Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Immunology and Infection

Geautomatiseerde Scheiding van doi: 10.3791/51090 Published: March 21, 2014

Summary

De wormsorter vergemakkelijkt genetische screens in Caenorhabditis elegans door het sorteren wormen volgens expressie van fluorescerende verslaggevers. Hier beschrijven we een nieuw gebruik: sorteren volgens kolonisatie door een GFP-expressie ziekteverwekker, en we gebruiken het om de slecht begrepen rol van pathogeen herkenning bij het initiëren van immuunreacties te onderzoeken.

Abstract

De wormsorter is een instrument analoog aan een FACS machine die wordt gebruikt in studies van Caenorhabditis elegans, doorgaans naar wormen basis van expressie van een reporter fluorescent sorteren. Hier hebben we aandacht voor een alternatief gebruik van dit instrument, voor het sorteren wormen volgens hun mate van kolonisatie door een GFP-expressie ziekteverwekker. Dit nieuwe gebruik konden we de relatie tussen kolonisatie van de darm worm en inductie van immuunresponsen pakken. Terwijl C. elegans immuunrespons op verschillende pathogenen zijn gedocumenteerd, is nog onbekend wat hen initieert. De twee belangrijkste mogelijkheden (die elkaar niet uitsluiten) zijn erkenning van pathogeen-geassocieerde moleculaire patronen, en detectie van schade veroorzaakt door een infectie. Om onderscheid te maken tussen de twee mogelijkheden, moet de blootstelling aan de ziekteverwekker worden gezien van de schade die ze toebrengen. De wormsorter ingeschakeld scheiding van wormen die werden uitgebreid-gekoloniseerd door de Gram-negatief pathogeen Pseudomonas aeruginosa, met de schade die wordt veroorzaakt door pathogenen, van wormen die op soortgelijke wijze zijn blootgesteld, maar niet of marginaal, gekoloniseerd. Deze verschillende populaties werden gebruikt om het verband tussen pathogenen en de inductie van transcriptionele immuunresponsen beoordelen. De resultaten suggereren dat de twee worden gescheiden, ondersteunen de mogelijkheid van pathogeen herkenning.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Automatische worm sortering is net als FACS, die door het meten van een fluorescerend signaal in een worm (die normaal door transgene expressie van reporter eiwitten) bij het passeren rechtgetrokken in een buis, waardoor omleiding hetzij naar een verzamelcentrum buis / put of een afvalcontainer volgens aan het poorten van de onderzoeker 1 set parameters. De wormsorter kan op verschillende manieren onderzoek te vergemakkelijken; een voorbeeld van het gebruik van het als een analytisch instrument is een studie die spatiotemporele promotor activiteit gevolgd voor bijna 1.000 genen 2.
Echter, het belangrijkste gebruik van de wormsorter in genetische screens, na doelwitgen expressieniveaus of lokalisatie van fluorescerend eiwit langs de as van de worm 3-5.

Hier beschrijven we een nieuwe applicatie voor de wormsorter, in het volgen van kolonisatie van de worm door een fluorescent gelabeld ziekteverwekker. Met dit als een instrument hebben we ons gericht op de relatie tussen Pathognl kolonisatie / lading en de immuunrespons, tot nieuwe inzichten in de mechanismen die verantwoordelijk zijn voor de start van de immuunreacties van de worm te krijgen.

In vrijwel alle tot nu toe onderzochte organismen, initiatie van de aangeboren immuunrespons op microbiële ziekteverwekkers is afhankelijk van de erkenning van pathogeen-geassocieerde moleculaire patronen (PAMPs), en / of gevaar /-schade geassocieerde moleculaire patronen (dempt) 6,7. De eerste geconserveerd microbiële structuren die componenten van de microbiële celwand, het flagellum of de lipide bilaag 6 zijn, de tweede zowel model moleculen (bijv. ATP 8), veranderde eiwitten of andere merkers van veranderde cellulaire processen 9,10. Beide signalen worden herkend door eiwitten die als patroonherkenning receptoren (PRRS), die bij specifieke binding van een patroon molecuul activeert een keten van gebeurtenissen die leiden tot een beschermende respons. C. elegans is uiterst nuttig als tracta geweestble model om de verschillende aspecten van gastheer-pathogeen interacties te ontleden, maar een ding dat niet goed begrepen is hoe immuunreacties worden geïnitieerd in de worm. Geen van de vermeende receptoren die ortholoog patroonherkenning receptoren (PRRS) bij andere organismen is aangetoond PAMPs binden, en veel van de orthologen van PRRS die cruciaal voor immune responsen in andere organismen vertonen een verrassend beperkte bijdrage aan worm pathogeen reacties en weerstand. Zo is het Drosophila Toll-receptor, die essentieel zijn voor het weren grampositieve pathogenen, vertegenwoordigd C. elegans door een enkele homoloog, tol-1, die bijdraagt ​​aan bescherming tegen de Gram negatieve pathogeen Salmonella Typhimurium 11, maar niet van andere geteste Gram-negatieve of positieve pathogenen 11,12. Deze waarnemingen, gecombineerd met gegevens die aangeven immuunrespons kan worden geïnduceerd door het verstoren cellulaire eiwittranslatie hals sommigen ertoe gebracht om voor te stellen dat C. elegans detecteert voornamelijk DAMPs 9,13,14. Toch rapporten beschrijven het vermogen van dode ziekteverwekkers immuunrespons op te wekken suggereren dat PAMP bindend kunnen worden hebben een belangrijke rol in pathogeen herkenning in C. elegans 15,16. Vorige werk gericht op immuunreacties in de leeftijd gesynchroniseerde genetisch identieke C. elegans populaties aangetoond grote individuele variabiliteit in de darmflora door de bacteriële Gram-negatieve pathogeen Pseudomonas aeruginosa.

Echter, transcriptionele profiling studies behandeld deze variabel-gekoloniseerde bevolking als een entiteit 17,18. Profiteren van deze variabiliteit, een protocol gericht een geautomatiseerde wormsorter differentieel gekoloniseerde bevolking van Caenorhabditis elegans blootgesteld aan GFP-expressie P. scheiden ontwikkelden we aeruginosa. Het onderzoeken van genexpressie in verschillend-gekoloniseerde bevolking facilitated beoordeling van de relatie tussen ziekteverwekker belasting (en de bijbehorende schade) en immune reacties en nieuwe inzichten over pathogeen erkenning in C. elegans 19. Hieronder beschrijven we het protocol, die kunnen worden toegepast wormen geïnfecteerd met elk fluorescent gelabelde pathogeen sorteren.

Om potentiële gebruikers moet worden opgemerkt dat het aantal wormen moet worden uitgezocht afhankelijk van de aard van de volgende analyses en gebruikte protocollen. Bijvoorbeeld, in het geval van microarray genexpressie analyse> 1000 wormen zullen moeten voldoende RNA verkrijgen als standaard protocollen worden gebruikt, maar ~ 100 wormen volstaat als versterking wordt toegepast, waardoor een snelle verzameling van materiaal en dus spanning te minimaliseren de wormen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Het verkrijgen van een gesynchroniseerde Cultuur van jonge volwassen dieren

  1. Groeien wormen op verschillende NGM platen bezaaid met OP50-1 E. coli bacteriën (10x geconcentreerd uit een verzadigde cultuur) tot veel wormen hebben de zwangere stadium.
  2. Behandel zwangere dieren met een ei-prep oplossing voor een gesynchroniseerde cultuur (eieren) te verkrijgen.
  3. Plaat eieren op verschillende 60-mm NGM platen geënt met 10x geconcentreerde OP50-1 met een dichtheid van ongeveer 150-200 eieren / plaat.
  4. Incubeer de platen bij 25 ° C gedurende 2 dagen (tot wormen de L4 hebben bereikt - Jong volwassen stadium).

2. Voorbereiden van Pseudomonas aeruginosa Platen en infecteren van Worms

  1. Op de dag van de ei-prep (stap 1.1) inoculeren een PA14 :: GFP cultuur in 2 ml medium B met rifampicine Koning bij een eindconcentratie van 100 ug / ml. Incubeer de kweek bij 37 ° C onder roeren O / N.
  2. Plate de PA14 :: GFP cultuur op zoveel Langzaam Killing platen (SKP) als nodig is voor de test. Op elke 150 mm SKP petrischaal pipet 75-100 ul van verzadigde cultuur en gelijkmatig verdelen met behulp van een steriele glazen strooier. Incubeer de platen bij 37 ° C gedurende 20-24 uur.
  3. Verwijder platen uit incubator en laat ze afkoelen tot kamertemperatuur (~ 20 min). Met behulp van M9 buffer, wassen wormen uit stap 1.4 op PA14 :: GFP platen in een minimaal volume van vloeistof. Bij het gebruik van platen van 150 mm, kan een paar honderd wormen op een enkele plaat worden geplaatst.
  4. Incubeer de platen bij 25 ° C gedurende 18-21 uur. Voor P. aeruginosa-blootgestelde jonge volwassen wormen, dit is het tijdvenster de optimale verdeling van gekoloniseerde vs noncolonized dieren dat.

3. Het opzetten van de Wormsorter

Voor het uitvoeren van de steekproef soort, ervoor zorgen dat de machine goed functioneert. Details zijn te verkrijgen op http://www.unionbio.com/support/documents.aspx?id=43, en the essentiële stappen worden hieronder beschreven.

  1. Stel de schede ventiel druk tot ongeveer 5 psi (4.5-5.5 bereik).
  2. Om te controleren of mantelvloeistof debiet is nodig, plaats een 15 ml conische buis onder de dispenser, zet de schede klep, en zet de sorter ventiel. Houd de buis onder de dispenser voor 60 sec. Het volume in de buis moet 9-10 ml. Als het buiten dit bereik, dienovereenkomstig aan te passen de schede klep druk.
  3. Om ervoor te zorgen dat mantelvloeistof debiet (ingesteld als in stap 3.2) geeft accurate sortering toelaten, test het soort tarief met behulp van 40 micrometer controle deeltjes:
  4. Schakel de schede ventiel. Voeg ongeveer 25 ml control deeltje oplossing van het reservoir.
  5. Zet de huls ventiel en de monsterklep.
  6. Op de computer software, navigeer naar de "control deeltje mode" en klik verwerven.
  7. Zorg ervoor dat het deeltje debiet ~ 5-8 deeltjes / sec, met een TOF (Time Of Flight) benadert de breedtevan het deeltje, 40 urn. Zo'n TOF geeft aan dat slechts een enkele 40 urn object passeren tegelijk. Wanneer waarden buiten dit bereik, dienovereenkomstig aan te passen de instellingen (volgende aanwijzingen hierboven).

4. Sortering Colonized vs Noncolonized Worms

  1. Met M9, wassen wormen in 15 ml conische buizen. Laat volwassen wormen te zinken naar de bodem van de buis door de zwaartekracht en verwijder het supernatant. Vul de buis met verse M9. Herhaal dit proces 3-4x. Dit verwijdert een groot deel van larven en overmaat bacteriën en duurt ongeveer 10 minuten.
  2. Wormen toe te voegen aan de wormsorter reservoir met een zacht-mixing kleine roerstaafje.
  3. Pas eerste signaalversterking door de Green PMT 600 en de rode en gele PMT tot 200.
  4. Begin het verwerven van gegevens aan te passen.
  5. Streef naar een soort snelheid van 25-30 evenementen (wormen) per sec. Indien het aantal te hoog is, verdun de wormen in het reservoir met M9 dienovereenkomstig. Als de snelheid teo laag, voeg meer wormen in een klein volume van de M9.
  6. Als het experiment vereist een zeer strenge scheiding van gekoloniseerde vs noncolonized wormen, zet de "toeval check" om "zuivere". Dit zorgt ervoor dat twee objecten bij te dicht bij elkaar optreden of in dezelfde druppel, de machine verwerpt de daling plaats te verzamelen.
  7. Om de bevolking van belang te sorteren, tekenen hekken rond de assen aangeeft grootte (tot volwassen wormen te verkrijgen) en fluorescentie-intensiteit (dwz hoog voor gekoloniseerd, laag voor noncolonized). De waarden voor fluorescentie gating moet empirisch worden bepaald.
  8. Plaats een multi-well plaat of een petrischaal onder de dispenser om wormen te verzamelen open vervolgens het soort ventiel om te beginnen met het sorteren van wormen.
  9. Verzamel een kleine populatie van de dieren na te gaan onder de microscoop dat de gesorteerde populatie is de populatie van belang. Zo niet, stel de gating parameters dienovereenkomstig en ga verder met monstername.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Wanneer leeftijd afgestemd, genetisch identiek C. elegans worden blootgesteld aan P. aeruginosa, is wijd verspreid waargenomen niveaus van kolonisatie (figuur 1A). Met behulp van de hier beschreven efficiënte scheiding van noncolonized uit gekoloniseerde wormen worden bereikt (figuur 1B) protocol. In tegenstelling tot noncolonized wormen, gekoloniseerd wormen vertonen tekenen van schade, zoals traagheid en verminderde ontlasting 19. Dit laatste kan een reden waarom wormen gekoloniseerd door P. zijn aeruginosa hebben moeite clearing infectie. Dit heeft directe gevolgen voor de beschreven protocol suggereert dat wormen gesorteerd als noncolonized niet eerder werden gekoloniseerd. Om direct te testen of deze bewering juist is, werden met de hand geplukt gekoloniseerd wormen onderworpen aan soortgelijke stappen wassen als die aan de verwerking experiment en vervolgens onder een fluorescentiemicroscoop onderzocht; slechts 4/56 maakte de ziekteverwekker. Daarom is het waarschijnlijk eop het aantal eerder gekoloniseerde wormen onder die gesorteerd als noncolonized verwaarloosbaar. Het is echter wenselijk om veranderingen in kolonisatie tijdens wasstappen effecten van verkeerde sorteren op analyse voorkomen, die meer een probleem voor andere pathogenen dan P. bewaken aeruginosa.

Vorige werk in dienst van de hier beschreven gebruikt naargelang wormen voor een microarray analyse van genexpressie en waargenomen in wezen identiek reacties op P. protocol aeruginosa gekoloniseerde en noncolonized worm populaties die waren blootgesteld aan de ziekteverwekker voor dezelfde tijdsduur 19. Figuur 2 toont dezelfde trend een kwantitatieve (q) RT-PCR om expressie van vier genen, bekend om een deel van het C te meten . elegans immuunrespons: lys-2 codeert voor een lysozym, F08G5.6 en F55G11.2 twee gekarakteriseerde genen, die specifiek reageren op infectie, waarvan de eerste ook bij aan infectiestieweerstand en pgp-5, die aan infectie als zware metalen stress. Alle vier genen werden eveneens geïnduceerd door P. aeruginosa blootstelling, ongeacht de kolonisatie status van de wormen. Dit bevestigt eerder gepubliceerde resultaten die aangeven dat kolonisatie en de bijbehorende beschadigingen niet nodig zijn een immuunrespons, maar wijzen op pathogeen-geassocieerde moleculaire patronen signaal. Dat pgp-5 wordt geïnduceerd in noncolonized dieren, waarvan niet verwacht te worden ervaren grote schade, suggereert een overlap in de regelgeving programma controlerende immuunreacties en algemene stress-responsen in C. elegans.

Figuur 1
Figuur 1. Gekoloniseerd en noncolonized C. elegans gescheiden met een wormsorter. (A) representatief beeld van wild-type volwassen C. elegans blootgesteld aan GFP expressie P. aeruginosa 18 uur. (B) Vertegenwoordiger beelden van een noncolonized en gekoloniseerde wormen gescheiden met behulp van de wormsorter. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Figuur 2
Figuur 2. Kolonisatie is niet vereist voor de transcriptionele respons op P. aeruginosa. RNA niveaus van lys-2 (A), F08G5.6 (B), F55G11.2 (C) en pgp-5 (D) gemeten met qRT-PCR in wildtype dieren blootgesteld aan E. coli of P. aeruginosa </ Em> voor ~ 18 uur. Getoond worden de middelen en SD van duplo-metingen van het ene experiment, dat is een vertegenwoordiger van drie. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Tabel 1
Tabel 1. Materialen en reagentia die nodig zijn voor een wormsorter experiment.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

De methode die we beschrijven maakt gebruik van TL-etikettering van entiteiten buiten de worm, om de interacties tussen de worm en zijn omgeving te volgen. In het geval dat we presenteren, werd de scheiding op basis van etikettering van een ziekteverwekker en werd gebruikt om afzonderlijke wormen met zware pathogeen last van degenen die geen (of lichte) belasting. Daaropvolgende genexpressie analyse vond geen verschil in immuunrespons tussen de twee groepen suggereren dat zij onafhankelijk van pathogenen. Het signaal dat de reactie initieert elders is aangetoond fysieke geassocieerd met de bacteriën, in plaats van uitgescheiden, wat suggereert dat dit signaal een PAMP zijn. Samen vormen deze resultaten de hypothese ondersteunde dat PAMP erkenning speelt een rol bij het ​​initiëren immuunrespons in C. elegans 19.

Een voordeel van het sorteren protocol hierboven beschreven is dat zowel gekoloniseerd en noncolonized wormen worden geïsoleerd uit een populatie. This afhankelijk van het hebben van een populatie met een optimale verdeling van dieren die gekoloniseerd vs noncolonized. We hebben gevonden dat wanneer infecteren jonge volwassen wildtype wormen met P. aeruginosa, dit overeen met een belichtingstijd van ongeveer 18 uur. Deze blootstelling tijd produceerde een populatie waar de meerderheid van de dieren werden gekoloniseerd op een "intermediate" graad, maar enkele honderden wormen toonde vol kolonisatie, en een vergelijkbaar aantal waren noncolonized. Hoewel dit duidt optimale verdeling voor onze doeleinden, kunnen anderen hun eigen optimale verdeling definiëren.

Tijdens het sorteren, is het raadzaam om "kwaliteitscontrole" ingebouwd in elk experiment. We deden dat op twee manieren. Een, voor genexpressie studies hebben we de hand geplukt een klein aantal (gekoloniseerd en noncolonized) wormen onder een tl dissectiemicroscoop, die kan worden gebruikt voor qRT-PCR op een beperkte set genen. Deze dienen als de "gouden standaard" voor wat gen expressiop in een echt zuivere populatie eruit zou zien. Ten tweede is het een goede gewoonte om 20 of meer wormen te sorteren op een bord voor elk automatisch gesorteerd bevolking na te gaan onder een fluorescentiemicroscoop dat het instrument werkt zoals verwacht. Afhankelijk van de stroomafwaartse toepassing kan verschillende graden van "trouw" van de sortering protocol vereist. Indien gesorteerd wormen niet voldoen aan de gewenste mate van kolonisatie, moet gating parameters worden ingesteld (stap 4.7). Opgemerkt zij dat de strengere poorten, hoe hoger de aanvankelijke aantal wormen nodig en experimenten dienovereenkomstig worden opgeschaald.

De hier beschreven experiment kan met elk pathogeen plaats (zolang het fluorescent wordt gelabeld) worden uitgevoerd. Na sortering, hoeft latere analyses niet hoeft te houden aan de analyse van genexpressie, en zou zich kunnen richten op de overleving of zelfs gedragsanalyse. Bovendien zouden soortgelijke protocollen worden gebruikt voor analytische doeleindenTe metaboliet absorptie te volgen, of pathogenen, deze die een eenvoudiger alternatief voor CFU tellingen, die zeer variabel zijn 20,21 kwantificeren. De stijging van het aantal en de snelheid zou kunnen vergemakkelijken het kwantificeren van pathogenen onder verschillende omstandigheden, met inbegrip van genetische storingen in de gastheer of de ziekteverwekker, en de verschillende milieu-omstandigheden. Aangezien de wormsorter kan worden uitgerust om meerdere fluorescente moleculen te detecteren, volgen kolonisatie hoeft niet beperkt tot een soort bacterie. Deze mogelijkheid zou nuttig zijn voor ecologische studies, waarvan de verschillende microben om te concurreren voor kolonisatie. In laboratoriumstudies van pathogenese, C. elegans wordt typisch gekweekt op een bacteriële monocultuur. Echter, de studie van de mechanismen van het aangeboren immuunsysteem in het wild, waar ziekteverwekkers bestaan ​​onder honderden andere micro-organismen die van invloed kan immuniteit begint om aandacht 22,23 Garner.

Samengevat, usinG de wormsorter voor uiteenlopende toepassingen kan experimenten in korte tijd worden uitgevoerd en / of op grote schaal. Het uitbreiden van het repertoire van deze toepassingen kunnen ons begrip van C. vooruit elegans fysiologie. Vooral op het gebied van C. elegans aangeboren immuniteit, overleven is een veelgebruikte maatstaf voor het testen van de bijdragen van verschillende genen. Echter, kolonisatie is meer proximaal van de gebeurtenissen die immuniteit te starten, terwijl het toch een functionele output. Met protocollen zoals hier beschreven te isoleren en / of analyseren populaties plaats is een waardevol hulpmiddel om verschillende aspecten van de vroege gebeurtenissen van immuunreacties van de worm te bestuderen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgments

De auteurs danken de Ellison Medical Foundation voor hun steun. We willen ook de leden van de Abby Dernburg laboratorium bedanken voor hulp bij het gebruik van de wormsorter.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
M9 Buffer prepared in house Recipe at wormbook.org
Rifampicin Sigma R3501
Egg prep solution prepared in house 50 ml water; 40 ml bleach; 10 ml of 10 N sodium hydroxide
NGM plates prepared in house Recipe at wormbook.org
SKP plates prepared in house Recipe same as NGM only 0.35% peptone instead of 0.25%
Control test particles Union Biometrica 310-5071-001

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Pulak, R. Techniques for analysis, sorting, and dispensing of C. elegans on the COPAS flow-sorting system. Methods Mol. Biol. 275-286 (2006).
  2. Dupuy, D., et al. Genome-scale analysis of in vivo spatiotemporal promoteractivity in Caenorhabditis elegans. Nat. Biotechnol. 25, 663-668 (2007).
  3. Squiban, B., Belougne, J., Ewbank, J., Zugasti, O. Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in elegans. J. Vis. Exp. (60), (2012).
  4. Doitsidou, M., Flames, N., Lee, A. C., Boyanov, A., Hobert, O. Automated screening for mutants affecting dopaminergic-neuron specification in C. elegans. Nat. Methods. 5, 869-872 (2008).
  5. Pujol, N., et al. Distinct innate immune responses to infection and wounding in the C. elegans epidermis. Curr. Biol. 18, 481-489 (2008).
  6. Medzhitov, R., Janeway, C. Innate immune recognition: mechanisms and pathways. Immunol. Rev. 173, 89-97 (2000).
  7. Matzinger, P. Tolerance, danger, and the extended family. Annu. Rev. Immunol. 12, 991-1045 (1994).
  8. Mariathasan, S., et al. Cryopyrin activates the inflammasome in response to toxins and ATP. Nature. 440, 228-232 (2006).
  9. Melo, J. A., Ruvkun, G. Inactivation of conserved C. elegans genes engages pathogen- and xenobiotic-associated defenses. Cell. 149, 452-466 (2012).
  10. Chen, G. Y., Nunez, G. Sterile inflammation: sensing and reacting to damage. Nat. Rev. Immunol. 10, 826-837 (2010).
  11. Tenor, J. L., Aballay, A. A conserved Toll-like receptor is required for Caenorhabditis elegans innate immunity. EMBO Rep. 9, 103-109 (2008).
  12. Pujol, N., et al. A reverse genetic analysis of components of the Toll signaling pathway in Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 11, 809-821 (2001).
  13. McEwan, D. L., Kirienko, N. V., Ausubel, F. M. Host translational inhibition by Pseudomonas aeruginosa Exotoxin A Triggers an immune response in Caenorhabditis elegans. Cell Host Microbe. 11, 364-374 (2012).
  14. Dunbar, T. L., Yan, Z., Balla, K. M., Smelkinson, M. G., Troemel, E. R. C. C. elegans detects pathogen-induced translational inhibition to activate immune signaling. Cell Host Microbe. 11, 375-386 (2012).
  15. Irazoqui, J. E., et al. Distinct pathogenesis and host responses during infection of C. elegans by P. aeruginosa and S. aureus. PLoS Pathog. 6, (2010).
  16. Pukkila-Worley, R., Ausubel, F. M., Mylonakis, E. Candida albicans infection of Caenorhabditis elegans induces antifungal immune defenses. PLoS Pathog. (2011).
  17. Shapira, M., et al. A conserved role for a GATA transcription factor in regulating epithelial innate immune responses. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 14086-14091 (2006).
  18. Troemel, E. R., et al. p38 MAPK regulates expression of immune response genes and contributes to longevity in C. elegans. PLoS Genet. 183 (2006).
  19. Twumasi-Boateng, K., Shapira, M. Dissociation of immune responses from pathogen colonization supports pattern recognition in C. elegans. PLoS One. 7 (2012).
  20. Jakobsen, H., et al. The alkaloid compound harmane increases the lifespan of Caenorhabditis elegans during bacterial infection, by modulating the nematode's innate immune response. PLoS One. 8, (2013).
  21. Portal-Celhay, C., Bradley, E. R., Blaser, M. J. Control of intestinal bacterial proliferation in regulation of lifespan in Caenorhabditis elegans. BMC Microbiol. 12, 49 (2012).
  22. Troemel, E. R., Felix, M. A., Whiteman, N. K., Barriere, A., Ausubel, F. M. Microsporidia are natural intracellular parasites of the nematode Caenorhabditis elegans. PLoS Biol. 6, 2736-2752 (2008).
  23. Montalvo-Katz, S., Huang, H., Appel, M. D., Berg, M., Shapira, M. Association with soil bacteria enhances p38-dependent infection resistance in Caenorhabditis elegans. Infect. Immun. 18, 514-520 (2013).
Geautomatiseerde Scheiding van<em&gt; C. elegans</em&gt; Variabel gekoloniseerd door een bacteriële pathogenen
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Twumasi-Boateng, K., Berg, M., Shapira, M. Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen. J. Vis. Exp. (85), e51090, doi:10.3791/51090 (2014).More

Twumasi-Boateng, K., Berg, M., Shapira, M. Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen. J. Vis. Exp. (85), e51090, doi:10.3791/51090 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter