Summary
Blodkärl inom mänskliga skelettmuskulaturen hamnen flera flera härstamning prekursor befolkningsgrupper som är idealiska för regenerativa applikationer. Denna isoleringsmetoden möjliggör samtidig rening av tre multi prekursor cellpopulationer respektive från tre strukturella lager av blodkärl: myogena endotelceller från intima, pericyter från media och adventitiala celler från adventitia.
Abstract
Sedan upptäckten av mesenkymala stamceller / stromaceller (MSC), har det ursprungliga identitet och lokalisering av MSC fördunklats av sin retrospektiv isolering i kultur. Nyligen, med användning av fluorescensaktiverad cellsortering (FACS), vi och andra forskare prospektivt identifieras och renas tre subpopulationer av multipotenta prekursorceller som är förknippade med kärlsystemet i human skelettmuskel. Dessa tre cellpopulationer: myogena endotelceller (MEC), pericyter (PC) och adventitiala celler (ACS), är lokaliserade till de respektive tre strukturella lager av blodkärl: intima, media och adventitia. Alla dessa blodkärlet härrörande stamcells människa (hBVSC) populationer inte bara uttrycka klassiska MSC markörer, utan också besitter mesodermala utvecklingspotentialer som liknar typiska MSC. Tidigare har MECs, datorer och ACs isolerats genom olika protokoll och därefter karakteriseras i separata studier. Den nuvarande isolering protocol, genom ändringar av isoleringsprocessen och justeringar i de selektiva cellytmarkörer, ger oss möjlighet att samtidigt rena alla tre hBVSC subpopulationer av FACS från en enda människa muskelbiopsi. Denna nya metod kommer inte bara att effektivisera isoleringen av flera BVSc subpopulationer, men också underlätta framtida kliniska tillämpningar av hBVSCs för olika terapeutiska syften.
Introduction
Mänsklig skelettmuskel har ansetts vara en kliniskt attraktiv källa för stam / progenitorceller. Skelettmuskulatur innehåller inte bara begått myogena progenitorceller, skelett myoblaster, men också primitiva myogena stamceller, inklusive satellitceller och muskel-härledda stamceller (MDSCs) 1. Användningen av mänskliga muskel härrörande stam / progenitorceller, autolog eller allogen, i regenerativ medicin har undersökts i prekliniska djurmodeller och kliniska prövningar. De regenerativa tillämpningar av muskel stam / progenitorceller allt från regenerering av dystrofisk muskeln i Duchennes muskeldystrofi (DMD) patienter att reparera skadade hjärtan hos patienter med hjärtinfarkt.
Sedan upptäckten av mesenkyma stamceller / stromaceller (MSC) och andra multipotenta prekursor cellpopulationer, inklusive benmärgshärledda multipotenta vuxen progenitorceller (MAPCs) och adipos-härledda stamceller (ADSCs), adulta stamceller /progenitorceller har undersökts hittills 1-9. Ändå har deras ursprungliga identitet och lokalisering på plats varit skyms av de retroaktiva isoleringsmetoder. Nyligen, med hjälp av fluorescensaktiverad cellsortering (FACS), vi och andra grupper har prospektivt identifierade och renade tre multigångare cellpopulationer från blodkärl i human skelettmuskel och flera andra organ: myogena endotelceller (MEC), pericyter (PC), och adventitiala celler (ACS) 10. Dessa tre subpopulationer av mänskliga blodkärls-härledda stamceller (hBVSCs) kan respektive finns i de tre strukturella lager av blodkärl: tunica intima, tunica media och tunica adventitia. Mer specifikt MECs och datorer upptäcks i mikrokärl och kapillärer medan ACS är lokaliserade i adventitia lager av större artärer och vener. Varje prekursorcell delmängd uttrycker en unik kombination av cellytantigener: MECs (CD34 + / 56 + / 144 + / 45 -), datorer (CD146 + / 34 - / 45 - / 56 -), och ACs (CD34 + / 31 - / 45 - / 56 - / 146 -).
Ytterligare karakterisering av dessa hBVSC undergrupper visade att alla tre föregångare cellpopulationer har mesodermala utvecklingspotentialer som liknar typiska MSC, inklusive skelett myogenes, osteogenesis, kondrogenes och adipogenes. Alla hBVSC delmängder uppvisar också klassiska MSC markörer, inklusive CD44, CD73, CD90 och CD105, nyligen och i kultur. Kollektivt dessa bevis stödde den vaskulära ursprung MSC. Dessutom har de terapeutiska kapacitet MECs, datorer och ACs nyligen visats i separata studier. MECs sorterade från vuxna humana muskelbiopsier visades att regenerera skadade och dystrofa skelettmuskler och reparationer skadade hjärtmuskeln mer effektivt än skelett myoblasts och vaskulär endothelial celler (ECS). Renade datorer från olika mänskliga organ har också visat att reparera / regenerera skadade och dystrofa muskler och bidrar till satellitcellpoolen 13-16. Helt nyligen har vi visat att datorer som härrör från humant skelettmuskel effektivt reparera infarkthjärtmuskeln genom indirekta parakrin effekt och direkta cellulära interaktioner 17. ACs, å andra sidan, har varit antingen direkt isoleras från explanterade blodkärl eller renas genom FACS från human fettvävnad och skelettmuskulatur. Ett anmärkningsvärt pro-angiogena effekten av ACs visades i en mus hind-ischemi modell 19. Dessutom har ACs också visat att reparera infarkthjärtmuskeln mer effektivt än konventionella MSC, vilket indikerar den robusta terapeutiska potentialen hos ACS i ischemisk vävnad reparera 20.
De nuvarande reningsprotokollbidrag samtidiga, blivande rening av mecs, datorer ochACs från vaskulaturen av en enda human skelettmuskelbiopsi. Detta ger oss möjlighet att studera och / eller välja den optimala hBVSC subpopulation för olika terapeutiska syften. Dessutom den nya tekniken expanderar ytterligare repertoaren av stam / progenitorceller som kan härledas från human skelettmuskel, vilket gör den till en idealisk källa för multi prekursorceller för regenerativ medicin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1 muskelbiopsi Processing
- Bevara human skelettmuskelbiopsi på is i Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) kompletterat med 5% fetalt bovint serum (FBS) och 1% penicillin-streptomycin (P / S) under transport.
- Efter mottagandet av muskelbiopsi, ta bort provet från transportbehållaren och tvätta den två gånger i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) kompletterad med 2% antibiotika-svampdödande lösning (A / A) under sterila förhållanden.
- Ta bort bifogade fett och bindväv med steril sax och pincett i DMEM kompletterat med 2% A / A.
- Ta bort stora blodkärl i dissektion mikroskop och därefter skära muskel provet i små bitar (<1 cm2 i storlek).
- Bevara slipade muskelstycken (<5 g) i 20 ml konserveringsmedium (PM; DMEM kompletterat med 10% FBS och 1% P / S) vid 4 ℃ i upp till 5 dagar.
2. Muskel Dissociatjon och Cell Isolation
- På dagen för cellisolering, ta bort muskelbitar från PM och tvätta två gånger i PBS kompletterat med 2% P / S. För att göra matsmältningen lösningen, till typ-I, typ II och typ-IV-kollagenaser (100 mg / ml) nyligen i PM.
- Finhacka och mekaniskt skräder muskel bitar med steril sax och pincett i en petriskål med en liten mängd PM tills lösningen passerar 10 ml serologisk pipett utan koagulering. Avlägsna återstående adipos och bindväv under denna process. Använd minst 8-10 gram vuxna muskel eller 2 gram foster muskler för varje cell isolering.
- Transfer 4-5 gram malet vuxen muskel till 20 ml (eller 2 gram malet fetal muskel in 10 ml) tillde digere lösning med en 10 ml serologisk pipett. Matsmältning för 50-60 min vid 37 ℃ på en orbital skakanordning vid 70 till 80 rpm. Optimera cellutbyte och ytantigen konservering genom att justera koktiden och / eller agitation hastigheten därefter baserat på mängdenav vävnad. Observera matsmältningen status var 15-20 min tills grumlighet nästan rensar.
- Kraftigt pipett rötas vävnaden 3-5 gånger med en 10 ml serologisk pipett. Lägg lika mängd PM för att stoppa reaktionen och sedan centrifugera vid 400 xg under 4 minuter.
- Ta försiktigt bort supernatanten; suspendera pelleten med 10 ml PM att tvätta, och filtrerades sedan genom ett 100 | im cellfilter.
- Centrifugera vid 400 xg under 4 min och försiktigt bort supernatanten. Resuspendera pellets i erytrocyt lyseringsbuffert (155 mM NH4CI, 10 mM KHCO3, 0,1 mm EDTA), filtrera genom ett 70 | im cellfilter för erhållande av en enkelcellsuspension, och sedan inkubera under 10 min vid RT. Filtrera genom ett 70-m cell sil igen om någon fällning observeras.
- Centrifugera vid 400 x g under 4 min och resuspendera cellpelleten i 0,5 ml PBS. Räkna antalet celler. Skaffa totalt minst 5 miljoner celler för cellsortering. Späd single cellsuspensionen till mindre än 5 miljoner celler per ml med PBS för färgning. Ta ut 50-100 l av cellsuspensionen och delas upp i 11 rör för kontrollfärgningar (ofärgade kontroll, negativa kontroller, och enfärgade positiva kontroller).
3 Cell Märkning och sortering
- Inkubera enda cellsuspension under 10 minuter vid 4 ℃ i musserum (utspädd 1:10 i PBS) för att blockera ändamål om nödvändigt.
- Lägg CD34-APC, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PE och CD146-FITC (alla 1: 100) i den inre cellsuspension och inkubera i 20 minuter vid 4 ℃. För negativ kontroll, till ekvivalenta koncentrationer av APC-, APC-Cy7-, PE-Cy7-, PE-och FITC-konjugerade isotyp IgG-antikroppar och inkubera under 20 min vid 4 ℃. För enfärgade positiva kontroller, lägga motsvarande koncentrationer av CD34-APC, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PE och CD146-FITC individuellt i varje rör och inkubera i 20 minuter vid 4 ℃.
- Efter inkubation, Centrifugera vid 400 xg under 4 minuter att tvätta. Resuspendera cellpelleten i 1-2 ml DMEM kompletterat med 5% FBS och 1% P / S. Den slutliga koncentrationen av cellsuspensionen bör vara mindre än 5 miljoner celler per ml. Lägg 7-AAD (1: 100) och inkubera i 15 minuter vid RT död cell utslagning. För negativ kontroll och enfärgade positiva kontroller, återsuspendera cellpelletar i 0,5 ml DMEM kompletterat med 5% FBS och 1% P / S.
- Överför alla cellsuspensioner till rundbottnad polystyren flödescytometri rör. Förbered celluppsamlingsrören (varje rör är förfylld med 500 l av lämplig odlingsmedium: MPM för MECs, EGM-2 för PC, AC medium för ACS). Transport cellsuspensioner på is till cellsorterare.
- Kör cellsuspensioner på cellsorterare i ordningen den ofärgade kontroll, negativa kontroller, enfärgade positiva kontroller, och huvud cellsuspensionen samtidigt justera laserintensitet, kanalkompensation och cellpopulation slussning strikt för att maximera cell purity (se artiklar som publicerats av JUPITER och andra tidskrifter för detaljer i flödescytometri).
- Samla önskade cellpopulationer i lämpliga uppsamlingsrören. Store uppsamlade cellerna vid 4 ℃ om ej sådd omedelbart.
4 Post-sortering cellodling
- Seed nyligen sorterade MECs (P0) vid <10000 celler / cm 2 i MPM på plattor i förväg belagda med typ-I-kollagen. För den efterföljande passage av MECs, frö 3500 - 4.000 celler / cm 2 i MPM på plattor / kolvar i förväg belagda med typ-I-kollagen.
- Seed nyligen sorterade datorer (P0) vid <20000 celler / cm 2 i EGM-2 på plattor nyligen belagda med 0,2% gelatin. För den efterföljande passage av datorer, dela celler vid 1: 3-i PC-medium (DMEM kompletterat med 20% FBS och 1% P / S) på regelbundna polystyren odlingsplattor tills P2. Från P3 framåt, utsäde celler vid 6.500 - 7.000 celler / cm 2 i PC medium på regelbundna polystyren odlingsplattor / flaskor.
- Seed nyligen sorterade ACs (P0) på <20000 celler / cm 2 i AC-medium (DMEM kompletterat med 20% FBS och 1% P / S) på regelbundna polystyren odlingsplattor. För den efterföljande passage av ACS, utsäde celler vid 6.500 - 7.000 celler / cm 2 i AC medium på regelbundna polystyren odlingsplattor / flaskor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
FACS parametrar korrigerades först utifrån uppgifterna från den ofärgade kontroll, negativa kontroller, och enfärgade positiva kontroller. Efter uteslutning av döda celler, är fluorescens-märkta cellsuspensionen underkastas en serie av negativa och positiva cellytmarkör markeringar. Först är CD45 + celler gated ut före CD56 + och CD56 - celler separeras från CD45 - fraktionen. Den CD56 + fraktionen vidare utsätts för CD34-CD144 val där endast CD34 + / CD144 + (dual-positiva) celler är markerade som MECs (CD34 + / 56 + / 144 + / 45 -) och därefter samlas in (Figur 1). Likaså CD56 - är fraktionen vidare utsatt för CD34-CD146 val där endast CD34 - / CD146 + celler är markerade som datorer (CD146 + / 34 - / 45 - / 56 -) och därefter samlas in (
Nyligen sorterade celler kan sås i odlingsbetingelser som anges i protokollet för vidare expansion eller användas omedelbart för in vivo experiment. Klonal expansion av hBVSC delmängder kan uppnås genom FACS Aria autoclone system eller begränsande spädningsmetod 13, 21. Till skillnad från de typiska heterogena MSCs, kulturer av hBVSC delmängder förblir homogen även efter långsiktig expansion. Representant morfologi av odlade hBVSC delmängder, renat från muskelbiopsier från enenda donator, visas i figur 2. Jämförelser mellan typiska MSC och renade hBVSC delmängder sammanfattas i Tabell 1.
Figur 1 Representant sortering av de tre undergrupper av humana blodkärlet-härledda stamceller (hBVSCs) från en enda människa skelettmuskelbiopsi. Renhet av varje sorterade cellpopulation bekräftas ytterligare av eftersorteringsanalys. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 De tre hBVSC subpopulationer, sorterade till homogenitet, uppvisade distinkt morfologi i Culture (vänster till höger): myogena endotelceller (MEC), pericyte (PC), och adventitial cell (AC) (vid passage 4, skala barer = 100 mm). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| MSCs | MEC | PC | ACs | |
| Renhet | Heterogena | Homogen | Homogen | Homogen |
| Cellyteantigen profil för rening | N / A | CD34 + CD45- CD56 + CD144 + | CD31- CD34 + CD45- CD146- | |
| MSC markör uttryck i kulturen | CD29 + CD44 + CD73 + CD90 + CD105 + | CD29 + CD44 + CD90 + CD105 + | CD44 + CD73 + CD90 + CD105 + | CD44 + CD73 + CD90 + CD105 + |
| Multipotens | Myogenes (+) adipogenes (+) Osteogenesis (+) kondrogenes (+) | Myogenes (+) adipogenes (+) Osteogenesis (+) kondrogenes (+) | Myogenes (+) adipogenes (+) Osteogenesis (+) kondrogenes (+) | Myogenes (N / A) adipogenes (+) Osteogenesis (+) kondrogenes (+) |
| Potentiella applikationer | Skeletomuscular reparation / regenerering: ben, brosk, Tendon, Ligament och skelettmuskeln; Hjärt reparation; Kärl reparation; Sårläkning; Immunreglering | Hjärt reparation; Skelettmuskulatur reparation / förnyelse; Bone / Brosk reparation / förnyelse | Hjärt reparation; Kärl reparation / förnyelse; Skelettmuskulatur reparation / förnyelse; Bone regeneration | Hjärt reparation; Kärl reparation / förnyelse; Bone regeneration |
| Anatomiska lokalisering i situ | N / A | Blodkärl Intima | Blodkärl Media | Blodkärl adventitia |
Tabell 1 Jämförelse av typiska MSC och multi hBVSC subpopulationer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Identifiering och rening av hBVSC subpopulationer representerar ett stort framsteg i förståelsen av MSC ontogeni. Det finns allt fler bevis indikerar perivaskulär ursprung MSC och föreningen mellan vävnadsspecifika prekursorceller och blodkärl 22-25. Dessutom, förmågan att isolera homogena subpopulationer av hBVSCs aids förståelsen av MSC heterogenitet och vaskulär cellbiologi 26 ytterligare.
Under de senaste åren har MECs, datorer och ACs individuellt identifierats och isolerats genom olika protokoll som separata studier. Dock har inga försök gjorts att rena alla tre hBVSC grupper samtidigt från human skelettmuskel på grund av svårigheterna att optimera vävnadsdissociering förfarandet och kombinationen av selektiva cell härstamning markörer identifierar MECs, datorer och ACs helt. Här beskrev vi en ny cellisolering protokoll som möjliggör samtidig Purifblue av MECs, datorer och ACs från en enda mänsklig muskelbiopsi genom att modifiera vävnadsdissociering processen och använda en ny kombination av selektiva cellytemarkörer (Figur 1). För bästa resultat, de kritiska stegen i det nuvarande protokollet som måste utredas vidare är: 1 friskhet och bevarande av vävnadsprovet; 2 Optimering av cellutbyte och ytantigen konservering genom noggrann övervakning av rötningsprocessen och justering av vävnadsdissociering tiden; 3 Exakt kalibrering av sex färger flödescytometri. Dessa parametrar ska bestämmas genom enskilt laboratorium i enlighet med dess specifika leverans / installation av utrustningen.
Genom att implementera detta nya protokoll, kan man inte bara effektivisera synkrona isolering av flera hBVSC subpopulationer utan också underlätta utnyttjandet av hBVSCs till grundforskning och translationell program, till exempel jämförelse av differentiella cellulära beteenden mellan hBVSC delmängder och optimering av enkla eller kombi hBVSC delmängd (er) för olika personliga terapeutiska tillämpningar. Emellertid är samtidig isolering av alla tre hBVSC delmängder närvarande begränsad till skelettmuskulaturen på grund av det faktum att MECs inte har identifierats i andra humana vävnader. Dessutom är det bortom begränsningen av det nuvarande protokollet att skilja övergången och / eller cellulära hierarkin mellan dessa tre hBVSC subpopulationer.
Karaktärisering av nyligen isolerade och odlade MECs, datorer, och ACs har separat visat i tidigare studier MECs i kultur behålla uttrycket av myogena markör CD56 men gradvis förlorar uttrycket av EG markörerna CD34 och CD144. På klonnivå, MECs uttrycker MSC markörer, inklusive CD29, CD44, CD90 och CD105, och visar mesenkymala differentieringspotentialer såsom kondrogenes, osteogenes, adipogenes och myogenes. Dessutom klon MECs behåller sin angiogenic kapacitet efter långtidsodling, bildar kapillära liknande nätverk i Matrigel kulturen och delta i kärlnybildning in vivo 21.
Datorer, färska eller odlade, har visat sig inte bara uttryck för MSC markörer, inklusive CD44, CD73, CD90 och CD105, utan också uppvisar mesodermala kapacitet utvecklings till exempel skelett myogenes, osteogenesis, kondrogenes och adipogenes 13. PC robust utsöndrar flera trofiska faktorer, även under hypoxi, och fungera som de regenerativa enheter genom sin parakrin funktion, direkt differentiering, och cellulär interaktion under vävnad reparera / regenerering ACS, liknande PC, visades uttrycka klassiska MSC markörer och differentierar till stora mesenkymala cell linjer 18. Tillsammans med datorer, har ACs också föreslagits som en av de utvecklings ursprung MSC. En sammanfattning jämföra cellytmarkör uttryck, differentieringskapacitet, och possible translation applikationer mellan typiska MSC och hBVSCs har listats i tabell 1. Nyligen Tang et al. identifierade multi vaskulära stamceller (MVSCs) från tunica media av stora blodkärlen i råtta och människa 29. MVSCs inte bara differentiera till glatta muskelceller, men också bidra till kärlremodellering och neointimal hyperplasi efter kärlskada 29. Oavsett MVSCs dela utvecklings förbindelser med BVSCs bosatta i mikrovaskulaturen och små fartyg kräver ytterligare utredning.
Den nuvarande protokollet förutsätter snabba cellisolering från färsk mänsklig muskelbiopsi, som ibland inte är tillgängliga i klinisk miljö. Alternativt, baserat på en modifierad uppsättning selektiva cellytmarkörer, är det möjligt att rena MECs och PC från kryokonserverade humana primära skelettmuskelcellkulturer genom flödescytometri 30. Denna metod tillåter blivande Purifcation av två hBVSC delmängder från banked human skelettmuskel kultur för terapeutiska ändamål. Icke desto mindre, på grund av bristen av CD34-expression i odlade humana muskelceller, är det inte möjligt att ytterligare separera ACs med denna särskilda protokoll.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Författarna vill tacka Alison Logar för hennes utmärkta tekniskt bistånd med flödescytometri. Detta arbete har finansierats med bidrag från Department of Defense (JH), Henry J. Mankin Begåvad ordförande (JH), och ministeriet för utbildning och vetenskap i Republiken Kazakstan (AS). CWC stöddes delvis av American Heart Association Predoctoral gemenskap (11PRE7490001). M.Corselli stöddes av California Institute för regenerativ medicin utbildningsbidrag (TG2-01169).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Collagenase type 1 | Sigma | C5894 | Sterile vial |
| Collagenase type 2 | Sigma | C1764 | Sterile vial |
| Collagenase type 4 | Sigma | C1889 | Sterile vial |
| Anti-human CD34 APC | BD Pharmingen | 555824 | Keep sterile |
| Anti-human CD45 APC-Cy7 | BD Pharmingen | 557833 | Keep sterile |
| Anti-human CD56 PE-Cy7 | BD Pharmingen | 557747 | Keep sterile |
| Anti-human CD144 PE | Beckman Coulter | A07481 | Keep sterile |
| Anti-human CD146 FITC | AbD Serotec | MCA2141F | Keep sterile |
| FACS Aria II Flow Cytometer | Becton-Dickinson | ||
| EGM-2 complete medium | Lonza | CC-3162 | For culturing PCs (only P0) |
| DMEM high glucose (1X), liquid, with L-glutamine, without sodium pyruvate | Invitrogen | 11965 | For culturing PCs |
| DMEM high glucose (1X), liquid, with L-glutamine, with sodium pyruvate | Invitrogen | 11995 | For culturing MECs and ACs |
| Fetal bovine serum | Invitrogen | 10437-028 | |
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | 26050-088 | |
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| Antibiotic-antimycotic (100X) | Invitrogen | 15240-062 | |
| Trypsin-EDTA 0.5% (10X) | Invitrogen | 15400-054 | |
| Dulbecco’s PBS without calcium and magnesium | Invitrogen | 14190-250 | |
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | CE650T-10 | Filter before use |
References
- Peault, B., et al. Stem and Progenitor Cells in Skeletal Muscle Development. Maintenance, and Therapy. Mol Ther. 15, 867-877 (2007).
- Toma, J. G., et al. Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin. Nat Cell Biol. 3, 778-784 (2001).
- Zuk, P. A., et al. Human Adipose Tissue Is a Source of Multipotent Stem Cells. Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).
- Zimmerlin, L., et al. Stromal vascular progenitors in adult human adipose tissue. Cytometry. 77, 22-30 (2010).
- Reyes, M., et al. Origin of endothelial progenitors in human postnatal bone marrow. The Journal of Clinical Investigation. 109, 337-346 (2002).
- Choi, Y., Ta, M., Atouf, F., Lumelsky, N. Adult pancreas generates multipotent stem cells and pancreatic and nonpancreatic progeny. Stem Cells. 22, 1070-1084 (2004).
- Zengin, E., et al. Vascular wall resident progenitor cells: a source for postnatal vasculogenesis. Development. 133, 1543-1551 (2006).
- Corselli, M., Chen, C. W., Crisan, M., Lazzari, L., Peault, B. Perivascular ancestors of adult multipotent stem cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 30, 1104-1109 (2010).
- Ballas, C. B., Zielske, S. P., Gerson, S. L. Adult bone marrow stem cells for cell and gene therapies: Implications for greater use. Journal of Cellular Biochemistry. 85, 20-28 (2002).
- Chen, C. -W., Corselli, M., Péault, B., Huard, J. Human Blood-Vessel-Derived Stem Cells for Tissue Repair and Regeneration. Journal of Biomedicine and Biotechnology. , 597439 (2012).
- Zheng, B., et al. Prospective identification of myogenic endothelial cells in human skeletal muscle. Nat Biotech. 25, 1025-1034 (2007).
- Okada, M., et al. Myogenic Endothelial Cells Purified From Human Skeletal Muscle Improve Cardiac Function After Transplantation Into Infarcted Myocardium. Journal of the American College of Cardiology. 52, 1869-1880 (2008).
- Crisan, M., et al. A Perivascular Origin for Mesenchymal Stem Cells in Multiple Human Organs. Cell Stem Cell. 3, 301-313 (2008).
- Park, T. S., et al. Placental Perivascular Cells for Human Muscle Regeneration. Stem Cells and Development. 20, 451-463 (2011).
- Dellavalle, A., et al. Pericytes of human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells. Nat Cell Biol. 9, 255-267 (2007).
- Dellavalle, A., et al. Pericytes resident in postnatal skeletal muscle differentiate into muscle fibres and generate satellite cells. Nat Commun. 2, 499 (2011).
- Chen, C. -W., et al. Human pericytes for ischemic heart repair. STEM CELLS. 31 (2), 305-316 (2012).
- Corselli, M., et al. The tunica adventitia of human arteries and veins as a source of mesenchymal stem cells. Stem Cells and Development. 21, 1299-1308 (2012).
- Campagnolo, P., et al. Human Adult Vena Saphena Contains Perivascular Progenitor Cells Endowed With Clonogenic and Proangiogenic Potential. Circulation. 121, 1735-1745 (2010).
- Katare, R., et al. Transplantation of Human Pericyte Progenitor Cells Improves the Repair of Infarcted Heart Through Activation of an Angiogenic Program Involving Micro-RNA-132 / Novelty and Significance. Circulation Research. 109, 894-906 (2011).
- Zheng, B., et al. Human myogenic endothelial cells exhibit chondrogenic and osteogenic potentials at the clonal level. Journal of Orthopaedic Research. 31, 1089-1095 (2013).
- Caplan, A. I. All MSCs Are Pericytes. Cell Stem Cell. 3, 229-230 (2008).
- Feng, J., Mantesso, A., Sharpe, P. T. Perivascular cells as mesenchymal stem cells. Expert Opinion on Biological Therapy. 10, 1441-1451 (2010).
- Tang, W., et al. White Fat Progenitor Cells Reside in the Adipose Vasculature. Science. 322, 583-586 (2008).
- Krautler, N. J., et al. Follicular Dendritic Cells Emerge from Ubiquitous Perivascular Precursors. Cell. 150, 194-206 (2012).
- Phinney, D. G. Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy. Journal of Cellular Biochemistry.113. 113, 2806-2812 (2012).
- Chen, C. -W., et al. Perivascular multi-lineage progenitor cells in human organs: Regenerative units, cytokine sources or both. Cytokine and Growth Factor Reviews. 20, 429-434 (2009).
- Lin, C. -S., Lue, T. F. Defining Vascular Stem Cells. Stem Cells Dev. 22, 1018-1026 (2013).
- Tang, Z., et al. Differentiation of multipotent vascular stem cells contributes to vascular diseases. Nat Commun. 3, 875 (2012).
- Zheng, B., et al. Isolation of myogenic stem cells from cultures of cryopreserved human skeletal muscle. Cell Transplant. 21, 1087-1093 (2012).
