Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Bioengineering

הנדסת רקמות של גידול סטרומה Microenvironment עם בקשה לפלישת תאי הסרטן

Published: March 18, 2014 doi: 10.3791/51321

Summary

מטריצה ​​מקורית המופק פיברובלסטים רקמה מהונדסות היא כלי המתעוררים ליצירת מצע סטרומה אשר תומך בהתפשטות תאי אפיתל ובידול. הנה פרוטוקול יישום מתודולוגיה זו כדי להעריך את ההשפעה של סוגי תאים שונים של סטרומה בביולוגיה של תא הסרטני מוצג.

Abstract

תרבויות organotypic 3D של תאי האפיתל במטריצה ​​משובצת עם תאי mesenchymal נמצאות בשימוש נרחב ללמוד התמיינות תאי אפיתל ופלישה. סוג הזנב של עכברוש אני קולגן ו / או מטריצה ​​שמקורם בתאי סרקומה עכבר Engelbreth-Holm-נחיל כבר מועסק באופן מסורתי כמצעים למודל המיקרו מטריקס או סטרומה שלתוכו תאי mesenchymal (בדרך כלל fibroblasts) מאוכלסים. למרות שניסויים באמצעות מטריצות כאלה הם מאוד אינפורמטיבי, ניתן לטעון כי בשל נוכחות מכרעת של חלבון יחיד (כמו בסוג אני קולגן) או תכולה גבוהה של רכיבי קרום במרתף וגורמי גדילה (כמו במטריקס נובע מעכבר תאי סרקומה), מצעים האלה לא הטובים ביותר משקפים את תרומתו להרכב מטריצה ​​שנעשתה על ידי תאי סטרומה בעצמם. ללמוד מטריצות ילידים המיוצרים על ידי fibroblasts עורי הראשוני בודד מחולים עם גידול הפרעת שלפוחיות גנטית (dystrophic נוטה, רצסיביולוזה epidermolysis), יש לנו להתאים פרוטוקול מטריצה ​​מקורי קיים ללמוד פלישת תא גידול. Fibroblasts מושר לייצר מטריצה ​​שלהם על פני תקופה ממושכת בתרבות. מטריצה ​​מקורית זה היא אז מנותק ממנת התרבות ותאי אפיתל הם זורעים על זה לפני כל coculture מועלה לממשק אוויר הנוזלי. בידול ו / או פלישה נייד אז ניתן להעריך לאורך זמן. טכניקה זו מספקת את היכולת להעריך אינטראקציות תא אפיתל-mesenchymal בסביבת 3D ללא הצורך במטריצה ​​סינתטית או זרה עם החסרון היחיד להיות תקופה הממושכת של זמן הנדרש כדי לייצר את המטריצה ​​המקורית. כאן אנו מתארים את היישום של טכניקה זו על מנת להעריך את יכולתה של מולקולה בודדת לידי ביטוי על ידי fibroblasts, סוג VII קולגן, כדי לעכב את הפלישה של תאים סרטניים.

Introduction

השימוש בחומר ביולוגי בתרבית רקמת 3D אפשר לחוקרים ללמוד על התנהגות תא במעבדה בתנאים פיסיולוגיים דומים יותר לסביבת in vivo מזה של אחד סכם עם הידבקות 2D ומצע פלסטיק. בפרט, צעדים גדולים קדימה נעשו בדוגמנות epithelia מרובדת עם האימוץ של שיטות תרבות 3D בממשק האוויר הנוזלי 1-4. טכניקות כגון נאמנות לחקות בידול keratinocyte ופלישת תאים סרטניים המאפשרת גמישות רבה יותר ונאמנות לחוקרים לומדים תהליכים אלה. הבחירה של מצע ביולוגי לחקות את סביבת סטרומה הייתה כרוכה בעיקר השימוש בסוג אני קולגן, מטריקס סרקומה עכבר Engelbreth-Holm-הנחיל והדרמיס דה epidermized. לדוגמא, fibroblasts הסרטן קשור הוכחו לתרום לפלישת סרטן 5, ייזום, והתקדמות באמצעות אינטראקציות סטרומה אפיתל 6,7 when גדל במצעים כאלה.

תקן הזהב עבור מחקה את סביבת סטרומה בעור, האפיטל מרובדת הגדול ביותר והנחקר ביותר תוך שימוש בטכניקות כגון, נחשב להיות דה epidermized הדרמיס אנושי (DED). הכנת DED כוללת את ההסרה של האפידרמיס באמצעות trypsinization או התנערות פיזית מ3,4 עור גופת אדם. עם זאת, גישה לעור כזה יכול להיות קשה מאוד למעבדות אינן קשורות למוסדות קליניים, והדרמיס החולה הוא כמעט בלתי אפשרי להשגה. כחלופה, מעבדות לעתים קרובות להשתמש בשילוב של סוג אני קולגן (מבודד מזנבות עכברים) ו / או מטריצת סרקומה עכבר Engelbreth-Holm-נחיל.

לאחר הגילוי, בשנת 1927 Nageotte 8 קולגן שיכול בקלות להיות מבודד באמצעות חומצה אצטית ומשקעי מלח, היישום שלה לתרבית רקמה היה חלוץ לאחר מכן על ידי Huzelלה ולעמיתי 9. ציפוי קולגן הוכיח שהוא עדיף על זכוכית לתרבית תאים של 29 זנים וexplants רקמות כנחקרו על ידי אהרמן ו -9 גיי. נכון לעכשיו, הסוג העיקרי של הקולגן המשמש בתרבית רקמה מבודד מגידי עכברוש זנב, והוא בדרך כלל קנה ממקורות מסחריים. עם זאת, החסרון לשחזור מצע נאמן הוא כי קולגן זנב החולדה אינו זהה לקולגן אנושי, או הדרמיס האנושי, שבו אני והסוג III collagens נמצאים כמרכיבים עיקריים, וקולגן זנב חולדה המבודד הוא תמיד מקוטע.

מטריקס סרקומה עכבר Engelbreth-Holm-נחיל הוא תערובת חלבונים דביקה מופרש על ידי תאי סרקומה העכבר בתרבית Engelbreth-Holm-נחיל 10. המרכיבים העיקריים הם laminin, קולגן הסוג IV, proteoglycan סולפט הפרין, entactin וnidogen והיחסים של חלבונים אלה המדויקים ישתנו מיצוו כדי אצווה. מלבד פרו מבנייםteins, מטריצה ​​זו מכילה גם רמות משמעותיות של גורמי גדילה כגון הפיכת β גורם גדילה, גורם גדילה באפידרמיס, גורם גדילה דמוי אינסולין 1, גורם גדילה פיברובלסטים שור, ונגזר גורם גדילה של טסיות דם אשר היה לשנות את התנהגות 11,12 סלולרית. והצביע לעבר המורכבות העצומה של מטריקס סרקומה עכבר Engelbreth-Holm-הנחיל, סך של 1,851 חלבונים זוהו במחקר proteomic האחרון 13. לאור הטבע העשיר ומורכב של מטריצה ​​זו, זהירות כבר יעצה כאשר לפרש ומשווה ניסויים שונים עם השימוש בו 11.

יש המעבדות שלנו עניין רב במחלות עור גנטיות, בעיקר אלו עם נטייה לפיתוח קרצינומה של תאים קשקשיים עורית (CSCC) 14. במקרה של ולוזה רצסיבי epidermolysis dystrophic (RDEB), מחלה שלפוחיות חמורה עם מוטציות בתאי מין בגן COL7A1 18. במהלך מחקר זה היינו להעריך את הגידול בקידום נכסים של fibroblasts עורי מוטבע בתוך מטריצת הקולגן סרקומה עכבר אני / Engelbreth-Holm-נחיל וחקר דרכים להערכת מטריקס הילידים, "התאים שלו. כדי להשיג זאת, אנו שונה בטכניקה קודמת מהמעבדה של לוסי ז'רמן עובד על עור אנושי ושווי 19,20. הטכניקה של ז'רמן הצליחה לשחזר עור אנושי עם קרום במרתף מאורגן היטב באמצעות תרביות keratinocyte ופיברובלסטים האנושיים ראשוניות בהעדר פיגום סינטטי או מת.

עמ 'במאמר זה את הצעדים המשמשים לשחזר microenvironment עורית סטרומה גידול (מטריצה ​​מקורית) נגזרים באופן ישיר מfibroblasts סטרומה העיקרי במבחנה מתוארות 18. מטריצות שפת אםroduced ידי תרבות לטווח הארוך של fibroblasts שמשו עורי שווה ערך לassay לפלישת תא CSCC. אנו מציגים נתונים באמצעות מטריצה ​​מקורית נגזרה משתי המטריצה ​​תאית מופרש על ידי fibroblasts RDEB (חסר בסוג VII קולגן (C7)) או מfibroblasts RDEB retrovirally transduced עם קולגן סוג VII להביע לבנות ולהדגים את ההשפעה העמוקה של קולגן יחיד על גידול תא פלישה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

מחקר זה נערך בהתאם להצהרת עקרונות הלסינקי ואושרה על ידי ועדת האתיקה המתאימה.

1. הכנת מדיה וריאגנטים

  1. הכנת 200x של מניית 2 פוספט L-חומצה אסקורבית
    1. ממיסים 29 מ"ג L-חומצה אסקורבית 2 פוספט לכל 5 מיליליטר של התמיסה השתנה Dulbecco בינוני של הנשר (DMEM) ולסנן דרך 0.22 מיקרומטר סינון הממברנה. חנות כaliquots סטרילי 0.25 מיליליטר ב-20 ° C.
    2. הוספת 0.25 מיליליטר aliquot של מניית 2 פוספט L-חומצה אסקורבית 200x לכל 50 מיליליטר של תקשורת פיברובלסטים (DMEM עם 1% L-גלוטמין ו10% בסרום שור עוברי) ביום הנדרש, לריכוז סופי של 0.1 מ"מ של L -חומצה אסקורבית 2 פוספט.
  2. הכנה של תקשורת צמיחת keratinocyte
    1. בידוד והתרבות של קרטינוציטים SCC העיקריים תוארו בעבר 21. הכנה של תקשורת צמיחת keratinocyte מתוארתבו גם כן.
    2. בקצרה, להכין את התקשורת באופן הבא:
      300 מיליליטר של DMEM ושל ה-F-12 של שינקין 100 מיליליטר בתוספת 10% FBS
      0.4 מ"ג / מיליליטר הידרוקורטיזון
      5 מ"ג / מיליליטר אינסולין
      10 ng / ml EGF
      5 מ"ג / מיליליטר transferrin
      8.4 ng / רעלן הכולרה מיליליטר
      13 ng / liothyronine מיליליטר
      פתרון פניצילין, סטרפטומיצין 1x

2. במבחנה הבנייה של מטריקס Native נגזר פיברובלסטים בL-חומצה אסקורבית 2-פוספט בתוספת התקשורת

  1. הזרעים 200,000 fibroblasts היטב לכל 6 צלחות היטב (20,000 תאים / 2 סנטימטר) בתקשורת פיברובלסטים בתוספת של L-חומצה אסקורבית 2 פוספט. Refeed כל 2-3 ימים עם 2-5 מיליליטר של תקשורת. (הערה: תדר ונפח Refeeding עשוי להיות מותאם כך שיתאימו לצרכימים האישיים של תאים שונים ראה "דיונים".).
  2. שכבה עבה של תאים משובצים במטריצה ​​תאית תהווה בסופו של 6 שבועות, גלויים לעין בלתי מזוינת (
  3. בואו לצוף מטריצה ​​המקורית ולשפץ במשך 5 ימים, שינוי בתקשורת כל 2-3 ימים. בשל חוזק מתיחה ושיפוץ פנימי בתוך מטריצה, המטריצה ​​תתכווץ באופן דרסטי והפכה מופחת למטריצה ​​מקורית קטנה יותר, אבל עבה יותר, והוא מוכן להיות מנוצל עבור assay פלישה.

3. הפלישה Assay עם גידול SCC קרטינוציטים

  1. להרים את המטריצה ​​המקורית בעדינות עם מלקחיים בוטים ולהעביר לרשת ניילון. פעם אחת ברשת ניילון, להפיץ את מטריקס בעדינות לשכב שטוח ככל האפשר באמצעות micropipette מיליליטר 1טיפ ומלקחיים בוטים.
  2. הכן את הגלילים משובטים סטריליים על ידי מריחת כמות קטנה של וזלין סטרילי בקצה אחד.
  3. מניחים את הגלילים המשובטים במטריצה ​​המקורית, עם צד זלין למטה. זאת על מנת להבטיח חותם חזק בין מטריקס היליד והטבעות המשובטים.
  4. הוספת תאי CSCC לצילינדרים המשובטים (250,000 תאים בשל תקשורת צמיחת keratinocyte 100 μl).
  5. הסר את הגלילים המשובטים לאחר 6 שעות כאשר תאי CSCC התיישבו על המטריצה ​​המקורית.
  6. הרם את רשת ניילון עם המטריצה ​​המקורית ותאי CSCC לממשק אוויר נוזלי על תמיכת רשת תיל פלדה אל חלד מכופפת.
  7. הוסף מדיה צמיחת keratinocyte בתוספת חומצה אסקורבית עד רמת התקשורת נוגעת בחלק התחתון של המטריצה ​​המקורית.
  8. שינוי בתקשורת בכל 2-3 ימים וקציר בשעה 7 ו14 ימים שלאחר זריעה של תאי CSCC.

4. קציר של תרבויות 3D והכנה להיסטולוגיה

  1. לתקן בסעיף 4%לילה aformaldehyde בטמפרטורת חדר.
  2. לחצות את הדגימות ולהטביע בשעווה ללוקים מוטבעים פרפין קבוע פורמלין, עם משטח החיתוך פונה החוצה.
  3. לחלופין, להטביע את הדגימות נחצו בOCT ו Snap-להקפיא באופן מיידי בחנקן נוזלי ללוקי רקמות קפואים.
  4. לחתוך 4 מיקרומטר סעיפים על microtome וdewax (במידת צורך). כתם באמצעות haematoxylin ו eosin סטנדרטיים. כדי להמחיש את תאי CSCC, נוגדן חד שבטי עכבר נגד קרטין 14 (LL001, בתוך הבית) ניתן להשתמש בצביעת immunohistology.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

טכניקה זו פותחת את האפשרות לבחון ולהשוות את ההתנהגות פולשנית של תאים סרטניים (במקרה זה CSCC) תחת סביבות סטרומה 3D שונות. באמצעות טכניקה זו, לא רק מטריצות ילידי C7-לקויים שנכנעו שוב לסביבת עורי RDEB יכולות להיות שנוצרו, אלא גם מטריצות נוספות שעברו הנדסה גנטית כדי C7-מעל מפורש 18. כפי שניתן לראות בתרשים 2, פלישה לקרטינוציטים RDEB CSCC היה מפגרת באופן משמעותי במטריצות ילידי C7-ביתר לעומת שליטת RDEB C7-לקויה. פלישה זו היא מדמיין באמצעות שיטות היסטולוגית סטנדרטיות, שבו ג'לים היו קבועים, משובצת באובניים פרפין ולאחר מכן נותח וimmunostained. נוגדנים הציעו להשתמש עבור מכתים הם אנטי קרטין 14 (LL001) לתאי CSCC ואנטי vimentin (V9) עבור fibroblasts.

"Width =" p_upload/51321/51321fig1highres.jpg 500 "/>
איור 1. זרימת עבודה של דור של מטריצה ​​מקורית המופק פיברובלסטים וassay פלישת גידול. לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

איור 2
איור 2. מכתים 14 קרטין (LL001) של פלישת CSCC לתוך המטריצה ​​המקורית נגזרה מRDEB שליטת פיברובלסטים חסר C7 (ai ודו), או בfibroblasts RDEB ביטוי באורך מלא C7 (איי וbii) להביע מעל, מראה בבירור כי מחדש ביטוי של C7 במטריצה ​​תאית יכול לעכב פלישת keratinocyte CSCC. הגרעינים הוכתמו DAPI (בכחול) וfibroblasts עם vimentin (בירוק) ובדו bii.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

בשל אופייה של ניסוי זה, את הסך כל הזמן הנדרש להשלמה יכול להיות עד חודשים. במשך כל הזמן הזה, שיטות טיפול ותרבות רקמת סטרילית עליונה חייבים להיות מועסקות על מנת למנוע זיהום חיידקים.

מלבד תפקידה כcofactor בסינתזה של hydroxyproline וhydroxylysine של collagens, חומצה אסקורבית מגרה ביטוי קולגן הספציפי mRNA בfibroblasts 22. החומצה אסקורבית של בחירה כאן היא L-החומצה אסקורבית יציבה יותר 2 פוספט 23. Refeeding מומלץ שלוש פעמים בשבוע, אבל זה תמיד יהיה תלוי בתאים הנלמדים. תרבויות פיברובלסטים הראשוניות יצרכו יותר חומרים מזינים כמו השבועות עוברים, וrefeeding תכוף יותר עם נפחי תקשורת גדולים יותר עשויה להיות רצוי. חשוב להיות עדין כאשר יש לנקוט אמצעי תקשורת וטיפול משתנה כדי למזער את ההפרעות לשכבת התאים במהלך ייצור מטריצת ילידים.

המטריצה ​​צריכה להיות גלויה בדרך כלל לאחר 2 שבועות, בעיקר סביב ההיקף של הבאר. לעתים רחוקות, מטריקס ישחרר את עצמו בלי שום הפרעה מכאנית. זוהי השתקפות של שיפוץ הפנימי של כוח המטריצה ​​והמתיחה, אשר מושך את המטריצה ​​כלפי פנים, אבל יכולה להיות גם סימן לכך שההיקף של המטריצה ​​המקורית הופרע במהלך שינויים בתקשורת.

כאשר משחררים ולשחרר את שכבת תאי מטריצה ​​מהצלחת, יש להיזהר שלא לעשות בו חורים באמצעות המטריצה. גם מגרדי תאים בוטים קטנים עשויים לשמש כתחליף לטיפי micropipette 1 מיליליטר. מיקום של המטריצה ​​המקורית שוחררה על רשת ניילון ראשון (להיות בטוח כדי להניח את המטריצה ​​המקורית שטוח) גורם לטיפול הרבה יותר קל והרמה לאחר ממשק האוויר הנוזלי.

פרוטוקול זה הוא ראשון שתארהשימוש במטריצת פיברובלסטים יליד כמצע עורי למודל המיקרו במבחני תאים סרטניים על מנת לקבל נתונים מדויקים יותר ורלוונטיים מבחינה פיזיולוגית.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

יש המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

APS נתמך על ידי דברה הבינלאומית וקרן העור הבריטית. YZN נתמך על ידי A * STAR - אוניברסיטת דנדי שותפות PhD התכנית.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
L-Ascorbic acid 2-phosphate Sigma A8960
DMEM with L-glutamine, 4,500 mg/L D-glucose, 110 mg/L sodium pyruvate Life Technologies 11995-073
100x Penicillin-Streptomycin Life Technologies 15070
Vaseline VWR PROL28908.290
Clonal cylinders Sigma Z370789
Nylon Net Filter Disc Hydrophilic 100 μm 25 μm diameter 100/pk Millipore NY1H02500
Bent stainless steel wire mesh support Made in house Dimensions were made so that the mesh would fit into 6-well plates

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bell, E., Ehrlich, H. P., Buttle, D. J., Nakatsuji, T. Living tissue formed in vitro and accepted as skin-equivalent tissue of full thickness. Science. 211 (4486), 1052-1054 (1981).
  2. Asselineau, D., Bernhard, B., Bailly, C., Darmon, M. Epidermal morphogenesis and induction of the 67 kD keratin polypeptide by culture of human keratinocytes at the liquid-air interface. Exp. Cell Res. 159 (2), 536-539 (1985).
  3. Pruniéras, M. M., Régnier, M. M., Woodley, D. D. Methods for Cultivation of Keratinocytes with an Air-Liquid Interface. J. Invest. Dermatol. 81 (1 Suppl), 28-33 (1983).
  4. Prunieras, M., Régnier, M. New procedure for culturing human epidermal cells on allogenic or xenogenic skin: preparation of recombined grafts. Ann. Chir. Plast. 24 (4), 357-362 (1979).
  5. Gaggioli, C. Fibroblast-led collective invasion of carcinoma cells with differing roles for RhoGTPases in leading and following cells. Nature. 9 (12), 1392-1400 (2007).
  6. Bhowmick, N. A., Neilson, E. G., Moses, H. L. Stromal fibroblasts in cancer initiation and progression. Nature. 432 (7015), 332-337 (2004).
  7. Erez, N., Truitt, M., Olson, P., Hanahan, D. Cancer-Associated Fibroblasts Are Activated in Incipient Neoplasia to Orchestrate Tumor-Promoting Inflammation in an NF-κB-Dependent. Manner. Cancer Cell. 17 (2), 135-147 (2010).
  8. Harkness, R. D., Marko, A. M., Muir, H. M., Neuberger, A. The metabolism of collagen and other proteins of the skin of rabbits. Biochem. J. 56 (4), 558-569 (1954).
  9. Ehrmann, R. L., Gey, G. O. The growth of cells on a transparent gel of reconstituted rat-tail collagen. J. Natl. Cancer Inst. 16 (6), 1375-1403 (1956).
  10. Kleinman, H. K. Basement membrane complexes with biological activity. Biochemistry. 25 (2), 312-318 (1986).
  11. Vukicevic, S., Kleinman, H. K., Luyten, F. P., Roberts, A. B., Roche, N. S., Reddi, A. H. Identification of multiple active growth factors in basement membrane Matrigel suggests caution in interpretation of cellular activity related to extracellular matrix components. Exp. Cell Res. 202 (1), 1-8 (1992).
  12. BD Biosciences - Discover Labware. SPC-356230 Rev 5.0 at Rev 5.0. , Available from: http://SPC-356230 Rev 5.0 Forthcoming.
  13. Hughes, C. S., Postovit, L. M., Lajoie, G. A. Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture. Proteomics. 10 (9), 1886-1890 (2010).
  14. Ng, Y. Z., Dayal, J. H., South, A. P. Genetic Predisposition to Cutaneous Squamous Cell Carcinoma. , Forthcoming.
  15. Christiano, A. M. A., Greenspan, D. S. D., Lee, S. S., Uitto, J. J. Cloning of human type VII collagen. Complete primary sequence of the alpha 1(VII) chain and identification of intragenic polymorphisms. J. Biol. Chem. 269 (32), 20256-20262 (1994).
  16. Hovnanian, A. A. Genetic linkage of recessive dystrophic epidermolysis bullosa to the type VII collagen gene. J. Clin. Invest. 90 (3), 1032-1036 (1992).
  17. Ryynänen, M. M., Ryynänen, J. J., Sollberg, S. S., Iozzo, R. V. R., Knowlton, R. G. R., Uitto, J. J. Genetic linkage of type VII collagen (COL7A1) to dominant dystrophic epidermolysis bullosa in families with abnormal anchoring fibrils. J. Clin. Invest. 89 (3), 974-980 (1992).
  18. Ng, Y. Z. Fibroblast-derived dermal matrix drives development of aggressive cutaneous squamous cell carcinoma in patients with recessive dystrophic epidermolysis bullosa. Cancer Res. 72 (14), 3522-3534 (2012).
  19. Larouche, D., Paquet, C., Fradette, J., Carrier, P., Auger, F. A., Germain, L. Chapter 15. Methods Mol. Biol. 482, 233-256 (2009).
  20. Pouliot, R. R. Reconstructed human skin produced in vitro and grafted on athymic mice). Transplantation. 73 (11), 1751-1757 (2002).
  21. Purdie, K. J., Pourreyron, C., South, A. P. Isolation and culture of squamous cell carcinoma lines. Methods Biol. 731, 151-159 (2011).
  22. Pinnell, S. R. Regulation of collagen biosynthesis by ascorbic acid: a review. Yale J. Biol. Med. 58 (6), 553-559 (1985).
  23. Hata, R., Senoo, H. L-ascorbic acid 2-phosphate stimulates collagen accumulation, cell proliferation, and formation of a three-dimensional tissuelike substance by skin fibroblasts. J. Cell. Physiol. 138 (1), 8-16 (1988).

Tags

ההנדסה ביו רפואית גיליון 85 microenvironment גידול fibroblasts סטרומה מטריצה ​​תאית הנדסת רקמות שווה ערך עור קולגן מטריצה ​​מקורית
הנדסת רקמות של גידול סטרומה Microenvironment עם בקשה לפלישת תאי הסרטן
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ng, Y. Z., South, A. P. TissueMore

Ng, Y. Z., South, A. P. Tissue Engineering of Tumor Stromal Microenvironment with Application to Cancer Cell Invasion. J. Vis. Exp. (85), e51321, doi:10.3791/51321 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter