Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Måling Effekter af bakterier på doi: 10.3791/51203 Published: October 22, 2013

Summary

Et æg-i-ormen (EIW)-analysen er en nyttig metode til at kvantificere æglægning adfærd. Ændringer i æglægning kan være en adfærdsmæssig reaktion modelorganismen

Abstract

C. elegans æglægningen adfærd påvirkes af miljømæssige signaler såsom osmolaritet 1 og vibrationer 2. I det totale fravær af fødevarer C. elegans ophører endvidere æglægning og fastholde befrugtede æg i deres livmoder 3.. Imidlertid er effekten af forskellige kilder til fødevarer, især sygdomsfremkaldende bakterier og især Enterococcus faecalis på æglægning adfærd ikke godt karakteriseret. Ægget-i-ormen (EIW) assay er et nyttigt redskab til at kvantificere effekten af forskellige typer af bakterier, i dette tilfælde E. faecalis på æglægning adfærd.

EIW assays involverer at tælle antallet af æg opbevares i livmoderen hos C. elegans 4.. Den EIW analysen indebærer blegning iscenesat, gravide voksne C. elegans at fjerne neglebånd og adskille de tilbageholdte æg fra dyret. Forud for blegning, er orme udsat for bakterier (eller nogen form for miljømæssig cue) For en bestemt periode. Efter blegning, er en meget let i stand til at tælle antallet af æg tilbageholdt inde i livmoderen af ​​orme. I dette assay, en kvantificerbar stigning i æg tilbageholdelse efter E. faecalis eksponering kan let måles. Den EIW assayet er en adfærdsmæssig assay, som kan anvendes til at screene for potentielt patogene bakterier eller tilstedeværelse af miljøgifte. Derudover kan EIW assayet være et redskab til at screene for lægemidler, der påvirker neurotransmitter signalering da æglægningen adfærd moduleres af neurotransmittere, såsom serotonin og acetylcholin 5-9.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Caenorhabditis elegans, en mikroskopisk, fritlevende rundorm, er en model organisme traditionelt anvendes til at studere udviklingsmæssige og celle signaleringsprocesser grund af dens transparente anatomi, velkarakteriseret udvikling, fuldt sekventeret genomet, korte generationstid-tid, og genetisk homologi til mennesker . For nylig C. elegans er blevet en model organisme inden for miljø-toksikologi og medfødte immunitet 10, 11.

Disse selv-gødnings tvekønnede orme bliver kønsmodne inden for to til tre dage efter udrugning fra ægget. I løbet af sin livscyklus, C. elegans passerer gennem fire larvestadier (L1-L4), før de nåede voksenalderen. Man isolerede hermafrodit kan producere i gennemsnit 300 afkom inden for tre dage peak frugtbarhed. I formeringsaktive modne C. elegans hermafroditter er befrugtede æg opbevares i livmoderen i flere timer, før de lægges. Dennormal antal æg gemt i livmoderen på en gang (i højsæsonen frugtbarhed) er mellem ti og femten 12.. Antallet af æg i livmoderen, er en funktion af både hastigheden af ​​ægproduktionen og hastigheden af ​​æglægning. Befrugtede æg udstødes fra livmoderen ved sammentrækning af seksten vulva muskler arrangeret omkring åbningen af vulva 13.. Hermafrodit-specifikke motoriske neuroner (HSN s) og VC motoriske neuroner synapse på vulva muskler påvirker muskel sammentrækning og dermed æglægning adfærd 5,7,13,14. Udvisning af æg fra livmoderen opstår på grund af koordineret aktivitet i neuroner og muskler.

Lab kulturer af C. elegans er typisk rejst på en diæt af patogen Escherichia coli OP50. I det naturlige miljø, C. elegans kommer i kontakt med en række fødevarer kilder, såsom patogene bakterier, kan der være potentielt skadelige. Når de udsættes for skadelige stoffer imiljø, C. elegans bevarer æg indtil miljøet bliver mere gunstige. Formentlig dette æg fastholdelse er et forsøg på at beskytte deres afkom.

I dette æg i ormen (EIW) assay, C. elegans udsættes for potentielt patogene bakterier, Enterococcus faecalis, som findes i miljøet. Udsættelse for patogene former af E. faecalis kan forårsage vedvarende tarminfektioner og endda død i C. elegans 15.. Eksponering for andre former for patogene bakterier har vist sig at påvirke æg tilbageholdelse 16,17, men effekten var ikke kvantificeret. Derudover stammer virkningen af mildt patogene E. faecalis, har stammer, der ikke umiddelbart dødelig på æglægning adfærd ikke blevet undersøgt.

EIW assays involverer at tælle antallet af æg opbevares i livmoderen hos C. elegans 4.. Selvom C. eleganser gennemsigtige, kan æg ophobes i livmoderen være svært at kvantificere i en intakt dyr. Den EIW analysen indebærer blegning gravide voksne C. elegans, der blev udsat for bakterier i en bestemt periode. Blegemiddelopløsningen opløser ydre kutikula forlader æggene bag. Æggene er refraktiv til virkningerne af blegemiddel på grund af tilstedeværelsen af ​​en beskyttende æggeskal. Efter blegning, er en meget let i stand til at tælle antallet af æg, der frigives fra livmoderen af ​​ormene ved blegning.

Den beskrevne assay er en enkel, billig og hurtig metode til at kvantificere antallet af æg i livmoderen på én gang, og dermed kvantificere virkningerne af E. faecalis på æg tilbageholdelse. Denne analyse kan anvendes til at kvantificere effekten af ​​andre typer af bakterier, miljømæssige toksiner eller narkotika på æg fastholdelse. Dette assay har også potentiale til at blive brugt som en skærm for bakteriel patogenicitet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1) Fremstilling af nematodevækst Media (NGM)

  1. For at gøre 50 plader, tilsættes 1,5 g NaCl, 8,5 g ultrarent Agar, og 1,25 g pepton til en 1 Lflask.
  2. Tilføj 487,5 ml dH2O til kolbe. Bland forsigtigt for at blande og dække åbningen af ​​kolbe med et stykke aluminiumsfolie.
  3. Sterilisere opløsningen ved autoklavering ved standardbetingelserne (121 psi, 120 ° C, 20 min).
  4. Lad opløsningen afkøle til 45 ° C i et vandbad.
  5. 500 pi kolesterol fra en 5 mg / ml stamopløsning (opløst i ethanol), 500 pi 1 M CaCl2, 500 pi 1 M MgSO4, og 12,5 ml KPO 4 buffer (54,15 g: Til den løsning, følgende, tilføjer KH 2 PO 4 og 17,8 g K 2 HPO 4 i 500 ml dH 2 O), som beskrevet i 18 år.
  6. Ved hjælp af sterile pipetter, der tilsættes 10 ml agar opløsning til hver 60 mm polystyren petriskål. At medierne at størkne ved stuetemperatur overnight.

2) Fremstilling af B Broth E. coli Medier

  1. Har fem 100 ml kulturer tilsættes 5,0 g Bacto trypton, 2,5 g gærekstrakt, 5,0 g NaCl til et bæger.
  2. Tilføj sterilt, destilleret vand til et samlet volumen på 500 ml. Opløsningen opvarmes på en varmeplade, under omrøring, indtil de opløste er opløst.
  3. Hæld 100 ml B bouillon i fem glasflasker (mindst 200 ml volumen).
  4. Sterilisere løsninger ved autoklavering ved standardbetingelserne (121 psi, 120 ° C, 20 minutter).
  5. Tillad B bouillon at afkøle til stuetemperatur før brug.

3) Såning C. elegans Vedligeholdelse Plates

  1. Efter henstand NGM plader til at tørre ved stuetemperatur i mindst en uge, pode en 100 ml B bouillonkultur med et par kolonier af E. coli (OP50).
  2. Grow E. coli kultur ved 37 ° C natten over.
  3. Pipetteres fodboldudtryk dråber (ca. 10081; l) OP50 kultur på midten af ​​hver NGM plade. Pladerne er typisk stablet låg opad. Når pipettering (såning), begynder ved pipettering kulturen på pladen ved bunden af ​​stakken. Arbejd din vej op hver stak. Prøv ikke at flytte pladerne efter såning, fordi det er vigtigt, at kulturen ikke komme for tæt på kanterne af pladen.
  4. Lad podede plader til at tørre ved stuetemperatur i mindst en uge før anvendelse.
  5. Podede plader gemmes (inverteret) i lukkede plastbeholdere ved stuetemperatur.

4) Fastholdelse C. elegans Stammer

  1. For at opretholde velnærede C. elegans bestande bruge en orm vælger at flytte tre L4S eller drægtige voksne til en ny, seedet NGM plade hver 3-4 dage.
  2. Store plader (inverteret), fortrinsvis inde i en inkubator ved 15-22 ° C. Kulturer i de beskrevne assays blev opbevaret ved 20 ° C. C. elegans udvikling er temperaturafhængig. Som vedligehnce temperaturstigninger, nedsætter tiden mellem udviklingsstadier.

5) Fremstilling af tryptisk Soy Agar (TSA) E. faecalis Culture Media

  1. For at gøre 50 plader, måler 500 ml sterilt, destilleret vand i en kolbe, og bring i kog under omrøring, på en kogeplade.
  2. Tilsæt 20 g pulveriseret TSA agar kolbe og tillade opløsningen at opløse.
  3. Sterilisere løsninger ved autoklavering ved standardbetingelserne (121 psi, 120 ° C, 20 minutter).
  4. Lad opløsningen afkøle til 45 ° C i et vandbad.
  5. Ved hjælp af sterile pipetter, der tilsættes 10 ml agar opløsning til hver 60 mm polystyren petriskål. At medierne at størkne ved stuetemperatur natten over.

6) Fremstilling af tryptisk sojavæske (TSB) E. faecalis Culture Media

  1. At gøre 250 podningsrør, måle 500 ml sterilt, destilleret vand i en kolbe og varm på en varmeplade under omrøring. Tilsæt 15 g TSB agar pulver til kolben og tillade at opløse pulveret.
  2. Sterilisere løsninger ved autoklavering ved standardbetingelserne (121 psi, 120 ° C, 20 minutter).
  3. Opløsningen afkøles til stuetemperatur, og derefter afpipetteres 2 ml i sterile, 5 ml reagensglas.

7) Udarbejdelse af Brain Heart Infusion (BHI) medier med Streptomycin til E. faecalis Culture

  1. Mål 500 ml sterilt, destilleret vand i en kolbe, og bring i kog under omrøring, på en kogeplade.
  2. Tilføj 26 g BHI medium til kolben og lad opløsningen opløses.
  3. Sterilisere løsninger ved autoklavering ved standardbetingelserne (121 psi, 120 ° C, 20 minutter).
  4. Opløsningen afkøles til 45 ° C i et vandbad.
  5. Anvendelse af steril teknik tilsættes 0,5 ml af en 10 mg / ml streptomycin stamopløsning og hvirvel for at blande.
  6. Tilføj 10 ml af opløsningen til hver 60 mm polystyren petriskål.

8) Opretholdelse af E. faecalis stammer

  1. At opretholde E. faecalis bestande bruge en steril loop til streak individuelle kolonier onto separate tryptiske soja-agar (TSA) plader.
  2. Grow kulturer ved 37 ° C natten over. Store plader (inverteret) i en forseglet pose eller boks ved stuetemperatur i flere uger.

9) Forberedelse E. faecalis Plader til EIW Assay

  1. Pode en 2 ml TSB kultur med en koloni af E. faecalis og inkuberes natten over ved 37 ° C.
  2. Afpipetteres 20 ul E. faecalis kultur på midten af en forberedt BHI-streptomycin plade, og inkuberes natten over ved 37 ° C.

10) Forberedelse E. coli Plader til EIW Assay (Kontrol Plates)

  1. Pode en 100 ml B-broth kultur med en koloni af E. coli OP50 og inkuberes natten over ved 37 ° C
  2. Afpipetteres 20 ul af OP50 kultur på midten af ​​en upodet NGM plade og lade seedede pladerne at tørre ved stuetemperatur natten over.

11) Æg i Worm Assay

  1. Pick 15-20 iscenesat-L4 C. elegans (figur 1) på midten af en græsplæne af bakterier på et forberedt BHI-Strep-E. faecalis plade. Vær forsigtig med ikke at overføre en masse OP50 til BHI pladen. Pluk det samme antal L4S til en kontrolgruppe NGM-OP50 plade.
  2. Pladerne inkuberes i 40 timer ved 20 ° C.
  3. Forbered 20% blegemiddelopløsning. Bland en kommerciel blegemiddel (6,0% natriumhypochlorit) med det passende volumen af ​​destilleret vand.
  4. Tilsættes 10 ul dråber blegemiddel løsning til ti forskellige steder på et plastlåg (af en orm eller bakteriel plade).
  5. Ved hjælp af en orm pick, overføre én orm i hver blegemiddel dråbe. Vend forsigtigt spidsen afpick i blegemiddel dråbe sørge ormen har skyllet ud i slutningen af ​​pick (bekræft ved at se dråben under et dissektionsmikroskop).
  6. Lad neglebånd at opløse i ca 10 min, eller indtil ormene sprang op, fordrive de æg (figur 2). Vær forsigtig med ikke at overføre æg fra pladen.
  7. Ved hjælp af et dissektionsmikroskop, æggene tælle i hvert fald af blegemiddel.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denne analyse gør det muligt at kvantificere antallet af tilbageholdte æg inden C. elegans efter eksponering til E. faecalis. L4 iscenesat orme (karakteriseret ved gennemsigtig åbent rum over deres vulva, figur 1) blev udsat for E. faecalis gennem voksenalderen. Efter 40 timer af eksponering til E. faecalis blev blegning udføres. Som kutikula opløst i blegemiddel dråbe, æggene blev mere klart (figur 2). Antallet af tilbageholdte æg var let kvantificeret ved at tælle, mens du ser under dissektionsmikroskop.

Flere æg blev bibeholdt i nærværelse af E. faecalis testede stammer, sammenlignet med E. coli OP50 kontroller (figur 3). Der er en vis variation i virkningen af en hvilken som helst stamme af E. faecalis om individuelle orme, set fra fejllinjerne. Men virkningen af stammer af E. faecalis på æg fastholdelse indenen population af orme kommer til at afvige væsentligt fra kontrollerne. Graden af æg tilbageholdelse fremkaldt ved forskellige stammer af E. faecalis testet, kan også variere. Denne varieret effekt kan skyldes ekspression af forskellige virulensfaktorer i hver stamme.

Figur 1
Figur 1. Identificering L4 iscenesat C. elegans. A. L4 trin C. elegans larver er den største larver til stede på plader kun lidt kortere i længden end voksne orme. L4S er tyndere end voksne så godt, på grund af fraværet af tilbageholdte æg (som gør voksne orme lidt bredere). B. Efter at have identificeret de larver, der er en anelse kortere end voksne,-L4 iscenesat C. elegans identificeres yderligere ved den lettere halvmåne stedet placeret imidten af ​​deres krop (sorte pilespidser). Denne stedet er synlig i mindre larver (L2 og L3 stadier), men er fraværende i den voksne. Alle billeder blev taget af orme på NGM plader, med et kamera monteret på et dissektionsmikroskop (40X og 50X forstørrelse til A og B, henholdsvis). Klik her for at se større billede .

Figur 2
Figur 2. Blegemiddelopløsning opløser C. elegans neglebånd over tid. En trinvis voksne orm er placeret i en dråbe af blegemiddel opløsning (A). I løbet af fem til ti minutter, begynder neglebånd af ormen til at opløse (BF). Da de fleste af neglebånd er opløst, æggene bliver synlige (F sorte pile). Fedtdepoter inde i ormen als o opløses langsomt i blegemiddel, og stadig være synlig (F, grå pile). Alle billeder blev taget af orme på NGM plader, med et kamera monteret på et dissektionsmikroskop (40X). Klik her for at se større billede .

Figur 3
Figur 3. Nogle E. faecalis stammer forårsage øget æg retention efter 40 timers eksponering. Worms udsat for to af de seks E. faecalis stammer (appelsin søjler) viste et forhøjet niveau af æg fastholdelse i forhold til orme fodret E. coli (OP50) kontrol stamme (blå søjler). Ti orme blev fodret hver bakteriestamme i hvert forsøg. Forsøg blev udført tre gange på forskellige dage. * Angiver p <0,05 (Student t-test)."> Klik her for at se større billede.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

De mest kritiske trin i vellykket udførelse dette assay, er: 1) ved hjælp velnærede lagre af C. elegans, 2) dyrkning single typer bakterier på assaypladen, 3) præcist at identificere trinvis L4 orme for eksponering E. faecalis, 4) at holde eksponeringen tid til E. faecalis konsistente på tværs af alle prøvelser og 5) blegning tid, bør ikke overstige ti minutter for at forhindre ægget disintegration.

Til dette assay er det vigtigt at vælge sunde, velnærede orm. Maternal sult kan påvirke frugtbarhed og vækst af afkom 19,20, og det er derfor vigtigt, at orme er blevet godt fodret flere generationer før udførelse af denne analyse. En velnærede bestand af orme er let at vedligeholde ved blot at overføre nogle få voksne orme til en ny seedet NGM plade hver 2-3 dage. To dage før assayet, skal voksne orme anbringes på en frisk græsplæne af OP50 for at have tilstrækkelig L4 afkom rådighed for analysen.

<p class = "jove_content"> Det er også vigtigt, at EIW assayplader fremmer væksten af kun en enkelt type af bakterier. E. faecalis stammer blev dyrket på BHI-plader. Streptomycin blev tilsat til pladerne at selektere mod E. coli OP50, der overføres med L4 orme, som de er overført fra vedligeholdelse NGM plader assaypladerne. OP50 også vokser på BHI-plader. Hvis ikke valgt imod, C. elegans ville fodre på to typer af bakterier (E. coli og E. faecalis), mens på BHI plader. De stammer af E. faecalis anvendt i dette assay er resistente over for streptomycin. Hvis der er forskellige typer af bakterier blev anvendt til dette assay, en anden antibiotikum, og måske forskellige dyrkningsmedier, bør anvendes til at selektere for bakterier af valg og mod E. coli OP50.

Præcist vælge iscenesat orme til dette assay er afgørende af flere grunde. Først er det vigtigt at tælle æg tilbageholdelse under t Han tidspunkt for ægproduktion / æglæggende i selv-befrugtende C. elegans. Ægproduktionen forekommer kun i de første fem dage af C. elegans voksenalderen (topper omkring 40 timer efter L4) og hurtigt derefter falder 4,21. Voksne orme lever i gennemsnit to til tre uger, så mange voksne orme lever i mindst en uge, mens ikke producerer befrugtede æg. Derfor er det vigtigt at sørge for, at EIW analysen ikke foretages på unstaged voksne orme af ukendt alder.

Den anden grund er det vigtigt at bruge trinvis dyr i EIW assayet er således at den tid i udvikling, hvor orme er blevet udsat for bakterierne, er toksin eller lægemiddel stramt kontrolleret. Kulturer af C. elegans typisk synkroniseret på ægget, L1 eller L4 etaper. L4 fase blev anvendt til dette assay på grund af bekymring for, at længere eksponering til E. faecalis ville resultere i letalitet før orme blev drægtige voksne.

telt "> Varigheden af ​​tid orme er tilbage i blegemiddel løsning er også vigtigt at overvåge. Worms bør typisk opløses i under ti minutter, men denne gang kommer til at afvige fra orm til orm. Befrugtede æg til sidst opløst ved blegemiddel, men processen er langsommere end for neglebånd på grund af tilstedeværelsen af ​​en beskyttende æggeskal. æggeskallen vil begynde at blive opløst af blegemiddel, hvis venstre i opløsningen i mere end 10-15 min.

Egg fastholdelse afspejler den balance mellem ægproduktion og æglægning. Den EIW analysen alene ikke skelne, om antallet af æg tilbageholdt i livmoderen skyldes ændringer i ægproduktion eller æglægning. Dette er især en bekymring, hvis orme behandlet med en bakteriestamme eller toksin bevarer færre æg end i kontrolgruppen. I disse tilfælde især, bør en opfølgende kuldstørrelse assay gøres. Kuldstørrelse assays kvantificere antallet af æg lagt over ormen reproduktive levetid 4 E. faecalis ville handle for at øge ægproduktionen, er det rimeligt at antage, at en stigning i æg fastholdelse efter eksponering til E. faecalis (som set i figur 3) er et resultat af nedsat æglægning adfærd.

Den EIW analysen heller ikke bestemme den mekanisme, hvormed bakterier kan ændre æg fastholdelse. Det er muligt, at C. elegans kan bibeholde æg, fordi de patogene bakterier påvirker fodring ved kolonisering i og blokere munden åbning eller fordi det er en dårlig fødekilde. Det er også muligt at bakterier kan kolonisere og blokere vulva åbning, eller påvirker funktionen af ​​celler i æglægningen systemet. Yderligere analyser er påkrævet for at bestemme den mekanisme, which æg tilbageholdelse ændres.

Denne EIW assay kan let ændres for at bestemme virkningerne af mange typer af forbindelser på æg tilbageholdelse. Desuden er dette assay simpelt nok, at det kan indgå i en skærm til at identificere gener, i enten værten (C. elegans) eller patogen (E. faecalis), der kræves for virkningen af patogenet. Den EIW analyse kan også anvendes til screening for gener, der kræves til regulering æglægning selv. C. elegans æglægningen adfærd moduleres af neurotransmittere som serotonin og acetylcholin 5-9, og kræver en koordineret aktivitet af flere neuroner og muskelgrupper 12.. EIW assays har været og fortsætter med at blive brugt til at identificere gener, der er vigtige for neurotransmitter signalering og / eller muskel aktivitet. EIW analyser giver et kvantitativt, snarere end kvalitative analyse af en vigtig C. elegans adfærd.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.

Acknowledgments

Forfatterne vil gerne takke juni Middleton til forsyning E. faecalis stammer og vejledning med bakterier kultur. C. elegans blev leveret af CGC, som er finansieret af NIH Office of Research Infrastructure Programs (P40 OD010440).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agar, ultrapure Affymetrix 10906
Bacto Peptone Becton Dickinson 211677
Bacto Tryptone Becton Dickinson 211705
Brain Heart Infusion dehydrated medium Carolina Biological Supply 781781
C. elegans, N2 strain Caenorhabditis Genetics Center http://www.cbs.umn.edu/cgc
Cholesterol Alfa Aesar A11470
Culture plates for C. elegans Tritech Research Inc. T3308
Culture plates for E. faecalis Fisher Scientific-Fisherbrand 875713
E. coli (OP50) Caenorhabditis Genetics Center http://www.cbs.umn.edu/cgc
E. faecalis strains provided by J. Middleton. All isolates were confirmed as enterococci
by observing growth on enterococcosel agar (BBL) and in 6% NaCl broth;

all strains grew at 44.5 ºC and were catalase negative and hydrolyzed esculin. A simplified dichotomous key based on pigmentation and fermentation reactions for six sugars (arabinose, mannitol, methyl-α-D-glucopyranoside (MGP), ribose, sorbose and sorbitol) allowed presumptive identification of all E. faecalis strains (Efs lacks pigmentation and is arabinose, MGP and sorbose negative and sorbitol, mannitol and ribose positive). All presumptive Efs strains were confirmed using the API 20 STREP system (Biomerieux).

Microscope Motic SMZ 168B any microscope with transmitted illumination and 50X magnification should be sufficient
Streptomycin sulfate Fisher BioReagents BP910-50
Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium), Difco Becton Dickinson 236950
Trypticase Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium), BBL Becton Dickinson 211768
Yeast extract Acros 61180-1000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans. Science. 216, 1012-1014 (1982).
  2. Sawin, E. R. Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]. Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1996).
  3. Trent, C. Genetic and behavioral studies of the egg-laying system of Caenorhabditis elegans [dissertation]. Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1982).
  4. Chase, D. L., Koelle, M. R. Genetic analysis of RGS protein function in Caenorhabditis elegans. Methods Enzymol. 389, 305-320 (2004).
  5. Trent, C., Tsuing, N., Horvitz, H. R. Egg-laying defective mutants of the nematode Caenorhabditis elegans. Genetics. 104, 619-647 (1983).
  6. Weinshenker, D., Garriga, G., Thomas, J. H. Genetic and pharmacological analysis of neurotransmitters controlling egg laying in Caenorhabditis elegans. J. Neurosci. 15, 6975-6985 (1995).
  7. Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans. Neuron. 21, 203-214 (1998).
  8. Bany, A., Dong, M., Koelle, M. R. Genetic and cellular basis for acetylcholine inhibition of Caenorhabditis elegans egg-laying behavior. J. Neurosci. 23, 8060-8069 (2003).
  9. Dempsey, C. M., Mackenzie, S. M., Gargus, A., Blanco, G., Sze, J. Y. Serotonin (5HT), fluoxetine, imipramine and dopamine target distinct 5HT receptor signaling to modulate Caenorhabditis elegans egg-laying behavior. Genetics. 169, 1425-1436 (2005).
  10. Leung, M. C., Williams, P. L., Bennedetto, A., Au, C., Helmcke, K. J., Aschner, M., Meyer, J. N. Caenorhabditis elegans: an emerging model in biomedical and environmental toxicology. Toxicol. Sci. 106, 5-28 (2008).
  11. Mylonakis, E., Aballay, A. Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions. Infect. Immun. 73, 3833-3841 (2005).
  12. Schafer, W. R. WormBook. WormBook. (2005).
  13. White, J., Southgate, E., Thomson, N., Brenner, S. The structure of the Caenorhabditis elegans nervous system. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314, 1-340 (1986).
  14. Desai, C., Garriga, G., McIntire, S. L., Horvitz, H. R. A genetic pathway for the development of the Caenorhabditis elegans HSN motor neurons. Nature. 336, 638-646 (1988).
  15. Garsin, D. A., Sifri, C. D., Mylonakis, E., Qin, X., Singh, K. V., Murray, B. E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. A simple model host for identifying Gram-positive virulence factors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 10892-10897 (2001).
  16. Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. A. Salmonella typhmurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 10, 1539-1542 (2000).
  17. O'Quinn, A. L., Wiegand, E. M., Jeddeloh, J. A. Burkholderia pseudomallei kills the nematode Caenorhabditis elegans using an endotoxin-mediated paralysis. Cell. Microbiol. 3, 381-393 (2001).
  18. Brenner, S. Genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  19. Harvey, S. C., Shorto, A., Orbidans, H. E. Quantitative genetic analysis of life- history traits of Caenorhabditis elegans in stressful environments. BMC Evol. Biol. 8, 15 (2008).
  20. Harvey, S. C., Orbidans, H. E. All eggs are not equal: the maternal environment affects progeny reproduction and developmental fate in Caenorhabditis elegans. PLoS One. 6, e25840 (2011).
  21. Klass MR, Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech. Ageing. Dev. 6, 413-429 (1977).
Måling Effekter af bakterier på<em&gt; C. Elegans</em&gt; Behavior Ved hjælp af en Egg Retention Assay
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Gardner, M., Rosell, M., Myers, E. M. Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay. J. Vis. Exp. (80), e51203, doi:10.3791/51203 (2013).More

Gardner, M., Rosell, M., Myers, E. M. Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay. J. Vis. Exp. (80), e51203, doi:10.3791/51203 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter