Summary
我们已经建立了原位皮质胶质母细胞瘤模型小鼠的活体双光子显微镜的概括了生物物理的限制，通常在作怪肿瘤的生长过程。一种慢性玻璃窗替换上面的肿瘤颅骨使后续的肿瘤进展时间的推移由双光子显微镜。
Abstract
胶质母细胞瘤（GBM）是脑肿瘤可至今没有根治的治疗的最积极的形式。
这种病理小鼠模型依赖于注射神经胶质瘤细胞的悬浮液进入脑实质以下硬脑膜-母校的切口。而细胞必须被表面注入到可访问的活体双光子显微镜，浅表注射失败复述的病理生理条件。事实上，通过注射道逃逸大多数肿瘤细胞到达外硬膜空间，他们不正常的扩张速度快于没有从实质机械约束。
我们的改进灶性植入胶质瘤球体而不是注射神经胶质瘤细胞中的悬浮液中的大脑皮质的表面层，而且在通过交联葡聚糖凝胶半珠被粘在surroun堵塞注射部位不仅包括鼎实质和密封，以DURA-母校与氰基丙烯酸酯。总之，这些措施的执行的生理扩张脑实质内的肿瘤细胞的浸润。开颅手术终于关上了玻璃窗凝成的头骨，使慢性成像在周中没有瘢痕组织的发展。
利用接枝我们已经表明，神经胶质瘤细胞，神经元（ 例如，大鼠Thy1-CFP小鼠）和血管（通过静脉内注射一种荧光染料的突出显示）之间发生相互作用的动力学可以通过活体可视化的荧光肿瘤细胞的荧光的转基因动物的该疾病的进展过程中双光子显微镜。
的可能性，像一个肿瘤在一个最低限度的脑损害环境的微观决议代表当前GBM动物模型应该有利于神经肿瘤学和药物测试领域的改进。
Introduction
胶质母细胞瘤表现为脑肿瘤在成人与12个月的中位生存期最积极的形式和5％的5年存活率。临床管理依赖于手术，放疗和化疗常常结合使用。然而，这些治疗的效果仍然姑息1-3。
截至目前，大多数神经肿瘤学的研究都依赖于那些只能提供静态视图和对荷瘤动物的大同伙进行牺牲在不同的时间点（例如，见4,5）技术。随访方法基于活体成像的最新发展使得研究脑胶质瘤生长和肿瘤细胞以及它们对同一动物随着时间的推移病理生理微环境之间的相互作用。这开辟了道路，以独家的资料片，这是迄今无法实现的6。转基因动物表达荧光标记的目标细胞可使用d，来研究在本文中肿瘤细胞和例如神经元之间的特异性相互作用。
在过去的十年中，活体双光子显微镜7已经成为基本的神经肿瘤学研究和临床前试验8,9为其进行深活体观察小鼠大脑能力的黄金标准（> 500微米以下的持续时间母校）与一个微米级的空间分辨率10。用活体双光子显微镜用植入慢性颅窗11 orthotopical动物模型中，也能够按照肿瘤进展时间的推移在同一小鼠9,12。
一这些先前公布的动物模型中的主要缺点是但它们不模仿支配肿瘤生长的硬脑膜，脑膜未注射的细胞悬浮液9,13,14后密封的物理约束。胶质瘤细胞可能泄漏的硬膜外空间转化原位胶质瘤模型成异位之一。
这里介绍的动物模型包括在注射荧光胶质瘤细胞在大脑皮质在200μm的深度接着硬脑膜，脑膜用交联葡聚糖凝胶半珠和直方兼容胶的密封的旋转椭球体的。然后将肿瘤生长被限制在脑实质，它维护的病理生理物理约束。上述肿瘤植入一种慢性玻璃窗允许活体双光子显微镜一件容易的光纤接入。利用转基因动物表达荧光标记的目标细胞有可能随着时间的推移来进行后续的脑胶质瘤生长，并研究其相互作用及其微环境（这里用神经元和血管突出了荧光葡聚糖）。
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Protocol
所有试验程序都按照法国法律，并遵守欧洲共同体理事会指令11月24日，1986（86/609/EEC）实验动物的护理和使用进行。对动物的研究被授权方向DépartementaleDES服务Vétérinaires德罗讷河口省（许可证D-13-055-21），并经普罗旺斯蔚蓝海岸编号为14（项目87-04122012）的伦理委员会。
1，制备球状体
- 的琼脂糖包被培养皿的准备
- 混合1克琼脂糖用100ml细胞培养液中的未补充有胎牛血清。使用微波炉（850瓦，持续40秒，然后3×15秒;挑起每个微波会话之间的解决方案），煮沸解决方案，并以完全溶解琼脂糖。高压灭菌20分钟，这1％的琼脂糖溶液，在120℃，以确保免缝。利蒂注 ：小心高压釜协议之前完全溶解琼脂糖。不均匀性可能会危及球体的形成。
- 一旦从高压釜中取出，倒10毫升在100×20毫米培养皿中的1％琼脂糖溶液。离开培养皿20分钟，在室温下，使1％的琼脂糖溶液凝固。
- 加琼脂糖高于10毫升的PBS中，以保持湿度。通过将它们包装用封口膜，以避免蒸发密封的琼脂糖包被培养皿的盖子。培养皿可以在4℃可保存长达2个月，如果适当地由PBS层加湿。
- 球体文化
- 在一个75 厘米的烧瓶中，培养的神经胶质瘤细胞在其推荐的介质作为一个单层。
- 从1％琼脂糖包被培养皿中加入1.5ml“预处理中的”从含胶质瘤细胞的二维单层瓶收集请更换PBS秒。
- 从含有神经胶质瘤细胞的2D单层烧瓶中取出培养基。
- 轻轻地冲洗该单层用10毫升PBS中。
- 加入2毫升的胰蛋白酶/ EDTA溶液0.05％和孵育在37℃ 注烧瓶4分钟：该孵育时间可根据所使用的细胞株不同而不同。
- 加入8毫升培养介质停止胰蛋白酶的作用下，轻轻冲洗细胞悬液注意 ：小心不要冲洗空气中的细胞悬液，因为它会增加细胞死亡。
- 放6毫升的细胞悬液在无菌小瓶中。
- 离心小瓶4分钟800转。
- 去除上清，轻轻悬浮细胞沉淀在3毫升培养液中。
- 种子细胞悬浮液中制备的琼脂糖包被的培养皿。
- 将培养皿于37℃在5％CO 2的气氛中进行2〜3天，直到所希望的直径的球状体形成。
2，球体和植入窗 - 该喷射系统的下游
- 干净的玻璃毛细管（直径1毫米），通过超声处理在70％乙醇中10分钟。漂洗两次，水配售前的孵化器内直至干燥。
- 为了准备一个小的股票拉几个清洗玻璃毛细管用吸管拉马。
- 300-350微米的典型的外部直径和250-300微米的导管：通过刮擦末端上的一块薄纸，得到所需尺寸的斜面末端打破拉毛细管的尖端。在此成形过程中，控制用粗视其眼配备有刻度的米拉毛细管的直径。
- 毛细管的非斜切末端连接到一个3路歧管使用的是一块塑料管，其内径适合的毛细管的外径。
- 使用塑料tubinG，连接歧管的另外两种方式的 25微升微升注射器和一个1毫升注射器装入直方兼容的矿物油。
- 调整歧管选择建立微升注射器和1ml注射器之间的通道。清除 该微升注射器的活塞和落后的注入矿物油进入微升注射器，直到漏出通过推动1ml注射器的活塞。更换微升注射器的活塞，同时注意不要让气泡在管。
- 调整歧管选择建立毛细管和1ml注射器之间的通道。填充毛细管用矿物油，直到它从前端漏出，同时小心不要离开气泡在管中。
- 调整所述歧管选择建立微升注射器和毛细管之间的连接。驱逐约10微升矿物油。
- 浸毛细管尖端插入PBS溶液和使用微升注射器的规格，吸在PBS中的毛细管各5μl。请注意，油和PBS之间的弯月面清晰可见。
- 修复毛细血管上一个3轴显微操作下手术粗视配件。此系统将被用于毛细管目标视觉控制下注射部位。
- 球体植入
- 轻轻吸入异氟醚（在1〜1.5分钟1.5％，在空气中）稳重的鼠标感应室。
- 麻醉动物用腹膜内注射氯胺酮/赛拉嗪（120毫克/千克，12毫克/千克）的混合物组成。需要注意的是麻醉往往降低了动物的体温。我们建议进行手术的房间在26°C和保持动物的体温与底层thermocontrolled加热垫。
- 适用眼膏，避免眼睛干燥。
- 剃除动物的头皮。
- 地方动物在使用耳棒和吹嘴立体定位框架。
- 清洁用聚维酮碘（3％的皂，然后用10％的溶液）的皮肤。
- 制成1厘米长的切口沿纵向在用手术刀头皮的中间。用剪刀剪和去除上面的顶骨皮肤。
- 用手术刀刀片轻轻取出头骨上方的骨膜。慷慨地适用于骨生成一个粗糙表面后水泥坚持顶氰基丙烯酸酯。
- 钻下一个手术粗视顶骨以产生直径4mm的开颅手术。慷慨地添加冰冷的PBS整个程序，以防止加热过程中含青霉素（1,000单位/毫升）和Streptomicin（1毫克/毫升）。用镊子和湿无菌纱布取出小碎骨。小心钻至少相距1mm顶颅骨缝，以避免出血。
- 瘦骨在那里的玻璃窗将被密封在开颅手术的边界。目标是到ENsure的后面的平面与大脑和玻璃之间的最大接触面玻璃窗的定位。慢慢地用钳子取出骨头和清洁暴露硬脑膜，脑膜与PBS溶液。
- 取直径5mm的圆形玻璃盖玻片，用酒精清洁，然后用纸巾擦干。尝试使用盖玻片作为盖的开颅手术，并确认大脑的大平面进入与玻璃接触。如有必要取出盖玻片，进一步薄边的骨头。继续进行，直到大脑可以被挤压扁，如果轻轻施加压力，盖玻片一次到位。
- 再次用酒精清洁盖玻片，用纸巾擦干，并保存它拆开。
- 用26号针头使硬脑膜，母校在开颅尚未避开主要血管的中心孔。请确保不要损坏脑实质作为这一步的目的只是打开硬脑膜，脑膜。
- 轻轻擦拭DURA-脑膜无线TH PBS溶液以去除出血性血液。顶盖采用了一块纸巾，同时准备球体注入。
- 在步骤2.1准备的球体喷射系统，吸圆的球体从步骤1.2准备的培养皿毛细管内径（约200-250微米）拟合。球体应该同来，大约5微升培养基。根据它的重量应该倒下的毛细作用的一角。
- 除去用于支付的开颅手术，并根据喷射系统定位动物的湿纸巾。
- 降低注射针，直到它触及的持续时间母校作出的洞。然后，通过250微米再次降低它。等待30秒。
- 慢慢用微升注射器的活塞（2-3微升），而泵出多余的液体，薄薄的一张纸巾注入球体。等待30秒，然后由50微米轻轻提起注射针向表面。再等待30秒，repea通过步长为50微米吨的提升过程，直到表面。等待时间避免了提取，将粘在吸管的球体。
- 使用荧光型宏观确认的球状体的大脑中的存在。
- 拌100-300微米直径的交联葡聚糖凝胶珠在培养皿中的PBS溶液。等待1分钟和一些鱼水合珠。将它们放在相邻的开颅手术骨。
- 在宏观调控中，选择一个小珠与类似硬脑膜，脑膜开口的大小的直径。切使用镊子两半的交联葡聚糖凝胶珠。
- 轻轻把交联葡聚糖凝胶半珠与朝向旋转椭圆体的凸面的喷射孔。注意不要移除球体，并轻轻按下向下，直到凹的前沿进入与周围硬脑膜，脑膜接触。
- 把氰基丙烯酸酯胶在载玻片上滴;沾了牙签的尖端进入德罗p来取少量胶水。通过围绕冲压胶迅速密封该交联葡聚糖凝胶半珠的边缘到相邻的硬脑膜，脑膜。小心以避免胶的交联葡聚糖凝胶半珠的牙签进行快速和精确的移动。避免多余的胶水，可以传播和阻碍，如果不能阻止成像一旦干燥。等待2分钟的胶水干后清洁开颅手术和周围骨用PBS液。
- 植入窗
- 把直径5 mm的圆形盖玻片开颅以上（见2.2.12）。盖玻片的边缘必须在减薄的头骨在开颅手术的外部。盖玻片必须与硬脑膜-脑膜和薄骨上的边缘相接触。这是非常重要的是要有硬脑膜-脑膜和盖玻片之间的直接接触，否则疤痕组织可能发展，阻碍光学清晰度。
- 用纸巾，吸取PBS在thË盖玻片边缘，使溶液涂敷在盖玻片中心的小的压力时，不会完全覆盖开颅手术。这将确保骨，玻璃和大脑上的感兴趣区域的侧面胶合在一起。
- 保持在盖玻片用钳子中心的一个小的压力，同时轻轻施加氰基丙烯酸酯在骨和盖玻片之间的边界。胶水会自发地传播，直到用PBS液的接口。溶液将作为给定的胶的疏水性的屏障。密封应该是有效的，在不到一分钟的时间，但举一个极端的小心不要移动盖玻片，直到它被固定。这将会产生的持续时间母校从而导致手术的失败氰基丙烯酸酯泄漏。
- 万一胶水将涂布在玻璃板的上方，通过做螺旋升降用微型手术刀刀片除去它，因为它可能会以其他方式减少的光学清晰度。小心不要弄破玻璃盖玻片超级碗克因压力过大的程序。
- 通过施加牙科用粘固剂在朝向相邻的颅骨盖玻片的边缘巩固玻璃固定。确保覆盖整个颅骨外露，直到头皮。使用额外的水泥，建立侧壁周围的盖玻片以创建所需的目标浸泡池。该牙科用粘固剂将固化在少于10分钟。
- 术后护理
- 从立体定位框架中取出鼠标，注入Dexamethazon（0.2毫克/千克）和Rimadyl（5毫克/公斤），SC在骨盆区域，奠定了她在笼子里有一个温暖的组织巢穴。
- 监测动物，直到麻醉的效果已经消失。在手术后一般2〜3小时，老鼠是完全移动。确保动物有一个易于获得食物和水。含葡萄糖琼脂（提供动物琼脂糖3％，葡萄糖3％）。
- 每天监测动物的体重和注入Dexamethazon（0.2毫克/千克）和Rimadyl（5毫克/千克）SC为第一10d的手术后。对于道德方面的考虑，安乐死的小鼠，当损失超过其原来重量的15％。颅内压力增加与肿瘤的大小，导致运动障碍的动物。这是肿瘤细胞系依赖的，并且发生在各种延迟手术后。特别应注意以表征实验中使用的细胞系的端点。
- 成像准备
- 轻轻吸入异氟醚镇静的小鼠中的感应腔（在空气中进行1〜1.5分钟，1.5％）。
- 麻醉动物用腹膜内注射氯胺酮/赛拉嗪（100毫克/千克，10毫克/千克）的混合物组成。这种麻醉通常允许观察45分钟。要执行较长的成像会议，鼠标被放置在在持续吸入异氟醚空气（0.25-0.75％）。
- 适用眼膏，避免眼睛干燥。
- 把动物的立体定位框架和阻止颅骨与earbars。
- 来可视化血管，荧光染料可被静脉内注射。
- 如果该窗口出现脏，它可以通过轻轻地除去碎片用薄刀片和一个组织的角落进行清洁。不要用酒精清洁窗口，因为它并不总是与牙科用粘固剂相容，它可以冷却脑的窗口的下面。
3，术后护理和成像准备
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Representative Results
一旦外科协议来执行（ 图1），动物可通过荧光显微镜的方法观察到数周，直到牺牲。炎症反应可能有一个或两个星期内消失，手术后进行观察。肿瘤的生长可通过各种显微技术包括荧光宏观和双光子显微镜（ 图2）被观察到。这里所示的示例图像，实现了对荧光型宏观和双光子显微镜耦合到飞秒脉冲红外可调谐激光器和家用修改，以允许下面的20X水浸物镜（1.0NA）动物的定位。
使用荧光型宏观相结合用于明场成像的反射率和落射荧光发射（ 图2A-2C）的偏斜照明的肿瘤发展估计随着时间的推移。荧光的阈值很容易地可以访问到肿瘤区域，同时superf期人工血管分离暗结构出可见光图像的白色背景。在另一方面活体双光子显微镜可以让Z-切片和观点与亚细胞高分辨率大领域正交重建（ 见图2D树突）。利用转基因动物中表达的荧光蛋白在感兴趣的细胞（例如，表达的青色荧光蛋白在神经元的大鼠Thy1-CFP小鼠，绿伪彩色图2D），可以观察到肿瘤进展中的神经元微环境。然而，必须指出的是，肿瘤细胞密度可以限制光子的穿透深度以及所发射的光子的检测，由于增加扩散。这显然是在图2D中可见，空间分辨率开始于200微米以下硬脑膜物，以减少在肿瘤而不是在健康的脑实质。此外，该二次谐波产生的信号所产生的往复米有组织的非centrosymetric分子如I型和III型胶原蛋白提供了持续时间脑膜（青色伪彩色图2D和箭头）的一个签名的图案。但必须注意的是，与我们的手术协议，肿瘤生长下方的硬脑膜，脑膜在其发展是由大脑的物理约束支配脑实质。硬脑膜-脑膜用交联葡聚糖凝胶半珠的密封防止神经胶质瘤细胞中逸出的硬膜外空间。
当随后的活体双光子显微镜不同的时间点之间的肿瘤进展可以在蜂窝分辨率进行比较。成像同一地区在D16和D27手术后（ 图3A），我们发现了一些血管作为一个由分别稳定在一个11天期间箭头高亮显示;另一方面，肿瘤前面清楚渗入健康实质同期。为了评估肿瘤进展，其马RGIN在D27观察被勾勒了黄色虚线，并覆盖在在D16拍摄的照片。前边缘的一个520微米的位移，观察持续与GL261胶质瘤模型15所报告的增殖曲线。肿瘤内的血管网的模式是非常不同的D16和D27表示显著血管重塑发生在病理学领域（ 图3A）。在肿瘤边缘，我们还发现神经胶质瘤细胞从肿瘤核心分离从肿瘤侵袭性如预期的案例。我们的图像的微观决议不仅表明，这些细胞发出的细胞质突起感知环境，但同时他们亦可以用血管作为基质为他们的进展（箭头和z重建图3B）。双光子显微镜从而允许以研究在一个真正的生理方面的细胞相互作用。利用转基因动物，其中每个感兴趣的细胞群是确定了其自身的荧光报道变得可以看作为疾病进展（ 图3B中 ，右）的关键调节肿瘤细胞和其环境之间的物理相互作用的存在。
手术图1概述的开颅手术是左侧顶骨（ 一 ）执行。左顶骨的限制概述用虚线和移除的部分被填充在黄色（B）。一旦进行开颅，顶叶皮层暴露（C）中，用于注入的旋转椭圆体的区域被选择同时注意避免主血管（箭头D）和一个26号针头用于打开硬脑膜，脑膜（在e箭头）。球体是注入并在持续时间母校的孔是由交联葡聚糖凝胶半珠与氰基丙烯酸酯胶（箭头F）密封堵塞。玻璃盖玻片粘在骨，同时保持与脑接触。盖玻片是进一步巩固在暴露的头骨，以确保颅窗口慢性观察（GI）的长期坚实的附件。整个协议进行了简要图式为J。 点击这里查看大图。
图2。肿瘤的生长被限制到脑实质并可以随着时间的推移。交流进行监测 。肿瘤生长（表达的DsRed2 GL261细胞株）为m观察acroscopy在手术当天（DO，A）和21天（B）和27（C）。在C中的箭头突出了一滴牙科水泥，这不是在步骤2.3.5。ð去除。从0获取到300微米以下的硬脑膜，脑膜在Thy1肾炎-CFP鼠标轴承GL261肿瘤通过双光子显微镜在D20手术后3×3场获得的正交重建。肿瘤（红色），硬脑膜，脑膜受二次谐波产生（箭头，青色）和神经元（绿色）的观察。需要注意的是肿瘤生长下方的硬脑膜，脑膜脑实质。 点击这里查看大图。
图3。VAscular重塑和肿瘤细胞侵袭可随着时间的推移与细胞的空间分辨率由活体双光子显微术来监控。静脉注射的级联蓝色葡聚糖70 kDa的突出血管后，在D16和D27后手术。GL261肿瘤（红色）的观察。虚线：肿瘤边缘的D27;箭头：例如，可以用来作为标志在D16和D27 乙本地化同一区域的血管。使用血管作为基质浸润（箭头）;个人肿瘤细胞（红色）侵入健康脑实质内（绿神经元）。拍摄图像在深度范围为100至150微米以下的持续时间的事情。虚线：区域里在底部中央面板中描绘的正交重构，实现了点击此处查看大图。
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Discussion
这种方法允许使用光学成像的方法来监测过几天和几周的原位植入胶质瘤的生长。同一动物可以随后的病理过程中经受几乎所有的大脑成像模态;但在双光子显微镜具体的准备提供了独特的机会来实现生活的动物的大脑中的亚细胞分辨率。我们的协议提出的优点来执行的肿瘤生长进入脑实质，而不是额外的durally因为它发生如神经胶质瘤细胞可通过受损硬脑膜离开中枢神经系统。在不存在由大脑环境施加的物理限制，肿瘤细胞可以确实增殖快，因为它们不需要渗入薄壁16。此前公布的方法没有尝试嫁接这是所有比他们注射悬浮细胞，而不是球体问题较多的后密封硬膜9,13,14。细胞的悬浮液确实不可能灶性申请作为单个细胞沿注射道吸移液管时，从深度到硬脑膜，脑膜系统性接种。
目前的协议可以在不同的小鼠品系，包括转基因和免疫抑制的动物被应用。各种神经胶质瘤细胞系可以嫁接和可视化，其中包括，只要它们被转染至稳定表达荧光报道事先接枝直接来自人的活检细胞。可以典型地在1个小时的手术方案，可以迅速地获得动物的同伙。这种方法因此可以用于研究血管重塑，药理疗法对血管生成和肿瘤生长的影响，以及免疫细胞的募集到肿瘤。当需要胶质瘤细胞迁移和神经胶质瘤细胞和微环境之间的动态相互作用可以实时地观察到几个厚RS。
作为成像可以在深度为500μm来完成它能够覆盖大多数的肿瘤体积的最初注入的200微米以下的硬脑膜，脑膜。为了确保最大成像深度必须特别注意在手术过程中采取建立硬脑膜，脑膜和玻璃盖玻片之间的身体接触。这确实是减少了形成瘢痕组织，否则将损害光学清晰度。手术环境的绝对无菌还应观察到，以限制手术后炎症瞬时模糊了窗口。无论如何，我们建议等到15天手术，先观察会话之间，以获得最佳的成像条件。此后，窗户上发现假手术动物，经历了整个协议除了注射球体瘤的手术后保持清醒长达一年。
总之，这里所描述的协议表示现有奥尔特的改进otopic胶质瘤的小鼠模型，致力于慢性活体双光子显微镜。浅层注入肿瘤球状体的，注射的堵塞跟踪与交联葡聚糖凝胶半珠和硬脑膜-脑膜强制肿瘤发展中的大脑环境，真正概括的物理限制，通常管疾病进展的密封。不仅这种方法将有助于对胶质瘤病理生理学基础研究，但它也将提高药物试验结果中临床前试验的相关性。
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Disclosures
作者宣称，他们有没有竞争的财务权益。
Acknowledgments
作者衷心感谢KK Fenrich博士，MC博士。 Amoureux酒店，体育韦伯和A. Jaouen有益的讨论; M.侯赛因·，C.梅尼尔，M. Metwaly，S. Bensemmane，J. Bonnardel，在IBDML动物设施和PicSIL成像平台IBDML的技术支持工作人员的工作人员。这项工作得到了补助国立研究所杜癌症（INCA-DGOS-INSERM6038）遗传资源，法新社国立德拉RECHERCHE（ANR JCJC PathoVisu3Dyn），联合会的支持倒拉RECHERCHE河畔乐Cerveau（FRC）以FD，由国际足球联合会奖学金德拉RECHERCHEMédicale和CancéropolePACA到CR。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Drill | Dremel (Germany) | 398 | any high quality surgical bone drill would suffice |
| Drill burr (#1/4 Carbide Round Burr) | World Precision Instruments (USA) | 501860 (#1/4) | also sold by Harvard Apparatus |
| Tissue scissors | World Precision Instruments (USA) | 14395 | |
| Dumont tweezers M5S | World Precision Instruments (USA) | 501764 | |
| Dental cement | GACD (USA) | 12-565 & 12-568 | |
| Cyanoacrylate | Eleco-EFD (France) | Cyanolit 201 | |
| Glass capillaries without filament | Clark Electromedical Instruments (UK) | GC100-15 | |
| Microliter syringe (25 µl) | Hamilton (USA) | 702 | |
| Micromanipulator | World Precision Instruments (USA) | Kite-R | |
| T derivation (3-way stopcock - Luer lock) | World Precision Instruments (USA) | 14035-10 | |
| Stereotactic frame (mouse adaptor) | World Precision Instruments (USA) | 502063 | |
| Glass coverslips | Warner Instruments (USA) | CS-5R (64-0700) | |
| Cross-linked dextran gel (Sephadex) G50 Coarse 100-300 µm beads | Available from various suppliers including Sigma (Germany) | ||
| Eye ointment | TVM (France) | Ocry-gel | |
| Fluorescence macroscope | Leica MZFLIII (Germany) | also sold by other companies | |
| Two-photon microscope | Zeiss LSM 7MP (Germany) | also sold by other companies (Nikon, …) | |
| Infrared tunable femtosecond laser (Maï-Taï) | Spectra Physics (USA) | also sold by other companies |
References
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