Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

فيفو السابقين الثقافة من الفأر الجنينية بالبشرة والتصوير لايف للهجرة أرومة ميلانينية

Published: May 19, 2014 doi: 10.3791/51352
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1MRC Human Genetics Unit, MRC IGMM, Western General Hospital, University of Edinburgh

Summary

وصفنا تشريح الجسم الحي وخارج ثقافة الماوس الجلد الجنينية. يحافظ على نظام الثقافة واجهة الهواء السائل عبر سطح الأنسجة ويسمح التصوير على مجهر مقلوب. Melanoblasts، وهو مكون من الجلد النامية، fluorescently المسمى السماح سلوكهم الواجب مراعاتها باستخدام متحد البؤر المجهري.

Abstract

Melanoblasts هي قمة العصبية المشتقة من الخلايا الصباغية السلائف؛ الخلايا المسؤولة عن إنتاج الصباغ في الجلد والشعر. Melanoblasts تهاجر من خلال البشرة للجنين حيث استعمار في وقت لاحق من الشعر النامي بصيلات 1،2. ودرس قمة العصبية خلية الهجرة على نطاق واسع في المختبر ولكن في طرق الحي لا تزال غير متطورة، خاصة في أنظمة الثدييات. بديل واحد هو استخدام فيفو السابقين الثقافة عضوي النمط 3-6. ثقافة الماوس الجلد الجنينية يتطلب الحفاظ على واجهة الهواء السائل (علي) عبر السطح من 3،6 الأنسجة. وقد أعاق عالية الدقة الحية التصوير من الجلد الماوس الجنينية بسبب عدم وجود وسيلة جيدة أن يحافظ ليس هذا فقط ولكن يسمح ALI الثقافة لتكون معكوسة، وبالتالي متوافقة مع مسافة عمل قصيرة العدسات موضوعية والمجاهر معظم متحد البؤر أيضا. توضح هذه المقالة التحسينات الأخيرة لميثالتطوير التنظيمي الذي يستخدم غشاء نفاذية الغاز للتغلب على هذه المشاكل والسماح عالية الدقة مبائر التصوير من الجلد الجنينية في فيفو السابقين الثقافة 6. باستخدام أرومة ميلانينية محددة جنة المساواة العرقية، معربا عن recombinase خط الماوس جنبا إلى جنب مع خط مراسل R26YFPR ونحن قادرون على تسمية fluorescently السكان أرومة ميلانينية داخل هذه الثقافات الجلد. يسمح تقنية التصوير الحي للmelanoblasts ومراقبة سلوكهم والتفاعل مع الأنسجة التي تتطور. يتم تضمين نتائج ممثلة لإثبات القدرة على العيش، صورة 6 الثقافات في نفس الوقت.

Introduction

وقد تم استزراع الجلد الجنينية تقليديا من قبل تشريح الجنين من الماوس وتصاعد على Nuclepore غشاء البولي. ثم يتم طرح الغشاء على مستنبت، وبالتالي الحفاظ على واجهة الهواء السائل عبر السطح من الأنسجة النامية 3،4. وقد استخدمت هذه التقنية لفحص سلوك أرومة ميلانينية عن طريق تحديد الأنسجة وتقييم توزيع أرومة ميلانينية باستخدام β-غالاكتوزيداز كعلامة 7. قمنا بتطوير طريقة تسمح melanoblasts المسمى الحية التصوير fluorescently في فيفو السابقين الثقافة الجلد 6. نحن هنا وصف الأسلوب في التفاصيل من تشريح، لإعداد، ليعيش التصوير متحد البؤر وتشمل بعض التحسينات الأخيرة.

Melanoblasts هي السلائف الجنينية من الخلايا الصباغية، والخلايا التي تنتج الصبغة في الشعر والجلد. تنشأ Melanoblasts في قمة العصبية المتاخمة للالأنبوب العصبي الجنيني في اليوم حوالي 9 (E9) في الماوس النامية البريدmbryo. في وقت لاحق تهاجر على طول الطريق بين ظهراني الأديم الظاهر وو somites النامية. في E12.5 ينتقلون من الأدمة إلى البشرة حيث تتكاثر ومواصلة هجرتهم. يبدأ نمط بصيلات الشعر الأولية لتشكيل في البشرة في E14.5 وmelanoblasts E15.5 وإضفاء الطابع المحلي لهذه المسام. لاستعراض تطوير أرومة ميلانينية / الصباغية رؤية توماس وإريكسون (2008) 1. من أجل تسمية السكان أرومة ميلانينية جمعنا :: صور حيوانات CREB التي تعبر عن لجنة المساواة العرقية-recombinase مدفوعا المروج الماوس التيروزينيز 8 مع الحيوانات R26YFPR التي تعبر عن بروتين فلوري الصفراء (YFP) مشروط من موضع ROSA26 9.

نحن تصف طريقة لثقافة الجنينية الصور والتقاط الجلد باستخدام المجهر متحد البؤر مقلوب. وتكييفه شكل طريقة الأصلي وصفها في مورت وآخرون (2010) 6. الحاضرالأسلوب يسمح التصوير في شكل 6 جيدا ويزيل الاعتماد على الأغشية Nuclepore وعلى matrigel لدعم الثقافة. بدلا من ذلك باستخدام كتلة صغيرة من 1٪ الاغاروز لتحقيق الاستقرار في الجلد الجنينية. إزالة الاعتماد على matrigel أهمية خاصة في الحالات التي تكون فيها استجابة الجلد الجنينية لعوامل النمو للذوبان هو محور الدراسة. وقد تم بالفعل استخدام طريقة لدينا الأصلي للحصول على أفكار جديدة في تطوير أرومة ميلانينية 10-13 ونحن نتوقع أن التحسينات وصفنا هنا سوف جعلها أكثر قوة باعتبارها تقنية تجريبية خاصة حيث الثقافات المتعددة والمتوازية هي شرط.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تم تنفيذ جميع الأعمال في الحيوان فقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية بموجب ترخيص من قبل وزارة الداخلية في المملكة المتحدة (رقم الترخيص المشروع PPL 60/3785 و60/4424).

1. إعداد

  1. تسمية melanoblasts في الجلد النامية من خلال الجمع بين لجنة المساواة العرقية-recombinase معربا عن خط الماوس المناسبة مع مراسل خط الماوس الفلورسنت. صور :: بجمعية العقارات، صور :: CREB 8 و 14 لجنة المساواة العرقية Wnt1 :: استخدمت بنجاح كخطوط لجنة المساواة العرقية، معربا عن و R26YFPR 9 كخط المراسل.
  2. تحضير مستنبت في غطاء تدفق الصفحي؛ تكملة Dulbecco لتعديل النسر متوسطة (DMEM) مع (1٪ ت / ت البنسلين / الستربتوميسين)، و 10٪ ت / ت مصل العجل الجنين و0.584 جم / L L-الجلوتامين.
  3. ويرد جهاز التصوير الحي في الشكل 1 تعقيم قاعدة غرفة التصوير بواسطة مسح أسفل مع الايثانول 70٪. تعقيم إدراج، ومقاطع التصوير، والحلقات التي تمرغ اوفernight في الايثانول 70٪. استخدام غطاء العقيمة من لوحة 6 كذلك غطاء للغرفة.
  4. السطح السفلي من غرفة التصوير تتكون من غشاء مرتبك الذي عقد في مكان من قبل يا الدائري (الشكل 1). تبدأ مع 35 ملم الغاز طبق مرتبك قابلة للاختراق. وضع الطبق على غرفة التصوير وقطع غشاء نفاذية الغاز مع واحد شفرة حلاقة ذو حدين. دفع يا الدائري على الغشاء لضمان الحصول عليها إلى غرفة التصوير.
  5. لقطات التصوير (6 في المجموع) المشبك الجلد الجنينية في مكان (الشكل 1) قبل الاستخدام يجب أن تكون مليئة 1٪ الاغاروز. إعداد محلول 2٪ من الاغاروز مع DH 2 O معقمة بواسطة الميكروويف والتبريد إلى 60 درجة مئوية. مزيج 01:01 مع 10 مل مستنبت (راجع الخطوة 2) مسخن إلى 60 درجة مئوية. الوقوف لقطات التصوير في 6 العقيمة لوحة 6 جيدا. بالتنقيط الحل الاغاروز 1٪ في وسط كل مقطع باستخدام pastette غرامة والسماح لتبرد. إضافة 1 مل PBS الباردة العقيمة إلى كل بئر لمنع وgarose من الجفاف. يمكن تخزين مقاطع التصوير لعدة ساعات في برنامج تلفزيوني.
  6. لتنفيذ الفصل حساسة من الجلد الجنينية وللتعامل مع الأنسجة تشريح استخدام 'طريقة عصا الشعر "كما هو موضح في كاشيواغي وآخرون. 3 بدلا من استخدام عود ويمكن استخدام سيخ كباب الخيزران. جعل فتحة صغيرة في نهاية شقة للسيخ واحد باستخدام شفرة حلاقة ذو حدين وإدراج فرشاة أسنان ناعمة الشعر الخشن. تقليم سيخ بحيث يكون ما يقرب من 15 سم في الطول.
  7. استخدام المجهر متحد البؤر البيئية مع غرفة كاملة أو مرحلة أعلى الغرفة توفير 5٪ CO 2 في الهواء. Prewarm المرحلة المجهر إلى 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة على الأقل قبل التصوير. هذا يساعد على منع الانجراف العينة الناجمة عن التوسع في مكونات المرحلة لأنها الاحماء.
  8. إعداد مجموعة متعددة الموقف باستخدام برنامج حاسوبي لمراقبة المجهر بحيث يمكن للمرء أن بسرعة وسهولة تركز على منتصف كل ثقافة لاقامة التجربهر.

2. الإجراءات

  1. تتزاوج الفئران وتعيين آخر اليوم الأول coitum كما E0.5 اليوم. في E14.5 اليوم، اعدام الأنثى من قبل خلع عنق الرحم وفضح تجويف الجسم عن طريق إجراء شق خط الوسط الصغيرة، وسحب الجلد بعيدا نحو الرأس والذيل ثم قطع الصفاق الكامنة وتدوي مرة أخرى إلى جانبي الجسم. تشريح الرحم في برنامج تلفزيوني العقيمة الباردة من خلال عقد بحزم مع ملقط والقص على طول مسراق الرحم باستخدام مقص جراحي. الحفاظ على الرحم على الجليد حتى المطلوبة. للحصول على وصف مفصل نرى شيا وآخرون (2007) 15.
  2. تشريح الأجنة من الرحم عن طريق قطع أول طول جدار الرحم مع مقص جراحي للافراج عن الساقط ومن ثم تشريح الأجنة من الساقط عن طريق سحب بينهما مع اثنين من أزواج من ملقط غرامة. الشاشة لالفلورسنت التعبير مراسل (إذا لزم الأمر).
  3. اعدام بقطع الرأس الأجنة قبل تشريح. الغواصاتequently إزالة الذيل والأطراف وهند ثم الأمامية باستخدام شفرة حلاقة واحدة حدين. تحتفظ الأنسجة لالتنميط الجيني إذا لزم الأمر.
  4. إجراء شق في ventrum على مقربة من خط الوسط في اتجاه rostro-الذيلية. باستخدام العصي الشعر هو موضح في الخطوة 1.6، ندف بعناية بعيدا الجلد من الأنسجة الضامة الأساسي الدورية الجنين في نفس الوقت. لا تقم بإزالة الجلد تماما ولكن بدلا من ترك الأمر تعلق على طول أبعد حافة بطني من شق أولا.
  5. من المهم عدم السماح للالجلد يصبح سكران كما هو ثم من الصعب جدا لتركيب. لمنع هذا، تتسطح من الجلد باستخدام العصي الشعر (الجانب الجلد لأعلى) على سطح طبق بتري جاف ثم قطع بعيدا عن جذع الجنين باستخدام شفرة حلاقة واحدة حدين. ويمكن التمييز بين الجانب الجلد من الجانب البشرة عن طريق رصد دقيق من مفترق الطرق بين الأنسجة تشريح والجنين قبل أن يتم إزالة الجلد. مجال الأنسجة تشريح هوما يقرب من 0.5 مم 2 عند تشريح الجنين E14.5.
  6. وضع مقطع التصوير على أعلى من الجلد بحيث الاغاروز لمس الجانب الجلد من الأنسجة. السماح للوقوف لمدة 60 ثانية ثم بعناية ندف حواف الأنسجة تصل الجانبين من مقطع. عكس كليب واستخدام العصي لشد الشعر من الجلد وإزالة أي فقاعات الهواء، مع الحرص على تلمس سطح الأنسجة (في المنطقة التي سيتم تصويرها) أقل قدر ممكن.
  7. استخدام الحرير خيوط الجروح لادراك التعادل في الجلد لمقطع التصوير باستخدام الإبهام وهما عقدة بسيطة على جانبي مقطع التصوير بحيث تشديد وسحب الجلد في أخدود بالقرب من الجزء العلوي من مقطع. عكس كليب، ودفع داخل إدراج التصوير ومكان في القاعدة. الخطوط العريضة تملأ إدراج مع ~ 5 مل من مستنبت (انظر الخطوة 1.2). الشكل 1 تجميع غرفة التصوير.
  8. تكرار بروتوكول ل5 عينات المتبقية.

3. لايفالتصوير

  1. غرفة التصوير لديه نفس أبعاد كمعيار لوحة 6 جيدا. استخدام لوحة إدراج المناسبة لتركيب غرفة على مسرح المجهر متحد البؤر.
  2. مطلوب مرحلة الآلي لصورة الثقافات في نفس الوقت. تحديد المواقف ستة لصورة في برنامج متحد البؤر. وسوف تعتمد على الضبط الدقيق على قدرة المجهر المستخدمة. وعادة ما تستخدم لض المكدس صغيرة (3-5 مناصب ض لحساب أي مرحلة الانجراف) في كل من مناصب 6 واستولت على ض المكدس كل 2 دقيقة ل 18-24 ساعة. للتطبيقات الحية التصوير فإنه من المفيد عموما لاستخدام أوسع من الإعداد الأمثل الثقب بصريا للحد من قوة الليزر وعدد من المقاطع ض المطلوبة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ويبين الشكل 2 نتائج ممثلة من تجربة مرور الوقت باستخدام الجلد الجنينية من صور :: CREB س الأجنة R26YFPR في E14.5. تم تصوير 6 الثقافات الجلد الجنينية بواسطة المجهر متحد البؤر كل 2 دقيقة لمدة 18 ساعة. تم استخدام برامج مجانية تحليل الصور حزمة يماغيج لتحليل سلوك melanoblasts YFP المسمى في 6 أفلام. كانت melanoblasts تتبع تلقائيا باستخدام البرنامج المساعد wrMTrck التي وضعتها يسبر Søndergaard بيدرسن ( http://www.phage.dk/plugins/wrmtrck.html ) يتم عرض نتائج تتبع في الشكل 2. افلام 1-3 هي ممثل للتجربة و تتوافق مع لوحات ألف وزاي وهي تظهر ضوء المنقولة، YFP وجهات النظر مركب على التوالي. السكان أرومة ميلانينية المهاجرة نشطة للغاية. الخلايا تتحرك باستمرار تقريبا، وقفة فقط عندما يكونون على وشك أن القسمة ميلtosis. ومن الممكن أيضا لمراقبة تطور نمط بصيلات الشعر الأولية خلال الفترة الثقافة في القناة الضوء المرسل (أرقام 3A-3X وفيلم 1).

الشكل 1
. الرقم المعدات وإعداد 1 A: تتكون قاعدة التصوير غرفة حية من السكن المقوى واضحة مع أبعاد خارج متطابقة إلى طبق ثقافة 6 جيدا. أنه يحتوي على ستة ثقوب فيه 6 جمعيات غرفة فردية يمكن فتحة B: يتكون كل إدراج من 4 مكونات؛ مقطع التصوير، وإدراج التصوير، غشاء مرتبك، ويا ​​الدائري. وlathed مقطع وإدراج من البلاستيك الأسود الاسيتيل، وجدنا هذا لديها أدنى تألق ذاتي من البلاستيك اختبرنا. يتم إجراء يا الدائري من PVCيستخدم د لكبح الغشاء مرتبك على الجزء السفلي من إدراج تشكيل واجهة السائل الهواء (ALI). مقطع التصوير (الاسيتيل أسود) لديه عدة ثقوب للسماح للتداول مستنبت C: يتم تعبئة رمح المركزي للكليب مع 1٪ الاغاروز قبل الاستخدام لتوفير سطح مستو الشركة التي لتركيب الجلد. ويرد الجلد لكليب مع خيوط الجروح قبل أن توغلت في إدراج، يقحم الجلد بين الاغاروز وغشاء شخص مغفل. ثم يتم تعبئة إدراج مع مستنبت D:. للتشريح والتلاعب الجلد الجنينية فرشاة الأسنان واحدة هي التي شنت الشعر الخشن في شق في نهاية شقة من الخيزران سيخ كباب. زوج من العصي الشعر يمكن أن تستخدم في تركيبة مع ملقط غرامة لتشريح الجلد الجنينية وجبل في غرفة التصوير E:. صور للمكونات المفصل في AC الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 2
الشكل 2. نتائج الممثل من 6 أفلام سجلت في نفس الوقت. AF: تتبع نتائج من 6 أفلام سجلت في موازية لإظهار قدرات النظام. وقد سجلت كل فيلم في نقاط زمنية 2 دقيقة ليصبح المجموع 18 ساعة (انظر 1-3 افلام للفيلم المقابلة من الألواح A و G). وتظهر مواقف الخلايا في إطار واحد من الفيلم ويتم فرضه على تتبع النتائج على رأس GL: ملخص لنتائج تتبع تآمر كما ركزت تتبع البيانات.

d/51352/51352fig3.jpg "/>
الرقم 3 صور الممثل من الأفلام الوقت الفاصل بين التنمية بصيلات الشعر ومن أرومة ميلانينية تمر الانقسام AX:. المختارة، اقتصاص قطة من فيلم 1 بصيلات الشعر تصبح مرئية الابتدائية خلال الفترة من 0-18 الثقافة الجلد ساعة. تم تطبيق أحد طرفية إلى الصور A'-X. ': مختارة، اقتصاص الإطارات من فيلم 2 صور ممثل melanoblasts المهاجرة في البشرة وتطوير خلية واحدة (انظر سهم في A.') يمر الانقسام (سهم في تي ') . الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الفيلم 1: نتيجة الممثل للقناة الخفيفة تنتقل من تجربة مرور الزمن 18 ساعة. </ قوية> نمط الشعر جريب الأولية، وإن لم يكن واضحا في بداية الفيلم، ويصبح أكثر وضوحا مع تقدم الثقافة.

الفيلم 2: . نتيجة الممثل للقناة YFP من تجربة الوقت الفاصل بين 18 ساعة والسكان أرومة ميلانينية هو السكان ديناميكية للغاية والمهاجرة. خلايا ثابتة نادرة وعادة ما تمر الانقسام (انظر الشكل 3).

الفيلم 3: . نتيجة الممثل للقناة مركب من تجربة الوقت الفاصل بين 18 ساعة ويمكن رؤية السكان أرومة ميلانينية إلى الهجرة داخل البشرة النامية والتفاعل مع بصيلات الشعر النامي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

نحن تصف طريقة لثقافة الجلد الجنينية التي هي قابلة خصوصية التصوير للعيش الخلية على المجاهر مبائر مقلوب. يتضمن الأسلوب التحسينات الأخيرة التي تسمح لل6 الثقافات ليمكن تصوير بالتوازي ويزيل الاعتماد على matrigel والأغشية Nuclepore الأسلوب الأصلي 6. الفرق الفنية الحاسمة من تقنيات مشابهة هو استخدام غشاء مرتبك الغاز نفاذية لإنشاء واجهة الهواء السائل وأيضا ليكون بمثابة ساترة. لقد حافظت بنجاح الثقافات مع التصوير متحد البؤر المستمر لمدة تصل إلى 48 ساعة. على دقة عالية وممتازة إشارة إلى نسبة الضوضاء من الصور مبائر يسمح تتبع خلية الآلي لتحليل السلوك أرومة ميلانينية في الناتج الأفلام مرور الزمن.

باستخدام هذه التقنية من الممكن للتحقيق في ديناميات أرومة ميلانينية تشتت ودراسة تفاعلها مع البشرة وبصيلات الشعر النامي. الحادي الحرجةالعائد على السهم في البروتوكول هي لإجراء تشريح دقيق لا تضر البشرة النامية وتركيب عينات الجلد الجلد الجانب ضد الاغاروز دون مكامن الخلل أو تمتد. الإجراء الموضح في هذه الورقة يعمل بشكل أفضل بين E13.5 E15.5 و. قبل E13.5 الجلد لا يزال هشا للغاية وبعد E15.5 فمن سميكة نسبيا ويصعب اختراق بواسطة المجهر متحد البؤر. قدرات النظام المجهر المستخدمة هي أيضا مهم جدا. نحن عادة استخدام المجهر متحد البؤر نيكون A1R مجهزة الملكية نظام التركيز نيكون الكمال (PFS). باستخدام PFS يقلل كثيرا من عدد من الأفلام السيئة الناجمة عن مرحلة الانحراف، متاحة لمنصات أخرى أنظمة مشابهة.

عيب واحد من هذه التقنية هو شرط لأجهزة الثقافة المتخصصة. ولكن تصميم بسيط وغرفة يمكن تجميعها بسهولة من قبل أي ورشة عمل تقنية صغيرة. في ملخص نقدم طريقة بسيطة التي يجب أن تكون من الاستخدام الواسع لstudieق التنمية الجنينية الجلد والسلوك أرومة ميلانينية. ومن المتوقع أن التقنية يمكن أيضا أن يتم تعديل لسيناريوهات أخرى حيث واجهة الهواء السائل هو شرط للثقافة ناجحة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgments

وأيد هذا العمل من قبل التمويل الأساسي من مجلس البحوث الطبية. نحن ممتنون لكريغ نيكول لإعداد الرسومات الفنية. نحن ممتنون لماثيو بيرسون وبول بيري لدعم التصوير الخاصة بهم.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM high glucose Biochrom AG F0475 without phenol red
Penicillin Sigma P3032
Streptomycin Sigma S9137
Fetal calf serum Hyclone SV30160.03
Glutamax Gibco 35050-038
Ethanol Generic
Live imaging chamber Custom made
Lummox dishes Sarstedt 94.6077.410
6-well plate Greiner Bio-One 657-160
Single edged razor blade Fisher Scientific 1244-3170
Agarose Biogene 300-300
Fine pastette Generic
PBS Generic
Kebab skewers Waitrose Bamboo BBQ skewers 30 cm
Toothbrush Generic
Petri dishes Greiner Bio-One 633185
Suture thread Look SP115 Black silk suture thread

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Thomas, A. J., Erickson, C. A. The making of a melanocyte: the specification of melanoblasts from the neural crest. Pigment Cell & Melanoma Research. 21 (6), 598-610 (2008).
  2. Mayer, T. C. The migratory pathway of neural crest cells into the skin of mouse embryos. Developmental Biology. 34 (1), 39-46 (1973).
  3. Kashiwagi, M., Huh, N. Organ Culture of Developing Mouse Skin and Its Application for Molecular Mechanistic Studies of Morphogenesis. Epidermal Cells: Methods and Protocols. Turksen, K. 289, Humana Press. 39-45 (2005).
  4. Kashiwagi, M., Kuroki, T., Huh, N. Specific inhibition of hair follicle formation by epidermal growth factor in an organ culture of developing mouse skin. Developmental Biology. 189 (1), 22-32 (1997).
  5. Van Der Wel, L. I., Wei, L., Prens, E. P., Laman, J. D., Companjen, A. R. A modified ex vivo skin organ culture system for functional studies. Archives of Dermatological Research. 293 (4), 184-190 (2001).
  6. Mort, R. L., Hay, L., Jackson, I. J. Ex vivo live imaging of melanoblast migration in embryonic mouse skin. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (2), 299-301 (2010).
  7. Jordan, S. A. A., Jackson, I. J. J. MGF (KIT ligand) is a chemokinetic factor for melanoblast migration into hair follicles. Developmental Biology. 225 (2), 424-436 (2000).
  8. Delmas, V., Martinozzi, S., Bourgeois, Y., Holzenberger, M., Larue, L. Cre-mediated recombination in the skin melanocyte lineage. Genesis. 36 (2), 73-80 (2003).
  9. Srinivas, S., et al. Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus. BMC Developmental Biology. 1 (1), (2001).
  10. Li, A., et al. Rac1 Drives Melanoblast Organization during Mouse Development by Orchestrating Pseudopod. Driven Motility and Cell-Cycle Progression. Developmental Cell. 21 (4), 722-734 (2011).
  11. Li, A., et al. Activated Mutant NRas(Q61K) Drives Aberrant Melanocyte Signaling, Survival, and Invasiveness via a Rac1-Dependent Mechanism. The Journal of Investigative Dermatology. , 1-12 (2012).
  12. Schachtner, H., et al. Tissue inducible Lifeact expression allows visualization of actin dynamics in vivo and ex vivo. European Journal of Cell Biology. 91 (11-12), 923-929 (2012).
  13. Ma, Y., et al. Fascin 1 is transiently expressed in mouse melanoblasts during development and promotes migration and proliferation. Development. 140 (10), Cambridge, England. 2203-2211 (2013).
  14. Danielian, P. S., Muccino, D., Rowitch, D. H., Michael, S. K., McMahon, A. P. Modification of gene activity in mouse embryos in utero by a tamoxifen-inducible form of Cre recombinase. Current Biology. 8 (24), 1323-1326 (1998).
  15. Shea, K., Geijsen, N. Dissection of 6.5 dpc mouse embryos. Journal of Visualized Experiments. (2), (2007).

Tags

علم الأحياء التنموي، العدد 87، والماوس، أرومة ميلانينية، والجلد، متحد البؤر المجهري، واجهة الهواء السائل
<em>فيفو السابقين</em> الثقافة من الفأر الجنينية بالبشرة والتصوير لايف للهجرة أرومة ميلانينية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mort, R. L., Keighren, M., Hay, L.,… More

Mort, R. L., Keighren, M., Hay, L., Jackson, I. J. Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration. J. Vis. Exp. (87), e51352, doi:10.3791/51352 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter