Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Måle effekten av bakterier på doi: 10.3791/51203 Published: October 22, 2013

Summary

Et egg-i-ormen (EIW) analysen er en nyttig metode for å kvantifisere eggleggingen atferd. Endringer i egg legging kan være et atferdsmessig respons av modellen organisme

Abstract

C. elegans egglegging atferd påvirkes av miljømessige signaler som osmolaritet en og vibrasjon to. I det totale fravær av mat C. elegans også opphøre egg-legging og beholde befruktede egg i sin livmor tre. Imidlertid er virkningen av forskjellige kilder av mat, spesielt patogene bakterier og spesielt Enterococcus faecalis, på egglegging oppførsel ikke godt karakterisert. Den egg-i-orm (EIWs) assay er et nyttig verktøy for å kvantifisere virkningene av forskjellige typer av bakterier, i dette tilfellet E. faecalis, på egglegging atferd.

EIWs analyser involverer å telle antall egg holdes tilbake i livmoren av C. elegans 4. Den EIWs analysen innebærer bleking iscenesatt, gravid voksen C. elegans å fjerne skjellaget og skille de tilbakeholdte egg fra dyr. Før bleking, er ormer utsatt for bakterier (eller noen form for miljømessig cue) For en fast periode. Etter bleking, er en meget lett i stand til å telle antall egg tilbakeholdt inne i livmoren av ormer. I denne analyse ble en målbar økning i egg-retensjon etter E. faecalis eksponering kan lett måles. Den EIWs analysen er et atferdsmessig analysen som kan brukes til å screene for sykdomsfremkallende bakterier eller tilstedeværelse av miljøgifter. I tillegg kan den EIWs analysen være et verktøy for screening av stoffer som påvirker signalisering nevrotransmitter ettersom egglegging oppførsel er modulert av neurotransmittere, slik som serotonin og acetylcholin 5-9.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Caenorhabditis elegans, en mikroskopisk, frittlevende rundorm, er en modell organisme tradisjonelt brukt til å studere utviklings-og cellesignalisering prosesser på grunn av sin gjennomsiktige anatomi, godt karakterisert utvikling, fullt sekvensert genomet, kort generasjon-tid, og genetisk homologi til mennesker . Mer nylig C. elegans har blitt en modell organisme innen Miljøtoksikologi medfødt immunitet og 10, 11..

Disse selv-gjødsling tvekjønnet ormer blir kjønnsmodne i løpet av to til tre dager før klekking fra egg. I løpet av sin livssyklus, C. elegans passerer gjennom fire larvestadier (L1-L4), før de når voksen alder. En isolert hermafroditt kan produsere i gjennomsnitt 300 avkom i løpet av tre dager med topp fruktbarhet. I reproductively moden C. elegans hermafroditter, er befruktede egg beholdes i livmoren i flere timer før de ble lagt. Dennormalt antall egg som er lagret i livmoren til enhver tid (i løpet av peak fecundity) er mellom ti og femten 12.. Antallet egg i livmoren er en funksjon av både frekvensen av eggproduksjon og frekvensen av egglegging. Befruktede egg er utvist fra livmoren ved sammentrekning av seksten vulval muskler arrangert rundt åpningen av vulva 13. Hermafroditt-spesifikke motorneurons (HSN tallet) og VC motorneurons synapse på vulval muskler som påvirker muskel sammentrekning og dermed eggleggingen atferd 5,7,13,14. Utvisning av egg fra livmoren oppstår på grunn av koordinert aktivitet av nerveceller og muskler.

Lab kulturer av C. elegans er vanligvis reist på en diett av nonpathogenic Escherichia coli OP50. I naturen, C. elegans kommer i kontakt med en rekke matvarer kilder, for eksempel patogene bakterier, som kan være potensielt skadelige. Når de utsettes for skadelige stoffer imiljø, C. elegans beholde egg til miljøet blir mer gunstig. Antagelig egg oppbevaring er et forsøk på å beskytte sine avkom.

I denne egg i ormen (EIW) analysen, C. elegans er utsatt for potensielt skadelige bakterien Enterococcus faecalis, som finnes i miljøet. Eksponering for sykdomsfremkallende former for E. faecalis kan forårsake vedvarende tarminfeksjon og død i C. elegans 15. Eksponering for andre former av patogene bakterier har blitt vist å påvirke egg retensjon 16,17, men effekten ikke ble kvantifisert. I tillegg kan effekten av mildt patogene stammer av E. faecalis, har stammer som ikke er umiddelbart dødelig, på egglegging oppførsel ikke undersøkt.

EIWs analyser involverer å telle antall egg holdes tilbake i livmoren av C. elegans 4. Selv om C. eleganser gjennomsiktige, kan egg akkumulert seg i livmoren være vanskelig å kvantifisere i et intakt dyr. Den EIWs analysen innebærer bleking gravid voksen C. elegans som ble eksponert for bakterier for en fast periode. Blekemiddel oppløser den ytre skjellaget forlater eggene bak. Eggene er refraktiv for virkningene av blekemiddel på grunn av tilstedeværelsen av en beskyttende eggeskall. Etter bleking, er en meget lett i stand til å telle antall egg frigjøres fra uterus av ormene ved bleking.

Analysen beskrevet er en enkel, billig og hurtig metode til å kvantifisere antallet egg i livmoren på en gang, og dermed kvantifisere effekten av E. faecalis på egg oppbevaring. Denne analysen kan brukes til å kvantifisere effekten av andre typer av bakterier, miljømessige toksiner eller medikamenter på egg oppbevaring. Metoden har også potensiale til å bli brukt som en skjerm for bakteriell patogenisitet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1) Utarbeidelse av Nematode vekstmedier (NGM)

  1. For å gjøre 50 plater, tilsett 1,5 g NaCl, 8,5 g Ultrapure Agar, og 1,25 g peptone til en 1 Lflask.
  2. Legg 487,5 ml dH 2 O til kolbe. Virvel forsiktig for å blande og dekker åpningen av kolbe med et stykke aluminiumfolie.
  3. Steriliser oppløsningen ved autoklavering ved standardbetingelser (121 psi, 120 ° C, 20 min).
  4. Tillat løsningen å avkjøles til 45 ° C i et vannbad.
  5. Til løsningen, legge til følgende i rekkefølge: 500 ul kolesterol fra en 5 mg / ml stamløsning (oppløst i etanol), 500 ul 1 M CaCl 2, 500 mL 1 M MgSo4, og 12,5 ml KPO 4 buffer (54.15 g KH 2 PO 4 og 17,8 g K HPO 2 4 i 500 ml dH 2 O) som beskrevet i 18.
  6. Bruk sterile pipetter, tilsett 10 ml agar løsning til hver 60 mm polystyren petriskål. Tillate media å stivne ved romtemperatur overnight.

2) Utarbeidelse av B buljong E. coli Media

  1. For å gjøre fem 100 ml kulturer, tilsett 5,0 g Bacto Trypton, 2,5 g gjærekstrakt, 5,0 g NaCl til et begerglass.
  2. Legg sterilt, destillert vann til et sluttvolum på 500 ml. Varm opp-løsning på en varmeplate under omrøring, inntil de oppløste stoffer er oppløst.
  3. Hell 100 ml av B kokes i fem glassflasker (minst 200 ml volum).
  4. Sterilisere løsninger ved autoklavering ved normaltilstand (121 psi, 120 ° C, 20 minutter).
  5. Tillat B buljong avkjøles til romtemperatur før bruk.

3) Seeding C. elegans Vedlikehold Plates

  1. Etter å ha latt NGM plater for å tørke ved romtemperatur i minst én uke, inokulere en 100 ml B buljongkultur med noen få kolonier av E. coli (OP50).
  2. Grow E. coli-kultur ved 37 ° C over natten.
  3. Pipette en-to dråper (ca. 10081; l) av OP50 kultur på midten av hver NGM plate. Platene er vanligvis stablet lokk-siden opp. Ved pipettering (seeding), begynner ved pipettering av kulturen til plate på bunnen av stabelen. Arbeid deg oppover hver bunke. Unngå å bevege platene etter såing, fordi det er viktig at kulturen ikke komme for nær kantene av platen.
  4. La de tilsådde plater for å tørke ved romtemperatur i minst en uke før bruk.
  5. Tilsådde plater lagres (invertert) i forseglede plastbeholdere ved romtemperatur.

4) Opprettholde C. elegans Stammer

  1. For å opprettholde velfødde C. elegans aksjer, bruke en orm velge å flytte tre L4S eller drektige voksne til en ny, seeded NGM plate hver 3-4 dager.
  2. Oppbevar plater (invertert) fortrinnsvis inne i en inkubator ved 15-22 ° C. Kulturer i assayene beskrevet ble lagret ved 20 ° C. C. elegans utvikling er temperatur-avhengig. Som vedlikehnce temperaturen øker, reduseres tiden mellom utviklingsstadier.

5) Fremstilling av tryptisk-agar (TSA) E. faecalis Kultur Media

  1. For å gjøre 50 plater, måler 500 ml sterilt, destillert vann i en kolbe og kok opp under omrøring på en kokeplate.
  2. Tilsett 20 g pulverisert TSA agar til kolbe og tillate oppløsningen å oppløse.
  3. Sterilisere løsninger ved autoklavering ved normaltilstand (121 psi, 120 ° C, 20 minutter).
  4. Tillat løsningen å avkjøles til 45 ° C i et vannbad.
  5. Bruk sterile pipetter, tilsett 10 ml agar løsning til hver 60 mm polystyren petriskål. Tillate mediet å stivne ved romtemperatur over natten.

6) Fremstilling av tryptisk soyavekstmedium og (TSB) E. faecalis Kultur Media

  1. For å gjøre 250 kultur-rør, måler 500 ml sterilt, destillert vann i en kolbe og varme på en varmeplate under omrøring. Tilsett 15 g TSB agar-pulver til kolben og tillate pulveret å oppløse.
  2. Sterilisere løsninger ved autoklavering ved normaltilstand (121 psi, 120 ° C, 20 minutter).
  3. Tillat løsningen å avkjøles til romtemperatur, og pipetter inn i sterile 2 ml, 5 ml reagensglass.

7) Utarbeidelse av hjerne hjerte infusjon (BHI) Media, med streptomycin, for E. faecalis Kultur

  1. Mål 500 ml sterilt, destillert vann i en kolbe og kok under omrøring på en varmeplate.
  2. Legg 26 g av BHI-medium til kolben og la oppløsningen for å oppløse.
  3. Sterilisere løsninger ved autoklavering ved normaltilstand (121 psi, 120 ° C, 20 minutter).
  4. Tillat løsningen å avkjøles til 45 ° C i et vannbad.
  5. Ved hjelp av steril teknikk, tilsett 0,5 ml av en 10 mg / ml streptomycin stamløsning og virvel for å blande.
  6. Tilsett 10 ml av oppløsningen til hver 60 mm polystyren petriskål.

8) Opprettholde E. faecalis Stammer

  1. For å opprettholde E. faecalis aksjer, bruke en steril løkke til strek individuelle kolonier på separate tryptic soya agar (TSA) plater.
  2. Dyrke kulturer ved 37 ° C over natten. Oppbevar plater (invertert) i en forseglet pose eller boks ved romtemperatur i flere uker.

9) Forbereder E. faecalis Plater for EIW analysen

  1. Vaksinere en 2 ml TSB kultur med en koloni av E. faecalis og inkuberes over natten ved 37 ° C.
  2. Pipetter 20 mL av E. faecalis kultur på midten av et bearbeidet BHI-streptomycin plate, og inkuberes over natten ved 37 ° C.

10) Forbereder E. coli-plater for EIW analyse (Kontroll Plates)

  1. Vaksinere en 100 ml B-broth kultur med en koloni av E. coli OP50 og inkuberes over natten ved 37 ° C
  2. Pipetter 20 pl av den OP50 kulturen på midten av en unseeded NGM plate og la de tilsådde plater for å tørke ved romtemperatur over natten.

