Protocol
Sørg for at alle prosedyrer som involverer dyr er godkjent av riktig bruk dyr og omsorg kroppen.
1. Forbered Stock buffere i Advance
- Forbered 2 L lager Ca 2 + gratis Tyrode tallet (tabell 1). Juster pH til 7,4 med NaOH.
- Forbered 2 L lager 1.2 mM Ca 2 + Tyrode tallet (tabell 2). Juster pH til 7,4 med NaOH.
2. På Day of the Experiment, Forbered Perfusjons, Transfer, og fordøyelse buffere
- Forbered 150 ml perfusjon buffer i Ca 2 + gratis Tyrode tallet (tabell 3) og filtrere gjennom et 0,2 mikrometer filter.
- Forbered 35 ml Ca 2 + free transfer "Buffer A" (tabell 4) og 25 ml Ca 2 + som inneholder "Buffer B" (tabell 5). Filtrer hver gjennom et 0,2 mikrometer filter.
- Forbered løsninger av 00,06, 0,24, 0,6, og 1,2 mM Ca 2 + ved blanding av buffer A og B per Tabell 6.
- Forbered 25 ml fordøyelsen buffer ved oppløsning av fordøyelsen enzymer i 25 ml perfusjon buffer (Tabell 7) basert på kroppsvekt (BW) i mus. Filtrer gjennom et 0,2 mikrometer filter før bruk.
3. Forsøksoppsett
- Monter en konstant strøm Langendorff apparatur, som er tilgjengelig kommersielt eller ved hjelp av en peristaltisk pumpe, rør, og en varmevekslerspiral for å tillate en strømningshastighet på 3 ml / min av perfusatet ble oppvarmet til 37 ° C. En enkel skjematisk er gitt i 2011-anmeldelse av Bell, et al 18.
- Sett sirkulerende vannbad temperatur (~ 47 ° C) av Langendorff apparatur, slik at utstrømningen fra kanylen er ved 37 ° C ved en strømningshastighet på 3 ml / min.
- Kjør 70% etanol via perfusjon systemet i 15 minutter, etterfulgt av 100 ml ultrarent type I vann. Kjør perfusjon buffer gjennom system for 5 min mens de eliminerer luftbobler.
- Steril alle kirurgiske verktøy med en ønsket metode.
- Lag kanyle ved å feste en liten del (ca. 3 mm) av PE-50 rør til tuppen av en 23 G Luer-stub adapter. Varme spissen av rør for å skape en leppe over hvilke aorta vil bli plassert.
4. cardiomyocyte Isolation
- Injisere mus med 0,2 ml Heparin-oppløsning (1000 IE / ml), via intraperitoneal injeksjon.
- Etter 5 min, bedøve mus med isofluorane. Når fullt bedøvet (ingen respons på sterk foten klype), spray brystet med 70% EtOH. Åpne brystet, raskt skjære hjertet, være forsiktig så du ikke skader aorta, og plasser i 4 ° C perfusjon buffer. Bruk buet pinsett til å gripe og løfte under hjertet. Dette skaper rom for å trimme vedlegg bak hjertet med fine saks.
- Cannulate hjertet ved forsiktig å gripe kanten av aorta med to par fin pinsett og forsiktig trekke opening av aorta over kanten av kanylen. Påse at spissen av kanylen er ikke forbi aorta-ventilen og inn i ventrikkelen, da dette vil hemme perfusjon av hjertet gjennom koronararteriene.
- Fest aorta til kanylen ved å knytte en sløyfe på 5-0 silke sutur rundt aorta rett over leppen av kanylen.
- Merk: Trinn 4.2 gjennom 4.4 bør gjennomføres så raskt som mulig for best kvalitet fordøyelsen.
- Merk: Hjertet kan henges direkte på kanylen allerede er festet til Langendorff Apparat med rennende buffer perfusjon. Imidlertid henger hjertet mot en kanyle festet til en liten sprøyte med perfusjon buffer under et mikroskop disseksjon har blitt funnet å være mest vellykket. Dette gjør at en liten mengde perfusjon buffer for å bli presset gjennom, ser for clearing av koronararteriene og sikre hjerte er godt festet til kanyle. Kanylen blir deretter hengt på Langendorff med rennende perfusjon buffer.
- Perfusehjertet med Ca 2 + fri perfusjon buffer ved en strømnings på 3 ml / min i 2-3 min.
- Bryter enzym fordøyelsen buffer og perfuse etter 7-10 min, vil hjerte bli mykere og lysere i farge.
- Merk: Fordøyelse tid kan justeres basert på enzymaktivitet og hjertestørrelsen.
- Når hjertet er smakfult slapp tilstand, fjerne hjertet fra kanylen og legg det i en steril p60 tallerken med Buffer A (Ca 2 + free transfer buffer).
- Fjern atriene og store blodkar. Fjern høyre ventrikkel hvis ønskelig. Med tang, separere ventrikkelen i små biter. Pipettes flere ganger med en steril 5 ml pipette for å overføre ytterligere dispergere cellene.
- Filtrer cellesuspensjonen i en 50 ml konisk rør gjennom en 250 um mesh nylonfilter.
- Tillat suspensjonen for å klumpe i omtrent 10 min.
- Overfør pelleten inn i 0,06 mM Ca 2 +-løsning. Tillat å pelletere cellene i 10 min. Friske celler vil pellet, mens de fleste døde celler vil flyte. Aspirer supernatanten, og overføre pelleten til 0,24 mM Ca 2 +-løsning.
- Gjenta 10 min inkubasjon, aspirasjon, og overføre gjennom de resterende to Ca 2 + løsninger til cellene er i 1,2 mM løsning. På dette punktet, bør et flertall av cellene være stavformede myocytter.
5. Måle kontraktilitet og kalsium transienter
- Merk: Både kontraktilitet og kalsium transienter kan måles samtidig.
- Forbered Fura-2 AM-løsning ved å resuspendere i vannfri DMSO til en konsentrasjon på 1 pg / pl. Fura-2 AM-løsning kan være lagret i en eksikator ved -20 ° C.
- Load 1 ml av suspendert celler med 1 pl Fura-2 AM. Tillate celler til å sitte i mørket 10 min deretter aspirer supernatant. Vask to ganger med Ca 2 + Tyrode oppløsning, slik at cellene til pellet i mørke i 10 min mellom hver vask.
- Plasser et glass dekkglass i en scene innsats som gjør at oppvarmet perfusion / aspirasjon og elektrode pacing med en myocyte feltet stimulator. Place stadium innsats på invertert mikroskop satt opp for fluorescens måling, og legger en dråpe olje på objektivet hvis du bruker en olje nedsenking målsetting.
- Sett opp oppvarmet tyngdekraft perfusjon med 1.2 mM Ca 2 + Tyrode løsning slik løsning på scenen når 37 ° C. Fest aspirasjon til vakuum. Fest elektroder.
- Slå på mikroskopet systemet, og åpne ratiometrisk fluorescens og celle dimensjonering datainnsamling programvare.
- Tilsett noen dråper av Fura-2 AM lastet celler til scenen innsats, blokkerer perfusjon øyeblikk for å tillate friske celler til å bosette seg.
- Bruk 40X mål å finne ønsket celle. En sunn celle bør være stavformet og ikke spontant kontrahering. Det bør synlig og jevnt kontrakt når cellen er tempoet på 5-20 V.
- Merk: Fysiologisk analyse krever en høy kvalitet fordøyelsen. Det er mulig å ha celler som ser sunt, men ikke pa ce godt for fysiologisk analyse. Fordøyelse protokollen kan kreve raffinement for å få høy kvalitet, sunne myocytes. Dessuten kan muterte eller syke hjerter kreve modifikasjoner av protokollen.
- Juster linsen rotasjon og endre blenderåpning så ønsket celle er foret opp horisontalt på skjermen og bakgrunnen er ikke synlig.
- Juster kantdeteksjons barer i hver ende av myocyte og justere terskelen. Rett sarcomere deteksjon på en del av celle med ensartede sarcomeres. Jo lenger du kan gjøre denne baren, jo mer nøyaktig den matematiske modellen av sarkomerlengde være, så lenge det ikke er på to populasjoner av sarcomeres.
- Pace celler ved 2 Hz og 5-20 V for 10-15 sek før opptak.
- Record tracing. Omgivelseslyset bør minimeres for beste kalsium forbigående opptak.
6. Analyse
- Analysere spor ved hjelp av ratiometrisk fluorescens og celle dimensjonering datainnsamling programvare.
- Denne protokollen gir overskytende celler som kan brukes for en rekke andre eksperimenter inkludert: fiksering og farging, vurdering direkte medikamenteffekter, kortvarig kultur, og atomic force microscopy.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Når kontraktilitet og forbigående tracings er samlet (figur 2), blir data enkelt analysert med riktig programvare. Hele tracing, eller deler derav kan bli gjennomsnitts (figur 3). Kontraktilitet kan analyseres på en rekke måter. For systolisk funksjon, kan man vurdere omfanget av sammentrekning med fractional forkorte, eller hastighet av sammentrekning med tid til maksimal forkorte, og sammentrekning hastighet. Diastolisk funksjonen kan bli analysert på samme måte med tiden til 50% fett og avslapning hastighet. For kalsium transienter, kan lignende data sammenlignes med baseline og peak Fura-2 forholdstall og tid til maksimal eller baseline (Tabell 8). Disse analyser gir sammenlignbare data fra WT og KO hjerter på systolisk og diastolisk cellulær kontraktile funksjon, så vel som kalsium-fluks, noen av hvilke kan bli forandret i et hjerte med tilsvar hele organdysfunksjon. I tillegg celler fra samme isolert kanbrukes til andre eksperimenter som er angitt i protokollen, inkludert immunhistokjemisk farging (figur 4).
| Ca 2 + gratis Tyrode | mM | FW / konsentrasjon | Beløp for to L-løsning |
| NaCl | 135 | 58.44 g | 15,8 g |
| KCl | 4 | 74.56 g | 0,596 g |
| MgCl2 | 1 | 1 M | 2 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| NaH 2 PO 4 | 0,33 | 141,96 g | 0,094 g |
Tabell 1. Kalsium-fri Tyrode løsning - reagensNTS for 2 L på lager Ca 2 + -gratis Tyrode løsning.
| 1.2 mM Ca 2 + Tyrode | mM | FW / konsentrasjon | Beløp for to L-løsning |
| NaCl | 137 | 58.44 g | 16 g |
| KCl | 5.4 | 74.56 g | 0.805 g |
| MgCl2 | 0.5 | 1 M | 1 ml |
| HEPES | 10 | 238,31 g | 4,77 g |
| CaCl 2 · 2H 2 O | 1.2 | 147,01 g | 0,353 g |
Tabell 2. 1.2 mM Kalsium Tyrode løsning - Reagenser for 2 L på lager 1.2 mM Ca 2 +løsning.
| Perfusjons Buffer | mM | FW | Beløp i 150 ml Ca 2 + gratis Tyrode |
| Glukose | 10 | 180,16 g | 0,27 g |
| 2,3-butandion-monoxime (BDM) | 10 | 101,11 g | 0,152 g |
| Taurin | 5 | 125,16 g | 0,094 g |
Tabell 3. Perfusjon Buffer - Reagents for å forberede perfusjon bufferen på dagen for eksperimentet.
| Buffer A | 35 ml Perfusjons Buffer |
| Bovint serum albumin (BSA) | 0.175 g |
Tabell 4. Buffer A - Reagents for å forberede Buffer A på dagen for eksperimentet.
| Buffer B | mM | FW | 25 ml Ca 2 + Tyrode buffer |
| Glukose | 5 | 180,16 g | 0,0225 g |
Tabell 5. Buffer B - Reagents for å forberede buffer B på dagen for eksperimentet.
| Overfør Buffer | Buffer A (ml) | Buffer B (ml) |
| 0,06 mm Ca 2 + | 9.5 | 0.5 |
| 0,24 mm Ca 2 + | 8 | 2 |
| 0.6 mM Ca 2 + | 5 | 5 |
| 1.2 mM Ca 2 + | 0 | 10 |
Tabell 6. Overfør Buffer - Reagenser for å forberede overføring buffer på dagen for eksperimentet.
| Enzyme Fordøyelse Buffer | 25 ml Perfusjons Buffer |
| Kollagenase B | 0,4 mg / g kroppsvekt |
| Kollagenase D | 0,3 mg / g kroppsvekt |
| Protease XIV | 0,05 mg / g kroppsvekt |
Tabell 7. Enzyme Fordøyelse Buffer - Reagenser for å forberede enzymet digestion buffer på dagen av eksperimentet.
| Kontraktilitet | |
| Baseline | 1,73 mikrometer |
| Peak | 1,64 mikrometer |
| Brøk Avkortning | 4,70% |
| Tid til topp | 0,056 sek |
| Tid til 50% baseline | 0.043 sec |
| Kalsium transienter | |
| Baseline | 1.18 |
| Peak | 1.32 |
| Tid til topp | 0,021 sek |
| Tid til 50% baseline | 0,083 sek |
Tabell 8. kontraktilitet og kalsium forbigående analyser. N = 5.
Figur 1. Generell oversikt over eksperimentell design. A) Hjerte oppsluttes via koronar perfusjon med buffer-enzymbehandling. B) Celler blir ytterligere dispergert inn i individuelle, sunne myocytter. C) Celler blir sekvensielt overført gjennom økende kalsiumkonsentrasjoner slik at cellene blir kalsiumtolerant. D) Celler blir lastet med den kalsiumavhengige fargestoff, er Fura-2 AM. E) Loaded celler elektrisk tempo mens sarkomerlengde, cellelengde, og fluorescens er registrert. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. A) Sample contraclitet spår representert ved sarkomerlengde mot tid. B) Prøve kalsium transienter representert ved Fura-2 forhold mot tid. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. A) Gjennomsnittlig kontraktilitet tracing etter analyse. B) Gjennomsnitt av kalsium transienter etter analyse. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. Immunofluorescent farging av cardiomyocyte cytoskjelettet (α-actinin).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Isolering av kvalitets cardiomyocytes krever en viss grad av praksis og optimalisering. Denne protokollen inneholder viktige skritt som i stor grad kan påvirke utfallet av fordøyelsen. Disse bør vurderes nøye når du utfører og feilsøking protokollen. Tiden fra fjerning av hjertet til kanylering og perfusjon bør minimaliseres, ideelt mindre enn fem minutter. Skylling hjertet umiddelbart i iskaldt perfusjon buffer etter fjerning fra musen og dissekere og kanylerør hjertet i iskald buffer vil også øke sjansene for en kvalitet fordøyelsen. Den kanylering i seg selv er et kritisk punkt. Spissen av kanylen må plasseres under de første grener av aorta, men ikke gjennom aortaventilen i ventrikkelen, da dette vil hindre perfusjon av koronararteriene. Koronar perfusjon er avgjørende for en god fordøyelsen. I dette laboratoriet, blir kanyle festet til en sprøyte fylt med perfusjon buffer. Forsiktig injisere en small mengde perfusjon buffer etter montering og se på koronararteriene klare av blod kan teste tilstrekkeligheten av kanylering.
Feilsøking denne protokollen innebærer nøye vurdering av de nevnte kritiske trinn. Hvis hjertet ikke blir smakfult mykt under fordøyelsen, er det noen mulige årsaker. Først, under kanylering, spissen av kanylen kan ha blitt avansert utover aortaventilen, hindrer perfusjon gjennom koronararteriene. Dette kan bli vurdert før avslutning hjertet på Langendorff apparatur, men presser en liten mengde buffer perfusjon gjennom kanylen med en sprøyte og ser nøye for koronararteriene til fritt for blod. Hvis perfusjon er tilstrekkelig, men hjertet ikke fordøye godt, vurdere å kjøpe ulike mange enzymer. Fordi enzymer er faktisk blandinger, trenger mange ikke opptre likt. Vi anbefaler å kjøpe små mengder av hvert enzym. Når mange er funnet at fordøye godt, kjøhase større mengder at mye for fremtidig bruk. Som diskutert, hvis disseksjon og kanylering av hjertet ta lengre tid enn 5-10 min, kan kvaliteten av de fordøyde cellene bli dårlig. Tenk full isoleringer med villtype eller ubehandlede dyr å mestre disseksjon før du går videre til knockout eller behandlede dyr. Etter fordøyelsen, celler må sakte gjøres kalsium tolerant. Celler bør bruke minst 10 minutter i hvert av de kalsiumløsninger. Rushing disse trinnene kan redusere utbyttet og levedyktighet av celler.
Selv reproduserbar, fysiologiske målinger avhenge starter med en kvalitet fordøyelsen. Når du velger celler for å måle, velge celler som ikke spontant Contracting, noe som indikerer en lekk, skadet cellemembranen. Cellene skal trekke jevnt tempo. Tenk pacing celler for 10-15 sek før opptak målinger for å sikre kontraktile konsistens. Hvis cellen ser ut til å pådra jevnt, men målinger av contraction magnitude varierer drastisk over tid, først sjekke for å være sikker på at regionen av interesse definert dekker bare en befolkning på sarcomeres. Av og til to celler gruppe sammen og regionen av interesse (ROI) kan måle to forskjellige populasjoner av sarcomere som én. Hvis en passende ROI velges men kontraktilitet er variabel innenfor en enkelt celle, kan celle være dø, og en annen celle bør velges. For kalsium transienter, er det avgjørende å fortynne Fura-2 AM i desiccated vannfri DMSO som vann endrer mengden av Fura-2 AM som er funksjonelt tilgjengelig. Etter lasting, tillate minst 20 min mellom første vask og måle transienter å tillate alle Fura-2 AM å de-forestre i cellen. Som med en hvilken som helst fluorescerende fargestoff, beskytte cellene mot lys under og etter lasting. Noen celler vil ikke opptak av fargestoff, således iblant ingen kalsium transienter vil bli observert i en målecelle. Selv kontraktilitet og kalsium transienter tracings kan virke "renere "når pacing frekvensen reduseres sterkt (0,5-1 Hz), målinger er mer fysiologisk med en hastighet nærmere mus puls, og dermed en takt på minst 2 Hz blir foretrukket.
Isoleringen i seg selv kan modifiseres hvis ønskelig. Dette laboratoriet anvender en konstant strømningsmetode (3 ml / min for mus) under perfusjon. Noen grupper har funnet en tyngdekraft strømme mer effektivt. Gravitasjonsstrømnings perfusjon tillater for fordøyelsen å bli visualisert lettere som strømningshastigheten øker etter hvert som hjerte oppsluttes.
Som nevnt, er disse teknikker gjør bære begrensninger. Da kvaliteten av de fysiologiske målinger er avhengig av kvaliteten av fordøyelsen, er det klokt å måle myocytter fra mer enn ett hjerte for hver eksperimentell tilstand. Hvert hjerte vil gi mange myocytes å måle, men gjentar digestions vil sikre at resultatene er sammenfallende mellom hjerter. Isolasjon er en terminal prosedyre, således, om eksperimentell design innebærer follpå grunn av hjertefunksjonen til et dyr over tid, kan de kardiomyocytter bare bli høstet en gang. Flere mus er nødvendig, slik en kohort kan følges i lengderetningen mens enkelte mus er ofret for å analysere cardiomyocytes.
Vårt fokus har vært å studere kontraktilitet og cytoskeletal struktur i en knockout mus, men isolerte cardiomyocytes kan brukes til en rekke andre eksperimenter inkludert levende cellefarging for T-tubuli, studere cardiomyocytes fra trykk eller volum overbelastet mus, undersøke effekten av farmakologisk behandling, immunfluorescens, transfeksjon 9, og transkripsjonelle profilering 19. Denne allsidige teknikk gir mange fordeler i forhold til andre metoder som brukes for å studere hjertesvikt. Studerer fysiologi av individuelle celler gir informasjon som ikke tilbys av hele organ studier som ekkokardiografi eller EKG, og gir innsikt i celleforandringer som følger hele organet failure. I tillegg, isolerte celler er overlegen for avbildnings sub-cellulære strukturer, som hele cellen kan lett farget og avbildes. Isolere cardiomyocytes for analyse av kontraktilitet, kalsium transienter, og immunfluorescens er en svært allsidig teknikk som gir verdifull informasjon fra et stort utvalg av eksperimentelle design.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Vi har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Marc Wozniak for bruk av Department of Cell og utviklingsbiologi videografi utstyr.
Vanderbilt University Cell Imaging delt ressurs.
Dette arbeidet støttes av AHA stipend 12PRE10950005 til ERP, AHA stipend 11GRNT7690040 til DMB, NIH stipend R01 HL037675 til DMB. DMB er Gladys P. Stahlman Chair i Cardiovascular Research.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | RPI | S23020 | |
| KCl | Sigma | P-3911 | |
| MgCl2 | Sigma | M-8266 | |
| HEPES | EM Science | S320 | |
| NaH2PO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2·2H2O | Fisher | C79 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G7528 | |
| 2,3-Butanedione-monoxime (BDM) | Sigma | B-0753 | |
| Taurine | Sigma | T-0625 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma | A-7030 | |
| Collagenase B | Roche Diagnostics | 1-088-823 | |
| Collagenase D | Roche Diagnostics | 1-088-882 | |
| Protease XIV | Sigma | P-5147 | |
| Heparin | APP Pharmaceuticals, LLC | 401586D | |
| Isofluorane | Butler Schein | 11695-6776-2 | |
| Fura-2 AM | Teflabs | 103 | |
| DMSO – anhydrous | Sigma | 276855 | |
| IonOptix cell pacing and fluorescent analysis system | IonOptix | ||
| 250 μm nylon mesh filter | Sefar America | Lab Pak 03-250/50 | |
| 23 G Luer-stub adaptor | Becton Dickinson | 1482619E | |
| PE-50 tubing | Becton Dickinson | 427410 |
References
- Babick, A. P., Dhalla, N. S. Role of Subcellular Remodeling in Cardiac Dysfunction due to Congestive Heart Failure. Medical Principles and Practice. 16, 81-89 (2007).
- Nogami, A. Purkinje-Related Arrhythmias Part I: Monomorphic Ventricular Tachycardias. Pacing and Clinical Electrophysiology. 34, 624-650 (2011).
- Clancy, R. M., Kapur, R. P., Molad, Y., Askanase, A. D., Buyon, J. P. Immunohitologic Evidence Supports Apoptosis, IgG Deposition, and Novel Macrophage/Fibroblast Crosstalk in the Pathologic Cascade Leading to Congenital Heart Block. Arthritis and Rheumatism. 50, 173-182 (2004).
- Splawski, I., et al. CaV1.2 Calcium Channel Dysfunction Causes a Multisystem Disorder Including Arrhythmia and Autism. Cell. 119, 19-31 (2004).
- Berry, M. N., Friend, D. S., Scheuer, J. Morphology and Metabolism of Intact Muscle Cells Isolated from Adult Rat Heart. Circulation Research. 26, 679-687 (1970).
- Fang, F., et al. Luteolin Inhibits Apoptosis and Improves Cardiomyocyte Contractile Function through the PI3K/Akt pathway in Simulated Ischemia/Reperfusion. Pharmacology. 88, 149-158 (2011).
- Feng, W., et al. Coordinated Regulation of Murin Cardiomyocyte Contractility by Nanomolar (-)-Epigallocatechin-3-Gallate the Major Green Tea Catechin. Molecular Pharmacology. 82, 993-1000 (2012).
- Claycomb, W. C., et al. HL-1 cells: A cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte. Proceedings of the National Academy of Science. 95, 2979-2984 (1998).
- Kaestner, L., et al. Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging. J Vis Exp. (31), e1433 (2009).
- Vainio, L., et al. Neronostatin, a Novel Peptide Encoded by Somatostatin Gene, Regulates Cardiac Contractile Function and Cardiomyocytes Survival. The Journal of Biological Chemistry. 287, 4572-4580 (2012).
- Park, M., et al. Novel mechanisms for caspase inhibition protecting cardiac function wth chronic pressure overload. Basic Research in Cardiology. , 108 (2013).
- Novaes, R. D., et al. Effects of Trypanosoma cruzi infection on myocardial morphology, single cardiomyocyte contractile function and exercise tolerance in rats. International Journal of Experimental Pathology. 92, 299-307 (2011).
- Weltman, N. Y., Wang, D., Redetzke, R. A., Gerdes, A. M. Longstanding Hyperthyroidism is Associated with Normal or Enhanced Intrinsic Cardiomyocyte Function despite Decline in Global Cardiac Function. PLoS One. 7, e46655 (2012).
- Papanicolaou, K. N., et al. Preserved heart function and maintained response to cardiac stresses in a genetic model of cardiomyocyte-targeted deficiency of cyclooxygenase-2. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 49, 196-209 (2010).
- Despa, S., Lingrel, J. B., Bers, D. M. Na+/K+-ATPase a2-isoform preferntially modulates Ca2+ transients and sarcoplasmic reticulum Ca2+ release in cardiac myocytes. Cardiovascular Research. 95, 480-486 (2012).
- Touchberry, C. D., et al. FGF23 is a novel regulator of intracellular calcium and cardiac contractility in addition to cardiac hypertophy. American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. , (2013).
- Helmes, M., et al. Titin Determines the Frank-Starling Relation in Early Diastole. The Journal of General Physiology. 121, 97-110 (2003).
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50, 940-950 (2011).
- Flynn, J. M., Santana, L. F., Melov, S. Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes. J Vis Exp. (58), e3302 (2011).
