Summary
Un modèle de tumeur de souris de stress chirurgical est utilisé pour explorer comment l'immunosuppression postopératoire favorise la maladie métastatique et pour évaluer les thérapies périopératoires immunostimulantes.
Abstract
La résection chirurgicale est un traitement essentiel pour la plupart des patients atteints de cancer, mais la chirurgie induit un dysfonctionnement dans le système immunitaire, ce qui a été liée au développement d'une maladie métastatique dans des modèles animaux et chez les patients cancéreux. Travail préclinique de notre groupe et d'autres ont démontré une suppression profonde de la fonction immunitaire innée, en particulier les cellules NK dans la période postopératoire et ce joue un rôle majeur dans le développement accru de métastases après la chirurgie. Relativement peu d'études sur les animaux et des essais cliniques ont porté sur la caractérisation et inverser les effets néfastes de la chirurgie du cancer. En utilisant un modèle animal rigoureuse des tumeurs métastasiques spontanément et le stress chirurgical, la mise en valeur de la chirurgie du cancer sur le développement des métastases pulmonaires a été démontrée. Dans ce modèle, des cellules de cancer du sein 4T1 sont implantées dans la souris coussinet adipeux mammaire. Au jour implantation de la tumeur 14 de poste, une résection complète de la tumeur mammaire primaire est performed chez tous les animaux. Un sous-groupe d'animaux reçoit le stress chirurgical supplémentaire sous la forme d'une néphrectomie abdominale. Au jour 28, nodules tumoraux du poumon sont quantifiés. Lorsque l'immunothérapie a été donnée immédiatement avant l'opération, une activation profonde des cellules immunitaires qui a empêché le développement de métastases après la chirurgie a été détectée. Bien que le modèle de la chirurgie de la tumeur du sein 4T1 permet la simulation des effets du stress chirurgical abdominal sur les métastases tumorales, son applicabilité à d'autres types de tumeur doit être testé. Le défi actuel est d'identifier les immunothérapies sûres et prometteuses dans des modèles précliniques de souris et de les traduire en thérapies périopératoires viables à être administré à des patients de chirurgie du cancer de prévenir la réapparition de la maladie métastatique.
Introduction
La chirurgie est une composante essentielle dans le traitement curatif du cancer de tumeurs solides, mais en dépit de résection complète, de nombreux patients développent une récidive métastatique et finalement mourir de leur maladie. De plus en plus, de la période post-opératoire, à la suite de la réponse à un stress physiologique pour la chirurgie, notamment la coagulation du sang, la libération de facteurs de croissance, et la suppression immunitaire, est reconnu comme temps critique pour le développement des métastases. Notre 1,2 de groupe et d'autres 5.3 ont montré que la période post-opératoire immédiate est un moment unique sensible à la formation de métastases.
L'un des principaux mécanismes responsables des effets prometastatic de la chirurgie est la dysfonction postopératoire de Natural Killer (NK) 1-3. Les cellules NK sont des lymphocytes cytotoxiques du système immunitaire inné impliquée dans le contrôle de la croissance tumorale et les métastases 6. Dysfonctionnement des cellules NK après la chirurgie a été documenté in deux patients humains 1,7-9 et des modèles animaux 1,10,11. La suppression des cellules NK postopératoire est corrélée avec une augmentation des métastases dans les modèles animaux de métastases spontanées et implantés 1,11-14, tandis que dans des études humaines, activité NK bas pendant la période péri-opératoire est associée à un taux de récidive du cancer et de la mortalité 15,16 ultérieure.
Malgré cela, il n'existe actuellement aucun traitement de cancer portant spécifiquement sur les changements qui se produisent prometastatic immédiatement après la chirurgie du cancer. La période périopératoire représente une fenêtre d'opportunité thérapeutique dans lequel d'intervenir dans le processus métastatique. Alors que les traitements du cancer traditionnels, tels que la chimiothérapie cytotoxique, sont considérés comme trop toxiques pour être administré à des patients qui se remettent d'une chirurgie majeure 17, thérapies immunitaires sont des candidats idéaux pour l'administration périopératoire. Utilisation périopératoire de l'IL-2 et IFN-Î ³ recombinant ont été explorées in première phase des essais cliniques démontrant leur capacité à empêcher la suppression postopératoire des cellules NK et améliorer la survie sans progression 18-21. Malheureusement, le développement a été entravé par la tolérance de ce traitement par une cytokine non spécifique associée à une intervention chirurgicale majeure 17. Les virus sont également des activateurs non spécifiques puissants des cellules NK. Notre recherche a déjà démontré que l'administration préopératoire de virus se répliquant, comme roman anti-cancer virus oncolytiques (OV), et nonreplicating vaccins viraux, tels que le vaccin de la grippe, peut inhiber NK dysfonctionnement cellulaire induite par la chirurgie et atténuer la maladie métastatique 1,22.
Le modèle chirurgical décrit dans le présent document a facilité notre compréhension des mécanismes impliqués dans la propagation et la croissance des cellules tumorales après la chirurgie et nous a permis d'explorer de nouvelles thérapies ciblées qui peuvent être administrés dans la période périopératoire. Pour atteindre cet objectif, un animalmodèle de stress chirurgical et la métastase spontanée wad développé. Le modèle utilise des tumeurs de carcinome mammaire de la souris (BALB / c 4T1) - qui sont capables de former des métastases spontanément à partir de la glande mammaire primaire de plusieurs sites distants, en particulier les poumons. Au jour 0, des cellules de cancer du sein sont implantés dans le coussinet adipeux mammaire de la souris. Au jour 14 après implantation de la tumeur, une résection complète de la tumeur mammaire primaire est réalisée dans tous les animaux. Un sous-groupe d'animaux reçoit le stress chirurgical supplémentaire sous la forme d'une néphrectomie abdominale. Au jour 28, les nodules de tumeur pulmonaire dans chirurgicalement souligné et aucune souris témoins par rapport à la chirurgie sont isolés et quantifiés. Dans ce modèle animal de cancer et de la chirurgie, les effets de la chirurgie sur les métastases cancéreuses sont à l'étude et l'efficacité de l'administration péri-opératoire des immunothérapies innovantes, y compris la replication et nonreplicating immuns stimulants à base de façon virale sont testés pour la première fois.
Protocol
Une. Le maintien 4T1 cellules tumorales in vitro
- des cellules tumorales non modifiées 4T1 de culture dans du DMEM complet (DMEM, 10% de FBS, 1 x pénicilline / streptomycine) dans des plaques de 10 cm pour culture de tissus. Incuber à 37 ° C, 5% CO 2 incubateur de culture tissulaire.
- cultures Split 2-3 fois / semaine. Pour maintenir les cellules de viabilité optimales ne doivent pas dépasser 80% de confluence. Ne pas utiliser des cellules pour établir des tumeurs primaires in vivo si les cultures ont été exposées in vitro pour> 1 mois à compter de cette malignité et diminue le potentiel métastatique de cellules à des passages plus tôt.
2. Récolte 4T1 cellules tumorales pour injection
- Aspirer le milieu de culture à partir de la plaque de culture de tissu à l'aide d'une pipette Pasteur.
- Ajouter 10 ml de PBS 1x stérile contenant 2 ml d'EDTA. Laisser la solution PBS incuber la plaque à 37 ° C, 5% de CO 2 incubateur de culture tissulaire pour 5-7 min.
- Solution PBS récolte de la plaque, rinsing la plaque 2-3x avec une solution, transférer 15 ml tube conique.
- Centrifuger les cellules pendant 5 min à 500 x g, à 4 ° C, dans une centrifugeuse de paillasse.
- Aspirer le surnageant et remettre en suspension le culot cellulaire dans du DMEM sans sérum.
- Déterminer la concentration des cellules en utilisant un compteur de cellules.
- Diluer les cellules avec du milieu sans sérum à 1x10 6 cells/500 ul (1x10 5 cellules/50 ul (pour injection et de placer les cellules sur de la glace.
3. L'injection des souris avec des cellules tumorales 4T1
Toutes les études réalisées sur l'animal étaient en conformité avec les directives institutionnelles aux Services vétérinaires de protection des animaux de l'Université d'Ottawa de recommandations pour tous les animaux recevant des injections ou des implants orthotopiques tumorales.
- Offrez-souris sous-cutanée avec la buprénorphine (0,05 mg / kg) 1 h avant la chirurgie pour la gestion de la douleur.
- Induire et maintenir une souris sous anesthésie à l'aide de 2,5% d'isoflurane pendant la durée de l'injectiontion. Pincez la patte de la souris pour détecter réponse réflexe. Si rien n'est détecté, les niveaux d'anesthésie efficaces sont atteints. Lubrifiant oculaire stérile est ensuite appliquée pour éviter un dessèchement de la cornée.
- Chargez un 30 G ½ en seringue "Ultra-fine" avec exactement 50 pi de suspension de cellules. S'assurer que toutes les bulles d'air sont éliminées de la colonne de seringue en appuyant sur le côté de la seringue afin de déloger les bulles d'air.
- Placez la souris (sous anesthésie) ventrale vers le haut.
- Nettoyez le site d'injection à l'aide d'un tampon imbibé d'alcool et d'introduire l'aiguille horizontalement et directement dans la 4ème coussinet adipeux mammaire, passer lentement le volume de la seringue.
- Utilisez un coton-tige pour nettoyer toute fuite possible.
- Permettre souris pour récupérer de l'anesthésie.
- Maintenir la buprénorphine (0,05 mg / kg) pour la gestion de la douleur sc administré toutes les 8 h pendant 2 jours.
4. Administrer le traitement péri-opératoire dans 4T1 tumorales portant souris BALB / c
- 13 jours d'injection de cellule post-tumorale, de mesurer la tumeur primaire à l'aide d'un étrier externe. Mesurer le plus grand diamètre longitudinal (longueur) et le plus grand diamètre transversal (largeur) de l'étrier. La formule ellipsoïdale modifiée est utilisée pour calculer le volume de la tumeur (volume de la tumeur = 1/2 (longueur, une largeur 2)
- 13 jours d'injection de cellules post-tumeur, la tumeur primaire doit mesurer environ 1 cm 3. Lorsque cette mesure est atteint d'une tumeur, de préparer le réactif de traitement péri-opératoire.
- Virus oncolytique est un thérapeutique innovante que l'on peut administrer pendant la période périopératoire. Préparer virus oncolytique (1x10 9 PFU / 1 ml) en 1x PBS stérile et placer sur la glace avant l'injection.
- Souris sécurisé et lieuen dispositif de retenue pour injection intraveineuse dans la veine caudale.
- Chauffer doucement la queue de la souris dans l'eau chaude du robinet pour visualiser latérales veines de la queue.
- Chargez un 27 G ½ "seringue à insuline" avec précisément 100 pi de traitement du virus oncolytique. Veiller à ce que toutes les bulles d'air sont éliminées de la colonne de la seringue.
- Injecter la souris avec 1x10 8 PFU/100 ul / souris à un des veines de la queue latérales. Si l'aiguille est correctement inséré dans une veine latérale, pas de résistance devrait être sentie en appuyant sur la seringue.
5. La résection complète de la tumeur et abdominale gauche néphrectomie
- 14 jours d'injection de cellule post-tumorale, initier les soins périopératoires routine suivante Université d'Ottawa Animal Care Service vétérinaire et protocoles approuvés. Offrez-souris sous-cutanée avec la buprénorphine (0,05 mg / kg) 1 h avant la chirurgie pour la gestion de la douleur. Induire et maintenir une anesthésie en utilisant 2,5% d'isoflurane pendant la chirurgie. Under conditions et en utilisant des instruments chirurgicaux stériles stérilisés, site chirurgical est rasée et nettoyée. Les animaux sont administrés fluides sous-cutanés et lubrifiant oculaire avant la chirurgie.
- Faire une petite incision (1-2 cm de longueur) pour enlever délicatement et complètement le primaire 4T1 tumeur du coussinet adipeux mammaire.
- Fermer l'incision avec 2-3 de 9 mm agrafes.
- Exposer l'abdomen en coupant à travers la peau et la couche sous-cutanée le long de la ligne médiane ventrale de la souris.
- Faire une incision à la ligne blanche (3-4 cm) pour accéder péritoine de la souris.
- Exposer le côté intérieur gauche de l'abdomen en déplaçant les entrailles recouvrant sur le côté. Assurez-vous que les intestins sont maintenues humides avec une gaze stérile saline trempé.
- En utilisant une paire de pinces chirurgicales émoussé, saisir le rein gauche doucement.
- L'utilisation d'un enduit de cire 3-0 suture tressée de soie noué dans une boucle, ligaturer le hile du rein gauche et le fixer avec 3 nœuds chirurgicaux. Retirez le rein gauche avec Surgiciseaux cal.
- Inspectez soigneusement la cravate de suture afin de s'assurer que l'hémostase adéquate est obtenue.
- Fermez la couche sous-cutanée avec une suture en boucle continue en utilisant 5-0 couche tressé résorbable, puis agrafer la peau à l'aide de 9 mm agrafes. Les étapes 5.2 à 5.10 doivent exiger 10 min / animal.
- Maintenir la buprénorphine (0,05 mg / kg) pour la gestion de la douleur sc administré toutes les 8 h pendant 2 jours.
6. Souris euthanasier et de traitement et la quantification des tumeurs du poumon fardeau
- 28 jours après l'injection de la tumeur 4T1, euthanasier les souris selon le soin des animaux et les services vétérinaires protocole à l'Université d'Ottawa.
- Arroser souris avec 70% d'éthanol.
- Faire une incision initiale avec des ciseaux juste en dessous de la cage thoracique.
- Exposer le thorax en coupant à travers la peau et la couche sous-cutanée le long de la ligne médiane ventrale de la cavité de la poitrine de la souris.
- Faire des incisions latérales à travers la peau et du tissu de chaque côté jusqu'à la neck de la souris.
- Disséquer les poumons en saisissant doucement le poumon tout en coupant loin le tissu conjonctif ci-dessus et ci-dessous les poumons.
- Presoak extrait poumons dans du PBS froid pour enlever les résidus de sang, puis placez dans 10% tamponnée de formaldéhyde.
- Photographier chaque poumon pour l'évaluation des métastases tumorales. Peser les poumons pour la quantification de la charge tumorale.
Representative Results
Un modèle de souris reproductible de stress chirurgical qui se traduit par l'amélioration spectaculaire des métastases pulmonaires a été développé. Au jour 28 après 4T1 inoculation de la tumeur (et 14 jours après la résection tumorale + / - néphrectomie abdominale), les poumons ont été récoltés et visualisés de métastases. Chirurgie augmente nettement la quantité de métastases pulmonaires par comparaison aux souris non traitées comme démontré par des images, des poumons (Figure 1A), le dénombrement des nodules pulmonaires (figure 1B) et le poids des poumons (Figure 1C). L'administration préopératoire de la réplication virale oncolytique et vaccin antigrippal inactivé sauve considérablement les effets prometastatic de la chirurgie du cancer (figures 1A-C).
Pour déterminer si les cellules NK jouent un rôle de médiateur dans la prévention des métastases traitement post-vaccin, les cellules NK ont été épuisés sur le plan pharmacologique utilisant des anticorps anti-asialo-GM-1 dans le modèle de métastase de la tumeur. En l'absence de NKcellules, nous avons observé une abrogation de l'effet thérapeutique de l'immunothérapie périopératoires (Figures 2A et 2B). Ces données suggèrent que la suppression des métastases tumorales dans notre modèle de stress chirurgical est principalement médiée par le virus de la grippe et le vaccin oncolytique activation des cellules NK et NK lyse tumorale médiée par la suite. Pour caractériser la fonction des cellules NK après l'administration périopératoire de virus oncolytique et vaccin contre la grippe, ex vivo des cellules NK meurtre a été évaluée. Brièvement, mis en commun et triés DX5 + les cellules NK ont été isolées à partir de splénocytes de chirurgicalement stressé et les souris témoins. Ils ont été co-cultivées pendant 4 heures avec du chrome marqué YAC-1 des cellules cibles, à l'effecteur à la cible différent ratios, suivie par mesure de la libération de chrome surnageant avec un compteur gamma. Une chirurgie défaut important induit dans cytotoxicité des cellules NK avec une reprise significative de NK meurtre après l'administration périopératoire de virus oncolytique et inflvaccin uenza par rapport à la chirurgie seule (figures 2C et 2D) a été observée. Pris ensemble, ces résultats démontrent que la suppression des cellules NK périopératoire peut être traitée avec succès et une maladie métastatique réduit avec de nouvelles thérapies immunostimulantes.
Figure 1. Nouveau vaccin anti-cancer oncolytique virus et la grippe comme traitement périopératoire contre l'amélioration induite par chirurgie des métastases pulmonaires. Évaluation de 4T1 métastases tumorales du poumon à jour 28 groupes de traitement indiqués par (A) des photos de poumons représentatifs, (B) l'énumération de tumeur du poumon nodules et (C) poids des poumons. Les données sont représentatives de 3 expériences similaires avec n = 5-10/group (*, p = 0,01; **, p <0,0001; ns, non significatif). S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 2. Stress chirurgical augmente métastases tumorales pulmonaires par l'altération des cellules NK. (A, B) Quantification de métastases de tumeurs du poumon chez les souris traitées par voie chirurgicale a souligné avec une thérapie périopératoire roman. (C, D) La capacité des DX5 + purifiées à partir de cellules NK chirurgicalement souligné et les témoins non traités pour tuer les cellules tumorales. Les données sont affichées comme pour cent de moyenne (+ / - écart-type) de libération de chrome de trois puits pour la indiquée rapports E: T. Les données sont représentatives de 3 expériences similaires où n = 4-5/group (*, p = 0,01; **, p <0,005; ns, non significatif)./ Www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg "target =" _blank "> S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Discussion
La résection chirurgicale est la pierre angulaire du traitement pour les patients atteints de tumeurs solides localisées. Même avec une résection complète, de nombreux patients développent une récidive métastatique et finissent par mourir de leur maladie. La période post-opératoire immédiate fournit un environnement idéal pour la formation de métastases cancéreuses, modulé, en grande partie, par la suppression postopératoire des cellules NK. Malgré cela, il reste une fenêtre thérapeutique qui est largement ignorée. Il n'existe actuellement aucun traitement anti-cancéreux périopératoires standards visant à prévenir les métastases postopératoires. Le défi actuel est d'identifier des thérapies sûres et prometteuses qui activent les cellules NK dans la période périopératoire empêchant ainsi l'établissement de la maladie micrométastatique. Ces thérapies doivent être caractérisés de façon rigoureuse pour la sécurité et l'efficacité dans des modèles animaux précliniques et ensuite traduits en essais cliniques soigneusement conçu.
Le rapport principalnale de développement d'un modèle de tumeur de souris de stress chirurgical est d'explorer les mécanismes de l'immunosuppression et la dissémination métastatique après chirurgie et d'évaluer les immunothérapies innovantes à fort potentiel pour une utilisation future chez les patients cancéreux qui subissent une chirurgie pour enlever la tumeur primaire. Pour atteindre cet objectif, un modèle murin 4T1 de carcinome mammaire couplé avec le stress chirurgical a été développé. Alors que la lignée cellulaire 4T1 est une souris "carcinome mammaire", la raison d'utiliser cette lignée cellulaire est la reproductibilité des métastases spontanées qui nous permet d'évaluer les effets du stress chirurgical dans un modèle de cancer réaliste. Dans ce contexte, l'origine réelle de la tumeur maligne est moins important que la biologie potentiel et tumeur métastatique. Le second composant essentiel de notre modèle est la mise au point d'une procédure chirurgicale animale pour ressembler étroitement la chirurgie du cancer humain. Dans cet animal chirurgicale modèle de stress, le primaire 4T1 tumeur du sein est excisé après avoir atteint 1 cm 3. Parce quechirurgies du cancer chez des patients humains impliquent la suppression immunitaire significative, une néphrectomie à ventre ouvert dans les groupes de traitement de «stress chirurgical» est en outre effectué. Comme il compare avec plus d'une résection tumorale classique chez les humains, le caractère invasif d'une néphrectomie totale gauche est très comparable à de nombreux types de traitements chirurgicaux pour les tumeurs solides, y compris une intervention chirurgicale pour un cancer colorectal, le cancer de l'ovaire, le cancer du rein, le cancer du pancréas, du poumon et de l'œsophage cancer. En outre, nous dirions que les changements physiologiques profonds qui se produisent en période périopératoire, en raison de la laparotomie + néphrectomie, reproduit adéquatement les changements physiologiques qui se produisent écrasante après la chirurgie invasive pour la plupart des tumeurs solides. Pour contrôler les facteurs périopératoires qui pourraient conduire à un excès de stress chirurgical et la mortalité, la durée de l'anesthésie et de la chirurgie et de maintenir la température du corps au cours de la chirurgie est précisément définie. Tous ces paramètres sont exécutés précisément uned définie dans notre protocole de chirurgie pour refléter les soins périopératoires routine chez les patients cancéreux humains.
Le calendrier des traitements périopératoires est un élément essentiel supplémentaire pour le modèle de sauvetage périopératoire. Souris porteuses 4T1 tumorales ont été précédemment traités avec 3 régimes de vaccin contre la grippe: néoadjuvante (donné 5 jours avant la chirurgie), périopératoire (donnée le même jour de la chirurgie) et périopératoire + multidose (donné le jour de la chirurgie, suivis par 2 doses supplémentaires donnés cinq jours d'intervalle). Remarquablement, les 3 modes de traitement de vaccin ont diminué de manière significative des métastases pulmonaires 22. Toutefois, le vaccin antigrippal administré en péri-opératoire en une seule dose métastases réduites plus efficacement. Collectivement, ces expériences mettent en évidence l'importance de la période péri-opératoire immédiat comme une fenêtre thérapeutique étroite à intervenir dans le processus métastatique.
Utilisation périopératoire d'immunothérapies innovantes telles que oncolyvirus tic et vaccins a été exclusivement limitée à notre groupe de recherche. Nous avons démontré pour la première fois que l'administration périopératoire de virus oncolytique roman de l'ORF et la vaccine peut inverser la suppression de cellules NK après la chirurgie dans des modèles animaux 1. Plus important encore, ce sauvetage de la fonction immunitaire est en corrélation avec une réduction de la formation de métastases post-opératoires. Dans les études humaines, les patients de chirurgie du cancer postopératoires avaient réduit cytotoxicité des cellules NK et périopératoire OV augmente nettement l'activité des cellules NK chez les patients cancéreux 1. Utilisation de vaccins prophylactiques disponibles dans le commerce, nous avons démontré que la grippe périopératoire administration du vaccin a réduit de façon significative les métastases tumorales et amélioré la cytotoxicité des cellules NK dans des modèles de tumeur précliniques. Dans les études humaines, le vaccin antigrippal amélioré de manière significative l'activité des cellules NK chez des donneurs humains en bonne santé et les patients de chirurgie du cancer 22.
Plusieurs approches sont utilisées pour réduire cancer récidive, y compris la chimiothérapie et la radiation, mais ces traitements sont habituellement administré semaines à quelques mois avant (néoadjuvante) ou après (adjuvant) chirurgie. La recherche dans ce domaine montre que la période post-opératoire immédiate est essentielle pour déterminer le taux de récidive de la tumeur à long terme. Par conséquent, les interventions cliniques sous la forme d'immunothérapies au cours de cette période critique peut avoir des avantages considérables à long terme. Nos études utilisant un modèle murin de métastases pulmonaires spontanées et stress chirurgical offrent une occasion unique d'explorer de nouvelles thérapies et de déterminer leur potentiel de prévenir l'immunosuppression périopératoire chez les patients de chirurgie du cancer et ainsi réduire également le taux de récidive du cancer.
Disclosures
Les auteurs déclarent aucun intérêt financier concurrents.
Acknowledgments
Les auteurs souhaitent te remercier Kim Yates, Eileen Franklin, et Rebecca Tjepkema (soins vétérinaires et de services, Université d'Ottawa) de l'aide pour les chirurgies d'animaux. Lee-Hwa Tai est soutenu par un Fonds de recherche du Québec Fellowship santé. Ce travail a été financé par des subventions de fonctionnement de l'Innovation Grant Institut de recherche de la Société canadienne du cancer, Ministère de la Recherche et du Développement Bourse de nouveaux chercheurs de l'Ontario et de la Fondation canadienne pour l'innovation - Subvention d'appui du chef de Rebecca Auer.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Corning Cell-Gro | 10-013-CV | |
| Inactivated Fetal Bovine Serum (FBS) | HyClone | SH30396.03 | |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15070-063 | |
| 1x Sterile Phosphate Buffered Saline (PBS) | Corning Cell Gro | 21-031-CV | |
| Buprenorphine | Chiron, Guelph | RXN309968 | |
| Isoflurane | Baxter Corp | 1001936040 | |
| 1/2 Ultra-fine syringe | Terumo | 30 G, SS05M3009 | |
| 9 mm Staples | Braintree | ACS BX | |
| 5-0 Braided absorbable suture | Covidien | UL-202 | |
| 3-0 Wax braided silk suture | Covidien | S-194 | |
| Formalin | Fisher | SF100-20 | |
| 4T1 Tumor cells | ATCC | CRL-2539 | |
| BALB/c mice | Charles Rivers Labs | Strain Code:028 |
References
- Tai, L. H., et al. Preventing postoperative metastatic disease by inhibiting surgery-induced dysfunction in natural killer cells. Cancer Res. 73, 97-107 (2013).
- Seth, R., et al. Surgical Stress Promotes the Development of Cancer Metastases by a Coagulation-Dependent Mechanism Involving Natural Killer Cells in a Murine Model. Ann. Surg. , (2012).
- Shakhar, G., Ben-Eliyahu, S. Potential prophylactic measures against postoperative immunosuppression: could they reduce recurrence rates in oncological patients. Ann. Surg. Oncol. 10, 972-992 (2003).
- Shiromizu, A., et al. Effect of laparotomy and laparoscopy on the establishment of lung metastasis in a murine model. Surgery. 128, 799-805 (2000).
- Tsuchiya, Y., et al. Increased surgical stress promotes tumor metastasis. Surgery. 133, 547-555 (2003).
- Lanier, L. L. NK cell recognition. Annu. Rev. Immunol. 23, 225-274 (2005).
- Espi, A., Arenas, J., Garcia-Granero, E., Marti, E., Lledo, S. Relationship of curative surgery on natural killer cell activity in colorectal cancer. Dis. Colon Rectum. 39, 429-434 (1996).
- Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. Mechanism of surgical stress impairment of human perioperative natural killer cell cytotoxicity. Arch. Surg. 126, 338-342 (1991).
- Pollock, R. E., Lotzova, E., Stanford, S. D. Surgical stress impairs natural killer cell programming of tumor for lysis in patients with sarcomas and other solid tumors. Cancer. 70, 2192-2202 (1992).
- Ben-Eliyahu, S., Page, G. G., Yirmiya, R., Shakhar, G. Evidence that stress and surgical interventions promote tumor development by suppressing natural killer cell activity. Int. J. Cancer. 80, 880-888 (1999).
- Page, G. G., Blakely, W. P., Ben-Eliyahu, S. Evidence that postoperative pain is a mediator of the tumor-promoting effects of surgery in rats. Pain. 90, 191-199 (2001).
- Glasner, A., et al. Improving survival rates in two models of spontaneous postoperative metastasis in mice by combined administration of a beta-adrenergic antagonist and a cyclooxygenase-2 inhibitor. J. Immunol. 184, 2449-2457 (2010).
- Benish, M., et al. Perioperative use of beta-blockers and COX-2 inhibitors may improve immune competence and reduce the risk of tumor metastasis. Ann. Surg. Oncol. 15, 2042-2052 (2008).
- Goldfarb, Y., et al. Improving postoperative immune status and resistance to cancer metastasis: a combined perioperative approach of immunostimulation and prevention of excessive surgical stress responses. Ann. Surg. 253, 798-810 (2011).
- Tartter, P. I., Steinberg, B., Barron, D. M., Martinelli, G. The prognostic significance of natural killer cytotoxicity in patients with colorectal cancer. Arch. Surg. 122, 1264-1268 (1987).
- Fujisawa, T., Yamaguchi, Y. Autologous tumor killing activity as a prognostic factor in primary resected nonsmall cell carcinoma of the lung. Cancer. 79, 474-481 (1997).
- Guillot, B., Bessis, D., Dereure, O. Mucocutaneous side effects of antineoplastic chemotherapy. Expert Opin. Drug Saf. 3, 579-587 (2004).
- Deehan, D. J., Heys, S. D., Ashby, J., Eremin, O. Interleukin-2 (IL-2) augments host cellular immune reactivity in the perioperative period in patients with malignant disease. Eur. J. Surg. Oncol. 21, 16-22 (1995).
- Houvenaeghel, G., et al. Tolerance and feasibility of perioperative treatment with interferon-alpha 2a in advanced cancers. Int. Surg. 82, 165-169 (1997).
- Klatte, T., et al. Perioperative immunomodulation with interleukin-2 in patients with renal cell carcinoma: results of a controlled phase II trial. Br. J. Cancer. 95, 1167-1173 (2006).
- Oosterling, S. J., et al. Perioperative IFN-alpha to avoid surgically induced immune suppression in colorectal cancer patients. Histol. Histopathol. 21, 753-760 (2006).
- Tai, L. H., et al. Perioperative influenza vaccination reduces post-operative metastatic disease by reversing surgery-induced dysfunction in natural killer cells. Clin Cancer Res. , (2013).