11) Egg i Worm-analyse

  1. Plukke 15 - 20 iscenesatt-L4 C. elegans (Figur 1) på midten av en plen av bakterier på en forberedt BHI-streptokokk-E. faecalis plate. Være forsiktig med å overføre mye av OP50 til BHI plate. Plukk samme antall L4S til en kontroll NGM-OP50 plate.
  2. Inkuber platene i 40 timer ved 20 ° C.
  3. Forbered 20% blekemiddel. Bland et kommersielt blekemiddel (6,0% natrium-hypokloritt) med det passende volum av destillert vann.
  4. Tilsett 10 mL dråper blekemiddel løsning på ti forskjellige steder på et plastlokk (av en orm eller bakteriell plate).
  5. Ved hjelp av en orm plukke, overføre en orm inn i hver blekemiddel slipp. Snurr tuppen avplukke i blekemiddel dråpen for å sørge for at ormen har vasket av enden av pick (bekrefte ved å vise dråpen under et dissekere mikroskop).
  6. La hårstråene å oppløse i ca 10 min eller til de ormer sprenge åpne, utviste eggene (figur 2). Være forsiktig med å overføre egg fra platen.
  7. Ved hjelp av en dissekere mikroskop, telle egg i hver dråpe av blekemiddel.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denne analysen gjør det mulig å kvantifisere antallet tilbakeholdte egg innenfor C. elegans etter eksponering til E. faecalis. L4 iscenesatt ormer (preget av gjennomsiktig åpen plass ovenfor sin vulva, en figur) ble utsatt for E. faecalis gjennom voksenlivet. Etter førti timer med eksponering for E. faecalis ble bleking utført. Som hårstråene oppløst i blekemiddel dråpene, ble eggene mer åpenbar (figur 2). Antallet tilbakeholdt egg var lett kvantifisert ved å telle mens du ser etter dissekere mikroskop.

Flere egg ble beholdt i nærvær av E. faecalis-stammer testet, sammenlignet med E. coli OP50-kontroller (figur 3). Det er en viss variasjon i virkningen av et hvilket som helst stamme av E. faecalis på individuelle ormer, sett fra feilstolpene. Men virkningen av stammer av E. faecalis på egg oppbevaring innenen befolkning på ormer ikke varierer betydelig fra kontrollene. Graden av retensjon egg fremkalt ved forskjellige stammer av E. faecalis testet kan også variere. Denne varierte effekten kan skyldes ekspresjonen av forskjellige virulens faktorer i hver stamme.

Figur 1
Figur 1. Identifisere L4 iscenesatt C. elegans. A. L4 stadiet C. elegans larver er den største larver til stede på platene bare litt kortere i lengden enn voksne ormer. L4S er tynnere enn voksne også, på grunn av fravær av tilbakeholdt egg (som gjør voksne ormer litt bredere). B. Etter å identifisere de larver som er litt kortere enn voksne, L4-iscenesatt C. elegans er videre identifisert av den lettere halvmåne sted som ligger imidten av kroppen (svarte pilspisser). Dette stedet er synlig i mindre larver (L2 og L3 etapper), men er fraværende i den voksne. Alle bildene ble tatt av ormer på NGM plater, med et kamera montert på en dissekere mikroskop (40X og 50X forstørrelse for A og B, henholdsvis). Klikk her for å se større bilde .

Figur 2
Figur 2. Blekemiddel løser opp C. elegans hårstråene over tid. trinnvis En voksen orm er plassert i en dråpe med blekemiddel (B). Over fem til ti minutter, begynner skjellaget av ormen å oppløse (BF). Som de fleste av skjellaget er oppløst, eggene blir synlige (F svarte piler). Fett butikker inne i ormen als o oppløses langsomt i blekemiddel, og forbli synlig (F, grå piler). Alle bildene ble tatt av ormer på NGM plater, med et kamera montert på en dissekere mikroskop (40X). Klikk her for å se større bilde .

Figur 3
Figur 3. Noen E. faecalis stammer føre til økt egg oppbevaring etter 40 timers eksponering. Worms utsatt for to av de seks E. faecalis stammer (oransje søyler) viste en økt nivå av egg oppbevaring sammenlignet med ormer matet E. coli (OP50) kontroll stamme (blå søyler). Ti ormer ble matet hver bakteriestamme i hvert forsøk. Forsøk ble utført i triplikat på forskjellige dager. * Indikerer p <0,05 (Student t-test)."> Klikk her for å se større bilde.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

De mest kritiske trinnene i hell utfører denne analysen er: 1) ved hjelp av velfødde bestander av C. elegans, 2) dyrking av enkle typer av bakterier på analysens platen, 3) nøyaktig identifisering trinnvis L4 ormer for eksponering mot E. faecalis, 4) å holde eksponeringstid til E. faecalis konsistente på tvers av alle prøvelser og 5) bleking tid bør ikke overstige ti minutter for å hindre egg oppløsning.

For denne analysen er det viktig å velge sunt, godt matet ormer. Maternal sult kan påvirke fruktbarhet og vekst av avkom 19,20, derfor er det viktig at ormer har blitt matet i flere generasjoner før du utfører denne analysen. En velfødde lager av ormer er lett vedlikeholdt ved å overføre noen voksne ormer til en ny seeded NGM plate hver 2-3 dager. To dager før analysen, bør voksne ormer plasseres på en plen av frisk OP50 for å ha tilstrekkelig L4 avkom tilgjengelig for analysen.

<p class = "jove_content"> Det er også viktig at EIWs analysen plater fremme veksten av bare en enkelt type av bakterier. E. faecalis stammer ble dyrket på BHI platene. Streptomycin ble lagt inn i platene for å velge mot E. coli OP50, som er overført med L4 ormer som de overføres fra vedlikehold NGM plater til analysen platene. OP50 vokser også på BHI plater. Hvis ikke valgt mot, C. elegans ville mate på to typer bakterier (E. coli og E. faecalis) mens på BHI plater. De stammer av E. faecalis brukt i denne analysen er resistente overfor streptomycin. Ved forskjellige typer av bakterier ble benyttet for denne analyse et annet antibiotikum, og kanskje forskjellige kulturmedier, bør brukes for å selektere for bakterier av valg og mot E. coli OP50.

Nøyaktig valg av trinnvis ormer for denne analysen er viktig av flere grunner. For det første er det viktig å telle egg retensjon under t Han tidspunktet for eggproduksjon / legging i selv-gjødsling C. elegans. Eggproduksjon oppstår bare i løpet av de første fem dagene av C. elegans voksenlivet (topp rundt 40 timer etter L4) og raskt avtar deretter 4,21. Leve voksne ormer for en gjennomsnittlig to til tre uker, så mange voksne ormer lever i minst en uke mens ikke produserer befruktede egg. Derfor er det viktig å sørge for at EIWs analysen ikke er utført på unstaged voksne ormer av ukjent alder.

Den andre grunn er det viktig å bruke trinnvis dyr i EIWs analysen er slik at tiden i utvikling hvor ormer har blitt eksponert til bakterien, blir medikamentet eller toksinet strengt kontrollert. Kulturer av C. elegans er vanligvis synkronisert på egg, L1 eller L4 etapper. Den L4 fasen ble anvendt for denne analysen på grunn av bekymring for at lengre eksponering overfor E. faecalis ville resultere i dødelighet før ormer ble drektige voksne.

telt "> Varigheten av tid ormer er igjen i blekemiddel er også viktig å overvåke. Worms bør vanligvis oppløses på under ti minutter, men denne gangen ikke varierer fra ormen til ormen. Befruktede egg er slutt oppløst av blekemiddel, men prosessen er lavere enn for hårstråene på grunn av tilstedeværelsen av en beskyttende eggeskallet. eggeskall Det vil begynne å bli oppløst av blekemiddel hvis igjen i løsningen i mer enn 10-15 min.

