Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

Termal ve Mekanik nosiseptik Usuller kullanma Farelerde Morfin kaynaklı Hiperaljezi ve Analjezik Hoşgörü Değerlendirilmesi

Published: July 29, 2014 doi: 10.3791/51264
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Biotechnology and Cellular Signalling, UMR 7242 CNRS, Université de Strasbourg

Summary

Bu opioid kaynaklı hiperaljezi ve farelerde tolerans gelişimini incelemek için bir protokol açıklar. Naif ve morfin ile tedavi edilen hayvanların, termal ve mekanik nosiseptif yanıtların ölçümü dayanarak, ağrı duyarlılığı (hiperaljezi) 'de artışı ölçmek ve kronik opiat uygulama ile bağlantılı analjezi (tolerans) azalma sağlar.

Abstract

Opioid kaynaklı hiperaljezi ve tolerans ciddi hayvanlarda ve insanlarda ağrı kesiciler gibi uyuşturucuların klinik etkinliğini etkileyebilir. Her iki fenomenlerin altında yatan moleküler mekanizmalar tam olarak anlaşılmış değildir ve bunların aydınlatılması hayvan modellerinin çalışma ve uygun deneysel protokollerin tasarımı yararlanmalıdır.

Burada, indükleyici kayıt ve vahşi tip farelerde kuyruk-daldırma ve kuyruk basınç testleri kullanılarak, analjezik tolerans gösteren hem de morfin kaynaklı hiperaljezi miktarının belirlenmesi için bir metodolojik yaklaşımı tarif eder. Videonun gösterildiği gibi, protokol beş ardışık aşamaya ayrılır. Kullanım ve alışkanlık fazlar hayvanların bazal nosiseptif tepki güvenli bir kararlılık sağlar. Her ikisi de, termal ve mekanik duyarlılığında bir artışa ile gösterildiği gibi kronik morfin uygulama, önemli bir hiperaljeziyi indükler oysa sonra analjezi zamanlı kursların karşılaştırma akut ya da temsilcisieated morfin tedavisi açıkça analjezik yanıt genliğinde bir azalma ile kendini gösteren tolerans gelişimini gösterir. Bu protokol, aynı şekilde nosisepsiyon ve morfin analjezi modülasyonunda tek tek genlerin rolünü değerlendirmek amacıyla genetik olarak modifiye edilmiş fareler için adapte edilebilir. Ayrıca opiat analjezik etkinliğini artırmak için potansiyel terapötik ajanların etkinliğini araştırmak için bir model sistemi sağlar.

Introduction

Opioid kaynaklı hiperaljezi (OIH) ve analjezik tolerans hayvanlarda ve insanlarda 1-3 opiat klinik etkinliklerini sınırlayabilmektedir. Pro-enflamatuar 4,5 'ya pro-nosiseptif (anti-opioid) 6,7 sistemlerinin katılımı halen hipotezler incelenmiştir. OIH ve tolerans altında yatan mekanizmaların aydınlatılması uygun hayvan modelleri, deney protokollerini ve moleküler araçları kullanarak, in vivo ve in vitro yaklaşımlar bir arada gerektirmektedir.

Davranış farmakoloji laboratuvar hayvanlarında analjezik ve hiperaljezik durumlarını izlemek ve ölçmek için egemen paradigma (sıçan, fare) 'dir. Hayvanın uygun bir gövde parçası (arka pençe, yükleme) bir zararlı uyarıcı (termal, mekanik ya da kimyasal) uygulaması kolay atılır bir nocifensive çekilmesine yol açar.

Biz OIH, uyaran kayıt ve ölçülmesi için burada metodolojik bir yaklaşım önermiştir vekuyruk-daldırma ve kuyruk basınç testleri kullanarak, vahşi tip farelerde tolerans. Prosedür farelerde termal ve mekanik nosiseptif tepki değerlerinin bir kolay, hassas ve tekrarlanabilir belirlenmesini sağlar. Video protokolü de gösterildiği gibi, C57BL / 6 fareleri, kronik morfin uygulamasından alttaki önemli hiperaljezi deneyim ve birkaç gün boyunca korur. Her ikisi de, termal ve mekanik nosiseptif değerler önemli ölçüde naif hayvanlarda bazal ölçümleri ile karşılaştırıldığında azalır. Ayrıca, bizim deneysel set-up OIH, morfin (tolerans) için analjezik yanıt düşüş gelişimine ek olarak, izlemenizi sağlar. Sunulan veriler bu literatürde 1,10-12 tartışmalı olmasına rağmen hiperaljezi ve hoşgörü, ortak hücresel ve moleküler mekanizmaları 8,9 içerebilir olduğu görüşünü desteklemektedir. Son olarak, bu protokol benzer modülatöründen tek tek genlerin rolünü değerlendirmek için genetik olarak modifiye edilmiş fareler şekilde uyarlanabilirağrı tion. Aynı zamanda, bir opiat analjezik etkileri iyileştirmek için potansiyel terapötik maddelerin etkinliğini değerlendirmek için bir model sistem sağlar.

Protocol

Tüm deneyler laboratuvar hayvanlarında (Avrupa Toplulukları Konseyi Direktifi 86/609/ECC) ve bilinçli hayvanlarda 13 deneysel ağrı soruşturma için etik ilkelerin bakımı için Avrupa kurallarına sıkı göre yapılmıştır. Erkek C57BL6 / N Tac fareler (10 hafta, 25-30 g) çevre standartlarına uygun olarak tesisi işleten sorumlu bir bakım personeli ile kurumsal bir hayvan tesisine yerleştirilmiştir. Hayvanlar gruba ayrılmıştır yiyecek ve suya serbest erişim ile bir sabit sıcaklık (21 ± 1 ° C), 12 saat / 12 saat ışık / karanlık döngüsü altında (kafes başına en fazla beş fare). Tüm deneyler 16 fareden oluşan bir grubu kullanarak günün aynı dönemine (10:00-16:00) gerçekleştirildi. Spesifik malzeme ve ekipmanlar malzemeleri tabloda belirtilmiştir.

Morfin kaynaklı-hiperaljeziyi ve hoşgörü izlemek için bir beş-aşamalı prosedür

Protokoldür15 gün, Şekil 1 bir süresi boyunca beş sıralı adımda (AE) ayrıldı.

. İşleme 1 Fareler (Adım A, d-7 D-5'e)

  1. Fareler Kulp ve özgürce süzgeç içine girmek onları alıştırmak. Böylece stres kaynaklı analjezi ile herhangi bir karışıklık minimize - - Bu ön basamak stresi azaltır ve hayvanlar fare süzgeç içine işleme ve manipülasyon, araştırmacı alışık sağlar. Her fare yavaşça her gün 5 dakika boyunca işlenir.

. 2 Bazal Nosiseptif yanıt (Basamak B, D-1 d-4)

  1. Kuyruk Daldırma Testi (TİT) kullanarak kuyruk çekme potansiyelleri ölçün:
    1. 48 ° C'ye termostatı ayarlayın
    2. Yavaşça süzgeç içine fare tanıtmak. Su banyosunun içine kuyruk çıkıntılı 2/3 ucunu batırın ve kronometreyi başlatın.
    3. Kısa sürede fare sıcak su kuyruğu çekilmesi gibi kronometreyi durdurun ve (sn) gecikme zamanı kaydedecektir. ThHerhangi bir nosiseptif reaksiyon e olmaması halinde, 25 saniye cut-off doku hasarını önlemek için kullanılır.
    4. Kafesine fareyi değiştirmek ve serinin sonuna kadar bir sonraki test edin.
    5. Aynı sırada, hayvanlardan ölçümleri alınarak, nosiseptif tepki ölçümler iki kez daha tekrarlayın. Her bir fare için Nosiseptif tepki gecikmesi (sn) birbirini izleyen üç tayini için ortalama değer olarak belirlenir.
  2. Kuyruk Basınç Testi (TPT) kullanılarak mekanik tepkileri ölçmek
    1. Yavaşça süzgeç içine fare tanıtmak ve analjezimetre ve konik ucu altında kuyruğunu yerleştirin.
    2. Ilk nosiseptif reaksiyonu (mücadele, gıcırdıyor) oluşuncaya kadar kuyruk proksimal parçası üzerine düzgün artan bir baskı uygulamak için ayak-düğmesine basın. Hayvan tepki anda, nosiseptif tepki ortaya çıkaran (gram olarak), mevcut kuvveti kaydedilir. Herhangi bir reaksiyonun yokluğunda, bir 600 g cut-off değeri t önlemek için kullanılırzarar vermek.
    3. Aynı fare kuyruk orta ve uzak kısımlarında bu tedbir tekrarlayın. En az 30 saniye bir aralık adaptasyonunu veya stres yanlılığı önlemek için belirli bir fare üzerinde önlemler arasında görülmektedir. Kafesine fareyi takın ve serisi (yani tüm fareler test edilmektedir) sonuna kadar bir sonraki hayvan test edin. Her bir fare için Nosiseptif değer (gram) ölçümleri (örneğin yakın, orta ve her bir hayvanın kuyruk distal kısmı) için, ortalama bir değer olarak alınmıştır.
  3. Sonraki günlerde tekrarlayın nosiseptif test (tüm prosedürleri adım 2 altında açıklanan), d-3 d-1.

. Morfin Analjezi 3 Ölçme (Adım C; d0)

  1. Kararlı ve karşılaştırılabilir nosiseptif ortalama değerleri ile farelerin iki grup (grup başına n = 8), hangisi yöntem Nosiseptif (TIT veya TPT) seçimi kabul edilir sağlar: hayvanların en iyi kombinasyonunu tanımlar. Bu değer, bazal olarak alınacaktırGelecekteki 'Tuzlu' ve 'Morfin' grupları için referans nosiseptif cevabı.
  2. Her bir hayvanın vücut ağırlığı ölçülür.
  3. Deri altına uygulama (hayvanın vücut ağırlığının her kg'ı başına 5 mg morfin) için steril fizyolojik salin (% 0.9 NaCl) içinde bir morfin çözeltisi (ml başına 0.5 mg morfin) hazırlayın.
  4. Hem 'Saline' ve TİT de 'Morfin' grupları (yukarıda 2.1 altındaki tüm adımlar) her fare için (zaman noktası 0 olarak alınmıştır) nosiseptif tepki gecikme ölçün. Sonra TPT (yukarıda 2.2 'tüm adımları) nosisepsiyonu ölçün.
  5. Sırasıyla 'morfin' ve 'tuzlu' gruplarına deri altından morfin (25 g fare ağırlığı başına 0.5 mg / ml morfin çözeltisi, tipik olarak 0.25 mi) ve tuzlu su (25 g fare ağırlığı başına 0.25 mi) enjekte edilir.
  6. Bir zaman boyunca TİT ve TPT üzerine nosiseptif değerleri (altındakiler yukarıda özetlenen tüm işlemler sırasıyla, 2.1 ve 2.2 adımları) (Tedbir 30 dakika interv atal) morfin değerlendirmek için (5 mg / kg) ile indüklenen analjezi:
    1. 30 dakika sonrası enjeksiyonundan sonra, TİT'i sonra TPT kullanarak, 'Tuzlu' ve 'Morfin' gruplarının her bir fare için nosiseptif yanıtı (tek belirlenmesi) ölçün.
    2. 1-1.5-2-2.5-3 ve 3.5 enjeksiyon sonrası: O zaman (saat olarak) zaman noktalarında tüm farelerde nosiseptif yanıt değerlerini (TİT ve TPT) ölçün.

4 kronik morfin tedavisi - Hiperaljezi, morfin kaynaklı. (Adım D; d6 d1)

  1. Günü: d1
    1. (2.1 ve 2.2 arasındaki adımlar) yukarıda tarif edildiği gibi TIT ve TPT ile ilgili nosiseptif tepki değerlerini ölçün. Dikkatli çekme potansiyelleri ve her bir hayvan için basınç limitleri açıklama.
    2. Adım 3.2 'de ayrıntılı olarak açıklandığı gibi bir taze morfin çözeltisi hazırlayın.
    3. 'Saline' grubuna için tüm 'Morfin' grubu ve fizyolojik tuzlu su (25 gr fare ağırlığı başına 0.25 mi), deri altından, morfin (5 mg / kg vücut ağırlığı) enjekte edilir. Let incie hayvanlar ertesi güne kadar bekletin.
  2. Gün On: d2, d3, d4, d5 ve Bölüm 4.1 altında açıklanan işlemleri tekrarlayın d6

. Analjezik Hoşgörü 5 Evidence (Adım E; d7)

  1. Zaten Bölüm 3'te ayrıntılı zaman ders paradigmaya göre morfin kaynaklı analjezi değerlendirin.

6.. Veri Toplama ve İstatistiksel Analizler

  1. Bazal Nosiseptif Tepki Değerlerinin Değerlendirilmesi (Adım B)
    1. Her gün için hesaplayın (fazla Cı-4 d-1 döneme) SEM değerleri ± ortalama (n = 8) 'Salin' ve 'Morfin' grupları içinde TIT ve TPT dan elde olarak bazal nosiseptif yanıtlar için.
    2. Her iki grup 2 için Şekil arsa süresi (gün) bir fonksiyonu olarak bazal nosiseptif ortalama değerleri.
  2. Gün d0 Morfin Ağrı zaman süreci analizi (Basamak C) ve d7 (Aşama E)
    1. Morfin sonra her zaman noktasında, hesaplayınEnjeksiyon, SEM değerleri ± ortalama (n = 8) Her bir grupta (saniye olarak) den elde edilmiştir TIT ve TPT (g) olarak nosiseptif yanıtlar için.
    2. Arsa günde 'Salin' ve 'Morfin' grupları için bir zaman fonksiyonu 0 Şekil 3 ve gün 7 Şekil 5 olarak nosiseptif tepki değerleri anlamına gelir.
  3. Morfin kaynaklı hiperaljezi (Adım D) Gelişimi
    1. (D0-d7 tedavi dönemi boyunca) her bir gün için hesaplama SEM değerleri ± ortalama (n = 8) 'Salin ile tedavi edilmiş "ve" Morfin ile tedavi edilen gruplarının içinde TIT ve TPT dan elde olarak bazal nosiseptif tepki değerleri için.
    2. Arsa 'Salin ile tedavi edilmiş "ve" Morfin ile tedavi grupları için, Şekil 4 süresi (gün) bir fonksiyonu olarak bazal nosiseptif tepki değerleri anlamına gelir.
  4. Analjezik Hoşgörü kanıt (Adım C ve E)
    1. Morfin zaman ders e belirleyinXperiment d0 Şekil 3 maksimal bir analjezik yanıtı uyarmak için morfin için gerekli zaman değeri (ya da zaman aralığı) gerçekleştirilir.
    2. Referans zaman d7, Şekil 5 de tahmin etmek için (genellikle 30 dakika), bu değeri al nosisepsiyon taban çizgisi değeri (salinle tedavi edilen grup) ve akut morfin için gerçek analjezik yanıt (morfin ile tedavi edilen grubu).
    3. Histogramlar Şekil 6 gibi bir zaman noktasında, tuzlu su ile muamele edilmiş ve morfin ile tedavi edilen gruplar için D0 ve d7 yapılan morfin zaman akışı deneylerinde 30 dakika alındığı Nosiseptif değerler sunulmaktadır.
    4. İstatistikler: tek yönlü tekrarlayan ölçümler ANOVA kullanarak verileri analiz. Varyasyon faktörler (nesneler arasında) tedavi ve (konu içinde) zamanı idi. Her grupta ayrı ayrı farklılıkları kontrol etmek için, tekrarlayan ölçümler ANOVA yapıldı. İki grup arasındaki karşılaştırmalar eşleştirilmemiş t-test veya çift t-testi kullanılarak, uygun yapıldı.
  5. Anlamlılık düzeyi p <0.05 olarak belirlenmiştir. Tüm İstatistiksel Analizler StatView Software kullanılarak gerçekleştirilmektedir.

Representative Results

Naif Farelerin Bazal nosiseptik Değerleri Değerlendirme (Adım B)

TIT ve TPT sekans ortalama nosiseptif tepki değerlerini sağlayan, bütün farelerin kohort (n = 16) uygulanmıştır. Hayvanların en iyi kombinasyona izin iki gruba (n = 8) farelerin, benzer ve kararlı bazal nosiseptif değerleri görüntülemek Tuzlu ve Morfin, Şekil 2 olarak anılacaktır. Her iki grubun denklik ne nosiseptif testi geçerli (bir a posteriori tanım TİT: Şekil 2A; TPT: seçildi Şekil 2B).

Gün 0 Morfin Analjezinin Zaman-ders (Adım C)

Morfin analjezi TIT Şekil 3A ve Şekil 3B TPT her ikisini de kullanarak naif farelerde morfinin tek bir enjeksiyon (SC) (5 mg / kg) takiben değerlendirilmiştir. Bir şekilde tekrarlanan ölçümler ANOVA revea hem testler, istatistiksel analizlerTIT tedavisi için ve zaman arasında önemli bir etkileşim olduğu l (F (7, 98), 72, p <0.001 =) ve TPT (F (7, 98) = 31, p <0.001). TİT ve TPT veriler ANOVA (p> 0.05, F (7, 49) = 0,49) serum enjeksiyonu hiçbir etkisi olduğunu gösterir ve F (7, 49) = 1.85, p> 0.05, sırasıyla TİT ve TPT için tekrarlanan ölçümler kullanılarak analiz testleri), morfin enjeksiyonu) TIT ve TPT testleri için sırasıyla güçlü farelerde analjezi (F (7, 49) = 92,46, p <0.001) ve F (7, 49) = 34,37, p <0.001 uyarmaktadır. Morfin maksimal analjezik etkisi TIT 30 dakika sonra ve serum fizyolojik enjekte edilen kontrol grubuna göre (p <0.001, eşleştirilmemiş t-test) ile karşılaştırıldığında TPT 60 dakika sonra ulaşıldı.

Farelerde Tekrarlanan Morfin Yönetimler İndükler Hiperaljezi (Adım D)

Bazal nosiseptif değerleri her gün ölçüldütuzlu su ya da morfin uygulamasından önce (protokolü). Ve mekanik (F (, Şekil 4'te gösterildiği gibi, 6 günlük tedavi süresi boyunca, günde bir kez, morfin idareleri anlamlı ve ilerici termal indirilmesi (Şekil 4A F (7, 56) = 11.6, p <0.001, tekrarlanan ölçümler için ANOVA) indüklenen Şekil 4B) bazal nosiseptif değerleri; 7,56) 15,55, p <0.001, tekrarlanan ölçümler için ANOVA =. Hiperaljezi it (salin enjekte edilen kontrol grubu ile karşılaştırıldığında p <0.01, t-test) TIT in 1. günde anlamlı başladı hızla gelişen ve TPT günde 2 tuzlu kıyasla (p <0.05, t-test, önceki ) denetimleri enjekte.

7. günde de morfin Analjezi için zaman-ki, kronik morfin tedavisi (Adım E) sonra

7. günde, (d6 d0) 7 günlük bir süre boyunca günlük olarak, morfin ya da tuzlu su enjeksiyonları uygulanmasından farenin T incelendiIT bazal nosiseptif değerleri için birinci 5A ve Şekil 5B, Şekil TPT ve akut morfine bunların analjezik tepki (5 mg / kg, sc.) Dir. Şekil 4'te gösterilen hiperaljezi gelişimi ile uyumlu olarak, kronik morfin ile tedavi edilen farelerin bazal nosiseptif değeri (zaman 0) tuzlu su enjekte edilmiş kontrol farelerinde (p <0.001, eşleştirilmemiş t-test) önemli ölçüde daha düşüktü. Akut morfin sonra, kronik morfin ile tedavi edilen grubun nosiseptif tepki önemli ölçüde artmış, ancak sadece biraz TIT 30 dakika içinde ve TPT (p <0.01, p <0.05, eşleştirilmemiş t ölçülen serum fizyolojik enjekte edilen kontrol farelerinin bazal nosiseptif değerini aşmıştır -testi, sırasıyla) ve TİT 60 dakika (p <0.05, t-test). 2 saat kaynaktan morfin muameleden sonra deneyin sonuna kadar, nosiseptif tepkileri kontrol farelerinin kişilerce (p daha düşük değerlere geri<0.001, t-test).

Morphine Farelerin azami analjezik Yanıtların karşılaştırması (Day 0) önce ve sonra kronik morfin tedavisi (Gün 7).

Şekil 6'da sunulan Nosiseptif eşik değerleri TIT (A) 'dan ve Şekiller 3 (gün 0) ve 5 (Gün 7)' de gösterildiği gibi TPT (B) ya da tuzlu su, morfin enjeksiyonundan sonra 30 dakika gerçekleştirilmiştir. Morfin analjezi düzeyinde önemli bir azalma hem nosiseptif testlerinde 0. günde başlangıç ​​analjezi tepki (p <0.001 ikili t-testi) ile karşılaştırıldığında, 7 gün boyunca kronik morfin tedavisi sonrasında farelerde gözlenmiştir. Bu veriler tolerans ağrı aşırı duyarlı hayvanlarda geliştirmek etmediğini ortaya koymaktadır.

Şekil 1
Şekil 1.. Beş adım promorfin kaynaklı-hiperaljeziyi ve hoşgörü izlemek için rektiğini düşündürmektedir. protokol 15 gün toplam süresi boyunca beş ardışık adımlarla (AE) ayrılmıştır.

Şekil 2,
. Bazal nosiseptif tepki değerleri (Basamak B, D-1 d-4) Şekil 2 Tanım. Kuyruk daldırma (TIT) (A) ve arka basıncı (TPT) (B) testleri hayvanların bütün dizi uygulanır bazal nosiseptif değerlerini değerlendirmek için. Bundan sonra, fareler iki grup (n = 8), "Saline 'olarak adlandırılır ve kabul edilir her türlü nosiseptif tedavi, sabit ve karşılaştırılabilir nosiseptif ortalama değerleri gösterirler, böylece' Morfin grupları tanımlanmıştır.

Şekil 3, TIT (A) ve TPT (B) 0. günde (Aşama C) morfin analjezi için Şekil 3,. Zaman ders. Farelerin bazal nosiseptif tepki değeri bir morfin (5 mg / kg, sc sonra her 30 dakikada belirlendi. ) ya da tuzlu su enjeksiyonları. Veriler ± SEM olarak ifade edilmiştir, grup başına n = 8 fare edilir. * P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001, eşleşmemiş t-testi, kontrol grubuna kıyasla.

Şekil 4,
. Tekrar morfin uygulamasından (Adım D; d6 d1) aşağıdaki hiperaljezi Şekil 4, Development. Farelerin bazal nosiseptif TIT değeri belirlendi (A) ve TPT (B) günde bir kez daha önce morfin (5 mg / kg,sc.) veya tuzlu su yönetimi. Veri ± SEM olarak ifade edilen ortalama değerler, grup başına n = 8 fare edilir. * P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001 eşleştirilmemiş t-testi ile, tuzlu su ile tedavi edilen kontrol grubu ile karşılaştırıldığında.

Şekil 5,
Şekil 5,. Zaman takibi 7. günde de kronik morfin-ile tedavi edilmiş farelerde analjezi morfin TIT de (Adım E) (A) ve kronik morfin (siyah nokta) veya tuzlu su (beyaz üçgenler) ile muamele edildi TPT (B). Fare için Gün 0 6 güne kadar, günde 7 morfinin, sırasıyla, tek bir enjeksiyon (5 mg / kg, sc.) veya tuzlu su aldı. Farelerin Nosiseptif tepki, morfin ya da tuzlu su enjeksiyonundan sonra her 30 dakikada belirlendi. Veriler ± SEM olarak ifade edilmiştir, n = grup başına 8 fare edilir. * P <0.05, ** P & #60; Salin ile tedavi edilmiş kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, eşleştirilmemiş t-testi ile 0.01. Sembolleri boyutlarını aşmamasına Hata çubukları gizlenir.

Şekil 6,
Şekil 6,. Burada bildirilen kronik morfin tedavisi (Gün 7). Değerler, Şekil 3 ve Şekil 5'te gösterilen deneyler vardır (gün 0) ve sonra daha önce morfin farelerin yüksek analjezik tepkiler (5 mg / kg, sc.) Karşılaştırılması. Nosiseptif TIT değerleri (A) ve TPT (B), morfin ya da tuzlu su enjeksiyonundan sonra 30 dakika ölçüldü. Veriler ± SEM olarak ifade edilmiştir, n = grup başına 8 fare edilir. *** P <0.001, eşleştirilmiş t-testi ile.

Discussion

Kritik Adımlar

Nosisepsiyon ölçümleri için hayvan modeli seçimi

Fareler suşları arasında nosiseptif ve analjezik duyarlılık Değişkenlik etiolojide farklı çeşitli ağrı modelleri kullanarak (yorum 14-16) değerlendirmeleri incelenmiştir (nosiseptif, enflamatuvar, nöropatik), modalite (termal, kimyasal, mekanik), süresi (akut, tonik, kronik) ve tatbikat alanı (deri içinden, deri altından, iç organ). Diğer suşlar ile karşılaştırıldığında bir yüksek bazal nosiseptif hassasiyet 17,18 ve 14,19 afyon bir orta analjezik tepki gösterir ve bu durum, C57BL/6J fareler (Jackson Laboratory için "J"), ağrı çalışmaları için uygun bir hayvan modeli oldu. Kronik morfin tedavisi ardından, aynı zamanda önemli bir analjezik toleransı 20,21, hiperaljeziyi 21,22 ve 20,23 bağımlılık gelişir.

nt "> Burada, deney C57BL/6N Tac fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir B6 soy ayrı bir dalı aittir (" Taconics grubu için Tac '"Ulusal Sağlık Enstitüsü için" N.) C57BL / 6 fareleri, uzun olmasına rağmen değiştirilebilir, son çalışmalar C57BL/6J ve C57BL/6N 24 suşları arasında önemli davranış farklılıkları işaret olarak kabul. özellikle, termal ağrı akut (Tac bir de dahil olmak üzere) üç C57BL/6N substrains alt duyarlılığı olarak kabul edilebilir Bu fenotip için test avantaj.

Erkek fareler çocuk erkeklerde 25 üzerinde gerçekleştirilir, hayvan modeli olarak fareler kullanılarak, ağrı çalışmaların büyük çoğunluğu olarak seçildi. Görüş analjezi veya hiperaljezi noktaları incelendiğinde bizim ellerimizde, onlar güçlü ve tekrarlanabilir verileri sağlamıştır. Bazen, biz C57BL/6N kadın TİT ve TPT testlerinde hem de daha değişken yanıtları sağlamak için bir eğilim fark ettim. Bu gözlem rağmenkadınların hormonal durumuna bağlı doğal varyasyonları yansıtmak, ağrı ve analjezi cinsiyet farklılıkların altında yatan genel mekanizmaları hala tartışma konusu olmaya devam etmektedir. Bu sıcak tartışmaların bazı yönleri kısaca bölümünün yanındaki 'tekniği Sınırlamalar' sunulacak.

Hayvan alışkanlık

Fareler ilk bir hafta boyunca hayvan tesis alışması için izin verildi. Başka bir davranış çalışmaya benzer şekilde, 3 günlük bir test-iklime alıştırma periyodundan (Şekil 1, aşama A) uyularak gerçekleştirildi. Nosiseptif testleri strese duyarlı olarak, ilk önlemler özellikle olmayan Alışmış farelerde 26,27 olarak, sonraki olanlardan daha uzun gecikmeleri verebilir. Alışkanlık adımı da aynı gün içinde ve gün arasında daha dengeli nosiseptif tepki değerlerinin obtention 2 ve 4, Şekil sağlar. Nosiseptif ve analjezik sirkadiyen etkilerini azaltmak içinduyarlılık 28,29, bütün denemeleri 10:00-04:00 yapılmıştır.

Nosiseptif testlerin seçimi

Nosiseptif testler termal, mekanik, kimyasal veya elektriksel uyaranlar (yorum 26,27,30. Farklı nosiseptif yöntemleri farklı Nosiseptörlerin ve liflerin 18,31,32 yoluyla işlenen edilebilir Onların seçim kritik kullanabilirsiniz.

Biz termal örnek olarak Randall ve Selitto 35 uyarlanan kuyruk daldırma testi (TİT) 33, D'amour ve Smith 34 tarafından geliştirilen klasik kuyruk darbesi testinin değiştirilmiş versiyonu, ve kuyruk basınç testi (TPT), seçilmiş ve farelerde morfinin neden analjezi, hiperaljeziyi ve hoşgörü çalışma mekanik yöntemler. Her iki test yaygın sıçanlarda kullanılmaktadır. Bir zaman kesme sistematik doku hasarı riskini önlemek veya sınırlamak için tanımlanmıştır.

Morfin-induced analjezi, hiperaljezi ve tolerans

Bu güçlü bir analjezik ve OIH indükleyici olarak Morfin, prototip mu-opioid agonist, insanlarda ve hem de farelerde 1,2,36, burada seçildi. Morfin analjezik etki farenin suşları, tatbikat yolları ve nosiseptif yöntemleri ile değişir bilinmektedir. C57BL / 6 farelerinde, güvenilir bir analjezi, genellikle 1-20 mg / kg doz aralığında 14,21 morfin deri altı enjeksiyonu ile elde edilir. Buna göre, termal nosisepsiyon 19,21 değerlendirilmiştir olan ED 50 değeri (7-20 mg / kg) yakın 5 mg / kg, en morfin tek bir uygulama (sc) aşağıdaki akut analjezi çalışma seçtik.

Tekrarlanan morfin uygulama sık ve hiperaljezi (ağrılı stimülasyonu için bir şiddetlenir hassasiyet (doz-yanıt eğrisinin bir sağa kayma ya da bir analjezik karşılık, genlik ve süresi azalıştan ya da kanıtladığı) analjezik toleransı ile eşliki) bazal nosiseptif değer bir azalma ile kanıtlandığı. Her ikisi de olumsuz etkiler tedavi süresi ve nosiseptif yöntemleri 21 opiat seçilir bileşik ve dozaj, doğasına, kemirgen suşları bağlıdır. Örneğin, tolerans ve hiperaljeziyi çalışma deneysel paradigmalar yüksek ve sabit (günde 20-40 mg / kg) ya da 22 (en fazla 50 ya da 200 mg / kg) 20,21 morfin dozları günlük yönetiminde oluşur. A, 8 günlük bir süre içinde, duruma göre, her gün morfin uygulamasından (sc 5 mg / kg) ile C57BL / 6 farelerinde hiperaljezi ve tolerans gelişimini teşvik etmiştir. Bu ılımlı morfin dozu daha iyi taklit klinik kullanım için daha yüksek olanlar tercih edilmiştir.

TİT operasyonel penceresinin kurmak

TİT bir muhtemel tuzak kemirgenler 26,37 arasında termoregülasyon kuyruk rolüne ilişkin olabilir. Ortam sıcaklığı nocicept önemli bir faktör olduğutepki ive varyasyonları, bu deneyler 38 boyunca (burada 21 ° C'de) sabit tutulması gerekmektedir. Isı yoğunluğu, genellikle 5 ila 10 saniye 27 içinde bir nosiseptif tepki algılamak için kuruldu. Kısa olanlar testin diferansiyel gücü azaltabilir oysa Nitekim, daha fazla gecikmeleri, nosiseptif uyarana ilgisi olmayan hayvan hareketlerinin izlenmesi için riskini artırabilir. Bu 48 ° C sabit bir sıcaklıkta TIT ölçümleri gerçekleştirildi Kuyruk çekme gecikmeleri 9 sn (bazal nosiseptif değer) yakındır ve 25 sn 4 sn (hiperaljezi) den farklı idi (maksimal analjezi; kesti). Pratik nedenlerle ek olarak, sabit bir sıcaklıkta nosiseptif tepki değerlerinin ölçümleri önsel böylece veri yorumlama kolaylaştıran, nosiseptörlerin ve devrelerin aynı repertuar içerebilir.

Olası Değişiklikler

Analjezi ve OIH ölçü için TIT işletme penceresinin optimizasyonuNTS

Analjezik yanıt odaklanırken, düşük bazal değerleri (yüksek ısı yoğunluğu) karşılık olarak bir gecikme tespiti lehine olabilir. Şekil 4, daha hızlı yanıt saptanmasını kolaylaştırabilir; Buna karşılık, bir ağrılı uyarıcı sonucu veya OIH gelişimini, daha yüksek taban çizgisi değerlerine (burada 48 ° C daha düşük bir ısı yoğunluk) gidermek için.

Morfin kaynaklı analjezi,: (Kritik adım önce belirtildiği gibi 5 mg morfin bulundu rağmen / güçlü bir analjezik yanıtı Şekil 3 ikna etmek ve (tekrarlanan uygulama üzerine) önemli hiperestezisi Şekil 4 tanıtmak için uygun bir doz kg, kendi dozaj adapte edilebilir hiperaljezi ve tolerans). Örneğin, daha düşük dozlar, daha yüksek dozların hiperaljezi başlangıcını hızlandırmak ve arttırmak için genlik seçilebilir ise (bu cut-off kısıtlamaları ortadan kaldırır) analjezi genlik azaltmak için kullanılabilir.

OveRall, 'nosiseptif pencerenin' optimizasyon çalışmanın altında farelerin genetik arka uyarlanmış ve dikkate Nosiseptörlerin ve devrelerin farklı dizilerin katılımı için olasılığı dikkate alınmalıdır.

Alternatif uyuşturucu agonistleri (fentanil, remifentanil)

En çok klinik olarak kullanılan afyon agonistleri olarak mu-opioid reseptörü hedef de, in vitro ve in vivo olarak farmakolojik özellikleri açısından önemli ölçüde farklılık göstermektedir. Örneğin, remifentanil ve fentanil için, morfin ile işaretlenmiş aksine, tam agonistler olarak davranırlar ve mu-opioid reseptörlerinin 39 içselleşmesini teşvik. Remifentanil birkaç dakika 41 ultra kısa bir yarı ömre sahiptir ise morfin ve fentanil gibi opium harici analjezikler, 40 saat aralığında yarı ömre sahiptir. İnsanlarda, OIH için en iyi kanıt, kısa etkili c olmak üzere, ameliyat sırasında afyon alınan hastaların birgibi remifentanil 2,42 gibi iyodu. Böylece, fentanil ve remifentanil TİT ve TPT paradigmalar altında, farelerde Hiperaljezi ve hoşgörü gelişimini incelemek için çok değerli araçlar olabilir.

OIH indüksiyonu alternatif modları (akut uygulama vs kronik)

OIH çok düşük ya da çok yüksek dozlarda 1,2 olsun, opiat tatbikat bir sonucu olarak, insan ve hayvan modellerinde görülmektedir. Biz morfin ılımlı dozda farelerin kronik tedavisi sonrasında OIH gelişimi burada rapor. . C57BL/6N farelerin tedavisi için birkaç gün 4 günlük morfin enjeksiyonu yeterli implante morfin granül ile değiştirilebilir bir berrak ve tekrarlanabilir bir durum Şekil hiperaljezik kanıt için gerekli olmuştur: çıkarılması üzerine, termal hiperaljezi ve allodini, mekanik hem de daha önce farelerde bildirilmiştir 43. Bir mikro-ozmotik pompası ile afyon infüzyonu başka bir olasılıktır 44. Kemirgenlerde, uzun süreli hiperaljezi de elde insan cerrahisinde 36,45,46 bu mu-opioid agonistinin kullanımını taklit eden bir protokol kullanılarak fentanil akut verilmesini takip etmektedir.

Tekniğin Sınırlamalar

Ağrı için hayvan türleri ve modelleri

Çok sayıda fare suşlarının karşılaştırmalı çalışmalar 4-gün tedavi, morfin, aşağıdaki 22 ağrılı uyaranlara 17,31,47 nosiseptif yanıtlarında ve OIH düzeylerinde büyük varyasyonlar için kanıt sağladı. Hayvan modellerinde (fareler ve sıçanlar) ağrı işleme ve modülasyon yatan mekanizmaları kronik ağrı hastalar için uygun olup olmadığını ve temel bir açıldı bir soru kalır. Böylece, çok dikkatli insanlar 16 hayvan verilerinin yorumlanması ve tahmin geçerlilik dikkat edilmelidir.

Ağrı ve analjezi Cinsiyet farklılıkları,

ntent "> ağrı için hayvan modelleri üzerinde en çok klinik öncesi çalışmalar, bu seçim yanlılığı rağmen, ortaya çıkan görünüm opioidi geliştirmek için opiat analjezikler 49,50, az yatkındır daha iyi yanıt olarak erkeği dikkate oldu. erkek kemirgenler 16,25,48 tarihinde yapılmıştır hiperaljeziyi 51,52 ve kadın meslektaşları (yorum 54) daha morfin analjezi 53 daha hoşgörülü kaynaklı. Ancak, nosisepsiyonun ve analjezik ilaçlar etkinliği açısından cinsiyet farkı böyle de devam etmeyin paradigma ', bir tek beden herkese uyar'. Nitekim, veri zenginliği şimdi çok sayıda değişkenler gibi opioid ilaç etkinliği ve seçicilik, nosiseptif deneyde, genetik arka plan, yaş, gonado-hormonal durum ya da sosyal etkileşim 48,54 olarak cinsiyet farklılıkları büyüklüğünü ve yönünü etkileyebilir gösterir. İnsanlarda klinik ağrı kadınlarda daha yaygın olduğunu, ancak bu gerçeği gerçek cinsiyet farklılıklarını yansıtan olmadığını tartışma 48,55,56 bir konudur. Fometa-analizler kadınlarda 57 bir anlamlı olarak daha fazla opioid etkinliğine işaret hastalar kontrollü konularda gerçekleştirilen oysa r örnek, elli klinik çalışmaların global analiz cinsiyetler arasında analjezik özelliklerinde anlamlı bir fark bulunmuştur. belirgin olmuştur ne tezat ikinci gözlem, kemirgenlerde bulunan, yine böyle ayrılıklar 16,48,55,57 için kökeni ile ilgili çeşitli sorular ortaya çıkarmaktadır. Toplamda, analjezi cinsiyet farklılıkları var ve liyakat daha altta yatan mekanizmaları ve klinik etkileri üzerinde durulmaktadır.

Nosiseptif testler hakkında

Kuyruk çekme testi spinal refleks ama supraspinal etkilere 58. tabi olabilir. TİT sıçanlar üzerinde gerçekleştirmek için nispeten kolay ama farelerde daha fazla uzmanlık gerektirir. Bir potansiyel zorluk istenmeyen stres yaratmadan doğru bir duruş içinde fare korumaktır. Önerilen protokolüne uygun olarak ayarlanabilirkohort boyutu. 16 hayvan (8 kontrol ve tedavi gören 8) kolayca kadar bazal nosiseptif tepki değerlerinin ölçümü olarak (birinci TIT kullanarak, daha sonra farelerin tüm dizi için TPT) endişe altında yönetilmektedir. Analjezi süresi dersleri izleme kazandırdığı zaman aralığı (burada 30 dakika) içinde kesin bir zaman çizelgesinin kurulması ve (sonra ilk TİT, TPT) test edilebilir hayvanların maksimum sayısının değerlendirilmesini gerektirir. Hayvanların bütün kohort böylece deneyi kinetik sınırlamaları saygı izin vermek için alt gruplara ayrılabilir.

Mevcut / Alternatif Yöntemler ile ilgili Tekniğinin Önemi

OIH fare karşı farelerde

Sıçanlar yaygın akut ya da kronik bir opiat uygulama 46,59-61 ardından, opioid analjezik, hiperaljezi ve tolerans incelemek için kullanılmıştır. Gerçekten de, birkaç pratik nedenlerden dolayı, üstün olarak kabul edilebilirağrı deneyler 16,61 için bir hayvan modeli olarak farenin. Bununla birlikte, yakın zamana kadar, genetik olarak tadil edilmiş farelerin üretimi basit bir işlem değildi. Çok sayıda genetiği değiştirilmiş fare suşları zaten mevcut olduğundan, bizim modeli farelerde OIH ve tolerans gelişiminde çok sayıda bireysel genlerin katkısını incelemek için bir fırsat sunuyor.

Diğer nosiseptif testler karşı TİT ve TPT

TIT tail flick test uyarımı alanı olan en belirgin fark bir çeşididir. Radyant ısı ile aksine, sıcak suya daldırma ile kuyruğun sıcaklığında hızlı ve düzgün bir artışa yol açar. Termal ağrı testi (sıcak levha veya Hargreaves testleri) diğer formları ile karşılaştırıldığında, TİT genelinde ve konular içinde hem de oldukça tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

TPT muhtemelen içeren mekanik nosisepsiyonun 26,27,35 çalışma için çok popüler bir testtirayrı nosiseptif lifler ve moleküler dönüştürücüler ardından TIT 32. Bu hızlı ve güvenilir ölçümler 59 sağlar ama deneyci ve büyük hayvan kohortlar bazı uzmanlık gerektirir. Bu çalışmada, diğer prosedürler veya aygıtta kullanılan analjezimetre bir alternatif olarak gerginlik ölçme dayanarak (inceleme 27) varolur. TPT von Frey filamentleri genellikle mekanik allodynia'yı (yorum 27) değerlendirmek için alınır ise mekanik hiperaljeziyi eğitim için uygundur.

Bu Tekniği Mastering sonra Gelecekteki Uygulamalar veya Tarifleri

Burada mevcut deney OIH / tolerans modeli benzer ağrı modülasyonunda tek tek genlerin rolünü değerlendirmek amacıyla genetik olarak modifiye edilmiş fareler için adapte edilebilir. Ayrıca kronik ağrıyı gidermek için potansiyel terapötik maddelerin etkinliğini araştırmak için bir model sistem sağlar.

Disclosures

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Acknowledgments

Biz Dr JL teşekkür ederiz. Galzi (UMR7242 CNRS, Illkirch, Fransa) verdiği destek için.

Bu çalışma CNRS, İNSERM, Université de Strasbourg, Alsace BioValley tarafından ve Conectus, Agence National de la Recherche (ANR 08 EBIO 014.02) hibe tarafından desteklenmiştir Conseil Régional d'Alsace (Pharmadol), Communauté Urbaine de Strasbourg (Pharmadol), ICFRC (Pharmadol), OSEO (Pharmadol), Yön Générale des Entreprises (Pharmadol).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57BL/6N Tac mice Taconic, Ry, Denmark C57BL/6N Tac B6-M Male mice (25-30 g)
Morphine hydrochloride Francopia, Paris, France CAS no. 52-26-6 Delivered with special authorization
Syringes (Terumo) Dutscher, Brumath, France 050000 Polypropylene, sterile, volume: 1 ml
Needles (Terumo) Dutscher, Brumath, France 050101 26 G ½ (Terumo reference : NN2613RO1)
Mouse restrainer Home-made Two metallic grids (5 x 11 cm) assembled with adhesive tape and staples
Thermostated water bath GR150 Grant Instruments, Cambridge, UK GP 0540003
Analgesimeter Panlab, Barcelona, Spain LE 7306
Kaleidagraph software Synergy software, Reading, PA, USA Kaleidagraph 4.03  Scientific graphing
STATview software Free download, statistics

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Angst, M. S., Clark, J. D. Opioid-induced hyperalgesia. A qualitative systematic review. Anesthesiology. 104, 570-587 (2006).
  2. Chu, L. F., Angst, M. S., Clark, D. Opioid-induced hyperalgesia in humans. Molecular mechanisms and clinical considerations. Clin. J. Pain. 24, 479-496 (2008).
  3. Lee, M., Silverman, S., Hansen, H., Patel, V., Manchikanti, L. A comprehensive review of opioid-induced hyperalgesia. Pain Physician. 14, 145-161 (2011).
  4. Hutchinson, M. R., Shavit, Y., Grace, P. M., Rice, K. C., Maier, S. F., Watkins, L. R. Exploring the neuroimmunopharmacology of opioids: An integrative review of mechanisms of central immune signaling and their implications for opioid analgesia. Pharmacol. Rev. 63, 772-810 (2011).
  5. Wang, X., et al. Morphine activates neuroinflammation in a manner parallel to endotoxin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 109, 6325-6330 (2012).
  6. Colpaert, F. C. System theory of pain and of opiate analgesia: No tolerance to opiates. Pharmacol. Rev. 48, 355-402 (1996).
  7. Simonnet, G., Rivat, C. Opioid-induced hyperalgesia: abnormal or normal pain. NeuroReport. 14, 1-7 (2003).
  8. Mao, J., Sung, B., Ji, R. R., Lim, G. Chronic morphine induces downregulation of spinal glutamate transporters: implications in morphine tolerance and abnormal pain sensitivity. J. Neurosci. 22, 8312-8323 (2002).
  9. King, T., Ossipov, M. H., Vanderah, T. W., Porreca, F., Lai, J. Is paradoxical pain induced by sustained opioid exposure an underlying mechanism of opioid antinociceptive tolerance. Neurosignals. 14, 194-205 (2005).
  10. DuPen, A., Shen, D., Ersek, M. Mechanisms of opioid-induced tolerance and hyperalgesia. Pain Management Nursing. 8, 113-121 (2007).
  11. Chu, L. F., et al. Analgesic tolerance without demonstrable opioid-induced hyperalgesia : A double-blinded, randomized, placebo-controlled trial of sustained-release morphine for treatment of chronic nonradicular low-back. 153, 1583-1592 (2012).
  12. Ferrini, F., et al. Morphine hyperalgesia gated through microglia-mediated disruption of neuronal Cl- homeostasis. Nature Neurosci. 16, 183-192 (2013).
  13. Zimmermann, M. Ethical guidelines for investigation of experimental pain in conscious animals. Pain. 16, 109-110 (1983).
  14. Mogil, J. S. The genetic mediation of individual differences in sensitivity to pain and its inhibition. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 7744-7751 (1999).
  15. Mogil, J. S., et al. Screening for pain phenotypes : Analysis of three congenic mouse strains on a battery of nine nociceptive tests. Pain. 126, 24-34 (2006).
  16. Mogil, J. S. Animal models of pain : progress and challenges. Nature Rev. Neurosci. 10, 283-294 (2009).
  17. Mogil, J. S., et al. Heritability of nociception I : Responses of 11 inbred mouse strains on 12 measures of nociception. Pain. 80, 67-82 (1999).
  18. Larivière, W. R., et al. Heritability of nociception. III. Genetic relationships among commonly used assays of nociception and hypersensitivity. Pain. 97, 75-86 (2002).
  19. Elmer, G. I., Pieper, J. O., Negus, S. S., Woods, J. H. Genetic variance in nociception and its relationship to the potency of morphine-induced analgesia in thermal and chemical tests. Pain. 75, 129-140 (1998).
  20. Eidelberg, E., Erspamer, R., Kreinick, C. J., Harris, J. Genetically determined differences in the effects of morphine on mice. Eur. J. Pharmacol. 32, 329-336 (1975).
  21. Kest, B., Hopkins, E., Palmese, C. A., Adler, M., Mogil, J. S. Genetic variation in morphine analgesic tolerance: A survey of 11 inbred mouse strains. Pharmacol. Biochem. Behav. 73, 821-828 (2002).
  22. Liang, D. -Y., Liao, G., Wang, J., Usuka, J., Guo, Y., Peltz, G., Clark, J. D. A genetic analysis of opioid-induced hyperalgesia in mice. Anesthesiology. 104, 1054-1062 (2006).
  23. Kest, B., Palmese, C. A., Hopkins, E., Adler, M., Juni, A., Mogil, J. S. Naloxone-precipitated withdrawal jumping in 11 inbred mouse strains : Evidence for common genetic mechanisms in acute and chronic morphine physical dependence. Neurosci. 115, 463-469 (2002).
  24. Bryant, C. D., et al. Behavioral differences among C57BL/6 substrains: Implications for transgenic and knockout studies. J. Neurogenet. 22, 315-331 (2008).
  25. Mogil, J. S., Chanda, M. L. The case for the inclusion of female subjects in basic science studies of pain. Pain. 117, 1-5 (2005).
  26. Le Bars, D., Gozariu, M., Cadden, S. W. Animal models of nociception. Pharm. Rev. 53, 597-652 (2001).
  27. Barrot, M. Tests and models of nociception and pain in rodents. Neurosci. 211, 39-50 (2012).
  28. Kavaliers, M., Hirst, M. Daily rythms of analgesia in mice: effects of age and photoperiod. Brain Res. 279, 387-393 (1983).
  29. Castellano, C., Puglisi-Allegra, S., Renzi, P., Oliverio, A. Genetic differences in daily rhythms of pain sensivity in mice. Pharmacol. Biochem., and Behavior. 23, 91-92 (1985).
  30. Sandkühler, J. Models and mechanisms of hyperalgesia and allodynia. Physiol. Rev. 89, 707-758 (2009).
  31. Mogil, J. S., et al. Heritability of nociception II. ‘Types’ of nociception revealed by genetic correlation analysis. Pain. 80, 83-93 (1999).
  32. Scherrer, G., et al. Dissociation of the opioid receptor mechanisms that control mechanical and heat. 137, 1148-1159 (2009).
  33. Janssen, P. A. J., Niemegeers, C. J. E., Dony, J. G. H. The inhibitory effect of fentanyl and other morphine-like analgesics on the warm water induced tail withdrawal reflex. Arzneimittelforsch. 13, 502-507 (1963).
  34. Amour, F. E., Smith, D. L. A method for determining loss of pain sensation. J. Pharmacol. Exp. Ther. 72, 74-79 (1941).
  35. Randall, L. O., Selitto, J. J. A method for measurement of analgesic activity on inflamed tissue. Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 111, 409-419 (1957).
  36. Elhabazi, K., et al. Involvement of neuropeptides FF receptors in neuroadaptative responses to acute and chronic opiate treatments. Br. J. Pharmacol. 165, 424-435 (2012).
  37. Berge, O. -G., Garcia-Cabrera, I., Hole, K. Response latencies in the tail-flick test depend on tail skin temperature. Neurosci. Lett. 86, 284-288 (1988).
  38. Benoist, J. -M., Pincedé, I., Ballantyne, K., Plaghi, L., Le Bars, D. Peripheral and central determinants of a nociceptive reaction: An approach to psychophysics in the rat. PLoS ONE. 3, e3125 (2008).
  39. Morgan, M. M., Christie, M. J. Analysis of opioid efficacy, tolerance, addiction and dependence from cell culture to human. Br. J. Pharmacol. 164, 1322-1334 (2011).
  40. Trescot, A. M., Datta, S., Lee, M., Hansen, H. Opioid pharmacology. Pain Physician. 11, S133-S153 (2008).
  41. Egan, T. D., et al. The pharmacokinetics of the new short-acting opioid remifentanil (GI87084B) in healthy adult male volunteers. Anesthesiology. 79, 881-892 (1993).
  42. Hansen, E. G., Duedahl, T. H., Rømsing, J., Hilsted, K. L., Dahl, J. B. Intra-operative remifentanil might influence pain levels in the immediate post-operative period after major abdominal surgery. Acta Anaesthesiol Scand. 49, 1464-1470 (2005).
  43. Li, X., Angst, M. S., Clark, J. D. A murine model of opioid-induced hyperalgesia. Mol. Brain Res. 86, 56-62 (2001).
  44. Varnado-Rhodes, Y., Gunther, J., Terman, G. W., Chavkin, C. Mu opioid analgesia and analgesic tolerance in two mouse strains. C57BL/6 and 129/SvJ. Proc. West Pharmacol. Soc. 43, 15-17 (2000).
  45. Celerier, E., et al. Long-lasting hyperalgesia induced by fentanyl in rats: preventive effect of ketamine. Anesthesiology. 92, 465-472 (2000).
  46. Celerier, E., Simonnet, G., Maldonado, R. Prevention of fentanyl-induced delayed pronociceptive effects in mice lacking the protein kinase C gamma gene. Neuropharmacol. 46, 264-272 (2004).
  47. Larivière, W. R., Chesler, E. J., Mogil, J. S. Transgenic studies of pain and analgesia: Mutation or background phenotype. J. Pharmacol. Exp. Ther. 297, 467-473 (2001).
  48. Mogil, J. S. Sex differences in pain and pain inhibition: multiple explanations of a controversial phenomenon. Nature Rev. Neurosci. 13, 859-866 (2012).
  49. Kest, B., Wilson, S. G., Mogil, J. S. Sex differences in supraspinal morphine analgesia are dependent on genotype. J. Pharmacol. Exp. Ther. 289, 1370-1375 (1999).
  50. Kest, B., Sarton, E., Dahan, A. Gender differences in opioid-mediated analgesia. Anesthesiology. 93, 539-547 (2000).
  51. Holtman, J. R., Wala, E. P. Characterization of morphine-induced hyperalgesia in male and female rats. Pain. 114, 62-70 (2005).
  52. Juni, A., et al. Sex differences in hyperalgesia during morphine infusion: effect of gonadectomy and estrogen treatment. Neuropharmacol. 54, 1264-1270 (2008).
  53. Craft, R. M., et al. Sex differences in development of morphine tolerance and dependence in the rat. Psychopharmacol. 143, 1-7 (1999).
  54. Bodnar, R. J., Kest, B. Sex differences in opioid analgesia, hyperalgesia, tolerance and withdrawal: central mechanisms of action and roles of gonadal hormones. Hormones Behav. 58, 72-81 (2010).
  55. Greenspan, J. D., et al. Studying sex and gender differences in pain and analgesia: A consensus report. Pain. 132, S26-S45 (2007).
  56. Fillingim, R. B., Ness, T. J. Sex-related hormonal influences on pain and analgesic responses. Neurosci. Biobehav. Rev. 24, 485-501 (2000).
  57. Niesters, M., et al. Do sex differences exist in opioid analgesia? A systematic review and meta-analysis of human experimental and clinical studies. Pain. 151, 61-68 (2010).
  58. Millan, M. J. Descending control of pain. Prog. Neurobiol. 66, 355-474 (2002).
  59. Celerier, E., Laulin, J. -P., Corcuff, J. -B., Le Moal, M., Simonnet, G. Progressive enhancement of delayed hyperalgesia induced by repeated heroin administration : A sensitization process. J. Neurosci. 21, 4074-4080 (2001).
  60. Simonin, F., et al. RF9, a potent and selective neuropeptide FF receptor antagonist, prevents opioid-induced tolerance associated with hyperalgesia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 466-471 (2006).
  61. Wilson, S. G., Mogil, J. S. Measuring pain in the (knockout) mouse: big challenges in a small mammal. Behav. Brain Res. 125, 65-73 (2001).

Tags

Nörobilim Sayı 89 fareler nokisepsiyon kuyruk daldırma testi kuyruk basınç testi morfin analjezi opioid kaynaklı hiperaljezi tolerans
Termal ve Mekanik nosiseptik Usuller kullanma Farelerde Morfin kaynaklı Hiperaljezi ve Analjezik Hoşgörü Değerlendirilmesi
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Elhabazi, K., Ayachi, S., Ilien, B., … More

Elhabazi, K., Ayachi, S., Ilien, B., Simonin, F. Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities. J. Vis. Exp. (89), e51264, doi:10.3791/51264 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter