Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

אקס תרבות Vivo של עור העכבר עוברי וLive-הדמיה של הגירת Melanoblast

Published: May 19, 2014 doi: 10.3791/51352

Summary

אנו מתארים את הנתיחה וvivo התרבות לשעבר של עור העוברי של עכבר. מערכת התרבות שומרת על ממשק אוויר נוזלי על פני השטח של הרקמות ומאפשרת הדמיה במיקרוסקופ הפוכה. Melanoblasts, רכיב של העור מתפתח, שכותרתו fluorescently המאפשרת את התנהגותם כדי להיות שנצפתה באמצעות מיקרוסקופ confocal.

Abstract

Melanoblasts הוא הרכס העצבי נגזר מבשרים של מלנוציטים; התאים אחראים לייצור הפיגמנט בעור ושיער. Melanoblasts נודדים דרך האפידרמיס של העובר שבו הם לאחר מכן ליישב את השיער מתפתח זקיקי 1,2. נדידת תאי רכס עצבית היא נחקרה בהרחבה במבחנה, אך בשיטות vivo עדיין לא מפותחות היטב, במיוחד במערכות של יונקים. חלופה אחת היא להשתמש vivo לשעבר תרבות organotypic 3-6. תרבות של עור העוברי של עכבר דורשת התחזוקה של ממשק אוויר נוזלי (עלי) על פני השטח של 3,6 הרקמות. רזולוציה גבוהה לחיות הדמיה של עור העוברי של עכבר כבר הקשתה על ידי חוסר שיטה טובה שלא רק שומרת עלי זה, אלא גם מאפשר לתרבות להיות הפוכה ולכן תואמת עם עדשות אובייקטיביות מרחק עבודה קצר ומיקרוסקופים confocal ביותר. מאמר זה מתאר שיפורים אחרונים לספידOD המשתמש בקרום חדיר גז כדי להתגבר על הבעיות אלה ולאפשר הדמיה confocal ברזולוציה גבוהה של עור עוברי in vivo התרבות לשעבר 6. באמצעות melanoblast Cre-recombinase הספציפית המבטאת קו עכבר בשילוב עם קו כתב R26YFPR אנו יכולים לתייג fluorescently אוכלוסיית melanoblast בתוך תרבויות עור אלה. הטכניקה מאפשרת לחיות הדמיה של melanoblasts והתבוננות בהתנהגות והאינטראקציות עם הרקמה בה הן לפתחם. נציג תוצאות כלולות כדי להדגים את היכולת לחיות תמונת 6 תרבויות במקביל.

Introduction

עור באופן מסורתי עוברי כבר בתרבית על ידי לנתח מן עובר העכבר וגובר על קרום Nuclepore פוליקרבונט. הקרום אז ריחף במדיום התרבות, ובכך שמירה על ממשק אוויר נוזלי על פני השטח של רקמת פיתוח 3,4. טכניקה זו נעשתה שימוש כדי assay התנהגות melanoblast ידי תיקון הרקמות והערכת הפצת melanoblast באמצעות β-galactosidase כסמן 7. פיתחנו שיטה המאפשרת melanoblasts כותרת חי הדמיה של fluorescently בvivo לשעבר תרבות עור 6. כאן אנו מתארים את השיטה בפירוט מנתיחה, להתקנה, לחיות confocal הדמיה וכוללים כמה שיפורים אחרונים.

Melanoblasts הם המבשרים העובריים של המלנוציטים, התאים המייצרים פיגמנט בשיער ועור. Melanoblasts להתעורר ברכס העצבי הסמוך לצינור העצבי סביב היום עוברי 9 (E9) בשעה בדואר עכבר הפיתוחmbryo. כתוצאה מכך הם נודדים לאורך מסלול dorsolateral בין האאקטודרם וsomites המתפתח. בE12.5 הם עוברים מהדרמיס לאפידרמיס שבו הם מתרבים וממשיכים ההגירה שלהם. דפוס זקיק השיער הראשוני מתחיל להיווצר באפידרמיס ובE14.5 ידי melanoblasts E15.5 הם לוקליזציה לזקיקים אלה. לסקירה של התפתחות melanoblast / מלנוציט לראות תומאס ואריקסון (2008) 1. כדי לתייג אוכלוסיית melanoblast יש לנו שילוב Tyr :: בעלי החיים CREB המבטאים Cre-recombinase מונעת על ידי האמרגן טירוסינאז העכבר 8 עם חיות R26YFPR המבטאות חלבון פלואורסצנטי צהוב (YFP) על תנאי מלוקוס ROSA26 9.

אנו מתארים שיטה לתמונות עור ולכידה עוברית תרבות באמצעות מיקרוסקופ confocal הפוך. הוא מותאם צורת השיטה המקורית שתוארה במורט et al. (2010) 6. העכשווישיטה מאפשרת הדמיה בפורמט 6 היטב ומסירה את ההסתמכות על ממברנות Nuclepore ועל matrigel לתמוך בתרבות. במקום באמצעות בלוק קטן של 1% agarose כדי לייצב את העור העוברי. הסרת ההסתמכות על matrigel חשוב במיוחד במצבים שבם התגובה של העור העוברי לגורמי גדילה מסיסים היא המוקד של מחקר. השיטה המקורית שלנו כבר הייתה בשימוש כדי להשיג תובנות חדשות פיתוח melanoblast 10-13 ואנו צופים כי השיפורים שאנו מתארים כאן יעשו את זה חזק יותר כטכניקה ניסויית במיוחד שבו תרבויות מקבילות מרובות הן דרישה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל העבודה בבעלי החיים בוצעה בהתאם להנחיות מוסדיות ברישיון על ידי המשרד בבריטניה הבית (מספר רישיון פרויקט PPL 60/3785 ו60/4424).

1. הכנה

  1. תווית melanoblasts בעור הפיתוח על ידי שילוב של שורה מתאימה Cre-recombinase להביע עכבר עם קו עכבר כתב ניאון. Tyr :: Crea, Tyr :: CREB 8 וWnt1 :: 14 Cre שימש בהצלחה כקווי Cre-לבטא ו 9 R26YFPR כקו כתב.
  2. הכן את מדיום התרבות בזרימה למינרית; להשלים הנשר בינוני השתנה Dulbecco (DMEM) עם (פניצילין 1% v v / / סטרפטומיצין), 10% v / v בסרום עוברי עגל ו.584 L-גלוטמין GM / L.
  3. מנגנון ההדמיה החיה מתואר באיור 1 לעקר את בסיס חדר הדמיה ידי ניגוב עם 70% אתנול. לעקר מוסיף, סרטוני הדמיה, וטבעות אטימות על ידי השרייה overnight ב70% אתנול. השתמש במכסה סטרילי מצלחת 6 גם את המכסה של התא.
  4. המשטח התחתון של חדר ההדמיה מורכב מקרום טמבל שנערך במקום על ידי O-טבעת (איור 1). התחל עם צלחת טמבלית 35 מ"מ גז חדיר. מניחים את הצלחת על פני חדר ההדמיה ולחתוך את הקרום החדיר הגז בסכין גילוח להב אחד. דחוף את טבעת O על הממברנה כדי לאבטח אותו לחדר ההדמיה.
  5. סרטוני ההדמיה (6 בסך הכל) מהדקים את העור העוברי במקום (איור 1) לפני השימוש הם חייבים להיות מלאים עם agarose 1%. הכן פתרון 2% agarose עם סטרילי DH 2 O על ידי במיקרוגל וקירור ל60 ° C. מיקס 01:01 עם 10 מדיום תרבות מיליליטר (ראה שלב 2) שחומם מראש ל 60 ° C. לעמוד סרטוני ההדמיה 6 בצלחת 6 היטב סטרילי. לטפטף 1% פתרון agarose למרכז של כל קליפ באמצעות pastette קנס ולאפשר לו להתקרר. הוסף 1 מיליליטר סטרילי PBS הקר היטב כל אחד כדי למנוע אתgarose מהתייבשות. סרטוני ההדמיה יכולים להיות מאוחסנים במשך מספר שעות ב-PBS.
  6. כדי לבצע את ההפרדה העדינה של עור עוברי ולטפל הרקמה גזור להשתמש "שיטת מקל שיער" כפי שמתוארת בKashiwagi et al. 3 במקום להשתמש במקל שיפוד קבאב במבוק יכול לשמש. הפוך חריץ קטן בקצה השטוח של השיפוד באמצעות סכין גילוח להב אחד ולהכניס את מברשת שיניים רכות זיפים. חתוך את השיפוד כך שזה כ 15 סנטימטר באורך.
  7. השתמש במיקרוסקופ confocal עם תא סביבתי מלא או שלב קאמרי עליון מתן 5% CO 2 באוויר. Prewarm הבמה מיקרוסקופ ל37 מעלות צלזיוס במשך שעה לפחות 1 לפני ההדמיה. זה עוזר למנוע סחף מדגם שנגרם על ידי התרחבות של רכיבי הבמה כפי שהם להתחמם.
  8. להכין סט רב עמדה באמצעות תוכנת השליטה של ​​מיקרוסקופ כדי שתהיינה אפשר למרכז במהירות ובקלות באמצע של כל תרבות להקים ניסיונילא.

2. נוהל

  1. Mate העכברים ולייעד את פוסט יום coitum הראשון כE0.5 יום. בE14.5 היום, לברור את הנקבה על ידי נקע בצוואר הרחם ולחשוף את חלל הגוף על ידי ביצוע חתך קו האמצע קטן, קרע לגזרים את העור לכיוון הראש והזנב ולאחר מכן חיתוך הצפק הבסיסי ומקלף חזרה לכל צד של הגוף. לנתח את הרחם לסטרילי PBS הקר על ידי מחזיק בחוזקה עם מלקחיים וגזרו לאורך mesometrium באמצעות מספריים כירורגיות. שמור הרחם על קרח עד נדרשת. לתיאור מפורט לראות שיאה et al. (2007) 15.
  2. לנתח עובר מן הרחם על ידי החיתוך הראשון אורכו של קיר הרחם עם מספריים כירורגיות כדי לשחרר את decidua ולאחר מכן לנתח את העוברים מdecidua ידי קרעת לגזרים אותם עם שני זוגות מלקחיים בסדר. מסך לביטוי כתב ניאון (במידת צורך).
  3. לברור עוברים על ידי עריפת ראש לפני לנתיחה. Subsequently להסיר את הזנב וגפיים אחורי ולאחר מכן forelimbs באמצעות סכין גילוח להב אחד. לשמור על רקמה לgenotyping אם נדרש.
  4. בצע חתך בventrum בסמוך לקו האמצע לכיוון rostro-הזנב. שימוש במקלות השיער המתואר בשלב 1.6, להקניט בזהירות את העור מרקמות חיבור הבסיסית מסתובבות העובר באותו הזמן. אל תסיר את העור לחלוטין, אלא להשאיר אותו מחובר יחד רחוק קצה הגחון מהחתך הראשון.
  5. זה חשוב לא לתת לעור להיות דפוק כאז זה מאוד קשה לעלות. כדי למנוע זאת, מיישר את העור באמצעות מקלות שיער (צד עור כלפי מעלה) על פני השטח של צלחת פטרי יבשה ולאחר מכן לחתוך משם מתא המטען העובר באמצעות סכין גילוח להב אחד. צד עורי ניתן להבחין מהצד באפידרמיס על ידי התבוננות זהירה של הצומת בין הרקמה גזור ואת העובר לפני העור הוסר. האזור של הרקמה גזור הואכ 0.5 מ"מ 2 כאשר לנתח עובר E14.5.
  6. הנח סרטון הדמיה על גבי העור כך שagarose נוגע בצד עורי של הרקמה. אפשר לעמוד ל60 שניות ולאחר מכן בזהירות להקניט את הקצוות של הרקמה עד הצדדים של קליפ. הפוך את הסרטון ולהשתמש בשיער מקלות כדי לשטח את העור ולהסיר את כל בועות אוויר, מקפיד לגעת במשטח של הרקמה (באזור שיהיה צילם) מעט ככל האפשר.
  7. השתמש בחוט תפר משי לקשור את העור לסרטון ההדמיה באמצעות שני קשרים אצבע פשוטים משני צדדיו של סרטון ההדמיה, כך שהם להדק ולמשוך את העור בחריץ קרוב לחלק העליון של הסרטון. הפוך את הסרטון, לדחוף פנימה את הכנס ההדמיה והמקום בבסיס. מלא להכניס את עם ~ 5 מיליליטר של מדיום התרבות (ראה שלב 1.2). איור 1 מתאר את ההרכבה של חדר ההדמיה.
  8. חזור על פרוטוקול ל5 דגימות שנותרו.

3. בשידור חיהדמיה

  1. יש חדר ההדמיה אותם הממדים כמו צלחת 6 היטב סטנדרטית. השתמש להוסיף צלחת מתאימה להר קאמרי על הבמה של מיקרוסקופ confocal.
  2. שלב אוטומטי נדרש לתמונת התרבויות במקביל. הגדר את שש עמדות לתמונה בתוכנת confocal. ההגדרות המדויקות יהיו תלויות ביכולת של מיקרוסקופ בשימוש. בדרך כלל Z-מחסנית קטנה (3-5 Z-עמדות לדין וחשבון על כל להיסחף במה) משמשת בכל אחד מ6 העמדות וZ-מחסנית הוא נתפס על כל 2 דקות ל18-24 שעה. עבור יישומים חי הדמיה זה בדרך כלל יתרון לשימוש רחב יותר מאשר הגדרת חריר אופטי אופטימלית לצמצום כוח הלייזר ומספר Z-החלקים הנדרשים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

איור 2 מציג תוצאות נציג מניסוי זמן לשגות באמצעות עור עוברי מTyr :: CREB x עוברי R26YFPR בE14.5. 6 תרבויות עור עובריים היו הדמיה ידי מיקרוסקופיה confocal כל 2 דקות ל18 שעה. ImageJ חבילת תוכנת ניתוח תמונת התוכנה החופשית היה בשימוש כדי לנתח את ההתנהגות של melanoblasts כותרת YFP בסרטים 6. Melanoblasts היו באופן אוטומטי מעקב באמצעות תוסף wrMTrck שפותח על ידי Jesper Søndergaard פדרסן (http://www.phage.dk/plugins/wrmtrck.html) תוצאות המעקב מוצגות באיור 2. סרטי 1-3 הוא נציג של הניסוי ו מתאימות ללוחות וג' הם מראים את האור מסור, YFP ונוף מרוכבים בהתאמה. אוכלוסיית melanoblast הנודדת היא יוצא דופן פעילה. תאים לנוע כמעט כל הזמן, ורק להשהות כאשר הם עומדים להתחלק על ידי mitosis. כמו כן ניתן לצפות בהתפתחות של דפוס זקיק השיער העיקרי על פני תקופת התרבות בערוץ האור המועבר (איורים 3A-3X וסרט 1).

איור 1
.. איור 1 ציוד והתקנה: בסיס חדר ההדמיה החי מורכב מדיור פרספקס ברור עם ממדים חיצוניים זהים למנת תרבות 6 באר. הוא מכיל שישה חורים שבו 6 מכלולי התא בודדים יכולים חריץ ב ':. להכניס כל אחד כולל 4 רכיבים; סרטון הדמיה, הוספת הדמיה, קרום טמבל, וטבעת O-. קליפ ולהכניס אותם lathed מפלסטיק אצטיל שחור, מצאנו את זה כדי לקבל את autofluorescence הנמוך ביותר של הפלסטיק שבדקנו. O-הטבעת עשויה PVCד משמש כדי לצבוט את הקרום הטמבל על החלק התחתון של להכניס את יצירת ממשק נוזל האוויר (עלי). סרטון ההדמיה (אצטיל השחור) יש כמה חורים כדי לאפשר זרימת של התרבות בינונית C:. הפיר של קליפ המרכזי מתמלא agarose 1% לפני השימוש כדי לספק משטח שטוח מוצק להר העור. העור מחובר לקליפ עם חוט תפר לפני נדחף לתוך להוסיף, הרבדה את העור בין agarose והקרום טמבל. להוסיף לאחר מכן מלא במדיום תרבות D:. כדי לנתח ולטפל בעור העוברי מברשת שיניים אחת זיפים הוא רכוב לתוך חריץ בקצה השטוח של שיפוד קבאב במבוק. זוג מקלות שיער יכול לשמש בשילוב עם מלקחיים בסדר לנתח עור עוברי ולעגן בחדר ההדמיה E:.. תצלומים של הרכיבים המפורטים בAC אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2. נציג תוצאות של 6 סרטים שהוקלטו במקביל. AF: מעקב אחר תוצאות מ6 סרטים שהוקלטו במקביל ללהדגים את היכולות של המערכת. כל סרט נרשם בנקודות זמן של 2 דקות עבור סכום כולל של 18 שעה (ראה סרטים 1-3 לסרט המקביל של פנלים ו-G). עמדותיהם של התאים במסגרת אחת של הסרט מוצגות ותוצאות המעקב הן על גבי עליון GL:. סיכום של תוצאות המעקב זמם כהתביית מעקב נתונים.

"/> D/51352/51352fig3.jpg
איור 3 נציג תמונות מהזמן לשגות סרטים של התפתחות זקיק שיער ושל מיטוזה melanoblast עובר AX:.. נבחרת, שנחתך מסגרות מהסרט 1 זקיקי שיער ראשיים להיות גלויים על פני התקופה של תרבות עור 0-18 שעה.. LUT היה מוחל על תמונות A'-X. ': נבחרים, שנחתך מהסרט 2 מסגרות נציג תמונות של melanoblasts הנודד באפידרמיס בפיתוח ובתא בודד (ראה חץ ב.' מיטוזה עוברת) (חץ בT ') . אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

סרט 1: תוצאת נציג של ערוץ האור מועבר מניסוי הזמן לשגות 18-HR. </ Strong> דפוס שיער הזקיק העיקרי, אם כי לא ברור בתחילת הסרט, הופך בולט יותר ככל שהתרבות מתקדמת.

סרט 2:. תוצאת נציג של ערוץ YFP מניסוי הזמן לשגות 18-HR אוכלוסיית melanoblast היא אוכלוסייה דינמית ונוהגת לנדוד. תאים נייחים נדירים בדרך כלל עוברים מיטוזה (ראו איור 3).

סרט 3:. תוצאת נציג של הערוץ המורכב מ ניסוי הזמן לשגות 18-HR אוכלוסיית melanoblast ניתן לראות להגר בתוך האפידרמיס בפיתוח ובאינטראקציה עם זקיקי שיער המתפתחים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

אנו מתארים שיטה לעור עוברי תרבות שהיא ייחוד נוח הדמיה לחיות תאים במיקרוסקופי confocal הפוכים. השיטה כוללת שיפורים אחרונים שמאפשרים 6 תרבויות להיות צילמו במקביל ומסירה את ההסתמכות על matrigel וקרומים Nuclepore של השיטה המקורית 6. ההבדל הטכני החיוני מטכניקות דומות הוא השימוש בקרום טמבל גז חדיר להקמת ממשק נוזל אוויר וגם לפעול כcoverslip. יש לנו נשמרו בהצלחה התרבויות עם ההדמיה confocal רציפה עד 48 שעה. ברזולוציה הגבוהה ואות מצוינת יחס רעש של תמונות confocal מאפשר מעקב תא אוטומטי כדי לנתח את התנהגות melanoblast בזמן לשגות סרטים וכתוצאה מכך.

באמצעות טכניקה זו ניתן לחקור את הדינמיקה של פיזור melanoblast ולחקור את האינטראקציה שלהם עם העור וזקיקי שיער המתפתח. St הקריטיEPS בפרוטוקול הוא לבצע נתיחה זהירה שלא לפגוע באפידרמיס הפיתוח ולעגן את צד עורי דגימות עור מפני agarose ללא פיתולים או מתיחות. ההליך המתואר במאמר זה עובד הכי טוב בין E13.5 וE15.5. לפני E13.5 העור הוא מאוד שביר ואחרי E15.5 זה הוא יחסית עבה וקשה לחדור ידי מיקרוסקופיה confocal. היכולות של מערכת מיקרוסקופ המשמשת הן גם מאוד חשובות. אנחנו בדרך כלל להשתמש במיקרוסקופ confocal ניקון A1R מצויד במערכת של ניקון הקניינית מושלמת פוקוס (PFS). שימוש PFS מקטין באופן משמעותי את מספר הסרטים גרועים שנגרמו על ידי סחיפת במה, מערכות דומות זמינות לפלטפורמות אחרות.

אחד חסרונות של שיטה זו הוא הדרישה לציוד תרבות מיוחדת. עם זאת העיצוב הוא פשוט וקאמרי, אפשר להרכיב בקלות על ידי כל סדנה טכנית קטנה. לסיכום אנו מציגים שיטה פשוטה שצריכה להיות בשימוש רחב לstudieים של פיתוח עור עוברי והתנהגות melanoblast. זה צפוי כי הטכניקה יכולה גם להיות שונה לתרחישים אחרים שבם ממשק אוויר נוזלי הוא דרישה לתרבות מוצלחת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

יש המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

העבודה נתמכה על ידי מימון ליבה מהמועצה למחקר הרפואי. אנו מודים לקרייג ניקול להכנת שרטוטים טכניים. אנו מודים למתיו פירסון ופול פרי על תמיכת ההדמיה שלהם.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM high glucose Biochrom AG F0475 without phenol red
Penicillin Sigma P3032
Streptomycin Sigma S9137
Fetal calf serum Hyclone SV30160.03
Glutamax Gibco 35050-038
Ethanol Generic
Live imaging chamber Custom made
Lummox dishes Sarstedt 94.6077.410
6-well plate Greiner Bio-One 657-160
Single edged razor blade Fisher Scientific 1244-3170
Agarose Biogene 300-300
Fine pastette Generic
PBS Generic
Kebab skewers Waitrose Bamboo BBQ skewers 30 cm
Toothbrush Generic
Petri dishes Greiner Bio-One 633185
Suture thread Look SP115 Black silk suture thread

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Thomas, A. J., Erickson, C. A. The making of a melanocyte: the specification of melanoblasts from the neural crest. Pigment Cell & Melanoma Research. 21 (6), 598-610 (2008).
  2. Mayer, T. C. The migratory pathway of neural crest cells into the skin of mouse embryos. Developmental Biology. 34 (1), 39-46 (1973).
  3. Kashiwagi, M., Huh, N. Organ Culture of Developing Mouse Skin and Its Application for Molecular Mechanistic Studies of Morphogenesis. Epidermal Cells: Methods and Protocols. Turksen, K. 289, Humana Press. 39-45 (2005).
  4. Kashiwagi, M., Kuroki, T., Huh, N. Specific inhibition of hair follicle formation by epidermal growth factor in an organ culture of developing mouse skin. Developmental Biology. 189 (1), 22-32 (1997).
  5. Van Der Wel, L. I., Wei, L., Prens, E. P., Laman, J. D., Companjen, A. R. A modified ex vivo skin organ culture system for functional studies. Archives of Dermatological Research. 293 (4), 184-190 (2001).
  6. Mort, R. L., Hay, L., Jackson, I. J. Ex vivo live imaging of melanoblast migration in embryonic mouse skin. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (2), 299-301 (2010).
  7. Jordan, S. A. A., Jackson, I. J. J. MGF (KIT ligand) is a chemokinetic factor for melanoblast migration into hair follicles. Developmental Biology. 225 (2), 424-436 (2000).
  8. Delmas, V., Martinozzi, S., Bourgeois, Y., Holzenberger, M., Larue, L. Cre-mediated recombination in the skin melanocyte lineage. Genesis. 36 (2), 73-80 (2003).
  9. Srinivas, S., et al. Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus. BMC Developmental Biology. 1 (1), (2001).
  10. Li, A., et al. Rac1 Drives Melanoblast Organization during Mouse Development by Orchestrating Pseudopod. Driven Motility and Cell-Cycle Progression. Developmental Cell. 21 (4), 722-734 (2011).
  11. Li, A., et al. Activated Mutant NRas(Q61K) Drives Aberrant Melanocyte Signaling, Survival, and Invasiveness via a Rac1-Dependent Mechanism. The Journal of Investigative Dermatology. , 1-12 (2012).
  12. Schachtner, H., et al. Tissue inducible Lifeact expression allows visualization of actin dynamics in vivo and ex vivo. European Journal of Cell Biology. 91 (11-12), 923-929 (2012).
  13. Ma, Y., et al. Fascin 1 is transiently expressed in mouse melanoblasts during development and promotes migration and proliferation. Development. 140 (10), Cambridge, England. 2203-2211 (2013).
  14. Danielian, P. S., Muccino, D., Rowitch, D. H., Michael, S. K., McMahon, A. P. Modification of gene activity in mouse embryos in utero by a tamoxifen-inducible form of Cre recombinase. Current Biology. 8 (24), 1323-1326 (1998).
  15. Shea, K., Geijsen, N. Dissection of 6.5 dpc mouse embryos. Journal of Visualized Experiments. (2), (2007).

Tags

ביולוגיה התפתחותית, עכבר melanoblast עור מיקרוסקופיה confocal ממשק אוויר נוזלי גיליון 87
<em>אקס תרבות Vivo</em> של עור העכבר עוברי וLive-הדמיה של הגירת Melanoblast
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mort, R. L., Keighren, M., Hay, L.,More

Mort, R. L., Keighren, M., Hay, L., Jackson, I. J. Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration. J. Vis. Exp. (87), e51352, doi:10.3791/51352 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter