Summary
Um modelo de tumor do rato do estresse cirúrgico é usado para explorar como a imunossupressão pós-operatória promove a doença metastática e avaliar terapias perioperatórios immunostimulatory.
Abstract
A ressecção cirúrgica é um tratamento fundamental para a maioria dos pacientes de cancro, mas a cirurgia induz disfunção do sistema imune e isto tem sido associada ao desenvolvimento da doença metastática em modelos animais e em doentes com cancro. Trabalho pré-clínico do nosso grupo e outros demonstraram uma profunda supressão da função imune inata, especificamente células NK no período pós-operatório e este desempenha um papel importante no desenvolvimento de metástases reforçada após a cirurgia. Relativamente poucos estudos com animais e ensaios clínicos têm-se centrado na caracterização e reverter os efeitos negativos da cirurgia de câncer. Utilizando um modelo animal rigorosa de metastização espontânea tumores e estresse cirúrgico, foi demonstrado o aumento da cirurgia do cancro no desenvolvimento de metástases do pulmão. Neste modelo, as células de cancro da mama 4T1 são implantados na almofada de gordura mamaria do rato. No dia 14 pós implantação do tumor, a ressecção completa do tumor mamário primário é performed em todos os animais. Um subconjunto de animais recebe estresse cirúrgico adicional sob a forma de uma nefrectomia abdominal. No dia 28 de nódulos tumorais de pulmão são quantificados. Quando a imunoterapia foi determinada imediatamente antes da cirurgia, uma profunda activação das células imunes, que inibem o desenvolvimento de metástases após cirurgia foi detectado. Enquanto o modelo de cirurgia do tumor da mama 4T1 permite a simulação dos efeitos de estresse cirúrgico abdominal em metástases de tumores, a sua aplicabilidade a outros tipos de tumor deve ser testado. O desafio atual é identificar immunotherapies seguros e promissores em modelos pré-clínicos de mouse e traduzi-los em terapias perioperatórios viáveis para ser dado aos pacientes de cirurgia de câncer para prevenir a recorrência da doença metastática.
Introduction
A cirurgia é um componente crítico no tratamento do cancro curativo de tumores sólidos, mas apesar da ressecção completa, muitos pacientes desenvolvem uma recidiva metastática e por fim a morte da sua doença. Cada vez mais, o período pós-operatório, como um resultado da resposta ao stress fisiológico para a cirurgia, incluindo a coagulação do sangue, a libertação de factores de crescimento, e a supressão imunitária, é reconhecido que o tempo crítico para o desenvolvimento de metástases. O nosso grupo 1,2 e 3-5 outros têm mostrado que o período pós-operatório imediato é um tempo excepcionalmente susceptíveis para a formação de metástases.
Um dos principais mecanismos responsáveis pelos efeitos prometastatic da cirurgia é a disfunção pós-operatória de células natural killer (NK), as células 1-3. As células NK são linfócitos citotóxicos do sistema imune inato envolvida no controle do crescimento de tumores e metástases 6. A disfunção de células NK após a cirurgia tenha sido documentada in tanto pacientes humanos 1,7-9 e modelos animais 1,10,11. Supressão de células NK no pós-operatório se correlaciona com o aumento das metástases em modelos animais de metástases espontâneas e implantados 1,11-14, enquanto que em estudos com humanos, baixa atividade NK durante o período perioperatório está associada a uma maior taxa de recorrência e mortalidade 15,16 câncer.
Apesar disso, não existem actualmente terapias contra o câncer que abordam especificamente as alterações prometastatic que ocorrem imediatamente após a cirurgia de câncer. O período perioperatório representa uma janela terapêutica de oportunidade em que para intervir no processo metastático. Enquanto as terapias do cancro tradicionais, tais como a quimioterapia citotóxica, são consideradas demasiado tóxico para ser administrado a doentes em recuperação de uma cirurgia 17, terapias imunológicas são candidatos ideais para a administração perioperatória. Utilização perioperatória de recombinante IL-2 e IFN-y foram exploradas in fase inicial de ensaios clínicos que demonstram seu potencial para evitar a supressão de células NK no pós-operatório e melhorar a sobrevida livre de progressão 18-21. Infelizmente, o desenvolvimento tem sido dificultada pela tolerabilidade desta terapia citocina inespecífica combinado com grande cirurgia 17. Os vírus também são potentes ativadores inespecíficos das células NK. A nossa investigação tem demonstrado previamente que a administração pré-operatória de vírus em replicação, como novos medicamentos anti-cancro Oncolíticos Vírus (OV) e nonreplicating vacinas virais, tais como a vacina da gripe, pode inibir a disfunção das células NK induzido pela cirurgia e atenuar a doença metastática 1,22.
O modelo cirúrgico descrito neste trabalho tem facilitado a nossa compreensão dos mecanismos envolvidos na propagação e crescimento de células tumorais após a cirurgia e nos permitiu explorar novas terapias alvo que podem ser administradas no período perioperatório. Para atingir esta meta, um animalmodelo de estresse cirúrgico e espontânea maço metástase desenvolvidos. O modelo faz uso de tumores de carcinoma da mama do rato (Balb / c 4T1) - que são capazes de formar metástases espontaneamente a partir da glândula mamaria primária para múltiplos locais distantes, em particular os pulmões. No dia 0, as células de cancro da mama são implantadas no rato almofada de gordura da mama. No dia 14 pós implantação do tumor, a ressecção completa do tumor mamário primário é realizada em todos os animais. Um subconjunto de animais recebe estresse cirúrgico adicional sob a forma de uma nefrectomia abdominal. No dia 28 de nódulos tumorais de pulmão em salientou cirurgicamente e sem controle camundongos cirurgia comparação são isolados e quantificados. Neste modelo animal de cancro e a cirurgia, os efeitos da cirurgia em metástases do cancro são estudadas e a eficácia da administração perioperatória de imunoterapias inovadoras, incluindo a replicação e nonreplicating imunes-estimulantes baseados viralmente são testados para o primeiro tempo.
Protocol
1. Mantendo 4T1 Células Tumorais in vitro
- Cultura de células tumorais modificadas 4T1 em DMEM completo (DMEM, 10% FBS, 1x penicilina / estreptomicina), em placas de cultura de tecidos de 10 cm. Incubar a 37 ° C, 5% de CO 2 de cultura de tecidos incubadora.
- Culturas Dividir 2-3 vezes / semana. Para manter a viabilidade das células óptimas não deve exceder 80% de confluência. Não use pilhas para o estabelecimento in vivo tumores primários se as culturas foram repicadas in vitro por> 1 mês, pois isso diminui a malignidade e potencial metastático de células anteriormente subculturas.
2. Colheita 4T1 Células Tumorais para Injeção
- Aspirar o meio de cultura a partir da placa de cultura de tecido utilizando uma pipeta de Pasteur.
- Adicionar 10 ml de 1x PBS estéril contendo 2 ml de EDTA. Deixe a solução de PBS incubar na placa a 37 ° C, 5% de CO 2 de tecido de cultura incubadora durante 5-7 min.
- Colheita solução PBS a partir de chapa, rinsing a placa 2-3x com solução, a transferência para 15 ml de tubo cónica.
- Centrifugar células durante 5 min a 500 xg, a 4 ° C, numa centrífuga de bancada.
- Aspirar o sobrenadante e ressuspender o sedimento de células em MEMD isento de soro.
- Determinar a concentração de células utilizando um contador de células.
- Diluir as células em meio isento de soro para 1x10 6 cells/500 ul (1x10 5 células/50 ul (para injecção e colocar as células em gelo.
3. Injetando Ratos com 4T1 Células Tumorais
Todos os estudos com animais realizados foram de acordo com as diretrizes institucionais nos Serviços Veterinários Cuidados Animais da Universidade de Ottawa recomendações para todos os animais que receberam injeções ortotópico ou implantes tumorais.
- Trate os ratos por via subcutânea com buprenorfina (0,05 mg / kg) 1 hora antes da cirurgia para tratamento da dor.
- Induzir e manter o mouse sob anestesia com isoflurano 2,5% durante o período de duração do injeçãoção. Aperte a pata do rato para detectar resposta reflexa. Se nenhuma for detectada, os níveis eficazes de anestesia são atingidos. Lubrificante ocular esterilizada é então aplicado, para evitar a secagem da córnea.
- Coloque um 30 G ½ na seringa "Ultra-fino" com exatamente 50 mL de células suspensão. Certifique-se de que todas as bolhas de ar são removidas da seringa coluna tocando no lado da seringa para retirar as bolhas de ar.
- Coloque o mouse (sob anestesia) ventral voltada para cima.
- Limpe o local da injecção com um algodão embebido em álcool e introduzir a agulha na horizontal e diretamente para o quarto bloco de gordura mamária, dispensar lentamente o volume de seringa.
- Utilize um cotonete para limpar qualquer vazamento possível.
- Permitir que os ratos recuperar da anestesia.
- Manter buprenorfina (0,05 mg / kg) para o manejo da dor administrada sc cada 8 horas, durante 2 dias.
4. Administrando Tratamento Perioperatória em 4T1 Tumor Tendo BALB / c Mice
- Aos 13 dias de injeção de células pós-tumor, medir o tumor primário usando um paquímetro externo. Meça o maior diâmetro longitudinal (comprimento) eo maior diâmetro transversal (largura) com a pinça. A fórmula elipsoidal modificado é usado para calcular o volume do tumor (volume do tumor = 1/2 (comprimento de uma largura de 2)
- Aos 13 dias de injeção de células pós-tumor, o tumor primário deve medir cerca de 1 cm 3. Quando esta medida do tumor é atingido, preparar reagente terapia perioperatória.
- Vírus oncolítico é uma terapêutica inovadora que se pode administrar no período perioperatório. Prepare vírus oncolítico (1x10 9 UFP / 1 ml) em 1x PBS estéril e colocar em gelo, antes da injecção.
- Rato Seguro e lugarem limitador para injecção intravenosa veia da cauda.
- Gentilmente aqueça cauda do rato na água quente da torneira para visualizar veias da cauda laterais.
- Coloque um 27 G ½ em "seringa de insulina", com precisão de 100 l de terapia vírus oncolítico. Certifique-se de que todas as bolhas de ar são removidas da seringa coluna.
- Injetar o mouse com 1x10 8 PFU/100 mL / rato para uma das veias da cauda laterais. Se a agulha está adequadamente inserido na veia lateral, sem resistência deve ser sentida quando pressionando a seringa.
5. A ressecção completa do tumor primário e abdominal Esquerda Nephrectomy
- Aos 14 dias de injeção de células pós-tumor, iniciar cuidados perioperatórios rotina seguinte Universidade de Ottawa Animal Care e Serviço Veterinário aprovado protocolos. Trate os ratos por via subcutânea com buprenorfina (0,05 mg / kg) 1 hora antes da cirurgia para tratamento da dor. Induzir e manter a anestesia utilizando 2,5% de isoflurano durante a cirurgia. Under condições e utilizando instrumentos cirúrgicos estéreis esterilizados, local da cirurgia é raspado e limpo. Animais são administrados fluidos subcutâneos e lubrificante ocular antes da cirurgia.
- Fazer uma pequena incisão (1-2 cm de comprimento) para suavemente e remover completamente o tumor primário 4T1 de almofada de gordura mamaria.
- Feche a incisão com 2-3 9 milímetros grampos.
- Exponha o abdômen, cortando através da pele e tecido subcutâneo ao longo da linha média ventral do rato.
- Faça uma incisão na linha alba (3-4 cm) para acessar o mouse peritônio.
- Exponha o lado interior esquerdo do abdômen, movendo as entranhas sobrejacentes para o lado. Certifique-se que os intestinos são mantidos úmido com uma solução salina embebido gaze estéril.
- Usando um par sem corte de pinça cirúrgica, segure suavemente o rim esquerdo.
- Usando um fio de seda trançada revestida 3-0 cera amarrado em um laço, ligadura do hilo do rim esquerdo e prenda com 3 nós cirúrgicos. Retire o rim esquerdo com Surgitesoura cal.
- Inspecione o empate sutura cuidadosamente para garantir que hemostasia adequada seja alcançada.
- Feche a camada subcutânea com uma sutura loop contínuo usando 5-0 trançado camada de pele absorvível, em seguida, usando grampo 9 milímetros grampos. Passos 5,2-5,10 deve exigir 10 min / animal.
- Manter buprenorfina (0,05 mg / kg) para o manejo da dor administrada sc cada 8 horas, durante 2 dias.
6. Eutanásia Ratos e Processamento e Quantificação de pulmão Tumor Burden
- Aos 28 dias pós-injeção 4T1 tumor, eutanásia camundongos de acordo com a Animal Care e Serviços Veterinários protocolo da Universidade de Ottawa.
- Spray para baixo do mouse com etanol 70%.
- Fazer incisão inicial com uma tesoura, logo abaixo da caixa torácica.
- Expor o tórax, cortando através da pele e na camada subcutânea na linha média ventral da cavidade torácica do rato.
- Faça incisões laterais através da pele e do tecido de cada lado até o neck do mouse.
- Dissecar os pulmões agarrando suavemente o pulmão, enquanto cortando fora o tecido conjuntivo acima e abaixo dos pulmões.
- Presoak extraído pulmões em PBS frio para remover o sangue residual, em seguida, coloque em 10% de formalina tamponada a.
- Fotografia cada pulmão para avaliação de metástases tumorais. Pesar pulmões para carga tumoral quantificação.
Representative Results
Um modelo reprodutível rato de estresse cirúrgico, que resulta no aumento dramático de metástases pulmonares foi desenvolvido. No dia 28 após a inoculação do tumor 4T1 (e 14 dias após a ressecção do tumor + / - nefrectomia abdominal), os pulmões foram retirados e visualizados por metástases. Cirurgia aumenta claramente a quantidade de metástases pulmonares em comparação com ratos não tratados, como demonstrado por meio de fotografias de pulmão (Figura 1A), contagem de nódulos de pulmão (Figura 1B) e o peso do pulmão (Figura 1C). Administração pré-operatória de replicação do vírus oncolítico e vacina inativada contra influenza resgata significativamente os efeitos prometastatic de cirurgia de câncer (Figuras 1A-C).
Para determinar se as células NK desempenham um papel mediador na prevenção de metástases do tratamento pós-vacina, as células NK foram farmacologicamente esgotados usando anti-asialo GM-1 no modelo de metástases de tumores. Na ausência de NKcélulas, observou-se uma anulação do efeito terapêutico de imunoterapias perioperatórios (Figuras 2A e 2B). Estes dados sugerem que a remoção de metástases tumorais em nosso modelo estresse cirúrgico é mediada principalmente por meio de vírus e vacina contra a gripe ativação oncolítico das células NK e NK subseqüente lise tumoral mediada. Para melhor caracterizar a função das células NK após a administração perioperatória de vírus oncolítico e vacina contra a gripe, ex vivo NK morte celular foi avaliada. Resumidamente, agrupados e ordenados DX5 + células NK foram isolados a partir de esplenócitos de cirurgicamente forçado e ratinhos de controlo. Foram co-cultivadas durante 4 horas com crómio marcado YAC-1 de células alvo, em Effector diferentes para atingir proporções, seguido por medição da libertação de crómio sobrenadante com um contador gama. Um defeito significativo cirurgia induzida em citotoxicidade das células NK, juntamente com uma recuperação significativa da NK morte após a administração perioperatória de vírus oncolítico e influenza vacina em comparação com a cirurgia por si só foi observada (Figuras 2C e 2D). Tomados em conjunto, estes resultados demonstram que a supressão das células NK perioperatória podem ser tratados com sucesso e doença metastática reduzida com terapias imunoestimulantes novos.
Figura 1. Vacina de vírus influenza e Novel anti-câncer oncolítico como terapia perioperatória contra aumento induzido por cirurgia de metástases pulmonares. Avaliação da 4T1 metástases tumorais de pulmão no dia 28 de grupos de tratamento indicado pela (a) fotografias de pulmões representativos, (B) enumeração de tumor de pulmão nódulos e (C) pesos pulmonares. Os dados são representativos de três experiências semelhantes com n = 5-10/group (*, p = 0,01; **, p <0,0001; ns, não significativo). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2. Estresse cirúrgico aumenta metástases tumorais pulmonares, ao alterar as células NK. (A, B) Quantificação de metástases de tumores pulmonares em ratinhos salientou cirurgicamente tratados com terapia perioperatória romance. (C, D) A capacidade de DX5 + purificada a partir de células NK cirurgicamente forçado e controlos não tratados, para matar células tumorais. Os dados são apresentados como a percentagem média (+ / - SD) de libertação de crómio de poços triplicados para o E indicada: rácios t. Os dados são representativos de três experiências semelhantes em que n = 4-5/group (*, p = 0,01; **, p <0,005; ns, não significativa)./ Www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg "target =" _blank "> Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Discussion
A ressecção cirúrgica é o esteio da terapia para pacientes com tumores sólidos localizados. Mesmo com a ressecção completa, muitos pacientes desenvolvem uma recorrência metastática e, finalmente, morrer de sua doença. O período pós-operatório imediato fornece um ambiente ideal para a formação de metástases de cancro, modulada, em grande parte, pela supressão das células NK pós-operatório. Apesar disso, continua a ser uma janela terapêutica, que é largamente ignorado. Atualmente não há terapias anti-câncer perioperatórios padrão destinadas a prevenir metástases pós-operatórias. O desafio atual é identificar terapias seguras e promissoras que ativarão as células NK no período perioperatório impedindo assim o estabelecimento da doença micrometastática. Estas terapias devem ser rigorosamente caracterizados para a segurança e eficácia em modelos animais pré-clínicos e, em seguida, traduzido em ensaios clínicos cuidadosamente concebido.
A relação primárianale de desenvolver um modelo de tumor do rato do estresse cirúrgico é explorar mecanismos de supressão imunológica e metástase após a cirurgia e avaliar immunotherapies inovadores com potencial para uso futuro em pacientes com câncer submetidos a cirurgia para remover o tumor primário. Para alcançar este objetivo, foi desenvolvido um modelo de carcinoma mamário murino 4T1 juntamente com o estresse cirúrgico. Enquanto a linha celular 4T1 de murino é um "carcinoma mamário", a razão para utilizar esta linha de células é a reprodutibilidade das metástases espontâneas que nos permite avaliar os efeitos de trauma cirúrgico em um modelo de cancro realista. Neste contexto, a origem real da malignidade é menos importante do que a biologia do tumor e o potencial metastático. O segundo componente fundamental do nosso modelo é o desenvolvimento de um procedimento cirúrgico de animais para se assemelhar de perto a cirurgia de câncer humano. Neste modelo estresse cirúrgico animal, o principal 4T1 tumor de mama é retirado após atingir 1 cm3. Porquecirurgias de câncer em pacientes humanos envolvem supressão imunológica significativa, uma nefrectomia-abdômen aberto em grupos de tratamento "estresse cirúrgico" é adicionalmente realizada. Como ele se compara com a ressecção do tumor mais convencional em humanos, a natureza invasiva de uma nefrectomia esquerda completo é muito comparável a vários tipos de tratamentos cirúrgicos para tumores sólidos, incluindo a cirurgia para o câncer colorretal, câncer de ovário, câncer de rim, câncer de pâncreas, pulmão e esôfago câncer. Além disso, argumentam que as profundas mudanças fisiológicas que ocorrem no período perioperatório, devido à laparotomia + nefrectomia, reproduz adequadamente as mudanças fisiológicas que ocorrem esmagadora seguinte cirurgia invasiva para a maioria dos tumores sólidos. Para controlar fatores perioperatórios que podem levar ao estresse excessivo cirúrgico e mortalidade, a duração da anestesia e cirurgia e manter a temperatura do corpo durante a cirurgia é precisamente definido. Todos estes parâmetros são precisamente executado umd definido em nosso protocolo de cirurgia para espelhar cuidados perioperatórios de rotina em pacientes com câncer humanos.
O momento dos tratamentos perioperatória é um componente crítico adicional para o modelo de resgate perioperatória. Ratinhos portadores do tumor 4T1 tenham sido previamente tratados com 3 regimes de vacina contra a gripe: neoadjuvante (dada 5 dias antes da cirurgia), peri-operatória (dada no mesmo dia de cirurgia) e perioperatória + multidose (dada no dia da cirurgia, seguida por 2 doses adicionais dado 5 dias de intervalo). Notavelmente, todos os três modos de tratamento com a vacina diminuiu significativamente as metástases do pulmão 22. No entanto, a vacina contra a gripe administradas no período perioperatório em dose única metástases reduzidos de forma mais eficaz. Coletivamente, estas experiências destacar a importância do período perioperatório imediato como uma janela terapêutica estreita para intervir no processo metastático.
Uso perioperatório de imunoterapias inovadoras, tais como oncolytic vírus e vacinas foi exclusivamente limitada a nosso grupo de pesquisa. Nós demonstramos pela primeira vez que a administração perioperatória de vírus novo ORF oncolitico e vaccinia pode reverter a supressão das células NK após cirurgia em modelos animais 1. Mais importante ainda, este resgate da função imune correlaciona com uma diminuição da formação de metástases de pós-operatório. Em estudos humanos, os pacientes no pós-operatório de cirurgia de câncer tinham reduzido citotoxicidade das células NK e perioperatória OV aumenta significativamente a atividade das células NK em pacientes com câncer 1. Usando vacinas profiláticas disponíveis comercialmente, foi demonstrado que a administração da vacina da gripe perioperatória reduziu significativamente as metástases tumorais e melhorou a citotoxicidade das células NK em modelos de tumores pré-clínicos. Em estudos em humanos, a vacina contra influenza aumentou significativamente a atividade das células NK em doadores humanos saudáveis e pacientes de cirurgia de câncer 22.
Muitas abordagens são usadas para reduzir cancrecorrência er, incluindo quimioterapia e radioterapia, mas estas terapias são normalmente administrados semanas a meses antes (neoadjuvante) ou após (adjuvante) cirurgia. A investigação neste domínio mostra que o pós-operatório imediato é fundamental para determinar as taxas de recorrência do tumor a longo prazo. Assim, as intervenções clínicas em forma de imunoterapias durante este período crítico pode ter benefícios substanciais de longo prazo. Os nossos estudos usando um mouse modelo de metástase pulmonar espontânea e estresse cirúrgico oferecem uma oportunidade única para explorar novas terapias e determinar seu potencial para prevenir a imunossupressão perioperatório em pacientes de cirurgia de câncer e assim também reduzir as taxas de recorrência do câncer.
Disclosures
Os autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.
Acknowledgments
Os autores gostariam de agradecer a você Kim Yates, Eileen Franklin, e Rebecca Tjepkema (cuidados de animais e veterinários Serviços, Universidade de Ottawa) para assistência em cirurgias de animais. Lee Tai-Hwa é apoiado por uma Fonds de recherche santé Quebec Fellowship. Este trabalho foi apoiado por subvenções de funcionamento do Instituto de Pesquisa Canadian Cancer Society Inovação Grant, Ontario Ministry of Award Pesquisa e Desenvolvimento Pesquisador precoce e Fundação Canadense para Inovação - Líder do Opportunity Grant para Rebecca Auer.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Corning Cell-Gro | 10-013-CV | |
| Inactivated Fetal Bovine Serum (FBS) | HyClone | SH30396.03 | |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15070-063 | |
| 1x Sterile Phosphate Buffered Saline (PBS) | Corning Cell Gro | 21-031-CV | |
| Buprenorphine | Chiron, Guelph | RXN309968 | |
| Isoflurane | Baxter Corp | 1001936040 | |
| 1/2 Ultra-fine syringe | Terumo | 30 G, SS05M3009 | |
| 9 mm Staples | Braintree | ACS BX | |
| 5-0 Braided absorbable suture | Covidien | UL-202 | |
| 3-0 Wax braided silk suture | Covidien | S-194 | |
| Formalin | Fisher | SF100-20 | |
| 4T1 Tumor cells | ATCC | CRL-2539 | |
| BALB/c mice | Charles Rivers Labs | Strain Code:028 |
References
- Tai, L. H., et al. Preventing postoperative metastatic disease by inhibiting surgery-induced dysfunction in natural killer cells. Cancer Res. 73, 97-107 (2013).
- Seth, R., et al. Surgical Stress Promotes the Development of Cancer Metastases by a Coagulation-Dependent Mechanism Involving Natural Killer Cells in a Murine Model. Ann. Surg. , (2012).
- Shakhar, G., Ben-Eliyahu, S. Potential prophylactic measures against postoperative immunosuppression: could they reduce recurrence rates in oncological patients. Ann. Surg. Oncol. 10, 972-992 (2003).
- Shiromizu, A., et al. Effect of laparotomy and laparoscopy on the establishment of lung metastasis in a murine model. Surgery. 128, 799-805 (2000).
- Tsuchiya, Y., et al. Increased surgical stress promotes tumor metastasis. Surgery. 133, 547-555 (2003).
- Lanier, L. L. NK cell recognition. Annu. Rev. Immunol. 23, 225-274 (2005).
- Espi, A., Arenas, J., Garcia-Granero, E., Marti, E., Lledo, S. Relationship of curative surgery on natural killer cell activity in colorectal cancer. Dis. Colon Rectum. 39, 429-434 (1996).
- Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. Mechanism of surgical stress impairment of human perioperative natural killer cell cytotoxicity. Arch. Surg. 126, 338-342 (1991).
- Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. Surgical stress impairs natural killer cell programming of tumor for lysis in patients with sarcomas and other solid tumors. Cancer. 70, 2192-2202 (1992).
- Ben-Eliyahu, S., Page, G. G., Yirmiya, R., Shakhar, G. Evidence that stress and surgical interventions promote tumor development by suppressing natural killer cell activity. Int. J. Cancer. 80, 880-888 (1999).
- Page, G. G., Blakely, W. P., Ben-Eliyahu, S. Evidence that postoperative pain is a mediator of the tumor-promoting effects of surgery in rats. Pain. 90, 191-199 (2001).
- Glasner, A., et al. Improving survival rates in two models of spontaneous postoperative metastasis in mice by combined administration of a beta-adrenergic antagonist and a cyclooxygenase-2 inhibitor. J. Immunol. 184, 2449-2457 (2010).
- Benish, M., et al. Perioperative use of beta-blockers and COX-2 inhibitors may improve immune competence and reduce the risk of tumor metastasis. Ann. Surg. Oncol. 15, 2042-2052 (2008).
- Goldfarb, Y., et al. Improving postoperative immune status and resistance to cancer metastasis: a combined perioperative approach of immunostimulation and prevention of excessive surgical stress responses. Ann. Surg. 253, 798-810 (2011).
- Tartter, P. I., Steinberg, B., Barron, D. M., Martinelli, G. The prognostic significance of natural killer cytotoxicity in patients with colorectal cancer. Arch. Surg. 122, 1264-1268 (1987).
- Fujisawa, T., Yamaguchi, Y. Autologous tumor killing activity as a prognostic factor in primary resected nonsmall cell carcinoma of the lung. Cancer. 79, 474-481 (1997).
- Guillot, B., Bessis, D., Dereure, O. Mucocutaneous side effects of antineoplastic chemotherapy. Expert Opin. Drug Saf. 3, 579-587 (2004).
- Deehan, D. J., Heys, S. D., Ashby, J., Eremin, O. Interleukin-2 (IL-2) augments host cellular immune reactivity in the perioperative period in patients with malignant disease. Eur. J. Surg. Oncol. 21, 16-22 (1995).
- Houvenaeghel, G., et al. Tolerance and feasibility of perioperative treatment with interferon-alpha 2a in advanced cancers. Int. Surg. 82, 165-169 (1997).
- Klatte, T., et al. Perioperative immunomodulation with interleukin-2 in patients with renal cell carcinoma: results of a controlled phase II trial. Br. J. Cancer. 95, 1167-1173 (2006).
- Oosterling, S. J., et al. Perioperative IFN-alpha to avoid surgically induced immune suppression in colorectal cancer patients. Histol. Histopathol. 21, 753-760 (2006).
- Tai, L. H., et al. Perioperative influenza vaccination reduces post-operative metastatic disease by reversing surgery-induced dysfunction in natural killer cells. Clin Cancer Res. , (2013).
