजी होड़ के क्षेत्र के साथ आंख के माध्यम से भारतीय तट रक्षक द्वारा उत्सर्जित वृत्त के आकार का luminescence पंक्ति में हैकैमरे के डब्ल्यू. पूरी छवि कोई अंधेरे क्षेत्रों है जब तक यह बाएँ से सही बनाकर कैमरे की स्थिति के ऊपर और नीचे, और में और बाहर समायोजन पूरा किया है. कैमरे की निगाह से luminescence और क्षेत्र को लाइन में खड़ा कर रहे हैं, लेंस को आंख से दूरी गुणवत्ता इमेजिंग के लिए एक इष्टतम दूरी पर अगले छवियों के सेट के साथ ही के लिए प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य हो जाएगा.
  3. Vasculature ध्यान में है एक बार, अधिग्रहण मॉड्यूल पर गोल काली बटन दबाकर छवि तख्ते पर कब्जा. गोल काली बटन भी सबसे अच्छी छवि गुणवत्ता के लिए भारतीय तट रक्षक के संकेत को कम करने या बढ़ाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
  4. छवि choroidal घावों को इष्टतम देखने कोण और ध्यान केंद्रित गहराई का निर्धारण. यह आंख की स्थिति, ध्यान केंद्रित गहराई, और पूरे समय पाठ्यक्रम ICGA के लिए निर्धारित अन्य डिवाइस सेटिंग्स रखने के लिए महत्वपूर्ण है. छवियों अधिग्रहण मॉड्यूल की टच स्क्रीन पैनल पर प्राप्त बटन दबाने से बच रहे हैं.
  5. 6-15 मिनट पिछाड़ी पर मध्य चरण में छवियों का मोलएर इंजेक्शन.

    नोट: choroidal और रेटिना वाहिकाओं दोनों कम अलग हो जाते हैं. Choroidal vasculature के रूप में फैलाना प्रतिदीप्ति प्रकट होता है. Hyperfluorescence प्रदर्शन choroidal घावों सामान्य पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति आसपास के लुप्त होती के विपरीत उभरेगा.
  6. इंजेक्शन के बाद 17-25 मिनट में देर चरण में छवियों मोल.

    नोट: Hyperfluorescence fades. दोनों choroidal और रेटिना वाहिकाओं अब नहीं दिखाई दे रहे हैं. ऑप्टिक तंत्रिका सिर काला हो जाता है. Hyperfluorescent choroidal घावों लुप्त होती पृष्ठभूमि के साथ अधिक से अधिक विपरीत है.
  7. छवियों का अधिग्रहण पूरा करने के बाद, माउस आँखों के लिए एक स्पष्ट स्नेहक नेत्र जेल लागू करते हैं और वसूली के लिए एक हीटिंग पैड पर माउस छोड़ दें.
  8. उनके पिंजरों और पकड़े क्षेत्र के लिए चूहों पर लौटें. आगे के विश्लेषण के लिए झगड़ा या JPEG फ़ाइलों के रूप में निर्यात छवियाँ.

नोट: प्रत्येक चरण के समय निरपेक्ष नहीं है. हमने पाया है कि ईए का समयCH चरण इंजेक्शन भारतीय तट रक्षक की राशि के आधार पर बदल सकता है. अधिक भारतीय तट रक्षक प्रत्येक चरण को लम्बा खींच जाता है. एक चरण को परिभाषित करने के लिए सबसे अच्छा तरीका ऊपर सूचीबद्ध प्रत्येक चरण की प्रमुख विशेषताओं के अनुसार है.

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Representative Results

हम CD1 पृष्ठभूमि पर कर रहे हैं, जो दोनों HTRA1 ट्रांसजेनिक चूहों और नियंत्रण WT littermates में ICGA समय बेशक प्रदर्शन किया. सूरजमुखी मनुष्य CD1 पृष्ठभूमि indocyanine हरी एंजियोग्राफी (ICGA) इमेजिंग (चर्चा देखने के लिए) की सुविधा के लिए चुना गया था. Dilations जैसे कुछ धमनीविस्फार HTRA1 माउस में प्रारंभिक चरण में प्रदर्शित हुई (चित्रा 2, एक लाल तीर एक पोत की नोक पर फैलाव को इंगित करता है और एक लाल वृत्त एक क्लस्टर प्रकार polypoidal घाव इंगित करता है). Choroidal जहाजों के दौरान WT और HTRA1 चूहों दोनों में स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे इस भारतीय तट रक्षक डाई के मंच भरने में जल्दी. मध्य चरण में प्रारंभिक चरण में hyperfluorescent घावों साफ हो गया और choroidal वाहिकाओं (पीला हलकों अधिक घावों की उपस्थिति का संकेत) HTRA1 माउस में फीका करने के लिए शुरू कर दिया है, जबकि अधिक घावों दिखाई शुरू कर दिया. सभी जहाजों पृष्ठभूमि में दूर फीका के रूप में देर चरण में HTRA1 माउस का choroidal घावों अधिक "अलग" बन गया. ऑप्टिक तंत्रिका सिर WT और HTRA1 चूहों (हरी तीर) दोनों में अंधेरा था. 1 तीन चरणों की प्रमुख विशेषताओं मानव AMD रोगियों (; मध्यम चरण, 5-15 मिनट देर चरण, 18-22 मिनट प्रारंभिक चरण, 0-3 मिनट) में ICGA समय पाठ्यक्रम के समान हैं.

चित्रा 1
चित्रा 1. इमेजिंग माउस रेटिना और choroidal vasculature में एफए और ICGA की तुलना. गुम्मट CD1 चूहों चतुर्थ एफए और एक बहु साधन इमेजिंग प्रणाली का उपयोग करते हुए चतुर्थ ICGA ने उतारी गया. रेटिना वाहिकाओं एफए और ICGA दोनों में देखा जा सकता है. Choroidal जहाजों केवल ICGA में देखा जा सकता है. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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चित्रा 2. चतुर्थ इंजेक्शन द्वारा HTRA1 ट्रांसजेनिक चूहों की ICGA समय बेशक. एक WT नियंत्रण और एक HTRA1 ट्रांसजेनिक माउस (पूंछ नस इंजेक्शन के साथ) ICGA ने उतारी गया. एक लाल तीर एक पोत की नोक पर फैलाव (एकल नाकड़ा) इंगित करता है और एक लाल वृत्त में छपी है जो एक क्लस्टर प्रकार polypoidal घाव, इंगित करता है प्रारंभिक चरण. पीला हलकों मध्य चरण में दिखाई दिया कि कई घावों से संकेत मिलता है. हरी तीर WT और HTRA1 चूहों दोनों में अंधेरा ऑप्टिक तंत्रिका सिर को इंगित करें. Polypoidal घावों ICGA के प्रारंभिक चरण में दिखाई देते हैं और मानव अध्ययन 21-24 में के रूप में मध्य चरण में अधिक विशिष्ट बन ध्यान दें. अलहदा डॉट घावों मध्य चरण में दिखाई देते हैं और (तीन डॉट घावों का संकेत जैसे सबसे बड़े पीले सर्कल) देर चरणों में स्पष्ट हो गया है. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें . चित्रा 3
आईपी ​​इंजेक्शन द्वारा HTRA1 ट्रांसजेनिक चूहों की चित्रा 3. ICGA समय बेशक. HTRA1 ट्रांसजेनिक चूहों, 12 5 imaged, और भारतीय तट रक्षक के आईपी इंजेक्शन के बाद 20 मिनट थे. दो पैनल पंक्तियों की छवियों दो अलग HTRA1 ट्रांसजेनिक चूहों से लिया गया था. Choroidal vasculature इंजेक्शन (कम पैनल में माउस के लिए 12 मिनट). भी 5 मिनट के बाद ज्यादातर अदृश्य है कि नोट बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 4
चित्रा 4. एक वर्णक के ICGA समय पाठ्यक्रमएड (C57BL6) और चतुर्थ इंजेक्शन द्वारा एक सूरजमुखी मनुष्य (CD1) माउस. pigmented और सूरजमुखी मनुष्य चूहों के बीच choroidal vasculature की स्पष्टता में अंतर नोट करें. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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Discussion

इस अध्ययन में, हम HTRA1 ट्रांसजेनिक चूहों में छवि choroidal घावों को ICGA के उपयोग का प्रदर्शन किया. अपने माउस मॉडल में जल्दी, मध्य, और ICGA की देर चरणों की विशेषताओं मानव अध्ययन 1 में अच्छी तरह से समय पाठ्यक्रम मैच. इस तरह के AMD के रूप रंजित से संबंधित शर्तों के pathophysiological तंत्र और उपचार रणनीतियों पर अनुसंधान के लिए अमूल्य हैं जो मानव विकृति और पशु phenotypes के बीच बेहतर तुलना करने के लिए महत्वपूर्ण है.

हम पहले आईपी इंजेक्शन द्वारा चूहों में ICGA प्रदर्शन किया और समय बेशक शायद कारण पेट में शरीर गुहा (चित्रा 3) से भारतीय तट रक्षक डाई के चर अवशोषण करने के लिए, माउस से माउस को अत्यधिक चर था. इस मुश्किल चतुर्थ इंजेक्शन द्वारा निष्पादित मानव अध्ययन के साथ तुलना करने के लिए बनाता है. इसके अलावा, चतुर्थ ICGA के विभिन्न चरणों की angiographic सुविधाओं जानवर में choroidal घावों के विभिन्न प्रकार निस्र्पक के लिए बहुत उपयोगी हैं मॉडल. ज्यादातर लोगों के कारण पूंछ नस इंजेक्शन (माउस पूंछ नसों छोटे हैं) के प्रदर्शन की तकनीकी चुनौती के लिए चूहों के लिए चतुर्थ इंजेक्शन (जैसे एफए में) से बचने के लिए चुनते हैं. हालांकि, अच्छी तरह से प्रयास इस तकनीक की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रकृति और प्राप्त राशि की जानकारी पर खर्च किया जाता है. हम पूंछ नस इंजेक्शन की तकनीक में महारत हासिल कर लेंगे, दूसरे कदम आईपी ICGA बल्कि इसी तरह के हैं. यह एक सब कुछ बहुत ही कम प्रारंभिक चरण (0-4 मिनट) पर कब्जा करने के क्रम में (जैसे इमेजिंग सिस्टम) पहले से तैयार करने के लिए किया है उल्लेख है कि सार्थक है. हम विभिन्न HTRA1 ट्रांसजेनिक चूहों के अध्ययन के लिए चतुर्थ ICGA बनाम आईपी ICGA तुलना में. हम प्रत्येक विधि के लिए ~ 100 चूहों किया है. निष्कर्ष चतुर्थ ICGA रंजित में घावों निस्र्पक के लिए आईपी ICGA से बेहतर है कि है. समय पाठ्यक्रम चतुर्थ ICGA AMD माउस मॉडल की जांच करने के लिए हमारे मानक अभ्यास हो गया है. उसी कारण से, हम शोधकर्ताओं पशु अनुसंधान के लिए चतुर्थ एफए प्रदर्शन पर विचार करना चाहिए.

टी "इंजेक्शन मार्ग से अन्य>, हम रंगद्रव्य रंग भी ICGA की गुणवत्ता को प्रभावित करती है कि देखा. पिछले अध्ययनों से भी यह सूचना दी" रंजकता प्रभाव "18,25. हालांकि, कोई जानकारी अलग पर कोट रंग के प्रभाव पर उपलब्ध है ICGA के चरणों. हम समय पाठ्यक्रम चतुर्थ ICGA द्वारा pigmented चूहों (C57BL6) और सूरजमुखी मनुष्य चूहों (CD1) के बीच ICGA तुलना में. छोटे जहाजों तेज में है, जो C57BL6 चूहों में देखने के लिए कठिन हैं, जबकि बिग choroidal वाहिकाओं फजी और कम स्पष्ट दिखाई देते हैं मध्य चरण भी प्रभावित होता है, हालांकि CD1 चूहों में बड़े और छोटे दोनों choroidal वाहिकाओं (चित्रा 4) के ज्यादा तेज छवियों के विपरीत. सबसे बड़ा अंतर यह प्रारंभिक चरण में मनाया गया. देर चरण ICGA में कोई बड़ा अंतर की वजह से है choroidal वाहिकाओं में भारतीय तट रक्षक संकेत की लुप्त होती. जाहिर है, भारतीय तट रक्षक प्रतिदीप्ति आंशिक रूप से pigmented चूहों में रंजित में RPE और melanocytes द्वारा अवरुद्ध किया जा सकता है. एक सुझाव के रूप में, एक बी विचार कर सकते हैंउच्च संकल्प ICGA प्राप्त करने के लिए CD1 पृष्ठभूमि में उनके AMD मॉडल reeding.

एफए अधिक व्यापक रूप से AMD पशु मॉडल पर प्रयोग किया जाता है, ICGA choroidal vasculature में असामान्यताएं का पता लगाने में आवश्यक है. वास्तविक समय में उच्च संकल्प पर माउस choroidal vasculature पालन करने की क्षमता बहुत AMD माउस मॉडल में निस्र्पक और histopathological डेटा के साथ correlating में शोधकर्ताओं कर सकते हैं. ICGA, एफए और अक्टूबर के संयोजन मानव रोगियों में AMD के निदान में के रूप में AMD मॉडल के phenotype निस्र्पक में अत्यंत उपयोगी हो जाएगा. माउस वर्तमान में AMD अनुसंधान 26-29 के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल पशु मॉडल है, समय पाठ्यक्रम चतुर्थ ICGA अनुसंधान समुदाय में एक व्यापक भूमिका निभा सकते हैं.

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Disclosures

YF इस काम में प्रयुक्त AMD माउस मॉडल के लिए प्रासंगिक हैं कि दो लंबित पेटेंट के एक आविष्कारक है. एस, ZB, और adj खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

इस काम दृष्टिहीनता (RPB) को रोकने के लिए एनआईएच अनुदान 1R01EY022901, रिसर्च से कैरियर विकास पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया था, CMReeves और एमए रीव्स फाउंडेशन, ब्लाइंड के लिए ई. मटिल्डा ज़ेग्लेर फाउंडेशन, शूरवीरों टमप्लर नेत्र फाउंडेशन, और विभाग को एक अप्रतिबंधित अनुदान RPB से यूटा विश्वविद्यालय में नेत्र विज्ञान. हम पांडुलिपि पर चर्चा और टिप्पणी के लिए Spectralis बहु साधन इमेजिंग सिस्टम और ताओ जांग पर तकनीकी सहायता के लिए Balamurali Ambati धन्यवाद.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT
Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils
GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15  clear lubricant eye gel 
Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06
Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236
Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11
32-G Needle Steriject PRE-32013
1-ml syringe BD 309659
Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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चिकित्सा अंक 84 indocyanine ग्रीन एंजियोग्राफी ICGA रंजित वाहिका संरचना उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन एएमडी Polypoidal रंजितपटल संबंधी Vasculopathy PCV confocal स्कैनिंग लेजर नेत्रदर्शक चतुर्थ ICGA समय पाठ्यक्रम ICGA पूंछ नस इंजेक्शन
समय पाठ्यक्रम indocyanine ग्रीन एंजियोग्राफी द्वारा आयु से संबंधित धब्बेदार अध: पतन के एक माउस मॉडल में रंजितपटल संबंधी vasculature में असामान्यताएं का पता लगाने के
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Kumar, S., Berriochoa, Z., Jones, A. … More

Kumar, S., Berriochoa, Z., Jones, A. D., Fu, Y. Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography. J. Vis. Exp. (84), e51061, doi:10.3791/51061 (2014).

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