Hele Mount immunolabeling av olfactory Receptor nevroner i<em> Drosophila</em> Antenne
Summary
Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Abstract
Odorant molekyler binder seg til sine mål reseptorer på en presis og koordinert måte. Hver reseptor gjenkjenner et bestemt signal, og videresender denne informasjonen til hjernen. Som sådan, å bestemme hvor lukte informasjon overføres til hjernen, å modifisere både persepsjon og oppførsel, fordeler undersøkelse. Interessant, det er nye bevis på at mobilnettet transduksjon og transkripsjonsfaktorer er involvert i spredning av olfactory reseptor nervecellen. Her gir vi en robust hel montere immunologisk merking metoden til analysen in vivo olfactory reseptor nervecellen organisasjon. Ved hjelp av denne metoden, identifiserte vi alle olfactory reseptor nerveceller med anti-ELAV antistoff, et kjent pan-nevrale markør og Or49a-mCD8 :: GFP, en olfactory reseptor nervecellen spesifikt uttrykt i NBA nevron bruker anti-GFP antistoff.
Introduction
Den olfaktoriske system blir brukt til å skille mellom et mangfold av luktmolekyler og deretter sende den resulterende informasjon til de høyere hjerne sentre. Denne inngangen brukes til nøyaktig kontroll grunnleggende dyreatferd, for eksempel fôring og parring 1-6. Som hver lukte nevron type er forbundet med et bestemt sett av lukt, spredning av olfactory reseptor nevroner (ORN) s er avgjørende for riktig luktsystemet funksjon 7.
Drosophila genetikk gjør oss i stand til å utføre enkelt celle nivå etterforskningen involverer molekylære mekanismene forbundet med ORN utvikling og fysiologiske funksjon 8-16. Hele fjellet farging av Drosophila antenner har gjort oss i stand til å forstå i større detalj de molekylære mekanismene som er involvert i spredning av olfactory reseptor nevroner (ORN) s 7. Heri vi gi en omfattende beskrivelse av en enkel metode for å achieve dette.
Protocol
Representative Results
Discussion
Den disseksjon av Drosophila antennen beskriver vi er enkel og lett å utføre i et laboratorium setting. For å sikre en vellykket disseksjon, er det viktig å utnytte fin-edged saks. Mens farging av den dissekerte antenne, er det viktig å inkubere dem i en fuktighetsfylt beholder for å unngå fordamping av antistoffløsningen. Den dissekert antennen har en tendens til å flyte i løsningen. Ved hjelp av 0,1% Triton i PBS under fiksering og blokkeringstrinn som vil lette nedsenking av antennen i løsningen, …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denne studien ble støttet av mext-støttede Program for Strategic Research Foundation på private universiteter og JSPene Young Scientist B stipend for HT Vi ønsker å takke Ohtake Norihito å redigere videoklippene.
Materials
| Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
| Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
| Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
| Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
| Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |
References
- Christensen, T. A., White, J. . Representation of olfactory information in the brain In The Neurobiology of Taste and Smell. , 201-232 (2000).
- Ache, B. W. Towards a common strategy for transducing olfactory information. Sem. Cell Biol. 5, 55-63 (1994).
- Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction. C. elegans. Cell. 13, 515-527 (1993).
- Barth, A. L., Justice, N. J., Ngai, J. Asynchronous onset of odorant receptor expression in the developing zebrafish olfactory system. Neuron. 16, 23-34 (1996).
- Firestein, S. How the olfactory system makes sense of scents. Nature. 413, 211-218 (2001).
- Stockinger, P., et al. Neural circuitry that governs Drosophila male courtship behavior. Cell. 121, 795-807 (2005).
- Endo, K., et al. Chromatin modification of Notch targets in olfactory receptor neuron diversification. Nat Neurosci. 15, 224-233 (2011).
- Karim, M. R., Moore, A. W. Morphological analysis of Drosophila larval peripheral sensory neuron dendrites and axons using genetic mosaics. J Vis Exp. , (2011).
- Suh, G. S., et al. A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila. Nature. 431, 854-859 (2004).
- Sachse, S., Galizia, C. G. Role of inhibition for temporal and spatial odor representation in olfactory output neurons: A calcium imaging study. J Neurophysiol. 87, 1106-1117 (2002).
- Hallem, E. A., Ho, M. G., Carlson, J. R. The molecular basis of odor coding in the Drosophila antenna. Cell. 117, 965-979 (2004).
- Vosshall, L. B., Wong, A. M., Axel, R. An olfactory sensory map in the fly brain. Cell. 102, 147-159 (2000).
- Couto, A., Alenius, M., Dickson, B. J. Molecular, anatomical and functional organization of the Drosophila olfactory system. Curr Biol. 15, 1535-1547 (2005).
- Clyne, P., et al. Odorant response of individual sensilla on the Drosophila antenna. Invert Neurosci. 3, 127-135 (1997).
- Vosshall, L. B., et al. A spatial map of olfactory receptor expression in the Drosophila antenna. Cell. 96, 725-736 (1999).
- Wang, J. W., et al. Two-photon calcium imaging reveals an odor-evoked map of activity in the fly brain. Cell. 112, 271-282 (2003).
