Protocol
Sørg for at alle procedurer, der involverer dyr er godkendt af en hensigtsmæssig anvendelse af dyr og pleje krop.
1. Forbered Stock Buffere i Advance
- Forbered 2 L lager Ca2 + fri Tyrodes (tabel 1). Juster pH til 7,4 med NaOH.
- Forbered 2 L lager 1,2 mM Ca2 Tyrodes (Tabel 2). Juster pH til 7,4 med NaOH.
2. På dagen for eksperimentet Forbered Perfusion, Overfør og fordøjelse Buffere
- Forbered 150 ml perfusionsbuffer i Ca 2 + gratis Tyrodes (Tabel 3) og filtreres gennem et 0,2 um filter.
- Forbered 35 ml Ca 2 + fri transfer "puffer A" (tabel 4) og 25 ml Ca 2 + indholdende "puffer B" (tabel 5). Filtreres hver gennem et 0,2 um filter.
- Forbered opløsninger af 0.06, 0,24, 0,6, og 1,2 mM Ca2 + ved blanding af puffer A og B pr tabel 6.
- Forbered 25 ml spaltningsbuffer ved at opløse fordøjelsesenzymer i 25 ml perfusionsbuffer (tabel 7) baseret på kropsvægt (BW) af musen. Der filtreres gennem et 0,2 um filter før brug.
3. forsøgsopstilling
- Saml en konstant flow Langendorff apparat, kommercielt tilgængelige eller ved hjælp af en peristaltisk pumpe, slanger og en varmevekslerspiral at muliggøre en strømningshastighed på 3 ml / min perfusatet opvarmet til 37 ° C. En simpel skematisk er fastsat i 2011-anmeldelse af Bell et al 18.
- Indstil cirkulerende vandbad temperatur (~ 47 ° C) på Langendorff-apparatet, således at udstrømningen fra kanylen er ved 37 ° C ved en strømningshastighed på 3 ml / min.
- Kør 70% ethanol ved perfusion for 15 minutter, efterfulgt af 100 ml ultrarent type I vand. Kør perfusionsbuffer gennem system i 5 minutter og samtidig fjerne luftbobler.
- Sterilisere alle kirurgiske redskaber med en ønsket metode.
- Opret kanyle ved at fastgøre et kort stykke (ca. 3 mm) af PE-50 rør til spidsen af en 23 G Luer-stub adapter. Heat spidsen af slangen for at skabe en læbe, hvorover aorta vil blive placeret.
4. Cardiomyocyte Isolation
- Injicer mus med 0,2 ml heparin-opløsning (1.000 IE / ml) via intraperitoneal injektion.
- Efter 5 min bedøver mus med isofluoran. Når den er fuldt bedøvet (ingen reaktion på stærke fod knivspids), spray brystet med 70% EtOH. Åbn brystet, hurtigt udskære hjerte, være omhyggelig med ikke at beskadige aorta, og plads i 4 ° C perfusionsbuffer. Brug buede pincet til at gribe og løfte under hjertet. Dette skaber plads til at trimme vedhæftede bag hjertet med fine saks.
- Kanyle hjertet ved forsigtigt at tage fat i kanten af aorta med to par fine tænger og forsigtigt trække ång aorta over læben af kanylen. Sikre spidsen af kanylen er ikke forbi aorta ventil og ind i ventriklen, da dette vil hæmme perfusion af hjertet via kranspulsårerne.
- Fastgør aorta til kanylen ved at binde en løkke af 5-0 silkesutur omkring aorta umiddelbart over læben af kanylen.
- Bemærk: Trin 4.2 gennem 4.4 bør afsluttes så hurtigt som muligt for den bedste kvalitet fordøjelsen.
- Bemærk: Hjertet kan hænges direkte på kanylen allerede knyttet til Langendorff Apparater med strømmende perfusionsbuffer. Men hængende hjerte på en kanyle fastgjort til en lille sprøjte perfusionsbuffer under et dissektionsmikroskop har vist sig at være mest succesfulde. Dette giver en lille mængde perfusionsbuffer at blive skubbet igennem, ser for clearing af kranspulsårerne og sikre hjerte er forsvarligt fastgjort til kanylen. Kanylen er derefter hængt på Langendorff med rindende perfusionsbuffer.
- Perfunderehjertet med Ca2 + fri perfusionsbuffer ved en strømningshastighed på 3 ml / min for 2-3 min.
- Skift til enzymfordøjelse buffer og perfundere i 7-10 min, vil hjerte bliver blødere og lysere i farven.
- Bemærk: Fordøjelse tid kan justeres baseret på enzymaktivitet og hjertets størrelse.
- Når hjertet er håndgribeligt slap, fjern hjerte fra kanylen og sted i et sterilt P60 fad med puffer A (Ca 2 + fri transfer buffer).
- Fjern atrier og store fartøjer. Fjern højre ventrikel, hvis det ønskes. Med en pincet, adskille ventriklen i små stykker. Pipette flere gange med en steril 5 ml overførselspipetten til yderligere sprede celler.
- Filtreres cellesuspensionen i et 50 ml konisk rør gennem en 250 um nylon mesh filter.
- Lad suspensionen for at pelletere til omkring 10 min.
- Overfør pelleten i 0,06 mM Ca2 +-opløsning. Tillad celler at pelletere i 10 min. Sunde celler vil bundfælde, mens de fleste døde celler vil flyde. Aspirer supernatanten og overføre bundfaldet til 0,24 mM Ca2 + løsning.
- Gentag 10 minutters inkubation, aspiration, og overføre gennem de resterende to Ca2 + løsninger, indtil cellerne er i 1,2 mM opløsning. På dette tidspunkt, hvis hovedparten af cellerne være stavformede myocytter.
5. Måling kontraktilitet og calcium transienter
- Bemærk: kan måles både kontraktilitet og calcium transienter samtidigt.
- Forbered Fura-2:00 opløsning ved resuspendering i vandfrit DMSO til en koncentration på 1 pg / pl. Fura-2:00 opløsning kan opbevares i en ekssikkator ved -20 ° C.
- Belastning 1 ml suspenderede celler med 1 pi Fura-2 am. Tillad celler til at sidde i mørke 10 minutter derefter aspirer supernatant. Vask to gange med Ca 2 + Tyrode opløsning, cellerne lades bundfælde i mørke i 10 minutter mellem hver vask.
- Placer et dækglas i en fase indsats, der gør det muligt for opvarmet perfusion / aspiration og elektrode pacing med en myocyt felt stimulator. Placer etape indsatsen på inverteret mikroskop oprettet for fluorescens måling, tilføjer en dråbe olie til linse, hvis du bruger en olie fordybelse mål.
- Opsætning opvarmet tyngdekraft perfusion med 1,2 mM Ca2 + Tyrode opløsning så løsning på scenen når 37 ° C. Vedhæft aspiration til vakuum. Vedhæft elektroder.
- Tænd mikroskopet systemet og åbn ratiometriske fluorescens og erhvervelse celle dimensionering af data software.
- Tilføj et par dråber Fura-02:00 belastede celler på scenen indsatsen, blokering perfusion øjeblik for at tillade raske celler til at bundfælde sig.
- Brug 40X formål at lokalisere ønskede celle. En sund celle skal være stang formet og ikke spontant ordregivende. Det skal synligt og ensartet kontrakt, når celle paced 5-20 V.
- Bemærk: Fysiologiske analyse kræver en høj kvalitet fordøjelse. Det er muligt at få celler, der ser sund, men ikke pa ce godt for fysiologisk analyse. Fordøjelsen protokol kan kræve raffinement at få høj kvalitet, sunde myocytter. Derudover kan mutant eller syge hjerter kræve ændringer af protokollen.
- Juster linse rotation og ændre blænde ønsket celle linet op vandret på skærmen, og baggrunden er ikke synlig.
- Juster kantdetektering søjler til hver ende af myocyt og justere tærskel. Juster sarkomeret opdagelse på en del af celle med ensartede sarkomerer. Jo længere tid du kan gøre denne bar, jo mere nøjagtig matematisk model af sarkomer længden være, så længe det ikke er på to populationer af sarkomerer.
- Pace-celler ved 2 Hz og 5-20 V for 10-15 sekunder, før optagelsen.
- Optag sporing. Omgivende lys bør minimeres for bedste calcium forbigående optagelse.
6. Analyse
- Analyser spor ved hjælp af ratiometrisk fluorescens og celle dimensionering dataopsamlingssoftware.
- Denne protokol giver overskydende celler, som kan anvendes til en række andre forsøg, herunder: fiksering og immunfarvning, vurdering direkte effekter narkotika, kortsigtet kultur og atomic force mikroskopi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Når kontraktilitet og forbigående tracings er indsamlet (figur 2), at data nemt analyseres med den nødvendige software. Hele opsporing, eller dele deraf kan i gennemsnit (figur 3). Kontraktilitet kan analyseres på en række forskellige måder. For systolisk funktion, kan man vurdere omfanget af sammentrækning med fraktioneret afkortning, eller hastigheden af sammentrækning med tiden at toppe afkortning, og sammentrækning hastighed. Diastolisk funktion kan analyseres på lignende måde med tiden til 50% fedtstof og afslapning hastighed. For calcium transienter, kan lignende data sammenlignes med baseline og peak Fura-2-forhold og tiden til maksimal eller baseline (tabel 8). Disse analyser giver sammenlignelige data fra WT og KO hjerter på systolisk og diastolisk cellulær kontraktile funktion, samt calciumflux, nogen som kunne ændres i et hjerte med lignende hele organsvigt. Derudover celler fra den samme isolering kananvendes til andre eksperimenter som anført i protokollen, herunder immunhistokemisk farvning (Figur 4).
| Ca 2 + Tyrode | mM | FW / koncentration | Beløb for 2 L løsning |
| NaCl | 135 | 58,44 g | 15,8 g |
| KCI | 4 | 74,56 g | 0,596 g |
| MgCl2 | 1 | 1 M | 2 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| NaH 2 PO4 | 0,33 | 141,96 g | 0,094 g |
Tabel 1. Calcium-fri Tyrodes løsning - ReageNTS 2 l lager Ca 2 + -fri Tyrodes løsning.
| 1,2 mM Ca2 + Tyrode | mM | FW / koncentration | Beløb for 2 L løsning |
| NaCl | 137 | 58,44 g | 16 g |
| KCI | 5.4 | 74,56 g | 0,805 g |
| MgCl2 | 0,5 | 1 M | 1 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| CaCl2 · 2H 2 O | 1.2 | 147,01 g | 0,353 g |
Tabel 2. 1,2 mM Calcium Tyrodes løsning - Reagenser til 2 l lager 1,2 mM Ca2 +opløsning.
| Perfusion buffer | mM | FW | Beløb i 150 ml Ca 2 + Tyrode |
| Glukose | 10 | 180,16 g | 0,27 g |
| 2,3-butandion-monoxim (BDM) | 10 | 101,11 g | 0,152 g |
| Taurin | 5 | 125,16 g | 0,094 g |
Tabel 3. perfusionsbuffer - reagenser til at fremstille perfusionsbuffer på dagen for eksperimentet.
| Puffer A | 35 ml perfusionsbuffer |
| Bovint serumalbumin (BSA) | 0.175 g |
Tabel 4. Buffer A - reagenser til fremstilling af buffer A på dagen for eksperimentet.
| Puffer B | mM | FW | 25 ml Ca2 + Tyrode puffer |
| Glukose | 5 | 180,16 g | 0,0225 g |
Tabel 5. Puffer B - reagenser til fremstilling af puffer B på dagen for eksperimentet.
| Overførsel Buffer | Puffer A (ml) | Puffer B (ml) |
| 0,06 mM Ca2 + | 9.5 | 0,5 |
| 0,24 mM Ca2 + | 8 | 2 |
| 0,6 mM Ca2 + | 5 | 5 |
| 1,2 mM Ca2 + | 0 | 10 |
Tabel 6. overførselsbuffer - Reagenser til at forberede overdragelsen buffer på dagen for eksperimentet.
| Enzyme Digestion Buffer | 25 ml perfusionsbuffer |
| Collagenase B | 0,4 mg / g kropsvægt |
| Collagenase D | 0,3 mg / g kropsvægt |
| Protease XIV | 0,05 mg / g kropsvægt |
Tabel 7. enzymfordøjelse Buffer - reagenser til at fremstille enzymet diGestion buffer på dagen for eksperimentet.
| Kontraktilitet | |
| Baseline | 1,73 um |
| Peak | 1,64 um |
| Fraktioneret Afkortning | 4,70% |
| Tid til at toppe | 0,056 sek |
| Tid til 50% baseline | 0,043 sek |
| Calcium transienter | |
| Baseline | 1.18 |
| Peak | 1.32 |
| Tid til at toppe | 0,021 sek |
| Tid til 50% baseline | 0.083 sek |
Tabel 8. Kontraktilitet og calcium forbigående analyser. N = 5.
Figur 1. Generel oversigt over eksperimentelle design. A) Heart fordøjes via koronar perfusion med enzymfordøjelse buffer. B) Celler yderligere spredt i individuelle, sunde myocytter. C) Celler sekventielt overføres gennem stigende calciumkoncentrationer så cellerne bliver calcium tolerante. D) Celler er fyldt med calcium afhængig farvestof, er Fura-2 am. Ø) Loaded celler elektrisk tempo mens sarkomer længde, celle længde, og fluorescens registreres. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. A) Prøve Contractility sporing repræsenteret ved sarkomer længde vs tid. B) Prøve calcium transienter repræsenteret af Fura-2-forhold over tid. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. A) Gennemsnitlig kontraktilitet sporing efter analyse. B) Gennemsnit af calcium transienter efter analyse. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4. immunfluorescensfarvning af cardiomyocyte cytoskelet (α-actinin).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Isolering af kvalitets cardiomyocytes kræver en vis grad af praksis og optimering. Denne protokol indeholder en række vigtige skridt, der i høj grad kan påvirke resultatet af fordøjelsen. Disse bør overvejes nøje, når du udfører og fejlfinding af protokollen. Tiden fra fjernelse af hjertet til kanylering og perfusion bør minimeres, ideelt mindre end fem minutter. Skylning hjertet straks i iskoldt perfusionsbuffer efter fjernelse fra musen og dissekere og kanylering hjertet i iskold buffer vil også øge chancerne for en kvalitet fordøjelse. Kanylering sig selv er et kritisk trin. Spidsen af kanylen skal placeres under de første grene af aorta, men ikke gennem aortaklappen ind i ventriklen, da dette vil forhindre perfusion af kranspulsårerne. Koronar perfusion er afgørende for en kvalitet fordøjelse. I dette laboratorium er kanyle fastgjort til en sprøjte fyldt med perfusionsbuffer. Forsigtigt injicere en lilll mængde perfusionsbuffer efter montering og ser kranspulsårerne klare blod kan teste tilstrækkeligheden af kanyle.
Fejlfinding denne protokol indebærer nøje at vurdere de nævnte kritiske trin. Hvis hjertet ikke bliver håndgribeligt blød under fordøjelsen, er der et par mulige årsager. Først under kanylering, spidsen af kanylen kan være blevet fremført over aortaklappen, forhindrer perfusion via kranspulsårerne. Dette kan vurderes, før hængende hjertet på Langendorff apparatet men skubber en lille mængde af perfusionsbuffer gennem kanylen med en sprøjte og ser omhyggeligt for kranspulsårerne til fri af blod. Hvis perfusion er tilstrækkelig, men hjertet ikke fordøje godt, overveje at købe forskellige masser af enzymer. Fordi enzymer er faktisk blandinger, behøver partier ikke handle ens. Vi anbefaler køb af små mængder af hvert enzym. Når partier findes der fordøje godt, purchase større mængder af dette parti til fremtidig brug. Som diskuteret, hvis dissektion og kanylering af hjertet tage længere tid end 5-10 minutter, kan kvaliteten af de spaltede celler være dårlig. Overvej at færdiggøre isolationer med vildtype eller ubehandlede dyr at mestre dissektion før man går videre til knockout eller behandlede dyr. Efter fordøjelse celler skal langsomt gøres calcium tolerante. Cellerne skal bruge mindst 10 minutter i hver af calcium løsninger. Farende disse trin kan nedsætte udbyttet og levedygtighed af celler.
Selv reproducerbare, de fysiologiske målinger afhænger af at starte med en kvalitet fordøjelse. Når du vælger celler til at måle, vælge celler, der ikke spontant ordregivende, hvilket indikerer en utæt, beskadiget cellemembranen. Cellerne skal trække sig ensartet ved paced. Overvej pacing celler i 10-15 sekunder, før du optager målinger for at sikre kontraktile konsistens. Hvis celle ser ud til at være ordregivende ensartet, men målingerne af contraction størrelsesorden varierer drastisk over tid, først tjekke for at sikre, at området af interesse defineret dækker kun en befolkning på sarkomerer. Lejlighedsvis to celler gruppe sammen, og området af interesse (ROI), kan måling af to forskellige populationer af sarkomer som én. Hvis en passende ROI vælges men kontraktilitet er variable inden for en enkelt celle, kan cellen være døende og anden celle skal vælges. For calcium transienter, er det afgørende at fortynde Fura-2 AM om udtørret vandfrit DMSO som vand ændrer mængden af Fura-2:00, der er funktionelt tilgængelig. Efter lastning, skal der være mindst 20 minutter mellem den første vask og måling transienter at give alle Fura-2 AM til de-esterificere i cellen. Som med enhver fluorescensfarve beskytte cellerne mod lys under og efter læsning. Nogle celler vil ikke optagelse farvestoffet, således lejlighedsvis ingen calcium transienter vil blive observeret på en afmålt celle. Selvom kontraktilitet og calcium transienter tracings muligvis "renere ", når pacinghastighed er stærkt reduceret (0,5-1 Hz), målinger er mere fysiologisk med en hastighed tættere på musen puls, således et tempo på mindst 2 Hz foretrækkes.
Selve isoleringen kan ændres, hvis det ønskes. Dette laboratorium anvender en konstant flow metoden (3 ml / min for mus) under perfusion. Nogle grupper har fundet en tyngdekraft flyde mere effektiv. Gravity flow perfusion giver mulighed for fordøjelse visualiseres lettere som strømningshastigheden øges som hjertet fordøjes.
Som nævnt er disse teknikker gør bære begrænsninger. Da kvaliteten af de fysiologiske målinger er afhængig af kvaliteten af fordøjelsen, er det klogt at måle myocytter fra mere end ét hjerte for hver eksperimentel tilstand. Hvert hjerte vil give mange myocytter at måle, men gentagne spaltninger vil sikre, at resultaterne er konsistente mellem hjerter. Isolering er en terminal procedure, således, hvis eksperimentelle design indebærer følgrund hjertefunktionen af et dyr over tid, kan de cardiomyocytter kun høstes én gang. Flere mus er påkrævet, således en kohorte kan følges på langs mens individuelle aflives musene til at analysere kardiomyocytter.
Vores fokus har studeret kontraktilitet og cytoskeletale struktur i en knockout-mus, der imidlertid isolerede cardiomyocytter kan anvendes til en række andre forsøg, herunder levende celler farvning for T-tubuli, studere cardiomyocytter fra tryk eller volumen overbelastet mus, at undersøge virkningerne af farmakologiske behandling, immunfluorescens transfektion 9 og transkriptionel profilering 19. Dette alsidige teknik tilvejebringer utallige fordele i forhold til andre metoder, der anvendes til at studere hjertesvigt. Studere fysiologi af de enkelte celler giver oplysninger, der ikke tilbydes af hele orgel undersøgelser såsom ekkokardiografi eller elektrokardiografi, der giver indsigt i de cellulære ændringer, der følger hele orgel failure. Desuden isolerede celler er overlegne til billeddannelse af sub-cellulære strukturer, som hele celle kan nemt farves og afbildes. Isolering af kardiomyocytter til analyse af kontraktilitet, calcium transienter, og immunfluorescens er en yderst alsidig teknik, der giver værdifuld information fra et stort udvalg af eksperimentelle designs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Vi har intet at afsløre.
Acknowledgments
Marc Wozniak for brug af Department of Cell og Developmental Biology videography udstyr.
Vanderbilt University Cell Imaging delte ressource.
Dette arbejde understøttes af AHA tilskud 12PRE10950005 til ERP, AHA tilskud 11GRNT7690040 at DMB NIH tilskud R01 HL037675 at DMB. DMB er Gladys P. Stahlman Chair i Cardiovascular Research.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | RPI | S23020 | |
| KCl | Sigma | P-3911 | |
| MgCl2 | Sigma | M-8266 | |
| HEPES | EM Science | S320 | |
| NaH2PO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2·2H2O | Fisher | C79 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G7528 | |
| 2,3-Butanedione-monoxime (BDM) | Sigma | B-0753 | |
| Taurine | Sigma | T-0625 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma | A-7030 | |
| Collagenase B | Roche Diagnostics | 1-088-823 | |
| Collagenase D | Roche Diagnostics | 1-088-882 | |
| Protease XIV | Sigma | P-5147 | |
| Heparin | APP Pharmaceuticals, LLC | 401586D | |
| Isofluorane | Butler Schein | 11695-6776-2 | |
| Fura-2 AM | Teflabs | 103 | |
| DMSO – anhydrous | Sigma | 276855 | |
| IonOptix cell pacing and fluorescent analysis system | IonOptix | ||
| 250 μm nylon mesh filter | Sefar America | Lab Pak 03-250/50 | |
| 23 G Luer-stub adaptor | Becton Dickinson | 1482619E | |
| PE-50 tubing | Becton Dickinson | 427410 |
References
- Babick, A. P., Dhalla, N. S. Role of Subcellular Remodeling in Cardiac Dysfunction due to Congestive Heart Failure. Medical Principles and Practice. 16, 81-89 (2007).
- Nogami, A. Purkinje-Related Arrhythmias Part I: Monomorphic Ventricular Tachycardias. Pacing and Clinical Electrophysiology. 34, 624-650 (2011).
- Clancy, R. M., Kapur, R. P., Molad, Y., Askanase, A. D., Buyon, J. P. Immunohitologic Evidence Supports Apoptosis, IgG Deposition, and Novel Macrophage/Fibroblast Crosstalk in the Pathologic Cascade Leading to Congenital Heart Block. Arthritis and Rheumatism. 50, 173-182 (2004).
- Splawski, I., et al. CaV1.2 Calcium Channel Dysfunction Causes a Multisystem Disorder Including Arrhythmia and Autism. Cell. 119, 19-31 (2004).
- Berry, M. N., Friend, D. S., Scheuer, J. Morphology and Metabolism of Intact Muscle Cells Isolated from Adult Rat Heart. Circulation Research. 26, 679-687 (1970).
- Fang, F., et al. Luteolin Inhibits Apoptosis and Improves Cardiomyocyte Contractile Function through the PI3K/Akt pathway in Simulated Ischemia/Reperfusion. Pharmacology. 88, 149-158 (2011).
- Feng, W., et al. Coordinated Regulation of Murin Cardiomyocyte Contractility by Nanomolar (-)-Epigallocatechin-3-Gallate the Major Green Tea Catechin. Molecular Pharmacology. 82, 993-1000 (2012).
- Claycomb, W. C., et al. HL-1 cells: A cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte. Proceedings of the National Academy of Science. 95, 2979-2984 (1998).
- Kaestner, L., et al. Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging. J Vis Exp. (31), e1433 (2009).
- Vainio, L., et al. Neronostatin, a Novel Peptide Encoded by Somatostatin Gene, Regulates Cardiac Contractile Function and Cardiomyocytes Survival. The Journal of Biological Chemistry. 287, 4572-4580 (2012).
- Park, M., et al. Novel mechanisms for caspase inhibition protecting cardiac function wth chronic pressure overload. Basic Research in Cardiology. , 108 (2013).
- Novaes, R. D., et al. Effects of Trypanosoma cruzi infection on myocardial morphology, single cardiomyocyte contractile function and exercise tolerance in rats. International Journal of Experimental Pathology. 92, 299-307 (2011).
- Weltman, N. Y., Wang, D., Redetzke, R. A., Gerdes, A. M. Longstanding Hyperthyroidism is Associated with Normal or Enhanced Intrinsic Cardiomyocyte Function despite Decline in Global Cardiac Function. PLoS One. 7, e46655 (2012).
- Papanicolaou, K. N., et al. Preserved heart function and maintained response to cardiac stresses in a genetic model of cardiomyocyte-targeted deficiency of cyclooxygenase-2. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 49, 196-209 (2010).
- Despa, S., Lingrel, J. B., Bers, D. M. Na+/K+-ATPase a2-isoform preferntially modulates Ca2+ transients and sarcoplasmic reticulum Ca2+ release in cardiac myocytes. Cardiovascular Research. 95, 480-486 (2012).
- Touchberry, C. D., et al. FGF23 is a novel regulator of intracellular calcium and cardiac contractility in addition to cardiac hypertophy. American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. , (2013).
- Helmes, M., et al. Titin Determines the Frank-Starling Relation in Early Diastole. The Journal of General Physiology. 121, 97-110 (2003).
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 940-950 (2011).
- Flynn, J. M., Santana, L. F., Melov, S. Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes. J Vis Exp. (58), e3302 (2011).
