Summary
I det følgende eksperiment beskriver vi en protokoll for spor frykt kondisjonering på mus. Denne type assosiativ hukommelse omfatter et spor for å skille den nøytrale stimulus og det ubetingede stimulus.
Abstract
I dette forsøket viser vi en teknikk for å måle læring og hukommelse. I sporet frykt condition protokoll som presenteres her er det fem motstandere mellom en nøytral stimulans og en ubetinget stimulus. Det er en 20 sek spor periode som skiller hver condition rettssaken. På den påfølgende dagen frysing måles under presentasjonen av den betinget stimulus (CS) og spor periode. På den tredje dagen er det en 8 min test for å måle kontekstuell hukommelse. De representative resultatene er fra mus som ble presentert med motvilje ubetinget stimulus (sjokk) sammenlignet med mus som fikk tone presentasjoner uten ubetinget stimulus. Trace frykt condition har blitt brukt til å oppdage subtile læring og hukommelse underskudd og forbedringer i mus som ikke finnes med andre frykt condition metoder. Denne type frykt kondisjone antas å være avhengig av forbindelser mellom den mediale prefrontale cortex og hippocampus. En strøm kontrovers er om denne metoden er antatt å være amygdala-uavhengig. Derfor er andre frykt kondisjone testing er nødvendig for å undersøke amygdala-avhengige læring og hukommelse effekter, for eksempel via forsinkelses frykt kondisjonering.
Introduction
I frykt condition en nøytral stimulus (NS) er sammenkoblet med en ubehagelig ubetinget stimulus (US). NS er normalt en tone og blir en betinget stimulus (CS) gjennom gjentatte paringer med USA. Den CS kan deretter fremkalle en betinget respons (CR), slik som frysing, i fravær av motvilje USA. En vanlig brukt frykt condition protokollen er forsinkelse condition. I denne protokollen utbruddet av NS og USA er sammenhengende eller med noe overlapping i stimulus-presentasjon. Selv om forsinkelse frykt condition er en av de mest brukte typer time assosiativ condition, er det flere andre typer assosiativ condition timelige ordninger: samtidig condition, bakover condition, og spor condition en. I spor frykt kondisjone er det en stimulus fritt intervall mellom NS og USA på flere sekunder resulterer i et "spor"-perioden.
Flere studier har rapportert underskudds i spor frykt condition når nevrotoksiske lesjoner er produsert i de strukturer som innspill til hippocampus 2-5 eller når farmakologiske midler brukes til å blokkere reseptor funksjon i hippocampus. Lesjon til hippocampus resultatene i underskudd i spor condition og kontekstuell condition, men ikke svekke forsinkelse frykt condition åtte. Det er flere fordeler ved å bruke spor frykt condition. Frykten condition-protokollen kan oppnås over en tre-dagers testperiode og gir mulighet for hippocampus-avhengig hukommelse som ikke er romlig avhengig. Spor frykt kondisjone kan brukes som en komplementær test til Morris vannlabyrint, nye objekt anerkjennelse test eller andre labyrint prøver i undersøke hippocampal-avhengige minne.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Musene som brukes i følgende eksperiment ble generert og plassert ved Baylor University i en omgivelsestemperatur på 22 ° C, med en 14 timers lys og 10 timer mørke (20:00-06:00 hr) dagaktive syklus. Musene ble gitt ad libitum tilgang til mat og vann. Alle prosedyrer til musene var i samsvar med National Institutes of Health Retningslinjer for omsorg og bruk av forsøksdyr og dyr protokollen ble godkjent av Baylor University Animal Care og bruk komité.
Oversikt
Sporet betinget frykt oppgaven er basert på prosedyrer beskrevet ved Wiltgen og kolleger ni.
En. Klargjøring av utstyr
Frykt klimaapparat kammer (26 cm x 22 cm x 18 cm) består av to sider som er akryl-, to sider som er av metall, og et gittergulvet bunn som brukes til å levere en mild fot sjokk. Prøvingsrommet er husetd i en støydempet kammer. Kammeret er også lys stramt for å hindre utelys fra påvirke bevegelsesdeteksjon programvare.
- Kalibrere støtnivåer, lysnivåer og lyd intensitetsnivåer for testing kammeret. Mål bakgrunnsnivået av testkammeret. Den bakgrunnsstøy i dette kammeret er 65 dB. Bruk en lyd meter for å måle dette nivået. Måleren skal være satt til 70 dB, satt til C, og til deteksjon innstilling treg.
- Kalibrere sjokk nivå til 0,5 mA. Bruk en ekstern kalibreringsenhet til riktig kalibrere sjokk nivå (se Materialer tabell). Den interne måling av sjokkgenerator er ikke nøyaktig. Den sjokkgenerator administrerer en kryptert sjokk som ikke kan måles nøyaktig ved en standard amperemeter.
- Plasser en leder på en av rute barer og plassere de andre bly tre eller fire barer over. Bruk sjokkgenerator for å administrere sjokk. Juster sjokknivå til riktig nivå er oppnådd. Gjør dette for each frykter condition kammer.
- Lukk døren til kammeret når man måler lysnivået i kammeret. Kalibrere lysnivået til ca 1,0. Dette er et tall som er spesifikk for den FreezeFrame programvare som brukes i dette eksperimentet. En ekstern lysmåler vil lese dette som 2 lux. Lyset kan justeres ved å flytte plasseringen av huset lys eller ved å justere kondensator av linsen. Sørg for å stramme justeringsskruene for objektivet etter justering.
- Kalibrere lyden decibel nivå til 85 dB. Bruk en ekstern decibel meter innenfor testing buret for å kalibrere decibel-nivå (se Materialer tabell). Lyden presenteres vil være en 2700 Hz tone. Merk: Hvis du bruker mus eldre enn 6 måneder gammel, kan det være bedre å bruke hvit støy siden eldre mus kan ha hørt underskudd.
- Når anordningen er klar til å ta emnene til en separat holderommet. Merk: Ikke huse mus i samme rom som i testingen rommet.
- Etikett the halen av de musene som skal testes i rekkefølge av testing. Det er best å redusere overdreven håndtering før testing. Alternativt kan endene merkes dagen før eksperimentet for å redusere håndteringsstress. Etter at mus har blitt merket tillate dem å akklimatisere seg til rommet i 30 min. Har ekstra rene bur for boliger musene etter testing er fullført.
2. Trace Conditioning Dag 1
- Fjern hver mus fra buret og plassere dem i individuelle bur for transport til frykt condition kammeret. Bruk rent sengetøy for hver merd. Legg en lapp på overføring buret for å holde orden på mus testing korrekt. Merk: Hvis mus enkeltvis plassert så de kan transporteres i deres hjem buret.
- Plasser musen i testkammer og lukk døren. Start programmet.
- På trenings dag tillate mus utforske kammeret i 3 min. Programvaren presenterer deretter en 20 sek tone (85 dB, 2700 Hz) to dyret. Etter et spor periode på 20 sekunder et mildt sjokk (2 s, 0,5 mA), administreres til dyret.
- Spill reaksjonen av faget for å bekrefte at de har mottatt de aversive stimuli ved å se på videoen. En 200 sek inter-rettssaken intervall skiller de fem condition prøvelser. Hvert prøve består av en 20 sek tone etterfulgt av en 20 sekunders forsinkelse og deretter et sjokk.
- Etter at testingen er fullført tillater dyret å stå i testkammeret i 1 min før det fjernes fra testburet.
- Plasser dyret tilbake i overføringen bur og returnere den til sin hjemmeburet. Hvis det er flere mus i deres hjem bur så individuelt huse musa før alle musene komplett testing. Dette vil redusere belastningen på den annen mus som ikke har blitt testet. En alternativ løsning ville være å enkeltvis huse alle musene en uke før testing for å redusere innflytelsen av kontinuerlig fjerning av mus fra en merd.
- Rengjør testing kammer med 30% isopropanol etter EACh dyr er testet.
- Gjenta trinn 02.02 til 02.07 for alle mus i test kohort.
- Returnere alle mus til sin koloni plass etter den siste musa i kohorten har blitt testet.
Tre. Trace Fear Conditioning Dag 2: Trace Memory Testing
- Trace minne testing vil skje på dag to. I denne protokollen er det tre tone presentasjoner. Plasser mus i en ny kontekst for sporingen condition test.
- Forbered programvaren til å kjøre et program med en 2 min baseline periode etterfulgt av tre 20 sek tone presentasjoner. Det er sa 220 sek ITI mellom hver tone presentasjon.
- For den nye forbindelse tilstand, sett klar akryl innsatser på gulvet av kammeret til å endre form, tekstur og farge av kondisjoneringskammeret.
- Endre lukt i kammeret ved å plassere vanilje ekstrakt i en veie båt under gulvet innsatsen.
- Rens kammer med 70% etanol i stedet for 30% isopropanol. Merk: Dette vil hjelpefor å lage en ny sammenheng.
- Ta musene til venterommet og relabel halene for testing om nødvendig.
- Forbered romanen sammenheng overføre bur ved å erstatte sengetøy med makulert papir. Merk: Dette vil bidra til å skape en ny kontekst.
- Plasser mus i testkammeret deretter starte programmet. Rengjør kammeret med 70% etanol etter testing er fullført.
- Returner musene til sine hjem bur etter spor condition er fullført. Retur alle mus i deres kolonirommet når alle mus som har blitt testet.
4. Trace Fear Conditioning Dag 3: Innholds Memory Testing
- På den tredje dagen kontekstuelle condition er gjennomført. Forbered programvaren til å kjøre et program for opptak frysing atferd i 8 min.
- Rengjør kammeret med 30% isopropanol før testing og etter testing hver mus. Den sammenheng bør være identisk med dag 1.. Overføringen bur bør være den samme som i dag en.
- Plasser hver mus i testkammeret deretter starte programmet. Rengjør kammeret med 30% isopropanol etter testing er fullført.
- Retur alle mus i deres kolonirommet når fullført.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For de representative resultatene presenterer vi data fra kontroll C57BL/6J voksne mus som fikk de nøytrale stimulus motstandere med den ubetingede stimulus (sjokktilstand) sammenlignet med mus som fikk den nøytrale stimulus, men ikke fikk det ubetingede stimulus (ingen sjokktilstand). Det er viktig å kjøre denne tilstanden når den først setter opp denne adferdstest for å avgjøre om protokollen har blitt utført riktig.
Dataene i figur 1 representerer trening dagen i C57BL/6J mus i sporet frykt kondisjone test. Det er ikke generelt nødvendig å sammenligne gruppene over alle forhold under trenings dag. Det er imidlertid nyttig å se på grunnlinjen for å vurdere om det er første forskjeller i utgangspunktet. Vi gjorde ikke observere noen forskjeller i fryse nivåer i referansetilstand t (1,10) = 0.6, p = 0,56. Dette viser at det ikke er noen innledende forskjeller i frysing leVels. Generelt er det lavt fryse nivåer på tidlig læring prøvelser, men det er en økning i fryse atferd over condition sammenkobling prøvelser. Når vi utførte en mixed-modellen ANOVA som analyserte forskjeller mellom Sjokk og Sjokk tilstand i løpet av de 16 periodene vi funnet en viktig effekt av gruppe F (1,10) = 60,3, p <0,001. Det var en viktig effekt av gruppe F (1,10) = 215,9, p <0,001, og en gruppe av gangen interaksjon F (1,10) = 133,9, p <0,001. Analysen viser at det var en forskjell i anskaffelse betydning mellom de to gruppene.
Dataene for Figur 2 illustrerer fryse atferd mellom musene som hadde tone sjokk motstandere (Shock hk) og musene som fikk samme prosedyre uten sjokk sammenkobling (No Shock hk) på tvers av de fem tone condition prøvelser. Musene i Shock Tilstand dannet en forening mellom tone sjokk motstandere i spor frykt condition. En blandet-Utforming ANOVA ble brukt til å undersøke den viktigste effekten av læring for gruppe F (1, 10) = 83,48, p <0,001. Det var også en viktig effekt av condition studier (tid) F (3,30) = 24,83, p <0,001, og gruppen X tid interaksjon F (3,30) = 4.7, p <0,01. Siden det var en gruppe x tid interaksjon, ble separate t-tester per tidspunkt utført for å undersøke forskjellen mellom de to gruppene på hvert tidspunkt. Separate t-tester indikerer signifikant forskjell mellom gruppene ved grunnlinje t (1,10) = 6,8, p <0,001; tone t (1,10) = 8,6, p <0,001; spor periode t (1,10) = 5,3 , p <0,001, og i det inter-prøveintervall t (1,10) = 5,1, p <0,001. For tonen, spor periode, og den inter-rettssaken intervall dataene ble i gjennomsnitt over de tre presentasjonene. Dataene viser at sporingen condition eksperimentet vellykket produsert lærings forskjeller mot sporet condition protokollen.
Dataene for Fig. 3 viser den fryseing atferd mellom mus som hadde tone sjokk motstandere (Shock hk) og musene som fikk samme prosedyre uten sjokk sammenkobling (No Shock hk) i sammenheng tilstand. Konteksten tilstand testing ble presentert 48 timer etter spor condition er implementert. Musene i sjokk tilstand hadde signifikant mer frysing i den opprinnelige konteksten enn No Shock Tilstand mus F (1,10) = 12,5, p <0,01. Det var også en viktig effekt av tid F (7,70) = 5.5, p <0,001, men det var ingen interaksjon mellom tid og gruppe F (7,70) = 0,78, p = 0,61. Dataene viser at sporingen condition eksperimentet vellykket produsert kontekstuell læring når CS var forbundet med en USA i spor frykt condition.
Figur 1.Data fra treningsdag av spor frykt condition. De svarte linjene representerer data fra musene som fikk motvilje ubetinget stimulus (sjokk). De røde søylene representerer mus som ikke fikk motvilje ubetinget stimulus (ingen sjokk), men fikk tone stimuli. Linjene representerer gjennomsnitt ± standardfeilen for gjennomsnittet (SEM) prosent frysing for mus under treningen dagen.
Figur 2. Data fra mus i tonen test etter spor frykt condition. Musene som fikk ubetinget stimulus (Shock tilstand) hadde mer frysing sammenlignet med mus som ikke får sjokk (sjokk ikke Tilstand) i referanse, tone, spore, og intertrial intervall (ITI). Stolpene representerer middelverdien± standardfeil av middelverdien (SEM) prosent kulde til mus i løpet av tone test. Astericks (***) indikerer en betydelig gruppe forskjell (p <0,001).
Fig. 3. Data fra mus som ble testet i sammenheng test følgende spor frykt kondisjone. Musene som fikk støt hadde mer frysing i forhold til musene i Sjokk tilstand i sammenheng testtilstand over 8 min forsøket. Datapunktene representerer gjennomsnitt ± standardfeil av middelverdien (SEM) prosent frysepunktet for mus under rammen test. Astericks (***) indikerer en betydelig gruppe forskjell (p <0,001).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det har vært flere studier som har belyst den nevrale kretser som ligger til grunn spor frykt condition. Trace frykt condition antas å involvere CA1 av hippocampus 12-14. Det er også bevis for at den mediale prefrontale cortex (mPFC) spiller en stor rolle i spor øye-blink kondisjonering 15, og mPFC har blitt funnet å være involvert i spor frykt kondisjonering. En studie fant at mPFC nevroner gi varig aktivitet i løpet av spor periode, og dermed gi en struktur som kan opprettholde minnet under sporingen intervallet 17.
Ved å undersøke rollen til mPFC er det mulig å undersøke tidslinjen av molekylære hendelser som danner en assosiativ hukommelse. Runyan et al 16. Fant at hemme ekstracellulære signalregulerte kinase (ERK) i mPFC forstyrret hukommelse oppbevaring, men ikke forstyrre med minne koding. Videre kan en økning i phosphorylated ERK i prefrontal cortex ble rapportert tidligere enn i hippocampus. Siden ERK antas å være involvert i langtidshukommelsen, kan mPFC være en kritisk struktur involvert i oppbevaring av langtidshukommelsen. Andre studier kan undersøke hvilken rolle andre signalveier i langsiktige minne og samspillet mellom mPFC og hippocampus.
En annen bruk av spor frykt condition er i å undersøke subtile hippocampus avhengige læring og hukommelse endringer. Genetiske manipulasjoner som reduserer GABAergic hemming forbedre spor condition uten å endre forsinkelse frykt condition. En annen studie fant at spor frykt condition ble forbedret bare i hunnmus som manglet GABAA δ subenheten ni. En separat studie fant at spor frykt condition er forbedret i mus som mangler GABAA α4 22. Derfor spore frykt condition kan være nyttig å undersøke subtile hippocampus-avhengig læring og hukommelse forbedringer or underskudd. Trace condition kan være følsomme nok til å oppdage effekten av neurosteroids på GABAeric aktivitet som ligner på det som har blitt funnet ved hjelp av en kontekstuell frykt condition protokoll 23. Dette kan være en viktig faktor når undersøke læring og hukommelse underskudd i en knockout eller transgene mus der mannlige og kvinnelige mus brukes.
Selv om det er mye som tyder på at spor frykt condition kan være nyttig å se på rollen til mPFC og hippocampus, det er noe uenighet om spor frykt condition er amygdala-uavhengig. I en rapport utført de en dobbel dissosiasjon studie for å undersøke bidraget av amygdala og hippocampus å spore og forsinke frykt condition 24. Når de inaktiveres amygdala av GABA agonist muscimol det var verdifall i kontekstuell og forsinkelse condition uten å forstyrre erverv eller konsolidering av spor frykt condition. Inaktivering av the rygg hippocampus svekket spor condition og kontekstuell hukommelse uten å svekke forsinkelse frykt condition. Selv om disse resultatene sterkt støtte at spor frykt condition krever ikke amygdala, har andre studier funnet motstridende resultater 25-27. Kwapis et al. 25 fant at konsolidering av forsinkelse og spore frykt condition blir forstyrret av infusjon av proteinsyntesen inhibitor anisomysin inn i basolateral amygdala. Selv om disse papirene ser ut til å motsi hverandre er det flere prosessuelle forskjeller som må tas i betraktning når du utfører spor frykt condition.
Ved å undersøke spor frykt condition er det viktig å vurdere flere eksperimentelle parametre. En er av type dyr, til bruk i denne type assosierende kondisjonering. Studien av Kwapis et al. 25 brukes rotter og de Raybuck og Lattal 24 Studien brukte mus så detkan være artsforskjeller i neurocircuitry som ligger til grunn spor frykt condition. Den protokoll som er beskrevet i denne artikkelen er konstruert for mus. Denne protokollen kan brukes for rotter og andre arter, men valideringsstudier som bruker en dobbelt dissosiasjon eksperimentell design for å inaktivere amygdala og hippocampus må bli utført for å bestemme gyldigheten i andre dyr.
En annen vurdering er antall spor condition forsøk på treningsdag. Det kan være at mer eller mindre condition prøvelser kunne påvirke hvilke nevrale strukturer er rekruttert i spor frykt condition. I denne protokollen fem condition studier ble brukt. Hvis ytterligere condition forsøkene er lagt så det kan være ytterligere aktivering av andre nevrale strukturer som blir rekruttert med de ekstra motstandere. I tillegg kan sporet periode bli forlenget eller forkortet dersom antall sammenkoblinger skal endres. Men det er noen bevis for at short spor intervaller ikke engasjere hippocampus og kan produsere resultater som ligner på forsinke frykt condition, som ikke har noen intervall mellom presentasjonen av CS og USA. Derfor et spor intervall som strekker seg fra 15-20 sek er rapportert i flere studier for å engasjere hippocampus. En annen endring kan være styrken av den ubetingede stimulus. I den protokoll som presenteres her sjokket ble satt til 0,5 mA. Hvis ytterligere sammenkoblinger er nødvendige sjokknivå kunne senkes til 0,3 mA. Hvis færre sjokk er nødvendig, deretter sjokk nivå kan settes til 0,7 mA. En høyere støt nivå enn 0,7 mA bør unngås.
Når du utfører valideringsstudier for hippocampus-avhengig spor condition en vurdering er når det nevrale strukturen inaktiveres. Det har vist seg at alternative kretser kan benyttes i kontekstuell frykt kondisjone som ikke utnytter hippocampus når den er inaktivert før opplæring. Derfor, tidspunktet for inaktivering av different nevrale strukturer under sporing condition er en viktig faktor.
En annen viktig faktor for frykt condition eksperimenter er baseline nivå. I basisnivå er viktig å rapportere siden mange studier trekke basisnivåene fra nivåene av frost om tonen presentasjon 32 eller trekke basisnivåene fra inter-rettssaken intervallet 33. Disse manipulasjoner har den underliggende antakelsen om at utgangsverdiene er de samme på tvers av gruppene. Men, har en positiv korrelasjon blitt rapportert mellom baseline frykt nivåer og tone frykt nivåer 34. Papiret ved Jacobs et al. 34 beskriver flere strategier for å redusere baseline nivåer og hvordan å gjøre rede for baseline nivåer under frykt condition. Disse er viktige hensyn ved bruk av forholdet fremgangsmåte for frysing i tone kondisjonering enn grunnlinjenivåer, ved hjelp av subtraksjon metoden eller ved bruk av the baseline kovariat metode for å ta hensyn til forskjeller i baseline nivå.
Når først etablere frykt kondisjonering, er også en viktig kontroll bruk av en uparet kontrollgruppe. Den uparede kontrollgruppe kan bestå av et eksperimentelt oppsett der det er tilfeldige intervaller mellom presentasjonen av CS og USA. En annen tilnærming kan være hvor CS og USA er presentert på ulike dager 29. Den uparet kontrollgruppen er nyttig å bestemme nonassociative effekter som allergi, nyhet stress, pseudoconditioning, og andre faktorer som kan bidra til frysing atferd. Smith et al. 29., beskriver bruken av forskjellige typer av spor frykt kondisjoneringsprotokoller, og hvordan de kan bli optimalisert for å redusere nonassociative effekter i tre forskjellige stammer av mus. Dette er viktige hensyn når du optimaliserer frykt condition i mus.
Trace frykt condition tilbyr Several fordeler som kan utfylle funnene i forsinkelse frykt condition og romfølelse. Imidlertid må man være klar over at valg av gnager, antall spor condition prøvelser, og tidspunkt for krets manipulasjon i betydelig grad kan endre utfallet og tolkning av resultatene. En annen begrensning er at det er kontroversielt hvorvidt spor frykt kondisjonering kan anvendes for å undersøke amygdala-avhengige læring. Dette kan være en begrensning når først å undersøke effekten av en behandling eller en utstansing dyret. Når det gjelder strategi ville det være best å først bruke en forsinkelse fryktet condition protokoll som kan undersøke amygdala avhengig læring og hukommelse og kontekstuell-condition, som er hippocampus-avhengig. Man kan da bruke en annen kohort av fag for å ytterligere undersøke læring og hukommelse forskjeller i spor frykt condition.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet støttes av en Baylor University Research Council stipend og fra et forskningsstipend fra Epilepsy Foundation.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| FreezeFrame | Coulbourn | ||
| 30% Isopropanol | Purchase 90% isopropanol and dilute it down to 30% | ||
| 70% Ethanol | |||
| Amp-meter | Med-Associates | ENV-420 | Windows XP, Vista, and 7 Compatible (32-bit only) |
| Digital Sound Level Meter | 33-2055 | ||
| Vanilla Extract | McCormick Pure Vanilla Extract | ||
| Sticky Notes | Post-it | 3 in x 3 in |
References
- Powell, R. A., Honey, P. L., Symbaluk, D. G. Introduction to learning and behavior. , 4th ed, Wadsworth Cengage Learning. Forthcoming.
- Tsaltas, E., Preston, G. C., Gray, J. A. The effects of dorsal bundle lesions on serial and trace conditioning. Behav. Brain Res. 10, 361-374 (1983).
- McAlonan, G. M., Dawson, G. R., Wilkinson, L. O., Robbins, T. W., Everitt, B. J. The effects of AMPA-induced lesions of the medial septum and vertical limb nucleus of the diagonal band of Broca on spatial delayed non-matching to sample and spatial learning in the water maze. Eur. J. Neurosci. 7, 1034-1049 (1995).
- Chowdhury, N., Quinn, J. J., Fanselow, M. S. Dorsal hippocampus involvement in trace fear conditioning with long, but not short, trace intervals in mice. Behav. Neurosci. 119, 1396-1402 (2005).
- Quinn, J. J., Oommen, S. S., Morrison, G. E., Fanselow, M. S. Post-training excitotoxic lesions of the dorsal hippocampus attenuate forward trace, backward trace, and delay fear conditioning in a temporally specific manner. Hippocampus. 12, 495-504 (2002).
- Misane, I., et al. Time-dependent involvement of the dorsal hippocampus in trace fear conditioning in mice. Hippocampus. 15, 418-426 (2005).
- Quinn, J. J., Loya, F., Ma, Q. D., Fanselow, M. S. Dorsal hippocampus NMDA receptors differentially mediate trace and contextual fear conditioning. Hippocampus. 15, 665-674 (2005).
- McEchron, M. D., Bouwmeester, H., Tseng, W., Weiss, C., Disterhoft, J. F. Hippocampectomy disrupts auditory trace fear conditioning and contextual fear conditioning in the rat. Hippocampus. 8, 638-646 (1998).
- Wiltgen, B. J., Sanders, M. J., Ferguson, C., Homanics, G. E., Fanselow, M. S. Trace fear conditioning is enhanced in mice lacking the delta subunit of the GABAA receptor. Learn. Mem. 12, 327-333 (2005).
- Davis, R. R., et al. Genetic basis for susceptibility to noise-induced hearing loss in mice. Hear. Res. 155, 82-90 (2001).
- Zheng, Q. Y., Johnson, K. R., Erway, L. C. Assessment of hearing in 80 inbred strains of mice by ABR threshold analyses. Hear. Res. 130, 94-107 (1999).
- Moyer, J. R., Thompson, L. T., Disterhoft, J. F. Trace eyeblink conditioning increases CA1 excitability in a transient and learning-specific manner. 16, 5536-5546 (1996).
- Leuner, B., Falduto, J., Shors, T. J. Associative memory formation increases the observation of dendritic spines in the hippocampus. J. Neurosci. 23, 659-665 (2003).
- McEchron, M. D., Disterhoft, J. F. Hippocampal encoding of non-spatial trace conditioning. Hippocampus. 9, 385-396 (1999).
- McLaughlin, J., Skaggs, H., Churchwell, J., Powell, D. A. Medial prefrontal cortex and pavlovian conditioning: trace versus delay conditioning. Behav. Neurosci. 116, 37-47 (2002).
- Runyan, J. D., Moore, A. N., Dash, P. K. A role for prefrontal cortex in memory storage for trace fear conditioning. J. Neurosci. 24, 1288-1295 (2004).
- Gilmartin, M. R., McEchron, M. D. Single neurons in the medial prefrontal cortex of the rat exhibit tonic and phasic coding during trace fear conditioning. Behav. Neurosci. 119, 1496-1510 (2005).
- Crow, T., Xue-Bian, J. J., Siddiqi, V., Kang, Y., Neary, J. T. Phosphorylation of mitogen-activated protein kinase by one-trial and multi-trial classical conditioning. J. Neurosci. 18, 3480-3487 (1998).
- Martin, K. C., et al. MAP kinase translocates into the nucleus of the presynaptic cell and is required for long-term facilitation in Aplysia. Neuron. 18, 899-912 (1997).
- Crestani, F., et al. Trace fear conditioning involves hippocampal alpha5 GABA(A) receptors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 8980-8985 (2002).
- Crestani, F., et al. Decreased GABAA-receptor clustering results in enhanced anxiety and a bias for threat cues. Nat. Neurosci. 2, 833-839 (1999).
- Moore, M. D., et al. Trace and contextual fear conditioning is enhanced in mice lacking the alpha4 subunit of the GABA(A) receptor. Neurobiol. Learn. Mem. 93, 383-387 (2010).
- Cushman, J. D., Moore, M. D., Jacobs, N. S., Olsen, R. W., Fanselow, M. S. Behavioral pharmacogenetic analysis on the role of the alpha4 GABA(A) receptor subunit in the ethanol-mediated impairment of hippocampus-dependent contextual learning. Alcohol Clin. Exp. Res. 35, 1948-1959 (2011).
- Raybuck, J. D., Lattal, K. M. Double dissociation of amygdala and hippocampal contributions to trace and delay fear conditioning. PLoS ONE. 6, (2011).
- Kwapis, J. L., Jarome, T. J., Schiff, J. C., Helmstetter, F. J. Memory consolidation in both trace and delay fear conditioning is disrupted by intra-amygdala infusion of the protein synthesis inhibitor anisomycin. Learn. Mem. 18, 728-732 (2011).
- Gilmartin, M. R., Kwapis, J. L., Helmstetter, F. J. Trace and contextual fear conditioning are impaired following unilateral microinjection of muscimol in the ventral hippocampus or amygdala, but not the medial prefrontal cortex. Neurobiol. Learn. Mem. 97, 452-464 (2012).
- Baysinger, A. N., Kent, B. A., Brown, T. H. Muscarinic receptors in amygdala control trace fear conditioning. PLoS ONE. 7, (2012).
- Wanisch, K., Tang, J., Mederer, A., Wotjak, C. T. Trace fear conditioning depends on NMDA receptor activation and protein synthesis within the dorsal hippocampus of mice. Behav. Brain. 157, 63-69 (2005).
- Smith, D. R., Gallagher, M., Stanton, M. E. Genetic background differences and nonassociative effects in mouse trace fear conditioning. Learn. Mem. 14, 597-605 (2007).
- Rudy, J. W., O'Reilly, R. C. Contextual fear conditioning, conjunctive representations, pattern completion, and the hippocampus. Behav. Neurosci. 113, 867-880 (1999).
- Wiltgen, B. J., Sanders, M. J., Anagnostaras, S. G., Sage, J. R., Fanselow, M. S. Context fear learning in the absence of the hippocampus. J. Neurosci. 26, 5484-5491 (2006).
- Reijmers, L. G., Perkins, B. L., Matsuo, N., Mayford, M. Localization of a stable neural correlate of associative memory. Science. 317, 1230-1233 (2007).
- Huerta, P. T., Sun, L. D., Wilson, M. A., Tonegawa, S. Formation of temporal memory requires NMDA receptors within CA1 pyramidal neurons. Neuron. 25, 473-480 (2000).
- Jacobs, N. S., Cushman, J. D., Fanselow, M. S. The accurate measurement of fear memory in Pavlovian conditioning: Resolving the baseline issue. J. Neurosci. Methods. 190, 235-239 (2010).
