Infarto do Miocárdio e Avaliação de Resultados Funcional em porcos

Summary

Este protocolo descreve o modelo suíno infarto do miocárdio (IM) usando um 90 min-peito fechado oclusão coronária balão da artéria descendente anterior esquerda (LAD), seguida de reperfusão. Além disso, o protocolo para vários parâmetros de resultados, tais como a função cardíaca, hemodinâmica, resistência microvascular e tamanho do infarto, também são apresentados.

Abstract

A introdução de terapêutica cardiovascular recém-descobertas em ensaios primeiro-em-homem depende de um roteiro ético e legal estritamente regulamentado. Um pré-requisito importante é uma boa compreensão de todos os aspectos de segurança e eficácia obtidos em um modelo animal de grande porte que validamente refletem o cenário humano de infarto do miocárdio (IM). Porcos são amplamente utilizados a este respeito que a sua dimensão cardíaca, hemodinâmica e anatomia coronariana estão perto dos seres humanos. Aqui, apresentamos um protocolo eficaz para a utilização do modelo MI suíno utilizando um baú fechado oclusão coronária balão da artéria anterior esquerda (LAD) descendente, seguida de reperfusão. Esta abordagem é baseada em 90 min de isquemia miocárdica, induzindo grande infarto do ventrículo esquerdo do anterior, septal e ínfero paredes. Além disso, apresentamos os protocolos para várias medidas de resultado que fornecem uma ampla gama de informações sobre o coração, como sistólica cardíaca e função diastólica, hemodinamicamentecs, a velocidade do fluxo coronário, resistência microvascular e tamanho do infarto. Este protocolo pode ser facilmente adaptada para atender às exigências específicas para estudar a validação de novos produtos biológicos cardioregenerative em diferentes fases (ou seja, logo após o insulto isquêmico agudo, no cenário subaguda ou mesmo no MI crônica uma vez a formação de cicatrizes foi concluída). Assim, este modelo fornece uma ferramenta útil para estudar translacional MI, posterior remodelamento adverso, eo potencial de novos agentes cardioregenerative.

Introduction

Infarto agudo do miocárdio (IAM) e suas sequelas a longo prazo, tais como insuficiência cardíaca crônica (ICC) impactar profundamente o prognóstico do paciente e qualidade de vida, e muito menos as restrições impostas alto custo dos nossos recursos de saúde disponíveis ^1. A prevalência de CHF no mundo ocidental é estimado em 1-2%, dos quais ~ 60% dos casos são consequência da AMI como causa primária ^2. Só nos EUA, cerca de 5,7 milhões de pacientes sofrem de CHF respondendo por cerca de US $ 30 bilhões em custos anuais de saúde em 2008, com um triplicado previsto em custos crescentes para 97.000 milhões dólares anualmente em 2030 ^1. Tomados em conjunto, estes números fazem um forte argumento para a desenvolvimento de novos tratamentos cardioregenerative que, para a tradução rápida, dependem de um animal modelo de infarto reprodutível e confiável grande miocárdio que imita com precisão o cenário humano.

Suínos (Sus scrofa) estão cada vez mais sendo usados ​​em doeninvestigação lar para testes farmacológicos e toxicológicos ^3. Uma das características responsáveis ​​por esse sucesso como uma ferramenta de pesquisa translacional é a sua semelhança na função cardíaca e da anatomia com o ^4,5 coração humano. Por exemplo, a razão de porco coração-a-corpo de peso, tamanho cardíaco e distribuição anatomia das artérias coronárias têm demonstrado ser muito semelhante ao homem ^4. Além disso, o metabolismo dos cardiomiócitos, as propriedades eletrofisiológicas e resposta a um insulto isquêmico, como AMI têm sido relatadas para mostrar altos níveis de acordo com a situação humana ^6,7. Em última análise, para cumprir os critérios acima descritos, um protocolo de MI-padronizado que produz robusto e sustentável MI para testes de novos medicamentos de investigação (IND) é necessário. Aqui, apresentamos um modelo tão padronizada que usa um 90 min-peito fechado oclusão coronária balão da artéria descendente anterior esquerda (LAD), seguida de reperfusão, criando assim miocárdio reprodutível emmiocárdio cobrindo o anteroapical, paredes septal e ínfero do ventrículo esquerdo.

Protocol

Todos os experimentos in vivo foram conduzidos de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, preparados pelo Instituto de Recursos Animais de Laboratório. Os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Experimentação Animal local.

1. Medicação, Anestesia Venosa Access, e intubação

1. Medicação e Anestesia
   1. A pré-medicação
      1. Iniciar amiodarona 150 mg / kg, 10 dias antes da cirurgia para evitar arritmias. Continuar a amiodarona em uma dose de 100 mg / kg desde o dia da operação até ao dia 28. Reduzir a dosagem de 50 mg / kg no dia 29 e continua até ao final do estudo.
      2. Comece a terapia anti-plaquetária, 1 mg / kg de clopidogrel dia 3 antes da cirurgia e 4,5 mg / kg de ácido acetilsalicílico um dia antes da cirurgia. Continuar clopidogrel 1 mg / kg por dia e de ácido acetilsalicílico a 80 mg / dia.
      3. Comece a medicação para a dor um dia antes da cirurgia por fentanilo, 25mg / h para porcos ~ 70 kg. Continue o uso de adesivos de fentanil por 24 horas no pós-operatório para garantir medicamento adequado da dor. Além disso, monitorar diariamente para sinais de desconforto putativo (ou seja, o comportamento, a respiração, marcha, mobilidade, etc) para aumentar a medicação para dor.
      4. Rápido o animal por 12 horas, manter o acesso ilimitado à água.
   2. Anestesia
      1. Para prevenir o stress e desconforto desnecessário, sedar o porco na sua estável por injecção intramuscular de uma mistura de midazolam 0,4 mg / kg, quetamina a 10 mg / kg, e atropina 0,014 mg / kg.
      2. Obter acesso venoso através da canulação da veia da orelha com um 18 G iv cânula. Induzir a anestesia por administração intravenosa de 5 mg / kg sodiumthiopental, e dar 1000/100 mg de amoxicilina / ácido clavulânico para evitar infecções. O porco receberá 1000/100 mg de amoxicilina / ácido clavulânico no dia após a cirurgia, o tratamento com antibióticos.
      3. Entubar o porco usando um endotrachtubo eal (tamanho 8.5 para suínos com peso ~ 70 kg). Se for necessário realizar balão de ventilação com uma frequência de 12/min e transportar o porco para a sala de operação.
      4. Na chegada ao teatro de operação, começar imediatamente a ventilação com pressão positiva mecânica com FiO ₂ 0,50, 10 ml / kg volume corrente e uma freqüência de 12/min sob continua capnografia.
      5. Comece a anestesia balanceada por continua infusão intravenosa de uma combinação de midazolam 0,5 mg / kg / hr, sufentanil 2,5 mcg / kg / hr e pancurônio brometo de 0,1 mg / kg / hr. Durante toda a operação, monitorar continuamente ECG, pressão arterial, temperatura e capnografia para medir a profundidade da anestesia. Por exemplo, se uma taquicardia sinusal está presente, verifique se medicação para a dor e / ou anestesia são adequados.
      6. Infundir 4,3 mg / kg de amiodarona em 500 ml venofundin 6% por via intravenosa.
      7. Monitorar o ritmo do coração por um 5 leva ECG.
      8. Raspar e limpar a garganta e traseira limárea b.
      9. Insira um cateter de Foley.

2. Ecocardiografia transtorácica

1. Colocar o animal em decúbito lateral direito. Em suínos da raça Landrace, como porcos Dalland, apenas paraesternal (eixo longo e curto) podem ser obtidos. Devido à forma do tórax, aquisição apical não é viável.
2. Oriente e obter paraesternal eixo longo vista em 2D (modo B). Determine as dimensões do VE em diástole e sístole final final no modo-M.
3. Gire a sonda echo 90 ° no sentido horário, mantendo a sua posição paraesternal para adquirir os LV eixo curto a nível da válvula mitral, músculo papilar e ápice. O eixo curto do músculo papilar e ápice pode exigir a colocação da sonda echo um ou dois espaços intercostais inferiores em relação à posição da válvula mitral curto vista eixo.

3. Surgical Acesso Preparação e Vascular

1. Disinfect as áreas cirúrgicas com iodo a 2% e usar panos cirúrgicos estéreis para cobrir as partes não estéreis do porco.
2. Faça uma incisão medial no pescoço. Passe a linha alba para minimizar o dano muscular e sem rodeios abordar a artéria carótida ea veia jugular interna ao lado da traquéia.
3. Cuidadosamente isolar a artéria carótida ea veia jugular interna. Verifique se o nervo vago não está danificada. Coloque suturas Vicryl 2-0 em torno de ambos os navios para ganhar o controle embarcação. Alcançar o acesso arterial através da canulação da artéria carótida interna com uma bainha 8F pela técnica de Seldinger. Fixe a bainha até a artéria, certifique-se a artéria não está totalmente obstruído pela sutura. O acesso venoso pode ser adquirido através da canulação da veia jugular com uma bainha 9F também utilizando a técnica de Seldinger. Antes de fixar a bainha certifique-se a veia é ligado. Alternativamente, a artéria femoral também pode ser utilizado para acesso arterial.
4. Administrar 100 IE / kg de heparina imediatamente após a inserção da bainhahs para inibir a formação de trombos.
5. Para a medição da pressão arterial estável e constante, canular uma das artérias menores em um dos membros traseiros, fazendo uma pequena incisão acima da artéria. A artéria é encontrado logo abaixo da pele, pulsações podem ser sentidos através da pele. Isolar a artéria do seu tecido circundante. Coloque 2 suturas Vicryl 2-0 ao redor do navio, uma proximal e distal 1. Ligadura do lado distal e inserir um 18 G iv cânula e segura firmemente conectar a pressão.

4. Pressão Invasiva Análise Volume de Loop

1. Inserir um cateter Swann-Ganz (SG) através da bainha previamente colocado na veia jugular interna.
2. Conectar um dispositivo de débito cardíaco para a parte da SG que culmina no lúmen proximal.
3. Injetar 5 ml de solução salina 0,9% para o lúmen proximal do SG e medir o débito cardíaco; Repita isso três vezes e calcular a média dos índices.
4. Calibre o sistema fotovoltaico, utilizando o anteriormentesaída cardíaca determinada.
5. Insira o cateter 7F condutância através da artéria carótida para o ventrículo esquerdo sob orientação fluoroscópica.
6. Selecione o maior presente segmento no LV para medições de volume e executar uma varredura de linha de base em apnéia.
7. Após a calibração do volume é completado, ficha 10-15 bate em apnéia.
8. Remover o SG e colocar um cateter de balão na veia cava inferior ao nível do diafragma sob orientação fluoroscópica.
9. Realize redução da pré-carga por inflar o balão em apnéia e registrar os correspondentes PV-Loops.

5. Pressão intracoronária e Medição da vazão

1. Diluir a nitroglicerina numa concentração de 100 ug / ml e dilui-se a adenosina a uma concentração de 30 ug / ml.
2. Posicione um cateter guia 8F no óstio da artéria coronária esquerda.
3. Coloque o fio de pressão / fluxo combinado na parte proximal do arter coronária esquerday.
4. Administrar 200 ug de nitroglicerina intracoronária e normalizar a pressão distai (Pd), medido pelo fio, com a pressão arterial.
5. Coloque o fio na parte média do artéria descendente anterior esquerda (LAD).
6. Comece a medir a pressão da linha de base e de fluxo. Induzir hiperemia pela administração de 60 mg de adenosina intracoronária, lave com 2 ml de solução salina e medir a pressão hiperemia e fluxo. Aguarde até que o fluxo de restaurar aos valores basais. Repetir a medição duas vezes.
7. Infundir mais 200 mg de nitroglicerina intracoronária e repita os passos 1.6 e 1.7 para a artéria coronária circunflexa esquerda.

6. Indução de MI

1. Coloque o cateter intracardíaca desfibrilação no ventrículo direito utilizando a bainha venosa. Os eléctrodos distais devem ser no vértice do ventrículo, os eléctrodos proximal do átrio e / ou veia cava superior. Conectar o cateter para o desfibrilador e configurá-lo para 50J.
2. Medir o diâmetro da LAD distal a partir da segunda diagonal (D2) em AP e LAO 30 ° vista.
3. Escolher um balão de angioplastia com um diâmetro de acordo com o diâmetro da LAD distal do D2 (Figura 1).
4. Coloque um fio-guia através do cateter guia distal no LAD.
5. Avance o cateter balão sobre o fio-guia. Colocar o balão distai do D2.
6. Administrar 30 IE / kg de heparina.
7. Inflar o balão até que a pressão corresponde ao diâmetro direito da LAD.
8. Verifique a oclusão total da LAD pela angiografia (Figura 1).
9. Cubra o campo de trabalho estéril ea ferida no pescoço com panos de campos estéreis. Livre o peito de qualquer cobertura para torná-lo disponível para as compressões torácicas ou transtorácica desfibrilação.
10. Verifique a pressão no balão durante a próxima 90 min e restaurar a pressão, se necessário.
11. No caso de fibrilação ventricular:
    1. Iniciar imediatamente as compressões torácicas com uma frequência de 100/min.
    2. Administrar 300 mg de amiodarona por via intravenosa na forma de bolus rápido (~ 1 min).
    3. Comece a desfibrilação intracardíaca, dar choques de 50 J.
    4. Após 5 choques sem sucesso, reiniciar as compressões torácicas. Mude desfibrilação intracardíaca à desfibrilação transtorácica e choque com 150 J. Em caso de choque sem sucesso, mudar a 200 J.
    5. Se necessário, administrar outra dose de 150 mg de amiodarona e / ou 1 mg de adrenalina. Repetir adrenalina duas vezes com intervalos de 3-5 minutos, quando necessário.
    6. Continue as compressões torácicas, intercaladas com desfibrilação transtorácica

Finalizando o procedimento cirúrgico (para acompanhamento a longo prazo)

1. Após 90 min de verificação por angiografia se o LAD é ainda totalmente ocluído.
2. Administrar outros 30 IE / kg de heparina e desinflar o balão. Verifique a existência de reperfusão. Retire o balão vazio com o guidção a partir da bainha de cateter da carótida.
3. Cuidadosamente remover a bainha arterial e prender a artéria carótida imediatamente com uma pinça de anastomose (Figura 1). Utilização continua pontos (6-0 prolene) para fechar a artéria carótida. Retire o grampo e verificar se há vazamentos.
4. Remover o cateter de desfibrilhação interna e retirar a bainha da veia jugular interna. Ligadura proximal da entrada da bainha.
5. Feche o tecido subcutâneo e pele do pescoço em duas camadas, utilizando 2-0 Vicryl.

7. Ressonância magnética cardíaca

1. Colocar o animal na cabeça mesa MRI primeiro em decúbito dorsal sob anestesia contínua.
2. Coloque um phased array bobina cardíaca dedicado sobre o peito do animal.
3. Para o planejamento de imagem obter imagens de escoteiros no eixo curto e duas câmaras visualizações eixo longo.
4. Adquirir fechado-ECG de estado estacionário de precessão livre (SSFP) cine de eixo curto (de ápice para a base de LV) e dois chamber visualizações eixos longo.
5. Realce pelo gadolínio Tarde (LGE) pode ser adquirida usando uma recuperação inversão 3D-turbo-gradiente-eco-técnica 15 minutos após a dose dupla injeção iv bolus de um agente de contraste gadolínio base.
6. Realizar análise off-line com software validado de parâmetros funcionais. Avaliar fração-ejeção do ventrículo esquerdo (FEVE), massa do VE, o volume diastólico final, volume sistólico final, volume sistólico, débito cardíaco, e massa cicatriz.

8. Fim de Estudo e infarto Tamanho

1. No final do estudo, a seguir protocolos 1-5 e 7 para adquirir seguimento medições.
2. Faça uma média de 30-40 cm de incisão logo abaixo da fúrcula a um ponto logo abaixo do apêndice xifóide. Avance através da linha alba até o esterno. Dividir o xifóide e usar a tesoura Klinkenberg para separar o esterno posterior do pericárdio com cautela. Depois de usar a tesoura sem rodeios continuar mais separação. Realize uma esternotomia by por exemplo, usando um martelo e Lebsch faca. Hemorragia de medula óssea é minimizado pela fricção cera óssea na medula. Abra o tórax com um afastador de esterno.
3. Digite o espaço pleural 3 e localizar a veia cava inferior no mediastino.
4. Humanely sacrificar o animal, cortando a veia cava inferior sob anestesia profunda. Retirar sangue com um dispositivo de sucção. Coloque uma bateria de 9 V no ápice de induzir fibrilação ventricular.
5. Após excisão do coração, cortado a direito e no ventrículo esquerdo em cinco fatias de base para o ápice e incubadas em 1% de cloreto de trifenil-tetrazólio dissolvido em 0,9% de solução salina a 37 ° C durante 15 min. Em seguida, lavar as fatias em 0,9% de solução salina e fotografar as fatias a partir de ambos os lados.

Representative Results

A mortalidade e infarto Tamanho

No nosso centro, de 32 porcos (Feminino Dalland Landrace, 6 meses velho, ~ 70 kg), que foram submetidos a este protocolo MI, cinco (15,6%) morreram devido à fibrilação ventricular refratária durante a isquemia. Este protocolo cria um enfarte cobrindo cerca de 10-15% do ventrículo esquerdo, localizado na ântero, septo e paredes ínfero (Figura 2A). Se a avaliação não-invasiva de série do tamanho do enfarte não se justifica, contraste de gadolínio tarde (LGE) em CMR pode ser utilizado para seguir a área de enfarte não viáveis ​​ao longo do tempo (Figura 2B).

Função e Remodelação Cardíaca

Quatro semanas após o IM, os parâmetros globais e regionais que refletem a função cardíaca deve ser diminuída em comparação com os valores basais saudáveis. Especificamente, a fração de ejeção ventricular esquerda (FEVE) deve diminuir para cerca de ~ 35-45% quatro semanas de pós-MI. Além da função sistólica global,vários parâmetros que refletem pós-MI remodelamento adverso também pode ser medida, como a morfologia e diâmetros usando CMR e ecocardiograma (Figuras 3A e 3B) LV. Quatro semanas depois do MI, um aumento no volume diastólico final (EDV) como um sinal de remodelação adverso pode ser esperado (Figuras 3A e 3B).

Parâmetros de fluxo e pressão Coronárias

A angiogênese ea formação de novos capilares são frequentemente considerados como importantes objetivos do tratamento na doença isquêmica do coração ^8. Avaliação da resistência microvascular pode ser indirectamente com base na medição combinada de pressão e velocidade de fluxo intracoronária. Representante pressão e de medição de velocidade de fluxo sob condições e hiperemia máxima normal é mostrado na Figura 4. Quatro semanas depois do MI, a resistência microvascular hiperêmico deve ser aumentada na artéria coronária relacionada com enfarte (LAD), em comparaçãoà situação inicial ^8.

. Figura 1 modelo MI baseado na oclusão LAD balão (A) equipamentos cirúrgicos Standard com: 1.) Braçadeiras de toalha; 2) mosquitos; 3) dissecando fórceps; 4) recipiente redondo; 5) porta-agulhas (fina e áspera); 6) Klinkenberg tesoura; 7) dissecando tesoura (retas e curvas); 9) fórceps (De-Bakey, fina e áspera); 10) braçadeira; 11) braçadeira anastomose; 12) gazes; 13) lápis electrosurgical; 14) Suporte de bisturi; 15) Dreesman (sucção); 16) afastador; 17) suportes para lâmpadas. (B) anterior esquerda fluoroscopia oblíqua do LAD eo LCX. (C) Após visualizar o segundo ramo diagonal, posicione os dois marcadores radiopacos (ver caixa, setas pretas) do balão apenas distal do D2. Inflate e garantir que o fluxo sangüíneo coronariano é bloqueado com sucesso por injeção de contraste (ver asterisco). Intracardíaca chumbo desfibrilador pode ser visto no ventrículo direito (ver seta branca). LAD denota artéria descendente anterior esquerda; LCX denota artéria marginal esquerda; LAO denota incidência oblíqua anterior esquerda; AP denota vista posterior anterior; D1 denota primeiro ramo diagonal; D2 denota segundo ramo diagonal. Clique aqui para ver imagem ampliada.

Tamanho Figura 2. Enfarte após MI. (A) O balão de oclusão de 90 minutos da ADA leva a danos do miocárdio extensa e formação de cicatriz (cor branca), visualizadas por coloração de TTC a 1 meses de seguimento.(B) distribuição do enfarte esquemático que mostra o enfarte está localizado na região anterior, e segmentos ântero ínfero do coração. (C, D) eixo curto e longo final de gadolínio imagens CMR aprimorados mostrar a extensa cicatriz do infarto (sinal branco, ver setas pretas) localizada na região anterior, os segmentos ântero e ínfero do coração. LGE-CMR denota tarde gadolínio aprimorado de ressonância magnética cardíaca. Barra de escala denota 3 cm. Clique aqui para ver imagem ampliada.

Figura 3. Avaliação da função cardíaca em modelos de isquemia MI. (A) Representante CMR imagens cine-circuito no final da diástole e sístole final mostrando comprometimento funcional do infsegmentos da cicatriz ARCT. (B) imagem M-Mode de 2D eixo longo paraesternal por ecocardiografia, mostrando LV dilatação (aumento LVIDd) 1 mês após o IM, bem como comprometimento funcional (ausência de espessamento septal). EDV denota volume diastólico final; ESV denota volume sistólico final; LVIDd denota diâmetro interno do ventrículo esquerdo em diástole e LVIDs denota diâmetro interno do ventrículo esquerdo em sístole. Clique aqui para ver imagem ampliada.

Figura 4. Intracoronary velocidade de pressão e fluxo de parâmetros derivados. Pressão intracoronária e gravações de velocidade de fluxo usando o Combowire mostrando valores (A) de referência anteriores a MI com altos response de hiperemia (seta preta). (B) 1 mês após o IM, o infarto relacionado artéria (LAD) tem uma resposta hiperêmico diminuição da velocidade de fluxo coronário (setas pretas). Como resultado, a pressão ea velocidade do fluxo parâmetros derivados (HMR) ou fluxo de reserva de velocidade (CFR) são reduzidos em comparação com a linha de base. BAPV denota pico de velocidade média basal; pAPV denota pico de velocidade média de pico; CFR denota reserva de fluxo coronário; HMR denota resistência microvascular hiperêmico. Clique aqui para ver imagem ampliada.

Figura 5. Visão geral dos diferentes desenhos de estudo. (A) Esquema de vários projetos de estudo possíveis para validar novos medicamentos de investigação(INDs) em vários estágios de MI que utilizam este modelo suíno LAD MI. Dependendo da fase escolhida de MI que está sob investigação, análise funcional pode ser realizada imediatamente antes da alocação de tratamento como o valor de referência e avaliação da área de risco. Clique aqui para ver imagem ampliada.

Discussion

Oclusão balão intracoronário da LAD fornece um modelo pré-clínico MI reprodutível e consistente em porcos que pode ser utilizado para investigar a segurança e a eficácia de novas terapias cardiovasculares que imita de perto a situação humana. Como mostrado na Figura 5, o modelo de enfarte de isquemia / reperfusão apresentado fornece a plataforma que pode ser ainda adaptada para investigar diferentes fases de MI e de pós-MI enquanto que a remodelação inicial a lesão de isquemia / reperfusão é idêntica para ambos.

O sucesso do protocolo descrito aqui descrita é dependente da isquemia do miocárdio como a fase mais importante do protocolo. Colocação correta do balão distal ao segundo ramo diagonal da LAD é crucial para atingir o tamanho do infarto adequada, garantindo um elevado índice de sobrevivência. Com base neste modelo MI, a ~ taxa de mortalidade de 15% foi observada, enquanto extensa médio e segmentos apicais do anterior, septal e inferiou paredes foram enfartada, como visto na CMR e coloração de TTC (Figuras 2A e 2B). A duração da isquemia pode ser adaptado de acordo com o tamanho do enfarte desejado. Embora tenhamos usado suínos da raça Landrace neste protocolo, minipigs (ou seja, porquinhos Göttingen) geralmente requerem mais tempo de isquemia do miocárdio (por exemplo, 150 min oclusão).

Análise de resultados em estudos pré-clínicos e clínicos MI é muitas vezes baseada FEVE. Embora menor FEVE foi firmemente associado com aumento do risco de mortalidade cardiovascular, continua a ser dependente de parâmetros hemodinâmicos, tais como pré-carga ^9. Indiscutivelmente, uma vez que, em média, apenas 10-15% do VE é de infarto, várias limitações conceituais e práticas estão relacionadas com a FEVE sendo uma medida global da função sistólica do ventrículo esquerdo, em vez de refletir a melhoria local, ^10. Portanto, as medidas propostas de resultado utilizada neste modelo lançar luz sobre os diferentes aspectos da MI e pós-MI remodelação proporcionando assim aos investigadores os meios para avaliar com precisão a eficácia de novas terapias em vários níveis.

Para otimizar a tradução a partir de modelos pré-clínicos para a prática clínica, optamos por usar grandes porcos em vez de porquinhos. As medidas hemodinâmicas, dosagens de medicamentos e dispositivos cirúrgicos podem ser facilmente trocados com a prática clínica. Comparado com porquinhos, grandes porcos ganham relativamente muito peso. Isso pode causar um problema em longo prazo de acompanhamento, em relação à comparabilidade dos resultados de série. Porcos da raça Landrace Dalland fêmeas pesam aproximadamente 70 kg em uma idade de 6 meses. Para evitar o ganho de peso abundante durante o período de acompanhamento, os animais são mantidos em uma dieta restrita. Porcos receber 750 g de alimentos de baixo teor calórico feito à medida (contendo: 15,6% de proteínas, gordura 2,0%, fibras de 14,8%, cinzas 8,8%, de cálcio 0,9%, fósforo a 0,57%, 0,29% de magnésio, de potássio e 0,18%), duas vezes por dia e ter cerca de 10 kg de peso em 4 semanas.

e_content "> McCall e colegas de trabalho já publicado um protocolo semelhante para o infarto do miocárdio em suínos ^11. existe uma considerável sobreposição entre este protocolo eo deles, enfatizando a preferência pela LAD, em vez de a artéria circunflexa (LCX) ou artéria coronária direita (RCA ). Em nossa experiência, há uma menor proporção do tamanho do infarto do ventrículo esquerdo total com LCX enquanto o infarto do RCA é acompanhado com maior chance de distúrbios da condução indesejados (ou seja, disfunção do nódulo sinusal, disfunção AV-nó). Uma diferença entre os dois protocolos refere-se ao uso de uma maior inibição de plaquetas farmacológica neste protocolo, como já se observou maiores taxas de não-refluxo com base na formação de trombos, como o resultado de 90 minutos de hemostasia na artéria coronária obstruída. Esta observação está de acordo com hipercoagulabilidade conhecido observado em porcos ^12. Embora McCall propôs usar um único, de alta dosagem, bolus de heparina, this protocolo baseia-se na utilização de heparina em várias doses menores, distribuídos ao longo da cirurgia para minimizar as complicações trombóticas.

Em resumo, apresentamos um modelo MI suína que permite aos pesquisadores para fazer uso de um modelo prático grande animal eficaz, reprodutível e, sobretudo, de doenças humanas para estudar novas terapias como um passo essencial para um primeiro-em-homem ensaio clínico.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Saline	Braun
6-0 Prolene	Ethicon
Acetylsalicylic acid	Ratiopharm		80 mg
Adenosine	Apotheek UMCU		3 mg/ml
AdVantage PV loop system	Transonic Science
Amiodarone	Cordarone I.V. (Sanofi)
Amiodaron HCl (PCH)
Amoxicilline/clavulaanzuur	Sandoz		500/50 mg
Atropinesulfate	PCH		0.5 mg/ml
Bone Marrow Wax	Syneture
Cardiac Defibrillator	Philips
Clopidogrel	Apothecon B.V.		Clopidrogel 75A
Contrast agent	Telebrix
Endotracheal tube	Covidien
Fentanyl patch	Durogesic (Janssen-Cilag)		25 μg/hr
Fogarty catheter	Edwards Life Sciences
Gadolinium	Gadovist
Guidewire	Abbott
Heparin	Leo
I.V. cannula	Abbocath (Hospira Venisystems)
Iodine	Jodiumtictuur 2% (Eurovet)
Ketamine	Narketan 10 Vétoquinol
Midazolam	Actavis		5 mg/ml
Nitroglycerin	Pohl Boskamp		1 mg/ml
Pancuronium bromide			2 mg/ml
Seldinger vascular sheath 8F	Arrow
Sufentanil	Sufentanil-Hameln		50 μg/ml
Swann-Ganz catheter	Criticath ref 680078 (Argon)
Synolux	Pfizer		250 mg
Tetra-polar catheter	Transonic Science
Thiopental	Inresa		0.5 g
Triphenyl-tetrazolium chloride	Merck
Venofundin	Braun
Vicryl 2-0	Ethicon
Volcano ComboMap system	Volcano