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Neuroscience

थर्मल और यांत्रिक nociceptive रूपात्मकता का उपयोग कर चूहे में अफ़ीम प्रेरित hyperalgesia और एनाल्जेसिक सहिष्णुता का आकलन

Published: July 29, 2014 doi: 10.3791/51264
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Biotechnology and Cellular Signalling, UMR 7242 CNRS, Université de Strasbourg

Summary

हम opioid प्रेरित hyperalgesia और चूहों में सहिष्णुता के विकास की जांच के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन. भोले और अफ़ीम का इलाज पशुओं की थर्मल और यांत्रिक nociceptive प्रतिक्रियाओं के माप के आधार पर यह दर्द संवेदनशीलता (hyperalgesia) में वृद्धि यों और जीर्ण नशा प्रशासन के साथ जुड़े पीड़ानाश (सहिष्णुता) में कमी करने के लिए अनुमति देता है.

Abstract

Opioid प्रेरित hyperalgesia और सहिष्णुता गंभीर रूप से पशुओं और मनुष्यों में दर्द के रूप में opiates के नैदानिक ​​प्रभावकारिता को प्रभावित. दोनों घटनाएं अंतर्निहित आणविक तंत्र अच्छी तरह से समझ नहीं रहे हैं और उनकी व्याख्या पशु मॉडल के अध्ययन से और उचित प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के डिजाइन से लाभ चाहिए.

हम यहाँ, उत्प्रेरण रिकॉर्डिंग और जंगली प्रकार चूहों में पूंछ विसर्जन और पूंछ दबाव परीक्षण का उपयोग कर, एनाल्जेसिक सहिष्णुता साक्ष्य के लिए और साथ ही अफ़ीम प्रेरित hyperalgesia बढ़ाता के लिए एक methodological दृष्टिकोण का वर्णन. वीडियो में दिखाया गया है, प्रोटोकॉल पांच अनुक्रमिक चरणों में बांटा गया है. हैंडलिंग और आदी होना चरणों जानवरों के बेसल nociceptive प्रतिक्रिया का एक सुरक्षित निर्धारण की अनुमति. दोनों थर्मल और यांत्रिक संवेदनशीलता में वृद्धि के रूप में दिखाया द्वारा पुरानी अफ़ीम प्रशासन, महत्वपूर्ण hyperalgesia लाती है, जबकि बाद पीड़ानाश समय पाठ्यक्रमों की तुलना में तीव्र या प्रतिनिधिeated अफ़ीम उपचार स्पष्ट रूप से एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया आयाम में गिरावट से प्रकट सहिष्णुता के विकास को दर्शाता है. इस प्रोटोकॉल इसी nociception और अफ़ीम पीड़ानाश के मॉडुलन में व्यक्तिगत जीन की भूमिका का मूल्यांकन करने के क्रम में आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. यह भी नशा एनाल्जेसिक प्रभावकारिता में सुधार के लिए संभावित चिकित्सीय एजेंटों की प्रभावशीलता की जांच के लिए एक मॉडल प्रणाली प्रदान करता है.

Introduction

Opioid प्रेरित hyperalgesia (OIH) और एनाल्जेसिक सहिष्णुता पशुओं और मनुष्यों 1-3 में opiates के नैदानिक ​​प्रभावकारिता को सीमित. समर्थक भड़काऊ 4,5 या समर्थक nociceptive (एंटी opioid) 6,7 सिस्टम की भागीदारी फिलहाल परिकल्पना का पता लगाया जाता है. OIH और सहिष्णुता अंतर्निहित तंत्र की व्याख्या उचित पशु मॉडल, प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल और आणविक उपकरणों का उपयोग, vivo में इन विट्रो दृष्टिकोण में से एक संयोजन जरूरी है.

व्यवहार औषध विज्ञान प्रयोगशाला पशुओं में एनाल्जेसिक और hyperalgesic राज्यों पर नजर रखने और यों को प्रभावी प्रतिमान (चूहों, चूहों) है. पशु का एक सुविधाजनक शरीर के अंग (hindpaw, पूंछ) को एक हानिकारक प्रोत्साहन (थर्मल, यांत्रिक या रासायनिक) के आवेदन को आसानी से रन बनाए जा सकते हैं कि एक nocifensive वापसी की ओर जाता है.

हम OIH, उत्प्रेरण रिकॉर्डिंग और बढ़ाता के लिए यहां एक methodological दृष्टिकोण का प्रस्ताव है औरपूंछ विसर्जन और पूंछ दबाव परीक्षण का उपयोग कर जंगली प्रकार चूहों में सहिष्णुता,. प्रक्रिया चूहों में थर्मल और यांत्रिक nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों का एक आसान, संवेदनशील और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने के लिए दृढ़ संकल्प की अनुमति देता है. वीडियो प्रोटोकॉल में प्रदर्शन के रूप में, C57BL 6 / चूहों पुरानी अफ़ीम प्रशासन निम्नलिखित महत्वपूर्ण hyperalgesia अनुभव और कई दिनों के लिए यह बनाए रखें. दोनों थर्मल और यांत्रिक nociceptive मूल्यों में काफी भोले जानवरों पर आधारभूत माप की तुलना में कम कर रहे हैं. इसके अलावा, हमारे प्रयोगात्मक सेट अप OIH, अफ़ीम (सहिष्णुता) को एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया की गिरावट के विकास के अलावा, पर नजर रखने के लिए अनुमति देता है. प्रस्तुत आंकड़ों यह साहित्य 1,10-12 में विवादित है, हालांकि hyperalgesia और सहिष्णुता, आम सेलुलर और आणविक तंत्र 8,9 शामिल हो सकता है कि देखने का समर्थन है. अंत में, इस प्रोटोकॉल इसी MODULA में व्यक्तिगत जीन की भूमिका का मूल्यांकन करने के क्रम में आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों के लिए अनुकूलित किया जा सकता हैदर्द की tion. यह भी नशा एनाल्जेसिक प्रभाव में सुधार के लिए संभावित चिकित्सीय एजेंटों के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक मॉडल प्रणाली प्रदान करता है.

Protocol

सभी प्रयोगों प्रयोगशाला जानवरों (यूरोपीय समुदाय परिषद निर्देशक 86/609/ECC) और जागरूक जानवरों 13 में प्रयोगात्मक दर्द की जांच के लिए नैतिक दिशा निर्देशों की देखभाल के लिए यूरोपीय दिशा निर्देशों के साथ सख्त अनुसार किया गया. नर C57BL6 / एन टीएसी चूहों (10 सप्ताह, 25 - 30 ग्राम) पर्यावरण मानकों के अनुपालन में सुविधा के संचालन के आरोप में एक देखभाल करने वाले स्टाफ के साथ एक संस्थागत जानवरों की सुविधा में रखे थे. पशु समूहों में रखे थे भोजन और पानी के लिए स्वतंत्र पहुँच के साथ एक लगातार तापमान (21 ± 1 डिग्री सेल्सियस) पर एक 12 घंटा / 12 घंटे / प्रकाश अंधेरे चक्र के तहत (पिंजरे प्रति अधिकतम पांच चूहों). सभी प्रयोगों 16 चूहों की एक पलटन का उपयोग कर दिन की इसी अवधि (10:00-4:00) पर प्रदर्शन किया गया. विशिष्ट सामग्री और उपकरण सामग्री तालिका में संकेत कर रहे हैं.

अफ़ीम प्रेरित hyperalgesia और सहिष्णुता की निगरानी के लिए एक पांच कदम प्रक्रिया

प्रोटोकॉल है15 दिन संख्या 1 के एक अवधि के दौरान पांच अनुक्रमिक चरणों (एई) में बांटा गया.

. हैंडलिंग 1 चूहों (चरण एक, डी -7 डी -5)

  1. चूहों संभाल और आज़ादी restrainer में प्रवेश करने के लिए उन्हें आदत डालना. इस प्रकार तनाव प्रेरित पीड़ानाश के साथ किसी भी भ्रम की स्थिति को कम - - यह प्रारंभिक कदम तनाव को कम करता है और जानवरों माउस restrainer में से निपटने और जोड़ - तोड़, अन्वेषक के आदी होने के लिए अनुमति देता है. प्रत्येक माउस धीरे हर दिन 5 मिनट के लिए नियंत्रित किया जाता है.

2. बेसल nociceptive रिस्पांस (चरण बी, डी -1 डी -4)

  1. तेल विसर्जन टेस्ट (तैसा) का उपयोग पूंछ वापसी सुप्तावस्था उपाय:
    1. 48 डिग्री सेल्सियस के थर्मोस्टैट सेट
    2. धीरे restrainer में माउस परिचय. नहाने के पानी में अपनी पूंछ के फैलने वाला 2/3 अंत डुबकी और घड़ी शुरू करते हैं.
    3. जैसे ही माउस गर्म पानी से अपनी पूंछ निकाल लेता है के रूप में ठीक घड़ी बंद करो और (एसईसी) में विलंबता समय रिकॉर्ड है. वें मेंकिसी भी nociceptive प्रतिक्रिया की ई अभाव, एक 25 सेकंड कट ऑफ ऊतकों को नुकसान को रोकने के लिए प्रयोग किया जाता है.
    4. अपने पिंजरे में माउस की जगह और सीरीज के अंत तक अगले एक परीक्षण.
    5. उसी क्रम में जानवरों से माप लेने, nociceptive प्रतिक्रिया माप दो बार दोहराएँ. प्रत्येक माउस के लिए nociceptive प्रतिक्रिया विलंबता (एसईसी) लगातार तीन निर्धारण के लिए मतलब मूल्य के रूप में निर्धारित किया जाता है.
  2. टेल दबाव टेस्ट (टीपीटी) का उपयोग यांत्रिक प्रतिक्रियाओं को मापने
    1. धीरे restrainer में माउस परिचय और analgesimeter के शांकव टिप के तहत अपनी पूंछ की स्थिति.
    2. पहले nociceptive प्रतिक्रिया (संघर्ष, squeaking) तब होता है जब तक पूंछ के समीपस्थ भाग पर समान रूप से बढ़ते दबाव लागू करने के लिए पैर स्विच दबाते हैं. पशु प्रति प्रतिक्रिया समय, nociceptive प्रतिक्रिया elicits कि (ग्राम में) वर्तमान बल रिकॉर्ड. किसी भी प्रतिक्रिया के अभाव में, एक 600 ग्राम कट ऑफ मूल्य टी से बचने के लिए किया जाता हैक्षति जारी करते हैं.
    3. एक ही माउस की पूंछ की औसत और बाहर का भागों पर इस उपाय को दोहराएँ. कम से कम 30 सेकंड के अंतराल के अनुकूलन या तनाव पूर्वाग्रह से बचने के लिए एक दिया माउस पर उपायों के बीच मनाया जाता है. अपने पिंजरे में माउस की जगह और श्रृंखला (यानी सभी चूहों जांच की जाती है) के अंत तक अगले पशु परीक्षा. प्रत्येक माउस के लिए nociceptive मूल्य (ग्राम) तीन माप (यानी समीपस्थ, मंझला और प्रत्येक जानवर की पूंछ के बाहर का भागों) के लिए मतलब मूल्य के रूप में लिया जाता है.
  3. बाद के दिनों पर दोहराना nociceptive परीक्षण (सभी प्रक्रियाओं चरण 2 के तहत उल्लिखित), डी 3 डी -1 के लिए.

. अफ़ीम Analgesia के 3 मापन (चरण सी, D0)

  1. स्थिर और तुलनीय औसत nociceptive मूल्यों के साथ चूहों के दो समूहों (समूह प्रति एन = 8), जो भी nociceptive साधन (तैसा या टीपीटी) के चयन में माना जाता है की अनुमति देता है कि जानवरों का सबसे अच्छा संयोजन को परिभाषित करें. यह मान बेसल रूप में ले जाया जाएगाभविष्य 'खारा' और 'अफ़ीम' समूहों के लिए संदर्भ की nociceptive प्रतिक्रिया.
  2. प्रत्येक जानवर के शरीर के वजन को मापने.
  3. चमड़े के नीचे प्रशासन (जानवर के शरीर के वजन के प्रति किलोग्राम 5 मिलीग्राम अफ़ीम) के लिए बाँझ शारीरिक खारा (NaCl 0.9%) में एक अफ़ीम समाधान (एमएल प्रति 0.5 मिलीग्राम अफ़ीम) तैयार करें.
  4. दोनों 'खारा' और तैसा 'में अफ़ीम' समूह (ऊपर 2.1 के तहत सभी चरण) के प्रत्येक माउस के लिए (समय बिंदु 0 के रूप में लिया) nociceptive प्रतिक्रिया विलंबता उपाय. फिर टीपीटी में (ऊपर 2.2 के तहत सभी चरण) nociception उपाय.
  5. क्रमशः, 'अफ़ीम' और 'नमकीन' समूहों के लिए subcutaneously अफ़ीम (25 ग्राम माउस के वजन के प्रति एक 0.5 मिलीग्राम / एमएल अफ़ीम समाधान की आम तौर पर 0.25 मिलीग्राम) और नमकीन (25 ग्राम माउस के वजन के प्रति 0.25 मिलीग्राम) इंजेक्षन.
  6. एक समय पाठ्यक्रम पर तैसा और टीपीटी पर nociceptive मान (नीचे से ऊपर उल्लिखित सभी प्रक्रियाओं क्रमश: 2.1 और 2.2 कदम) (माप 30 मिनट interv परअल) अफ़ीम का आकलन करने के लिए (5 मिलीग्राम / किग्रा) प्रेरित पीड़ानाश:
    1. 30 मिनट के बाद इंजेक्शन के बाद, तैसा तो टीपीटी का उपयोग कर, 'खारा' और 'अफ़ीम' समूहों में से प्रत्येक माउस के लिए nociceptive प्रतिक्रिया (एक दृढ़ संकल्प) को मापने.
    2. 1-1.5-2-2.5-3 और 3.5 के बाद इंजेक्शन: तो (मानव संसाधन) में समय बिंदुओं पर सभी चूहों में nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों (तैसा और टीपीटी) उपाय.

4 लगातार अफ़ीम उपचार - hyperalgesia अफ़ीम प्रेरित किया. (चरण डी, डी 6 के लिए डी 1)

  1. दिन में: डी 1
    1. (2.1 और 2.2 कदम) के रूप में ऊपर वर्णित तैसा और टीपीटी पर nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों उपाय. ध्यान से वापसी सुप्तावस्था और प्रत्येक जानवर के लिए दबाव सीमा व्याख्या.
    2. 3.2 कदम में विस्तृत रूप में एक ताजा अफ़ीम समाधान तैयार करें.
    3. 'खारा' समूह के लिए पूरे 'अफ़ीम' समूह और शारीरिक खारा (25 ग्राम माउस के वजन के प्रति 0.25 मिलीलीटर) को subcutaneously अफ़ीम (5 मिलीग्राम / किग्रा BW) इंजेक्षन. चलो वेंई जानवरों अगले दिन तक आराम.
  2. दिन में: डी 2, डी 3, D4, D5 और धारा 4.1 के तहत वर्णित आपरेशन दोहराने D6

. एनाल्जेसिक सहिष्णुता के लिए 5 साक्ष्य (चरण ई, डी 7)

  1. पहले से ही धारा 3 में विस्तृत समय पाठ्यक्रम प्रतिमान के अनुसार अफ़ीम प्रेरित पीड़ानाश मूल्यांकन.

6. डाटा अधिग्रहण और सांख्यिकीय विश्लेषण

  1. बेसल nociceptive रिस्पांस मूल्यों का आकलन (चरण B)
    1. प्रत्येक दिन के लिए की गणना (अधिक डी -4 डी -1 की अवधि के लिए) SEM मूल्यों मतलब ± (एन = 8) 'खारा' और 'अफ़ीम' समूहों के भीतर तैसा और टीपीटी से afforded के रूप में बेसल nociceptive प्रतिक्रिया के लिए.
    2. दोनों समूहों के 2 व्यक्ति के लिए प्लॉट समय (दिन) के एक समारोह के रूप में बेसल nociceptive मूल्यों मतलब.
  2. दिन D0 में अफ़ीम Analgesia समय पाठ्यक्रम के विश्लेषण (चरण सी) और D7 (चरण ई)
    1. अफ़ीम के बाद हर समय बिंदु पर गणनाइंजेक्शन, SEM मूल्यों मतलब ± (एन = 8) प्रत्येक समूह में (सेकंड में) तैसा से afforded और टीपीटी (G में) के रूप में nociceptive प्रतिक्रिया के लिए.
    2. प्लॉट दिन में 'खारा' और 'अफ़ीम' समूहों के लिए समय के एक समारोह 0 चित्रा 3 और सुबह 7 चित्रा 5 के रूप में nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों मतलब.
  3. अफ़ीम प्रेरित hyperalgesia (चरण डी) के विकास
    1. (D0-D7 अवधि में इलाज) प्रत्येक दिन के लिए की गणना SEM मूल्यों मतलब ± (एन = 8) 'खारा इलाज' और 'अफ़ीम का इलाज' समूहों के भीतर तैसा और टीपीटी से afforded के रूप में बेसल nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों के लिए.
    2. प्लॉट 'खारा इलाज' और 'अफ़ीम का इलाज' समूहों 4 आंकड़ा के लिए समय (दिन) के एक समारोह के रूप में बेसल nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों मतलब.
  4. एनाल्जेसिक सहिष्णुता के लिए साक्ष्य (चरण सी और ई)
    1. अफ़ीम समय पाठ्यक्रम ई से निर्धारितxperiment D0 चित्रा 3 एक अधिक से अधिक एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया को प्रेरित करने के लिए अफ़ीम के लिए आवश्यक समय मूल्य (या समय सीमा) पर प्रदर्शन किया.
    2. संदर्भ समय D7 चित्रा 5 में अनुमान लगाने के लिए के रूप में (आमतौर पर 30 मिनट) यह मान लो nociception आधारभूत मूल्य (खारा इलाज समूह) और तीव्र अफ़ीम के लिए वास्तविक एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया (अफ़ीम का इलाज समूह).
    3. Histograms 6 व्यक्ति के रूप में समय बिंदु खारा इलाज और अफ़ीम का इलाज समूहों के लिए D0 और D7 पर प्रदर्शन अफ़ीम समय पाठ्यक्रम प्रयोगों से 30 मिनट में लिया nociceptive मान, प्रस्तुत कर रहे हैं.
    4. सांख्यिकी: एक तरह से दोहराया उपायों एनोवा का उपयोग कर डेटा का विश्लेषण. भिन्नता के कारकों (विषयों के बीच) के उपचार और (विषय) के भीतर समय थे. प्रत्येक समूह में अलग से मतभेद की जांच करने के दोहराया उपायों एनोवा प्रदर्शन किया गया था. दो समूहों के बीच तुलना unpaired टी परीक्षण या बनती टी परीक्षण जब उचित उपयोग कर प्रदर्शन किया गया.
  5. महत्व का स्तर पी <0.05 पर निर्धारित है. सभी सांख्यिकीय विश्लेषण STATview सॉफ्टवेयर का उपयोग किया जाता है.

Representative Results

भोले चूहों के बेसल nociceptive मान का मूल्यांकन (चरण B)

तैसा और टीपीटी क्रमिक रूप से मतलब nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों प्रदान करने, पूरे चूहों की पलटन (एन = 16) को लागू किया गया. जानवरों के सर्वश्रेष्ठ संयोजन की अनुमति दी दो समूह (एन = 8) चूहों की, समान और स्थिर बेसल nociceptive मान प्रदर्शित जो खारा और अफ़ीम, चित्रा 2 के रूप में भेजा. दोनों समूहों के तुल्यता जो कुछ nociceptive परीक्षण मान्य है (के एक अनुभवजन्य परिभाषा तैसा: चित्रा 2A, टीपीटी: चयनित किया गया था कि चित्रा 2 बी).

0 दिन में अफ़ीम analgesia के लिए समय पाठ्यक्रम (चरण c)

अफ़ीम पीड़ानाश तैसा चित्रा 3 ए और टीपीटी चित्रा 3B दोनों का उपयोग कर भोले चूहों में अफ़ीम का एक इंजेक्शन (SC) (5 मिलीग्राम / किग्रा) निम्नलिखित मूल्यांकन किया गया था. एक तरह से दोहराया उपायों एनोवा revea साथ दोनों परीक्षण, सांख्यिकीय विश्लेषण मेंतैसा के लिए इलाज और समय के बीच एक महत्वपूर्ण बातचीत है कि एल (एफ (7, 98) 72, पी <0.001 =) और टीपीटी (एफ (7, 98) = 31, पी <0.001). तैसा और टीपीटी डेटा एनोवा (p> 0.05, एफ (7, 49) = 0.49) खारा इंजेक्शन का कोई असर नहीं है कि संकेत मिलता है और एफ (7, 49) = 1.85, पी> 0.05 क्रमशः तैसा और टीपीटी के लिए दोहराया उपायों का उपयोग का विश्लेषण करती है परीक्षण), अफ़ीम इंजेक्शन) तैसा और टीपीटी परीक्षण के लिए क्रमश: एक मजबूत चूहों में पीड़ानाश (एफ (7, 49) = 92.46, पी <0.001) और एफ (7, 49) = 34.37, पी <0.001 लाती है जबकि. अफ़ीम की अधिक से अधिक एनाल्जेसिक प्रभाव तैसा में 30 मिनट के बाद और खारा इंजेक्शन नियंत्रण (पी <0.001, unpaired टी परीक्षण) की तुलना में टीपीटी में 60 मिनट के बाद तक पहुँच गया था.

चूहे में दोहराया अफ़ीम प्रशासनों लाती hyperalgesia (चरण D)

बेसल nociceptive मानों हर दिन मापा गयाखारा या अफ़ीम प्रशासन से पहले (प्रोटोकॉल देखें). और मैकेनिकल (एफ (चित्रा 4 में दिखाया गया है, एक 6 दिनों की अवधि में इलाज एक बार दैनिक अफ़ीम प्रशासन एक महत्वपूर्ण और प्रगतिशील थर्मल की कम (चित्रा -4 ए एफ (7, 56) = 11.6, पी <0.001, दोहराया उपायों एनोवा) प्रेरित चित्रा 4 बी) बेसल nociceptive मान, 7,56) 15,55, पी <0.001, दोहराया उपायों एनोवा =. Hyperalgesia यह (खारा इंजेक्शन नियंत्रण की तुलना में पी <0.01, unpaired टी परीक्षण,) तैसा में दिन 1 में महत्वपूर्ण होना शुरू कर दिया के रूप में तेजी से विकसित और टीपीटी में दिन 2 खारा की तुलना में (पी <0.05, unpaired टी परीक्षण, पर ) नियंत्रण इंजेक्शन.

7 दिन में अफ़ीम analgesia के लिए समय पाठ्यक्रम, पुरानी अफ़ीम उपचार (चरण ई) के बाद

7 दिन, (डी 6 के लिए D0) एक 7 दिन की अवधि में दैनिक अफ़ीम या खारा इंजेक्शन प्राप्त चूहों कि टी में जांच की गईयह उनकी बेसल nociceptive मूल्यों के लिए पहले 5 ए और टीपीटी चित्रा 5 ब चित्रा और फिर तीव्र अफ़ीम के लिए अपने एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया (5 मिलीग्राम / किग्रा, अनुसूचित जाति.) के लिए. 4 चित्र में दिखाया hyperalgesia के विकास के साथ समझौते में, लंबे समय से अफ़ीम के साथ इलाज किया गया है कि चूहों के बेसल nociceptive मूल्य (समय 0) खारा इंजेक्शन नियंत्रण चूहों (पी <0.001, unpaired टी परीक्षण) की तुलना में काफी कम था. तीव्र अफ़ीम के बाद, पुरानी अफ़ीम का इलाज समूह के nociceptive प्रतिक्रिया काफी वृद्धि हुई है, लेकिन केवल थोड़ा 30 तैसा में मिनट और टीपीटी (पी <0.01 और पी <0.05, unpaired टी पर मापा खारा इंजेक्शन नियंत्रण चूहों के बेसल nociceptive मूल्य से अधिक परीक्षण, क्रमशः) और तैसा में 60 मिनट (पी <0.05 पर, unpaired टी परीक्षण). 2 घंटा से अफ़ीम इलाज के बाद प्रयोग के अंत तक, nociceptive प्रतिक्रियाओं नियंत्रण चूहों के उन (पी से कम मूल्यों को लौट<0.001, unpaired टी परीक्षण).

अफ़ीम के लिए चूहे की अधिकतम एनाल्जेसिक प्रतिक्रियाएँ की तुलना (0 दिन) से पहले और बाद पुरानी अफ़ीम उपचार (7 दिन).

चित्रा 6 में प्रस्तुत nociceptive दहलीज मूल्यों तैसा (ए) से हैं और आंकड़े 3 दिन (0) और 5 दिन (7) में सचित्र रूप में टीपीटी (बी) खारा या अफ़ीम इंजेक्शन के बाद 30 मिनट का प्रदर्शन किया. अफ़ीम पीड़ानाश में एक मजबूत कमी दोनों nociceptive परीक्षण में 0 दिन में अपने शुरुआती पीड़ानाश प्रतिक्रिया (पी <0.001 बनती टी परीक्षण) के साथ तुलना में 7 दिनों के लिए पुरानी अफ़ीम इलाज के बाद चूहों में मनाया गया. इन आंकड़ों सहिष्णुता दर्द अतिसंवेदनशील पशुओं में विकसित किया है कि प्रदर्शित करता है.

चित्रा 1
चित्रा 1. एक पांच कदम समर्थकअफ़ीम प्रेरित hyperalgesia और सहिष्णुता की निगरानी के लिए cedure. प्रोटोकॉल 15 दिनों की कुल अवधि के दौरान पांच अनुक्रमिक चरणों (एई) में बांटा गया है.

चित्रा 2
. बेसल nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों (चरण बी, डी -1 डी -4) के चित्रा 2 परिभाषा. पूंछ विसर्जन (तैसा) (ए) और पूंछ दबाव (टीपीटी) (बी) के परीक्षण जानवरों की पूरी श्रृंखला के लिए लागू कर रहे हैं उनके बेसल nociceptive मूल्यों का मूल्यांकन करने के क्रम में. इसके बाद चूहों के दो समूहों (एन = 8), 'खारा' के रूप में जाना जाता है और वे माना जाता है कि जो कुछ भी nociceptive साधन, स्थिर और तुलनीय औसत nociceptive मूल्यों का प्रदर्शन इतना है कि 'अफ़ीम' समूहों, परिभाषित कर रहे हैं.

चित्रा 3 तैसा (ए) और टीपीटी (बी) में 0 दिन (चरण सी) में अफ़ीम analgesia के लिए चित्रा 3. समय पाठ्यक्रम. चूहों के बेसल nociceptive प्रतिक्रिया मूल्य एकल अफ़ीम (5 मिलीग्राम / किग्रा, सुप्रीम कोर्ट के बाद हर 30 मिनट निर्धारित किया गया था. ) या खारा इंजेक्शन. डाटा ± SEM मतलब है के रूप में व्यक्त n = समूह प्रति 8 चूहों कर रहे हैं. * पी ​​<0.05, ** पी <0.01, *** पी <0.001, unpaired टी परीक्षण समूह नियंत्रण की तुलना में.

चित्रा 4
. दोहराया अफ़ीम प्रशासन (चरण डी, डी 6 के लिए डी 1) निम्नलिखित hyperalgesia की चित्रा 4 विकास. चूहों के बेसल nociceptive मूल्य तैसा द्वारा निर्धारित किया गया था (ए) और टीपीटी (बी) एक बार दैनिक से पहले अफ़ीम (5 मिलीग्राम / किग्रा,सुप्रीम कोर्ट.) या खारा प्रशासन. डाटा ± SEM के रूप में मतलब मूल्यों व्यक्त n = समूह प्रति 8 चूहों कर रहे हैं. * पी <0.05, ** पी <0.01, *** पी 0.001 <unpaired टी परीक्षण द्वारा खारा इलाज नियंत्रण समूह के साथ तुलना के रूप में.

चित्रा 5
चित्रा 5. समय पाठ्यक्रम सुबह 7 बजे पुरानी-अफ़ीम इलाज चूहों में अफ़ीम पीड़ानाश तैसा में (चरण ई) (ए) और चिरकाल अफ़ीम (काले डॉट्स) या खारा (सफेद त्रिकोण) के साथ इलाज किया गया है कि टीपीटी (बी). चूहे के लिए 0 दिन से दिन के लिए 6, 7 दिन पर अफ़ीम का एक इंजेक्शन क्रमशः (5 मिलीग्राम / किग्रा, अनुसूचित जाति.) या खारा, प्राप्त किया. चूहों के nociceptive प्रतिक्रिया अफ़ीम या खारा इंजेक्शन के बाद हर 30 मिनट निर्धारित किया गया था. डाटा ± SEM मतलब है के रूप में व्यक्त, एन समूह प्रति = 8 चूहों कर रहे हैं. * पी <0.05, पी ** & #60; खारा इलाज नियंत्रण समूह के साथ तुलना के रूप में unpaired टी परीक्षण द्वारा 0.01. प्रतीकों आकार से अधिक नहीं है कि त्रुटि सलाखों छिपे हुए हैं.

चित्रा 6
चित्रा 6. यहां बताया पुरानी अफ़ीम इलाज (7 दिन). मान चित्रा 3 और 5 चित्र में दिखाया प्रयोगों से कर रहे हैं (0 दिन) से पहले और बाद अफ़ीम के लिए चूहों का अधिकतम एनाल्जेसिक प्रतिक्रियाएं (5 मिलीग्राम / किग्रा, अनुसूचित जाति.) की तुलना करें. nociceptive मूल्यों तैसा (ए) और टीपीटी (बी) अफ़ीम या खारा इंजेक्शन के बाद 30 मिनट का उपयोग कर मापा गया. डाटा ± SEM मतलब है के रूप में व्यक्त, एन समूह प्रति = 8 चूहों कर रहे हैं. *** पी <0.001 बनती टी परीक्षण द्वारा.

Discussion

गंभीर कदम

Nociception माप के लिए पशु मॉडल के विकल्प

चूहों उपभेदों में nociceptive और एनाल्जेसिक संवेदनशीलता में परिवर्तनशीलता उनके एटियलजि में भिन्न विभिन्न दर्द मॉडल का उपयोग (समीक्षा 14-16) समीक्षा जांच की गई है (nociceptive, सूजन, न्यूरोपैथिक), साधन (थर्मल, रासायनिक, यांत्रिक), अवधि (तीव्र, टॉनिक, पुरानी) और प्रशासन की साइट (त्वचीय, चमड़े के नीचे, आंत). अन्य उपभेदों की तुलना में जब वे एक उच्च बेसल nociceptive संवेदनशीलता 17,18 और opiates 14,19 को एक उदारवादी एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया का प्रदर्शन के रूप में, C57BL/6J चूहों (जैक्सन प्रयोगशाला के लिए "जम्मू") दर्द के अध्ययन के लिए एक लोकप्रिय पशु मॉडल बन गया है. पुरानी अफ़ीम उपचार के बाद, वे भी महत्वपूर्ण एनाल्जेसिक सहिष्णुता 20,21, hyperalgesia 21,22 और निर्भरता 20,23 विकास.

NT "> यहां, प्रयोगों C57BL/6N टीएसी चूहों पर किया गया बी -6 वंश की एक अलग शाखा के हैं जो (" Taconics खेत के लिए टीएसी '"राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान और के लिए" एन). C57BL 6 / चूहों लंबा किया गया है विनिमेय, हाल के अध्ययनों से C57BL/6J और C57BL/6N 24 उपभेदों में महत्वपूर्ण व्यवहार मतभेदों की ओर इशारा रूप में माना जाता है. विशेष रूप से, थर्मल दर्द तीव्र करने के लिए (टीएसी एक सहित) तीन C57BL/6N substrains के निचले संवेदनशीलता एक के रूप में माना जा सकता है इस phenotype के परीक्षण के लिए लाभ.

नर चूहों किशोर पुरुषों 25 पर प्रदर्शन कर रहे हैं, पशु मॉडल के रूप में चूहों का उपयोग कर, दर्द के अध्ययन के विशाल बहुमत के रूप में चयन किया गया था. देखने के पीड़ानाश या hyperalgesia अंक से जांच की है जब हमारे हाथ में, वे मजबूत और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य डेटा प्रदान की है. कभी कभी, हम C57BL/6N महिलाओं तैसा और टीपीटी परीक्षण में दोनों, अधिक चर प्रतिक्रियाओं प्रदान करने के लिए एक प्रवृत्ति देखा. इस अवलोकन सकता है, हालांकिमहिलाओं के हार्मोन के स्तर से जुड़ा हुआ प्राकृतिक बदलाव को प्रतिबिंबित, दर्द और analgesia में सेक्स मतभेद अंतर्निहित समग्र तंत्र अभी भी विवाद का विषय बने हुए हैं. इस गर्म बहस के कुछ पहलुओं को संक्षेप अनुभाग अगले 'तकनीक की सीमाएं' में प्रस्तुत किया जाएगा.

पशु आदी होना

चूहे पहले एक सप्ताह के दौरान जानवरों की सुविधा के आदी पाने के लिए अनुमति दी गई थी. किसी भी अन्य व्यवहार के अध्ययन के लिए इसी प्रकार, परीक्षण 3 दिन के अभ्यस्त अवधि (चित्रा 1, कदम के लिए एक) के बाद किया गया था. Nociceptive परीक्षण तनाव के प्रति संवेदनशील हैं, पहली उपायों विशेष रूप से गैर आदी चूहों 26,27 में, बाद में लोगों की तुलना में अब सुप्तावस्था दे सकता है. आदी होना कदम भी एक ही दिन के भीतर और दिनों के बीच और अधिक स्थिर nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों की obtention 2 और 4 आंकड़े देता है. Nociceptive और एनाल्जेसिक पर circadian प्रभाव को कम करने के लिएसंवेदनशीलता 28,29, सब testings 10:00-4:00 आयोजित की गई.

Nociceptive परीक्षण का चयन

Nociceptive परीक्षण थर्मल, यांत्रिक, रासायनिक या बिजली उत्तेजनाओं (समीक्षा 26,27,30. अलग nociceptive तौर तरीकों अलग nociceptors और फाइबर 18,31,32 के माध्यम से कार्रवाई की जा सकती है के रूप में उनके चुनाव महत्वपूर्ण है या तो उपयोग करें.

हम थर्मल के उदाहरण के रूप में रान्डेल और Selitto 35 से अनुकूलित पूंछ विसर्जन टेस्ट (तैसा) 33, डी 'प्रणय और स्मिथ 34 द्वारा विकसित की शास्त्रीय पूंछ झटका परीक्षण का एक संशोधित संस्करण है, और पूंछ दबाव परीक्षण (टीपीटी), चयनित और चूहों में अफ़ीम प्रेरित पीड़ानाश, hyperalgesia और सहिष्णुता का अध्ययन करने के लिए यांत्रिक तौर तरीकों. दोनों परीक्षण व्यापक रूप से चूहों में इस्तेमाल किया गया है. एक काट समय व्यवस्थित ढंग से ऊतकों को नुकसान के जोखिम से बचने या सीमित करने के लिए परिभाषित किया गया था.

अफ़ीम inducएड पीड़ानाश, hyperalgesia और सहिष्णुता

यह एक शक्तिशाली एनाल्जेसिक और OIH-inducer है के रूप में अफ़ीम, आद्य म्यू नशा agonist, मनुष्यों और चूहों 1,2,36 में दोनों, यहाँ का चयन किया गया. अफ़ीम एनाल्जेसिक शक्ति चूहों में तनाव, प्रशासन के मार्गों और nociceptive तौर तरीकों के साथ अलग अलग करने के लिए जाना जाता है. C57BL 6 / चूहों में, विश्वसनीय पीड़ानाश आमतौर पर 1-20 मिलीग्राम / किग्रा खुराक सीमा 14,21 में अफ़ीम के चमड़े के नीचे इंजेक्शन के बाद प्राप्त होता है. तदनुसार, हम थर्मल Nociception 19,21 से आकलन किया उसके प्रवर्तन निदेशालय 50 मूल्य (7-20 मिलीग्राम / किग्रा) के करीब 5 मिलीग्राम / किग्रा, में अफ़ीम की एक भी प्रशासन (अनुसूचित जाति) निम्नलिखित तीव्र पीड़ानाश अध्ययन करने के लिए चुना है.

दोहराया अफ़ीम प्रशासन अक्सर और hyperalgesia (दर्दनाक STIMUL को एक exacerbated संवेदनशीलता (खुराक प्रतिक्रिया वक्र की दाहिनी ओर बदलाव से या एक एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया आयाम या अवधि में कमी से या तो इसका सबूत) एनाल्जेसिक सहिष्णुता के साथ साथ हैमैं) बेसल nociceptive मूल्य में कमी से इसका सबूत. दोनों प्रतिकूल घटना उपचार की अवधि पर और nociceptive तौर तरीकों पर 21 नशा चयन किया जाता है जो मिश्रित और इसकी खुराक, की प्रकृति पर, कृंतक उपभेदों पर निर्भर करते हैं. उदाहरण के लिए, सहिष्णुता और hyperalgesia अध्ययन करने के लिए प्रयोगात्मक मानदंड उच्च और निरंतर (प्रति दिन 20 से 40 मिलीग्राम / किग्रा) की 22 या (अप करने के लिए 50 या 200 मिलीग्राम / किग्रा) 20,21 अफ़ीम खुराक तना का दैनिक प्रशासन में मिलकर बनता है. एक 8 दिन की अवधि में, उसके अनुसार, हम दैनिक अफ़ीम प्रशासन (SC 5 मिलीग्राम / किग्रा) के माध्यम से C57BL 6 / चूहों में hyperalgesia और सहिष्णुता के विकास को बढ़ावा दिया. यह मध्यम अफ़ीम खुराक बेहतर नकल क्लिनिक उपयोग करने के लिए अधिक लोगों को अधिक पसंद किया गया था.

तैसा परिचालन खिड़की का सेट अप

तैसा में एक संभावित ख़तरा कृन्तकों 26,37 के तापमान में पूंछ की भूमिका से संबंधित हो सकता है. परिवेश के तापमान nocicept में एक महत्वपूर्ण कारक है के रूप मेंप्रतिक्रिया विविधताओं ive, यह प्रयोगों 38 के दौरान (यहां 21 डिग्री सेल्सियस पर) स्थिर रखा जाना चाहिए. हीट तीव्रता आमतौर पर 5 से 10 सेकंड 27 के भीतर एक nociceptive प्रतिक्रिया का पता लगाने के लिए निर्धारित है. छोटे लोगों परीक्षा का अंतर शक्ति को कम कर सकते हैं, जबकि वास्तव में, अधिक से अधिक सुप्तावस्था, nociceptive प्रोत्साहन के लिए असंबंधित पशु आंदोलनों की निगरानी के लिए खतरा बढ़ सकता है. हम 48 डिग्री सेल्सियस के एक निश्चित तापमान पर तैसा माप प्रदर्शन टेल वापसी सुप्तावस्था 9 सेकंड (बेसल nociceptive मान) के करीब है और 25 सेकंड के लिए 4 सेकंड (hyperalgesia) से अलग थे (अधिकतम पीड़ानाश; काट). व्यावहारिक कारणों के अलावा, एक निश्चित तापमान पर nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों की माप एक प्राथमिकताओं जिससे डेटा व्याख्या की सुविधा, nociceptors और सर्किट का एक ही प्रदर्शनों की सूची शामिल हो सकता है.

संभावित संशोधन

पीड़ानाश और OIH measureme को तैसा परिचालन खिड़की का अनुकूलनपड़ोसी देशों की यात्रा योजना

एक एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया पर ध्यान केंद्रित करते हैं, कम आधारभूत मूल्यों (उच्च गर्मी तीव्रता) प्रतिक्रिया में देरी का पता लगाने के पक्ष में हो सकता है. 4 चित्रा तेजी से प्रतिक्रिया का पता लगाने की सुविधा हो सकती, बारी में, एक दर्दनाक उत्तेजना का परिणाम या OIH के विकास, उच्च आधारभूत मूल्यों (यहाँ 48 डिग्री सेल्सियस कम गर्मी तीव्रता) पता करने के लिए.

अफ़ीम प्रेरित पीड़ानाश,: (महत्वपूर्ण कदम पहले उल्लेख किया है के रूप में हम 5 मिलीग्राम में अफ़ीम पाया हालांकि / एक मजबूत एनाल्जेसिक प्रतिक्रिया चित्रा 3 प्रेरित करने के लिए और (दोहराया प्रशासन पर) महत्वपूर्ण hyperalgesia चित्रा 4 बढ़ावा देने के लिए एक सुविधाजनक खुराक किलो, इसकी खुराक अनुकूलित किया जा सकता है hyperalgesia और सहिष्णुता). उदाहरण के लिए, कम मात्रा अधिक मात्रा hyperalgesia शुरुआत में तेजी लाने और इसके आयाम को बढ़ाने के लिए चुना जा सकता है, जबकि (जिससे कट ऑफ सीमाओं से परहेज) पीड़ानाश आयाम को कम करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

OveRall, 'nociceptive खिड़की' के अनुकूलन के अध्ययन के तहत चूहों की आनुवंशिक पृष्ठभूमि को अनुकूलित और खाते में nociceptors और सर्किट की अलग सरणियों की भागीदारी के लिए संभावना ले जाना चाहिए.

वैकल्पिक नशा agonists (fentanyl, remifentanyl)

सबसे चिकित्सकीय इस्तेमाल opiates agonists के रूप में म्यू opioid रिसेप्टर लक्ष्य हालांकि, वे इन विट्रो और इन विवो दोनों में उनके औषधीय गुणों के लिए सम्मान के साथ काफी भिन्न होते हैं. उदाहरण के लिए, remifentanyl और fentanyl के लिए, अफ़ीम से चिह्नित इसके विपरीत, के रूप में पूर्ण agonists व्यवहार करते हैं और म्यू opioid रिसेप्टर्स 39 के internalization को बढ़ावा देने. Remifentanyl कई मिनट 41 की एक अल्ट्रा कम आधा जीवन है, जबकि अफ़ीम और fentanyl के रूप में नशा दर्दनाशक दवाओं, घंटा 40 की सीमा में आधा जीवन है. मनुष्यों में, OIH के लिए सबसे अच्छा सबूत कम अभिनय ग सहित, सर्जरी के दौरान opiates जो मिला रोगियों से हैऐसे remifentanyl 2,42 रूप ompounds. इस प्रकार, fentanyl और remifentanyl तैसा और टीपीटी मानदंड के तहत, चूहों में hyperalgesia और सहिष्णुता के विकास का अध्ययन करने के लिए बहुत कीमती उपकरण हो सकता है.

OIH के शामिल होने के वैकल्पिक साधनों (तीव्र प्रशासन बनाम पुरानी)

OIH बहुत कम या बहुत उच्च dosages 1,2 में, चाहे नशा प्रशासन का एक परिणाम के रूप में मानव और पशु मॉडल में देखा जाता है. हम अफ़ीम के उदारवादी खुराकों के साथ चूहों के जीर्ण इलाज के बाद OIH विकास पर यहाँ रिपोर्ट. . C57BL/6N चूहों के उपचार के कई दिनों के 4 रोज़ अफ़ीम इंजेक्शन पर्याप्त रूप से प्रत्यारोपित अफ़ीम छर्रों से बदला जा सकता है एक स्पष्ट और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य hyperalgesic राज्य चित्रा सबूत के लिए जरूरी थे: उनके हटाने पर, थर्मल hyperalgesia और यांत्रिक परपीड़ा दोनों पहले से ही चूहों में सूचित किया गया है 43. एक माइक्रो आसमाटिक पंप के माध्यम से opiates के आसव एक और संभावना है 44. कृन्तकों में, लंबे समय से स्थायी hyperalgesia भी प्राप्त मानव सर्जरी 36,45,46 में इस म्यू opioid agonist के उपयोग की नकल उतार एक प्रोटोकॉल का उपयोग fentanyl की तीव्र प्रशासन पीछा कर रहा है.

तकनीक की सीमाएं

दर्द के लिए जानवरों की प्रजातियों और मॉडल

कई माउस उपभेदों के तुलनात्मक अध्ययन 4 दिनों अफ़ीम इलाज 22 निम्नलिखित दर्दनाक उत्तेजनाओं 17,31,47 को nociceptive प्रतिक्रियाओं में और OIH स्तर में महान विविधताओं के लिए सबूत प्रदान की है. पशु मॉडल (चूहों और चूहों) में दर्द प्रसंस्करण और मॉडुलन अंतर्निहित तंत्र पुराने दर्द के रोगियों के लिए प्रासंगिक हैं चाहे एक मौलिक और खोला सवाल बना हुआ है. इस प्रकार, बहुत सावधानी मनुष्यों 16 के लिए पशु डेटा की व्याख्या करने के लिए और उनके भविष्य कहनेवाला वैधता को भुगतान किया जाना चाहिए.

दर्द और analgesia में सेक्स मतभेद

ntent "> दर्द के लिए पशु मॉडल पर सबसे preclinical अध्ययन यह चयन पूर्वाग्रह के बावजूद, उभरते विचार opioid विकसित करने के लिए नशा दर्दनाशक दवाओं 49,50, कम संभावना को बेहतर responders के रूप में पुरुषों पर विचार करना था. पुरुष कृन्तकों 16,25,48 पर आयोजित किया गया है hyperalgesia 51,52 और उनकी महिला समकक्षों (समीक्षा 54) की तुलना में अफ़ीम पीड़ानाश 53 को और अधिक सहिष्णु प्रेरित. हालांकि, nociception और एनाल्जेसिक दवाओं प्रभावकारिता के संबंध में सेक्स मतभेद ऐसे में फिर से शुरू नहीं है प्रतिमान 'एक एक आकार सभी फिट बैठता है'. दरअसल, डेटा का खजाना अब कई चर ऐसे opioid दवा प्रभावकारिता और चयनात्मकता, nociceptive परख, आनुवंशिक पृष्ठभूमि, उम्र, gonado हार्मोनल स्थिति या सामाजिक संपर्क 48,54 के रूप में सेक्स मतभेदों के परिमाण और दिशा को प्रभावित कर सकते हैं कि इंगित करता है. मनुष्यों में, नैदानिक ​​दर्द महिलाओं में अधिक प्रचलित है लेकिन इस तथ्य को वास्तविक सेक्स मतभेदों को दर्शाता है कि क्या बहस 48,55,56 का विषय बना हुआ है. एफओमेटा विश्लेषण करती महिलाओं को 57 में काफी अधिक opioid प्रभावकारिता की ओर इशारा रोगियों नियंत्रित विषयों पर प्रदर्शन किया जबकि आर उदाहरण, पचास नैदानिक ​​परीक्षणों की वैश्विक विश्लेषण लिंग के बीच एनाल्जेसिक गुणों में कोई महत्वपूर्ण मतभेद का संकेत दिया. स्पष्ट रूप से किया गया है क्या विरोधाभासों के साथ जो बाद के अवलोकन, कृन्तकों में पाया, फिर इस तरह के मतभेदों 16,48,55,57 के लिए उत्पत्ति के बारे में कई सवाल उठाती है. कुल मिलाकर, पीड़ानाश में सेक्स मतभेद मौजूद है और योग्यता आगे अंतर्निहित तंत्र और चिकित्सीय प्रभाव पर ध्यान केंद्रित.

Nociceptive परीक्षणों के बारे में

पूंछ वापसी परीक्षण एक रीढ़ की हड्डी में पलटा है लेकिन यह supraspinal प्रभावों 58 के अधीन किया जा सकता है. तैसा चूहों पर प्रदर्शन करने के लिए अपेक्षाकृत आसान है, लेकिन चूहों में अधिक विशेषज्ञता की आवश्यकता है. एक संभावित कठिनाई अवांछित तनाव उत्प्रेरण के बिना एक सही मुद्रा में माउस को बनाए रखने की है. प्रस्तावित प्रोटोकॉल के अनुसार समायोजित किया जा सकता हैपलटन आकार. 16 जानवर (8 नियंत्रण और 8 इलाज) आसानी से जहाँ तक उनके बेसल nociceptive प्रतिक्रिया मूल्यों की माप के रूप में (पहले तैसा का उपयोग, तो चूहों की पूरी श्रृंखला के लिए टीपीटी) चिंता के दायरे में है प्रबंधित कर रहे हैं. पीड़ानाश समय पाठ्यक्रमों की निगरानी के लिए दी समय अंतराल (यहां 30 मिनट) के भीतर एक सटीक समय अनुसूची की स्थापना और (तब पहली तैसा, टीपीटी) का परीक्षण किया जा सकता है कि पशुओं के लिए अधिक से अधिक संख्या के मूल्यांकन की आवश्यकता है. जानवरों की पूरी पलटन इस प्रकार प्रयोगकर्ता गतिज सीमाओं का सम्मान करने के लिए अनुमति देने के लिए उपसमूहों में विभाजित किया जा सकता है.

मौजूदा / वैकल्पिक तरीके के संबंध में तकनीक का महत्व

OIH माउस बनाम चूहों में

चूहे बड़े पैमाने पर तीव्र या पुराना नशा प्रशासन 46,59-61 निम्नलिखित, opioid analgesia, hyperalgesia और सहिष्णुता का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. दरअसल, कई व्यावहारिक कारणों के लिए, वे बेहतर करने के लिए विचार किया जा सकता हैदर्द प्रयोगों 16,61 के लिए एक पशु मॉडल के रूप में चूहों. हालांकि, हाल ही में जब तक, आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों की पीढ़ी एक सरल प्रक्रिया नहीं था. कई आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस उपभेदों पहले से ही उपलब्ध हैं, हमारे मॉडल चूहों में OIH और सहिष्णुता के विकास में कई व्यक्तिगत जीनों का योगदान अध्ययन करने का अवसर प्रदान करता है.

अन्य nociceptive परीक्षण बनाम तैसा और टीपीटी

तैसा पूंछ झटका परीक्षण, उत्तेजना के क्षेत्र में किया जा रहा सबसे स्पष्ट अंतर का एक प्रकार है. दीप्तिमान गर्मी के साथ इसके विपरीत, गर्म पानी में पूंछ का विसर्जन इसके तापमान में एक त्वरित और वर्दी वृद्धि हो जाती है. थर्मल Nociception परीक्षण (गर्म थाली या Hargreaves परीक्षण) के अन्य रूपों की तुलना में, तैसा भर में और विषयों के भीतर दोनों काफी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्रदान करता है.

टीपीटी शायद शामिल है जो यांत्रिक nociception 26,27,35 के अध्ययन के लिए एक बहुत लोकप्रिय परीक्षण हैअलग nociceptive फाइबर और आणविक ट्रांसड्यूसर तब तैसा 32. यह त्वरित और विश्वसनीय माप 59 प्रदान करता है, लेकिन प्रयोगकर्ता और बड़े जानवर साथियों से कुछ विशेषज्ञता की आवश्यकता है. वर्तमान अध्ययन, अन्य प्रक्रियाओं या उपकरण में इस्तेमाल किया analgesimeter के लिए एक विकल्प के रूप में तनाव गेज पर निर्भर (समीक्षा 27) मौजूद है. टीपीटी वॉन फ्रे filaments आमतौर पर यांत्रिक परपीड़ा (समीक्षा 27) का मूल्यांकन करने के लिए लिया जाता है जबकि यांत्रिक hyperalgesia के अध्ययन के लिए सबसे उपयुक्त है.

इस तकनीक के माहिर के बाद भविष्य के अनुप्रयोगों या निर्देश

हम यहां पेश प्रयोगात्मक OIH / सहिष्णुता मॉडल इसी दर्द के मॉडुलन में व्यक्तिगत जीन की भूमिका का मूल्यांकन करने के क्रम में आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. यह भी पुराने दर्द को दूर करने के लिए संभावित चिकित्सीय एजेंटों की प्रभावशीलता की जांच के लिए एक मॉडल प्रणाली प्रदान करता है.

Disclosures

लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषित.

Acknowledgments

हम डॉ. जीएल धन्यवाद. Galzi (UMR7242 CNRS, Illkirch, फ्रांस) अपने समर्थन के लिए.

इस काम CNRS, INSERM, Université डी स्ट्रासबर्ग, Alsace BioValley द्वारा और Conectus, एजेंस राष्ट्रीय डी ला Recherche (ANR 08 EBIO ०१४.०२) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया Conseil क्षेत्रीय d'Alsace (Pharmadol), Communaute Urbaine डी स्ट्रासबर्ग (Pharmadol), ICFRC (Pharmadol), OSEO (Pharmadol), दिशा जेनरल des Entreprises (Pharmadol).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57BL/6N Tac mice Taconic, Ry, Denmark C57BL/6N Tac B6-M Male mice (25-30 g)
Morphine hydrochloride Francopia, Paris, France CAS no. 52-26-6 Delivered with special authorization
Syringes (Terumo) Dutscher, Brumath, France 050000 Polypropylene, sterile, volume: 1 ml
Needles (Terumo) Dutscher, Brumath, France 050101 26 G ½ (Terumo reference : NN2613RO1)
Mouse restrainer Home-made Two metallic grids (5 x 11 cm) assembled with adhesive tape and staples
Thermostated water bath GR150 Grant Instruments, Cambridge, UK GP 0540003
Analgesimeter Panlab, Barcelona, Spain LE 7306
Kaleidagraph software Synergy software, Reading, PA, USA Kaleidagraph 4.03  Scientific graphing
STATview software Free download, statistics

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तंत्रिका विज्ञान अंक 89 चूहों nociception पूंछ विसर्जन परीक्षण पूंछ दबाव परीक्षण अफ़ीम पीड़ानाश opioid प्रेरित hyperalgesia सहिष्णुता
थर्मल और यांत्रिक nociceptive रूपात्मकता का उपयोग कर चूहे में अफ़ीम प्रेरित hyperalgesia और एनाल्जेसिक सहिष्णुता का आकलन
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Elhabazi, K., Ayachi, S., Ilien, B., … More

Elhabazi, K., Ayachi, S., Ilien, B., Simonin, F. Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities. J. Vis. Exp. (89), e51264, doi:10.3791/51264 (2014).

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