Egg oppbevaring reflekterer balansen mellom eggproduksjon og egg legging. Den EIWs analysen alene skiller ikke om antall egg opptjent i livmoren skyldes endringer i eggproduksjon eller egg legging. Dette er spesielt et problem dersom ormer som ble behandlet med en bakteriestamme eller toksin beholde færre egg enn de i kontrollgruppen. I disse tilfellene spesielt, bør en oppfølging kullstørrelse analysen gjøres. Kullstørrelse analyser tallfeste antall egg lagt over ormen reproduktive levetid 4 E. faecalis ville handle for å øke eggproduksjonen, er det rimelig å anta at en økning i egg oppbevaring etter eksponering for E. faecalis (som sett i figur 3) er et resultat av redusert egglegging oppførsel.

Den EIWs analysen heller ikke bestemme mekanismen som bakterier kan endre egg oppbevaring. Det er mulig at C. elegans kan beholde egg fordi de sykdomsfremkallende bakteriene påvirker fôring av kolonisere inn og blokkerer munnen åpning eller fordi det er en dårlig matkilde. Det er også mulig at bakterier kan kolonisere og blokkere vulval åpning, eller påvirke funksjonen til cellene i egglegging system. Videre analyser er nødvendig for å bestemme den mekanismen hvich egg oppbevaring endres.

Dette EIWs Analysen kan enkelt endres til å fastslå effekten av mange typer forbindelser på egg oppbevaring. I tillegg er denne analysen enkel nok til at den kunne innlemmes i en skjerm for å identifisere gener, enten i verten (C. elegans) eller patogen (E. faecalis), som kreves for virkningen av organismen. Den EIWs Målingen kan også brukes til å screene for gener som kreves for regulering av eggleggingen seg ​​selv. C. elegans egglegging oppførsel er modulert av neurotransmittere, slik som serotonin og acetylcholin 5-9, og krever koordinert aktivitet av flere neuroner og muskelceller grupper 12. EIWs assay har vært og fortsetter å bli brukt for å identifisere gener som er viktige for nevrotransmitter signalering og / eller muskelaktivitet. EIWs assays gi en kvantitativ snarere enn kvalitativ analyse av en viktig C. elegans atferd.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer at de har ingen konkurrerende finansielle interesser.

Acknowledgments

Forfatterne vil takke June Middleton for å levere E. faecalis belastninger og for veiledning med bakterier kultur. C. elegans ble levert av CGC, som er finansiert av NIH Office of forskningsinfrastruktur Programs (P40 OD010440).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agar, ultrapure Affymetrix 10906
Bacto Peptone Becton Dickinson 211677
Bacto Tryptone Becton Dickinson 211705
Brain Heart Infusion dehydrated medium Carolina Biological Supply 781781
C. elegans, N2 strain Caenorhabditis Genetics Center http://www.cbs.umn.edu/cgc
Cholesterol Alfa Aesar A11470
Culture plates for C. elegans Tritech Research Inc. T3308
Culture plates for E. faecalis Fisher Scientific-Fisherbrand 875713
E. coli (OP50) Caenorhabditis Genetics Center http://www.cbs.umn.edu/cgc
E. faecalis strains provided by J. Middleton. All isolates were confirmed as enterococci
by observing growth on enterococcosel agar (BBL) and in 6% NaCl broth;

all strains grew at 44.5 ºC and were catalase negative and hydrolyzed esculin. A simplified dichotomous key based on pigmentation and fermentation reactions for six sugars (arabinose, mannitol, methyl-α-D-glucopyranoside (MGP), ribose, sorbose and sorbitol) allowed presumptive identification of all E. faecalis strains (Efs lacks pigmentation and is arabinose, MGP and sorbose negative and sorbitol, mannitol and ribose positive). All presumptive Efs strains were confirmed using the API 20 STREP system (Biomerieux).

Microscope Motic SMZ 168B any microscope with transmitted illumination and 50X magnification should be sufficient
Streptomycin sulfate Fisher BioReagents BP910-50
Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium), Difco Becton Dickinson 236950
Trypticase Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium), BBL Becton Dickinson 211768
Yeast extract Acros 61180-1000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans. Science. 216, 1012-1014 (1982).
  2. Sawin, E. R. Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]. Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1996).
  3. Trent, C. Genetic and behavioral studies of the egg-laying system of Caenorhabditis elegans [dissertation]. Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1982).
  4. Chase, D. L., Koelle, M. R. Genetic analysis of RGS protein function in Caenorhabditis elegans. Methods Enzymol. 389, 305-320 (2004).
  5. Trent, C., Tsuing, N., Horvitz, H. R. Egg-laying defective mutants of the nematode Caenorhabditis elegans. Genetics. 104, 619-647 (1983).
  6. Weinshenker, D., Garriga, G., Thomas, J. H. Genetic and pharmacological analysis of neurotransmitters controlling egg laying in Caenorhabditis elegans. J. Neurosci. 15, 6975-6985 (1995).
  7. Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans. Neuron. 21, 203-214 (1998).
  8. Bany, A., Dong, M., Koelle, M. R. Genetic and cellular basis for acetylcholine inhibition of Caenorhabditis elegans egg-laying behavior. J. Neurosci. 23, 8060-8069 (2003).
  9. Dempsey, C. M., Mackenzie, S. M., Gargus, A., Blanco, G., Sze, J. Y. Serotonin (5HT), fluoxetine, imipramine and dopamine target distinct 5HT receptor signaling to modulate Caenorhabditis elegans egg-laying behavior. Genetics. 169, 1425-1436 (2005).
  10. Leung, M. C., Williams, P. L., Bennedetto, A., Au, C., Helmcke, K. J., Aschner, M., Meyer, J. N. Caenorhabditis elegans: an emerging model in biomedical and environmental toxicology. Toxicol. Sci. 106, 5-28 (2008).
  11. Mylonakis, E., Aballay, A. Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions. Infect. Immun. 73, 3833-3841 (2005).
  12. Schafer, W. R. WormBook. WormBook. (2005).
  13. White, J., Southgate, E., Thomson, N., Brenner, S. The structure of the Caenorhabditis elegans nervous system. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314, 1-340 (1986).
  14. Desai, C., Garriga, G., McIntire, S. L., Horvitz, H. R. A genetic pathway for the development of the Caenorhabditis elegans HSN motor neurons. Nature. 336, 638-646 (1988).
  15. Garsin, D. A., Sifri, C. D., Mylonakis, E., Qin, X., Singh, K. V., Murray, B. E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. A simple model host for identifying Gram-positive virulence factors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 10892-10897 (2001).
  16. Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. A. Salmonella typhmurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 10, 1539-1542 (2000).
  17. O'Quinn, A. L., Wiegand, E. M., Jeddeloh, J. A. Burkholderia pseudomallei kills the nematode Caenorhabditis elegans using an endotoxin-mediated paralysis. Cell. Microbiol. 3, 381-393 (2001).
  18. Brenner, S. Genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  19. Harvey, S. C., Shorto, A., Orbidans, H. E. Quantitative genetic analysis of life- history traits of Caenorhabditis elegans in stressful environments. BMC Evol. Biol. 8, 15 (2008).
  20. Harvey, S. C., Orbidans, H. E. All eggs are not equal: the maternal environment affects progeny reproduction and developmental fate in Caenorhabditis elegans. PLoS One. 6, e25840 (2011).
  21. Klass MR, Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech. Ageing. Dev. 6, 413-429 (1977).
Måle effekten av bakterier på<em&gt; C. Elegans</em&gt; Behavior Ved hjelp av en Egg Retention analysen
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Gardner, M., Rosell, M., Myers, E. M. Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay. J. Vis. Exp. (80), e51203, doi:10.3791/51203 (2013).More

Gardner, M., Rosell, M., Myers, E. M. Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay. J. Vis. Exp. (80), e51203, doi:10.3791/51203 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter