Summary
이 프로토콜은 가벼운 시트 현미경의 설치 및 C의 생체 내 이미징을위한 그것의 구현에 대해 설명합니다 엘레 배아.
Abstract
빠른 속도와 낮은 광독성 이미징 기술은 토토의 유기체의 발달을 연구하는 전제 조건이다. 세포 내 해상도로 3D 영상을 제공하면서 빛 시트 기반 현미경, 사진 표백 및 공 초점 현미경에 비해 광독성 효과를 감소시킨다. 여기에 우리가 직립 현미경과 빛 시트의 생성을위한 광 - 기계 요소의 작은 집합으로 구성되어 가벼운 시트 기반의 현미경의 설정을 제시한다. 이 프로토콜은, 빌드 현미경을 정렬하고 빛 시트의 특성을하는 방법에 대해 설명합니다. 또, C. TOTO의 이미징에 대한 방법을 구현하는 방법을 상세 elegans의 간단한 관찰 챔버를 이용하여 배아. 이 방법은 개발의 몇 시간 이상 3D 두 색상 시간 경과 영화를 캡처 할 수 있습니다. 이 기능은 장시간 세포의 모양, 세포 분열 및 태그 단백질의 추적을 용이하게한다.
Introduction
유기체의 형성과 형성 세포의 움직임, 세포 모양의 변화, 세포 분열과 세포 분화를 포함한다. 이러한 프로세스의 진행과 조정을 이해하는 세 가지 차원으로 기능과 세포 내 해상도와 빠른 이미징 도구가 필요합니다. 이러한 생체 내 이미징 기능과 기술 사이, 빛 시트 조명 현미경은 단일 / 선택적 비행기 조명 현미경이라고 저 광독성 효과 및 1,2 낮은 photobleaching에 생산의 고유 한 장점이있다.
시트 조명 현미경에서 시료를 광학 단면 처리를 행하는 광 시트에 의해 측으로부터 조명된다. 조명 경로와 검출 경로는 서로 수직 및 광 시트는 검출 대물 렌즈의 물체 초점면과 일치하도록 정렬된다. 샘플은 두 경로의 교차점에 배치된다ND 3D 이미징을 허용하도록 검출 축을 따라 이동 될 수있다. 또한 남은 평면은 조명되고,이 평면의 모든 포인트가 동시에 검출된다. 이것은 상당히 수집 속도를 증가시키고 공 초점 현미경 (3)에 비해 광표백뿐만 아니라 광독성을 감소시킨다.
이 차원 화상에 대해, 제공된 스캔 탐지 부분은 없으며, 조명 부분은 어느 것도 필요하지 않다; : 실용 시트 조명 현미경 설정 및 정렬하기 쉬운 기능 구획으로 광 시야 기술로서, 3 차원 화상은 샘플을 잡고 스테이지의 하나의 축 이동에 의해 얻어 질 수있다.
여기에서 우리는 C의 토토 영상에 대한 간단한 빛 시트 현미경과 그 구현의 설정까지 제시 elegans의 배아. C. 엘레 배아 잘 생체 IMA 살고 적합투명도로 인해 ging를, 불변의 혈통과 셀에 박힌 4,5를 배치합니다. 개발 된 광 시트 설치가 검출을위한 표준 직립 현미경을 기반으로합니다. 아래에 제시 프로토콜을 구축하고 정렬 여기 모듈 / 경로, 테스트 및 빛 시트의 특성과 3D 영상의 샘플을 장착하는 방법에 대해 자세히 설명합니다. 또한 형광 마커를 표현하는 다양한 균주의 설정과 획득 시간 경과 영화의 예를 제공합니다.
Protocol
1. 빛 시트 및 검색 경로 설정
그림 1은 광 설치의 일반적인 방식을 제공합니다.
- 광학 테이블에 현미경과 레이저를 삽입하고 고정합니다.
- 레이저에게 488 nm의, 561 nm의 해당 이색 거울이 405 nm의 결합. 다이크로 익 미러 후, 레이저 공동 정확하게 정렬되어야한다. 레이저 파장, 다이크로 익 미러, 광학 필터의 선택은 실험에 사용 된 특정 형광 라벨의 흡수 스펙트럼으로부터 결정되는 것에주의.
- 음향 광학 파장 가변 필터 (AOTF)를 놓습니다. AOTF의 주파수 및 전력을 조정하는 공급자 테스트 용지를 사용한다. 잘 맞춰지면 내 PowerMeter 의해 측정, 레이저 파워의 약 90 %의 최대 조정에 전송된다. AOTF 불필요한 만들 수있는 몇 가지 레이저가 완전히 소프트웨어에 의해 제어 할 수 있습니다.
- 배치 및 수정망원경. 망원경은 같거나 조명 대물 렌즈의 배면 개구의 직경보다 큰 폭으로 확장 된 빔을 2 개의 렌즈로 구성되어 있습니다. 최소 초점 거리를 가진 렌즈가 먼저 와야한다.
- 장소, 정렬하고 가까운 원통형 렌즈의 뒷면 구멍에 위쪽으로 광학 경로를 데리고 잠망경을 고정합니다. 잠망경의 두 개의 거울은 장축이 완전히 확장 된 빔을 반영하기 위해 미러의 경사에 누워있다 방식으로 장착되어 있습니다.
- 다음 잠망경 출구 원통형 렌즈를 놓습니다. 원통형 렌즈가 한 방향으로 상기 빔을 포커스하고 그에 광 시트를 형성하는 다른 방향으로 평행 나뭇잎 유의.
- 조명 대물 렌즈를 사용하여 얻어진 광 시트를 집중할. 조명 대물의 이미지 초점이 검출 목적의 물체 초점 포인트와 일치한다는 것을주의한다. 빔 프로젝트긴 거리에서 화면 (예 : 벽)에 대한 것입니다. 빛 시트의 화면 날카로운 윤곽을 얻기 위해 조명 빔의 축을 따라 조명의 목적을 이동합니다.
- 현미경 (큐브)에서 예약 된 장소에서 쿼드 라인 (405/488/561/638) 방출 필터를 놓습니다.
- 현미경 출력 포트에 EMCCD 카메라를 놓습니다.
- 현미경 단계에 드릴 구멍에 나사에 의해 현미경 무대에서 첫 번째 매뉴얼 번역의 단계를 수정. 이동 스테이지의 에지가 큐벳이 검출 대물 렌즈 아래를 중심으로되도록 멀리 현미경 스테이지의 중심으로부터 약 2 ㎝에 배치되어야합니다.
- 첫 번째 두 번째 매뉴얼 번역 단계를 수정. 두 단계의 방향 (X 및 Y 번역) 수직해야합니다.
- 앞의 두 단계의 상단에있는 Z 압전 단계를 수정. 동력 스테이지 대신 압전 스테이지 사용될 수 있음을주의한다.
- 큐벳 holde 수정R 스테이지의 상부에 (도 2 참조). 큐벳 따라서 조명 경로의 교차점과 서로 직각이 검출 경로에 배치 될 것이다.
2. 라이트 시트 확인
- 형광 용액을 유리 큐벳을 가득 채운 두 개의 광 경로의 교차점에 샘플 홀더에 놓습니다. 빛 시트는 이렇게 볼 수 있습니다. 이는 수평이어야하고, 대칭 / 검출 대물 렌즈 중심에 대하여.
- 원통형 렌즈를 제거하고 광 시트의 두께를 측정하기 위해 화상을 취득. 광 시트의 두께는 조명 대물 렌즈 (NA에 대해 3-4 = 0.3 μM)의 개구 수 (NA)에 의존한다는 것을주의한다. 관련 렌즈 것을 유의 광 시트의 두께는, 슬릿 배면 개구들이 빔의 크기를 감소시킴으로써 증가 될 수있다. 형광 마이크로 스피어는 AX를 측정하는데 사용될 수 있음을 유의현미경의 원점이라 횡 해상도.
- 실험을 시작하기 전에 원통형 렌즈를 다시 넣습니다.
3. C.의 실장 엘레 태아
다음 단계는 (그림 3)됩니다.
- 10 × 20 × 1 ㎜의 유리 슬라이드의 조각을 잘라 다이아몬드 마킹 펜을 사용합니다.
- 5 % 박토 - 한천을 준비 60 ℃에서 물에 데쳐 및 히터 블록에서 그것을 유지
- 슬라이드의 절단 된 부분의 한면에 폴리-L-라이신의 50 μl를 추가, 건조시켜야합니다.
- 벤치에 현미경 슬라이드를 삽입하고 고정합니다.
- 고정 슬라이드와 슬라이드의 절단 된 부분을 나란히하고 상단에 녹은 한천의 드롭을 추가합니다. 얇은 한천 패드를 얻기 위해 다른 깨끗한 현미경 슬라이드를 사용하여 한천을 꽉.
- 한천 패드 상단 슬라이드를 제거하기 전에 건조하도록 허용합니다.
- 약 3mm 오의 과잉을 남겨하기 위해 고정 된 슬라이드의 측면에있는 한천 패드를 잘라F 한천 부드럽게 고정 슬라이드를 제거합니다.
- 한천에 폴리-L-라이신의 50 μL를 추가하고 완전히 건조 보자.
- 시계 유리에 M9 매체에 임신하는 벌레를 넣습니다.
- 배아를 해제하는 메스와 외음부의 수준에서 벌레를 잘라.
- 양안에서 관심 단계에서 배아를 식별하고 미세 모세관 피펫을 사용하여 그들을 수집.
- 슬라이드의 절단 된 부분에서 돌출 폴리-L-라이신 코팅 한천의 부분에 배아를 놓습니다. 바로 옆에 슬라이드의 경계에 배아를 놓습니다. 그들은 충분히 안정하지 않기 때문에 한천의 국경에서 배아를 배치하지 마십시오. 배아는 폴리-L-라이신 층에 붙어 있도록 조심스럽게 액체를 제거합니다.
- 빠르게 건조를 방지하기 위해 배아를 맞 춥니 다.
- 플라스틱 페트리 접시에 잘라 슬라이드를 삽입하고 부드럽게 슬라이드를 커버하는 M9 배지를 추가합니다.
- 계란이 여전히 한천에 붙어있는 양안에서 확인하십시오.
C. 4. 기록 엘레 개발
- 샘플 홀더의 이전 준비 (컷 슬라이드, 한천 플러스 배아를) 수정하고 큐벳에 배치합니다. 그림 4는 수제 홀더를 설명하고 그림 5는 관측 맥락에서 큐벳의보기를 보여줍니다.
- 압전 무대에 큐벳을 수정.
- 시야 조명 태아의 위치를 확인합니다.
- AOTF, 카메라와 압전 단계를 제어하는 집에서 만든 소프트웨어를 시작합니다. 이러한 마이크로 매니저와 같은 무료 소프트웨어는, 또한 사용할 수 있습니다.
- 레이저 라인 및 전력 (AOTF)를 선택합니다.
- 원통형 렌즈 및 조명용 렌즈를지지하는 세 방향으로 스테이지를 사용하여 광 시트의 위치를 조정한다. 밝은 신호를 얻기 위해 가로 방향 (X)에 따라 단계를 이동합니다. 일을 구하는 다음 광 시트의 Z 위치 및 길이 방향의 위치 (Y)를 조정노이즈 비율 전자 최상의 신호. 빛 시트 초점의 위치가 빛의 경로 길이의 차이를 해결하기 위해 하나의 배아에서 다른 조정해야 할 수도 있습니다.
- 타임 랩스 영상을 획득하기 위해, 두 이미지뿐만 아니라, 취득되는 화상의 수와 레이저 파워 사이의 시간을 얻는, 노출 시간을 선택한다. 2 컬러 수집을 위해, 두 번째 레이저 라인을 선택합니다. 두 가지 색상 이미지를 연속적으로 획득된다.
- AZ 스택을 획득하려면, 또한 두 조각 사이의 거리, 및 시작과 압전체의 위치를 종료를 선택한다.
Representative Results
세 가지 다른 C.로부터 3 3D 시간 경과 기록 실험 엘레 균주는 상술 광 시트 현미경 설정을 사용하여 획득 될 수있는 데이터의 종류를 나타낸다. 우리는 이러한 조건에서 배아 SPIM 이미징 C.에서만 광독성 낮은 수준의 원인을 나타내는 이전 보고서와 일치, 정상 속도로 개발하고 영상 살아남을 것을 확인 엘레 6,7 배아.
첫 번째 변형 GFP (; stIs10024 zuIs178)에 융합 히스톤을 표현한다. 기록마다 37 초 촬영 20 조각 (조각 1 μm의 사이의 거리)의 더미를 가진 2 시간 동안 실시 하였다. 6가 서로 다른 시점에서 스택의 한면을 보여줍니다 그림. 두 interphasic 핵 (화살표)과 농축 유사 분열 염색질 (화살표 머리)를 명확하게 볼 수 있습니다.
두 번째 변형 GFP (ruIs57)에 융합 튜 불린과 히스톤을 표현mCherry (; stIs10226 itIs37)에 융합. 기록마다 105 초 촬영 20 조각 (조각 1 μm의 사이의 거리)의 스택과 함께 16 분 동안 수행 하였다. 7 스택과 다른 시점의 서로 다른면을 보여줍니다 그림. 관련 영화 1 표시 3 연속 시점에서 복원을 3D로. 분열 동안, 유사 분열 스핀들 (그린) 및 응축 염색체 (레드) 깨끗이 발달 동안 세포 분열 방향의 추적을 허용하는 표시이다.
세 번째 변형 GFP (pwIs23)에 융합 아포 지단백 VIT-2를 표현하고 mCherry (ltIs44) 바인딩 막. 기록이 매 30 초 촬영 10 조각 (조각 1 μm의 사이의 거리)의 스택과 함께 25 분 동안 수행 하였다. 8 스택과 다른 시점의 서로 다른면을 보여줍니다 그림. 세포 내에서 노른자 지방 단백질 입자 (녹색)의 빠른 이동을 쉽게 할 수 있습니다다음.
그림 1 : 조명 및 검출 장치, 전면과 바닥 전체로 구성 SPIM 광 설치. 조명 유닛에서는, 다이크로 익 미러에 의해 결합 된 레이저는 각각 독립적으로, 레이저의 파워를 제어 AOTF를 입력한다. 이어서, 망원경은 4 배에 의해 빔의 크기를 증가시키고, 잠망경 현미경의 높이로 가져온다. 원통형 렌즈는 조명 목적으로 재 집중되는 광 시트를 형성한다. 검출부는 직립 현미경에 통합되어 있으며, 주로 검출 렌즈, 필터, 튜브 렌즈와 EMCCD 의해 구성된다. 샘플은 조명 및 검출 경로 사이의 교차점에 위치된다. 압전 단계 수있는 샘플의 수직 (Z) 변위3D 획득을위한.
그림 2. 큐벳 홀더 홀더는 3 알루미늄 플레이트로 구성되어 있으며, 압전 무대에 나사 결합된다. 유리 베트는 (빨간색) 스프링에 의해 유지된다.
그림 3 : C. 실장 프로토콜 SPIM의 실험 elegans의 배아. 유리의 절단 된 부분은 폴리-L-라이신으로 코팅되어 있습니다. 한천의 패드는 코팅 표면 상에 위치된다. 폴리-L-라이신은 다음 한천 패드에 추가됩니다. 마지막으로, C. 엘레 배아는 폴리-L-라이신 코팅 한천 패드에 정렬됩니다.
그림 4 : 샘플 홀더. 홀더 유리 큐벳의 내부 크기에 적합하다. (빨간색) 두 개의 스프링 (그림 3 참조) 유리 슬라이드를 개최합니다. 이 홀더는 다음 유리 큐벳 안에 넣을 수 있습니다.
도 5 :... 샘플 홀더가 관찰 컨텍스트에서 배아 프로토콜이도 3에 요약에 따른 유리 슬라이드에 고정화 슬라이드가도 4에 설명 된 샘플 홀더에 의해 유지되는 샘플 홀더 유리 큐벳에 삽입되어, 그림 2에 설명 된 홀더에 의해 개최. 빛 시트는 내가 수평 및측면에서 배아를 lluminates. 피검 렌즈를 샘플 위에 수직이다.
그림 6 : C.의 기록 히스톤 :: GFP 융합을 표현 elegans의 배아 유전자 변형 배아의 단일 평면 이미지 히스톤 :: GFP 융합 (zuIs178; stIs10024) 표현하는 서로 다른 시간 지점에서를 3D 시간 경과 기록에서 추출한 이미지 :.. 20 조각 (만든 스택 조각 1 μm의 사이의 거리); 조각 당 노출 시간 : 30 밀리 초; 스택 사이의 시간 간격 : 37 초; 총 수집 시간 : 2 시간. 화살표 : interphasic 핵, 화살표 머리 : 응축 유사 분열 염색질. t = 0 분에서 배아는 2 세포 단계에 있으며, 정상 발달의에서 예상대로 t에서 = 120 분 배아는 70 셀이(하나의 평면에 포함 된 유일한 세포가 배아의 모든 세포가 아닌 그림에서 볼 수 있으며주의) 오줌. 조명의 전력 (조명 목적의 출구에서 측정) 488 nm에서 30 μW했다. 이 비디오를 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 7 : C.의 기록 엘레의 튜 블린 :: GFP 융합을 표현 배아와 히스톤 :: mCherry 융합. C.의 3D 시간 경과 기록에서 추출한 이미지 튜 블린 :: GFP 융합 (ruIs57)와 히스톤 :: mCherry 융합 (; stIs10226 itIs37)을 표현 elegans의 배아. 촬영 조건 : 조각 1 ~ 20 조각 (거리의 스택의 인수μm의) 모든 105 초; 총 수집 시간 : 16 분; 노출 시간 : 각 채널에 대해 200 밀리 초. 패널은 동일한 스택의 10 조각을 보여줍니다. 패널 B는 동일한 슬라이스마다 210 초를 보여줍니다. 조명의 전력 (조명 목적의 출구에서 측정) 각각 488 및 561 nm의 레이저, 30 μW 300 μW했다. 이 비디오를 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 8 : C.의 기록 VIT-2 :: GFP 융합을 표현 elegans의 배아와 C의 3D 시간 경과 기록에서 추출한 막 대상 mCherry. 이미지 엘레 배아 VIT-2 :: GFP 융합을 표현 (PWIS23) 및 막 - 대상 mCherry (ltIs44). 촬영 조건 : 10 조각 (조각 1 μm의 사이의 거리) 매 30 초 스택의 인수; 총 수집 시간 : 25 분; 채널 당 노출 시간 : 200 밀리 초. 패널은 동일한 스택의 제 5 슬라이스를 나타낸다. 패널 B는 동일한 슬라이스마다 30 초를 보여줍니다. 이 비디오를 보려면 여기를 클릭하십시오.
Discussion
이 프로토콜은 C의 생체 내 이미징을위한 빛 시트 현미경의 쉬운 설치를 설명 엘레 배아. 레이저, 빔 익스팬더, 시준 및 초점 렌즈를 포함한 광 시트를 생성하고 정렬하기 위해 필요한 광학 소자는 용이하게 광학 벤치에 장착 될 수있다. 검출 경로와 카메라의 직립 현미경과 조합하여,이 설정에 대한 간단한 솔루션 가벼운 시트 현미경을 제공합니다.
이 형상은 샘플 환경이 간단하게. 살아있는 표본이 개최 위치 및 기계 조각의 작은 집합으로 이동 유리 큐벳에 배치됩니다. 시트 조명 현미경 능력을 가진 절편 넓은 분야의 기술이기 때문에, 단지 하나의 축 동력 이동은 3D 이미징을 위해 요구된다. 이것은 단일 스캔 소자에 동기화 요건을 제한하고, 소프트웨어 개발을 용이하게한다. iSPIM 6 우리의 수직 지오에 비해RY는 검출 용 고 NA 대물 렌즈의 사용을 허용한다. 수평면에서 대물 렌즈와 SPIM 셋업에 비해 샘플의 장착 및 배아의 일련의 이미징은 쉽다. 전부,이 기술의 구현은 간단하고 광학에 약간의 전문 지식을 얻을 수 있습니다. 이것은 더 빠른 속도와 더 감소 광독성하지만 낮은 축 해상도의 단점의 장점과 공 초점 현미경에 싼 대안이다.
우리는 또한 C.를 탑재 할 수있는 쉽고 재현성있는 방법을 개발 이 시스템을 사용하여 생체 내 이미징을위한 엘레 간스의 배아. 설치 절차는 빠르게 (15 분) 일상 실험에 적합합니다. C.에 대한 엘레 영상, 간단한 설치의 장점은 적어도 두 겹이다 : 토토 이미징 (i)는 회전하지 않고 가능하기 때문에 3D 재건은 간단합니다; (II) 샘플 설치가 용이하고 여러 개의 배아는 순차적으로 이미지화 할 수있다같은 슬라이드에. 우리는 세포 분열과 세포 모양의 변화를 관찰 할 수있는 충분한 시간 분해능과 시간 경과 영화의 예를 보여 주었다. C.을 연구하는 빛 시트 현미경의 힘 elegans의 개발도 최근 다른 6, 7, 8에 의해 설명되었다. 따라서,이 기술은 C.의 형태 형성 및 패터닝을 연구하는 것은 매우 유용 할 것이다 elegans의 배아.
이 시스템은 또한 다른 모델 생물의 발달을 분석하는 데 사용할 수 있습니까? 그것은 인식하는 것이 중요하다되도록 C. 작은 투명 유기체 시트 조명 현미경의 구현 엘레은 Drosophila의 배아와 같은 큰 생물보다 덜 엄격하다. 초파리의 토토 영상에서 일반적으로 회전 및 멀티 뷰 복원 9, 10. 선상 여기 대물 렌즈와 두 가지 측면에서 흥분도 attenuat에 의한 그림자 효과를 감소 할 수 있습니다 필요합니다빛 (11)의 이온. 그러나, 여기에 제시된 설정은 여전히 낮은 표백과 낮은 photoxicity으로, 초파리 배아의 이미지를 한쪽으로 구성된다. 이 설정은 또한 멍게 또는 제브라 피쉬와 같은 이미지를 작은 투명 배아에 도움이 될 수 있습니다.
Disclosures
저자가 공개하는 게 없다.
Acknowledgments
우리는 토론을위한 소프트웨어 개발 및 제레미 Capoulade 특히 올리비에 블랑, 모든 Lenne의 회원들과 버트 랜드 연구소 감사합니다. 우리는 또한 기술 지원 PICsL-IBDM 영상 시설, 특히 클로드 모레티와 브라이스 Detailleur 감사합니다.
이 작품은 (P.-FL 및 VB에) CNRS에서 ATIP의 교부금에 의해 지원되었다, Labex은 (VB에) 사노피 - 아벤티스에서와 부여 (P.-FL 및 VB에) 부여를 알려 드리겠습니다. 우리는 (ANR-10-된 InSb-04-01 "INVESTISSEMENTS D' Avenir에서"를 호출) 직원은 국립 드 라 공들인에서 지원하는 프랑스 바이오 이미징 인프라를 인정합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| SPIM | |||
| Detection | |||
| upright microscope | ZEISS | Axiophot 1 | |
| 100x W objective (NA 1.1, W.D. 2.5mm) | NIKON | ||
| EMCCD back illuminated | ANDOR | DU-885K-CS0-#VP | |
| Illumination | |||
| LASER 488 nm / 60 mW | TOPTICA | iBeam smart | |
| LASER 405 nm / 120 mW | TOPTICA | iBeam smart | |
| LASER 561 nm / 500 mW | COBOLT | JIVE 500 | for time lapse imaging, 50 or 100mW is enough |
| filter Quad line laser rejectionband ZET 405/488/561/638 | AHF | F57-405 | |
| Dichroic 405 | AHF | F38-405 | |
| Dichroic 488 | SEMROCK | Di01-R488 | |
| AOTF | AA | AOTFnC-400.650-TN | |
| mirror | |||
| lens 50 mm | THORLABS | telescope 5X | |
| lens 200 mm | THORLABS | telescope 5X | |
| periscope | THORLABS | RS99/M | |
| cylindrical lens f=100mm | THORLABS | ACY254-100-A | |
| 10X NA 0,3 | NIKON | ||
| xyz stage | NEWPORT | ||
| Sample | |||
| Bacto Agar | Bectkton Dickinson | 214010 | 5% in water |
| Poly-L-Lysine solution | Sigma | P8920 | |
| Capillaries GC100F-10, 1.0mm oD, 0,58mm ID, 100 mm L | Havard Appartus | 30-0019 | |
| Aspiration tube (mouth pipette) | Dutsher | 55005 | |
| M9 medium: | |||
| KH2PO4 (3g/L) | Any supplier | ||
| Na2HPO4 (6g/L) | Any supplier | ||
| NaCL (5g/L) | Any supplier | ||
| MgSO4 (1 mM final) | Any supplier | ||
| cuvette holder | HOME MADE | made by Brice Detailleur | |
| sample holder | HOME MADE | made by Claude Moretti | |
| x stage | NEWPORT | ||
| coverslip 50x20x1 mm | MARIENFELD | cut then in 10x20x1mm | |
| piezo electric stage with amplifier/controller | PI | P-622.ZCD / E-625.CR | |
| cuvette 40mmx40mmx10mm | HELLMA | 704.002-OG.40 mm- 10mm high | |
| Diamond Point Glass Marking Pencil | VWR | ||
| Software | |||
| C++ (Qt) home made software | developed by Olivier Blanc and Claire Chardès, available on request. Alternative solutions: micromanager or labview | ||
References
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