Summary
Biz fare embriyonik deri diseksiyonu ve ex vivo kültürünü açıklamak. Kültür sistemi doku yüzeyi boyunca bir hava-sıvı arayüz korur ve bir ters mikroskop görüntüleme sağlar. Melanoblastlardan, gelişmekte olan derinin bir bileşeni olarak, flüoresan olarak davranışları konfokal mikroskopi kullanılarak gözlemlenebilir izin etiketlenir.
Abstract
Melanoblastlardan melanosit öncülerini türetilmiş nöral crest; cilt ve saç pigmenti üretmekten sorumlu hücreler. Melanoblastlardan bunlar daha sonra gelişmekte olan saç köklerinin 1,2 kolonize embriyonun epidermis içinden yer değiştirmektedir. Nöral krest hücre göçü yoğun in vitro çalışılmıştır ancak in vivo yöntemlere yine de özellikle memeli sistemlerinde, gelişmiş değildir. Bir alternatif ex vivo organotipik kültürü 3-6 kullanmaktır. Fare embriyonik deri Kültür 3,6 doku yüzeyi boyunca bir hava-sıvı arayüzü (ALI) içinde bakım gerektirir. Fare embriyonik deri yüksek çözünürlüklü canlı görüntüleme Bu ALI korur ama aynı zamanda kültür ters ve kısa çalışma mesafesi objektif lens ve en konfokal mikroskoplar ile bu nedenle uyumlu sağlar değil, sadece iyi bir yöntem olmaması engel olmuştur. Bu makalede, bir meth son gelişmeleri anlatırod ki, bu sorunların üstesinden gelmek ve ex vivo kültür 6 embriyonik deri yüksek çözünürlüklü confocal görüntüleme sağlamak için gaz geçirgen bir zar kullanılır. Belirli bir melanoblast Kre-rekombinaz, R26YFPR raportör hattı ile birleştirilmiş fare hattı sentezleyen kullanarak biz flüoresan bu cilt kültürleri içinde melanoblast nüfus etiket edebiliyoruz. Teknik sağlar Melanoblastlardan ve onların davranış ve geliştirmek hangi doku ile etkileşimleri gözlem canlı görüntüleme. Temsilcisi sonuçları yeteneği canlı görüntü paralel olarak 6 kültürleri göstermek için dahil edilmiştir.
Introduction
Geleneksel olarak embriyonik cilt fare embriyo kesme ve bir polikarbonat Nuclepore zar üzerinde monte edilmesi ile kültive edilmiştir. Zar sonra bu şekilde gelişen doku 3,4 yüzeyine karşı bir hava-sıvı arayüz muhafaza, kültür ortamı üzerinde perdahlanır. Bu teknik, sabitleme ve doku bir işaretleyici 7 olarak β-galaktosidaz kullanan melanoblast dağıtım değerlendirerek melanoblast davranışı analiz etmek için kullanılmıştır. Ex vivo deri kültürü 6 canlı görüntüleme bölgesinin floresanla işaretlenmiş Melanoblastlardan izin veren bir yöntem geliştirdik. Burada konfokal görüntüleme yaşamak için, kurulum, diseksiyonu ayrıntılı yöntemini açıklamak ve bazı yeni geliştirmeler içerir.
Melanoblastlardan melanosit embriyonik öncüleri, saç ve deri pigment üreten hücrelerdir. Melanoblastlardan gelişmekte olan fare e embriyonik gün 9 (E9) civarında nöral tüp bitişik olarak ortaya çıkan nöralmbryo. Daha sonra bunlar ektoderm ve gelişen Somitlerin arasında bir Dorsolateral yol boyunca göç ederler. E12.5 onlar çoğalırlar ve onların göç devam epidermis dermis taşımak. Birincil saç folikülü model bu köklerinin lokalize olan E14.5 de epidermis ve E15.5 Melanoblastlardan ile oluşmaya başlar. Melanoblast / melanosit gelişme gözden Thomas ve Erickson (2008) 1 bkz. Melanoblast nüfusu etiketlemek için biz Tyr kombine :: şartlı ROSA26 mahaline 9 sarı floresan protein (YFP) ifade R26YFPR hayvan fare tyrosinase promoter 8 ile tahrik Kre-recombinase ifade CREB'ye hayvanlar.
Biz ters bir konfokal mikroskop kullanılarak kültür embriyonik deri ve yakalama görüntüleri bir yöntem açıklanmaktadır. Bu Mort et al, orijinal bir yöntem. (2010) 6 bir şekilde uyarlanmıştır. Şimdikiyöntem, 6-çukurlu formatta görüntüleme sağlar ve kültür desteklemek için, Nüklepor dokularından ve Matrigel üzerinde güven kaldırır. Bunun yerine embriyonik cildi dengelemek için% 1 agaroz küçük bir blok kullanarak. Matrigel üzerinde güven çıkarılması özellikle çözünür büyüme faktörlerine embriyonik derinin cevap çalışmasında odağı olduğu durumlarda önemlidir. Bizim orijinal yöntem zaten melanoblast gelişme 10-13 içine yeni anlayışlar kazanmak için kullanılır olmuştur ve biz burada açıklamak gelişmeler çoklu paralel kültürler bir gereklilik özellikle deneysel bir teknik olarak daha güçlü olmasını bekliyoruz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm hayvan çalışmaları İngiltere Home Office (proje lisans numarası PPL 60/3785 ve 60/4424) tarafından lisans altında kurumsal kurallarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1.. Hazırlık
- Bir flüoresan raportör fare hattı ile, uygun bir Cre rekombinaz-sentezleyen fare hattını birleştirerek gelişmekte olan deride Melanoblastlardan etiketleyin. Tyr :: CREA, Tyr :: CREB 8 ve Wnt1 :: Cre 14 Cre-ifade eden çizgiler olarak başarılı bir şekilde kullanılmıştır ve olmuştur R26YFPR 9 bir haberci bir çizgi olarak.
- Bir laminar akış başlığı içinde kültür ortamının hazırlanması; (% 1 v / v Penisilin / Streptomisin) ihtiva eden Dulbecco'nun Modifiye edilmiş Eagle ortamında (DMEM) takviyesi,% 10 v / v cenin dana serumu ve 0.584 g / L L-glutamin.
- Canlı görüntüleme cihazı% 70 etanol ile silerek görüntüleme odasının tabanı sterilize Şekil 1'de özetlenmiştir. Ov iliklerine ekler, görüntüleme klipleri ve O-halkaları sterilize% 70 etanol içinde ernight. Haznenin kapak gibi bir 6-yuvalı plaka steril bir kapak kullanın.
- Görüntüleme odasının alt yüzeyi, bir O-halkası (Şekil 1) tarafından yerinde tutulan bir lummox zar oluşur. 35 mm gaz geçirgen lummox çanak ile başlayın. Görüntüleme odasının üzerine çanak yerleştirin ve tek kenarlı jilet ile gaz geçirgen membran kesip. Görüntüleme odasına sabitlemek için zar üzerinde O-halkasını itin.
- Görüntüleme klipler (toplam 6) yerine embriyonik cildi kullanımdan önce onlar% 1 agaroz ile dolu olmalıdır (Şekil 1) kelepçe. C mikrodalga ve 60 ° 'ye soğutarak steril dH 2 O ile agaroz bir% 2 solüsyonu hazırlayın 10 ml kültür ortamı ile karıştırın 01:01 (adım 2 ye bakınız), 60 ° C'ye kadar ısıtılır Steril 6-çukurlu plaka içindeki 6 görüntü klipleri durun. Ince pastette kullanarak her klibin merkezi haline% 1 agaroz çözeltisi damla ve soğumasını bekleyin. A önlemek için, her bir kuyucuğa 1 ml soğuk PBS steril eklemekurumasını garose. Görüntüleme klipler PBS içinde birkaç saat saklanabilir.
- Embriyonik cildin hassas ayrılmasını gerçekleştirmek için, ve bunun yerine bir bambu şiş kebap kullanılabilecek bir çubuk kullanarak Kashiwagi et al. 3'te tarif edildiği gibi kesilir doku 'saç çubuk yöntemi' kullanımlar için. Tek kenarlı jilet kullanarak şiş düz ucunda küçük bir yarık yapın ve kıl yumuşak bir diş fırçası yerleştirin. Bu uzunluk olarak yaklaşık 15 cm olacak şekilde şiş kesin.
- Tam çevre odası ile konfokal mikroskop kullanarak ya da hava içinde% 5 CO2 odası sağlayan iyi düzenlerler. Önce görüntüleme için en az 1 saat boyunca 37 ° C'ye kadar mikroskop sahne Prewarm. Bu da ısınmak gibi sahne bileşenlerin genişlemesi nedeniyle numune sapmalarını önlemek için yardımcı olur.
- Bir hızlı ve kolay bir experimen kurmak için her kültürün ortasında ortalamak böylece mikroskop kontrol yazılımı kullanarak bir çok pozisyon dizi hazırlamakt.
2. Prosedürü
- Fareler Mate ve gün E0.5 olarak ilk gün sonrası coitum adayı. E14.5 gün olarak, servikal dislokasyon ile itlaf kadın ve küçük bir orta hat kesi baş ve kuyruk doğru cildi ayrı çekme ve daha sonra, temel periton kesme ve geri vücudun her iki tarafına Pealing ile vücut boşluğu maruz kalmaktadır. Forseps ile sıkıca tutarak ve cerrahi makas kullanarak mesometrium boyunca kırpma soğuk steril PBS içine rahim teşrih. Gerekli kadar buz üzerinde rahim tutun. Ayrıntılı bir açıklama için Shea ve diğ. (2007) 15, bkz.
- İlk ince forseps iki çift ile onları ayrı çekerek desiduadan serbest bırakmak için cerrahi makas ile rahim duvarının uzunluğu kesme ve sonra decidua gelen embriyoların diseksiyon tarafından rahim embriyolar incelemek. Flüoresan raportör ekspresyonu (gerekirse) için ekran.
- Diseksiyon önce başı kesilerek embriyolar itlaf. Subsequently kuyruk kaldırmak ve tek kenarlı jilet kullanarak bacaklarda ve sonra ön ayakları hind. Gerekirse genotiplendirebilmek doku saklayın.
- Bir rostro-kaudal yönde orta hatta yakın Ventrum bir kesi yapmak. Adım 1.6 'de tarif edilen saç çubukları kullanılarak, dikkatli bir şekilde, aynı zamanda embriyo dönen bağ dokusu cildi uzak alay. Tamamen deri kaldırmak değil, ilk kesi ventral kenar uzak boyunca takılı bırakmayın.
- O daha sonra monte etmek çok zor olduğu hale cilt berbat izin vermemek önemlidir. Bunu önlemek kuru bir Petri kabı yüzeyinde saç yapışır (dermal tarafı) kullanılarak Cildi düzleştirmek ve sonra tek bir keskin jilet kullanarak uzak embriyo gövdeden kesmek için. Cilt kaldırılır önce dermal tarafı kesilmiş doku ve embriyo arasındaki birleşme dikkatli bir gözlem ile epidermal taraftan ayırt edilebilir. Disseke doku alanıYaklaşık 0.5 mm 2 bir E14.5 embriyo diseksiyon zaman.
- Agaroz dokusunun dermal tarafında dokunmadan böylece deri üstüne bir görüntü klibi yerleştirin. Klibin kenarlarına kadar doku kenarlarını dikkatli bir şekilde alay daha sonra 60 saniye boyunca bekletilmesine izin verin. Klibi ters çevirin ve saç cildi düzleştirmek ve mümkün olduğunca az (görüntülü olacak alanında) doku yüzeyine dokunmamaya özen, herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarmak için yapışır kullanın.
- Bu sıkın böylece görüntüleme klipin iki tarafında iki basit bir başparmak knot kullanarak görüntüleme klipsine cilt bağlamak ve klipin üst yakın oluk içine deri çekmek için ipek dikiş ipliği kullanın. Klibi haricindekileri, görüntüleme ekleme ve tabanı yere içeride itin. (Adım 1.2) kültür ortamının ~ 5 ml inserti doldurun. Şekil 1, bu görüntüleme odasının düzeneğini açıklar.
- Kalan 5 örnekleri için Protokolü tekrarlayın.
3. CanlıGörüntüleme
- Görüntüleme odası standart 6-çukurlu plaka ile aynı boyutlara sahiptir. Konfokal mikroskop sahnede odasına monte etmek için uygun bir plaka takmak kullanacak.
- Otomatik bir aşamasında paralel olarak görüntü kültürleri için gereklidir. Konfokal yazılım görüntüye altı konumlarını tanımlayın. Kesin ayarları kullanılan mikroskop yeteneğine bağlıdır. Tipik olarak, küçük bir z-yığın (3-5 z-konumu herhangi bir aşamada sürüklenme hesaba) 6-konumlarının her birinde kullanılan ve bir z-yığın 18-24 saat boyunca her 2 dakikada bir yakalanır. Canlı görüntüleme uygulamaları için bu lazer gücü ve gerekli z-bölümlerin sayısını azaltmak için optik olarak uygun bir ayar iğne deliği daha geniş bir kullanımı avantajlıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 2 Tyr'den embriyonik cilt kullanarak bir zaman atlamalı deney temsilcisi sonuçlarını gösterir :: CREB'ye E14.5 de R26YFPR embriyolar x. 6 embriyonik cilt kültürleri 18 saat boyunca her 2 dakikada eş odaklı mikroskopi ile görüntülenmiştir. Ücretsiz görüntü analizi yazılımı paketi İmageJ 6 filmlerde YFP etiketli Melanoblastlardan davranışını analiz etmek için kullanıldı. Melanoblastlardan otomatik olarak (Jesper Søndergaard Pedersen tarafından geliştirilen wrMTrck eklentisi kullanarak takip edildi http://www.phage.dk/plugins/wrmtrck.html 1-3 deneyini gösterir. Filmler) izleme Sonuçlar Şekil 2'de gösterilir ve paneller A'ya karşılık gelir ve G. Bunlar sırasıyla İletilen ışık YFP ve kompozit görünüşlerini göstermektedir. Göç melanoblast nüfus olağanüstü aktiftir. Hücreler neredeyse sürekli hareket ve onlar mi bölmek üzereyken sadece duraklatmakapoptosisi. Bu, iletilen ışık kanalı (Şekil 3A-3X ve Film 1) kültür süresi boyunca birincil saç folikülü desen gelişimini izlemek de mümkündür.
.. Şekil 1 Ekipman ve kurulumu A: canlı görüntüleme odası baz, 6 oyuklu kültür tabağına aynı dış boyuta sahip açık bir perspeks bir muhafazadan oluşmaktadır. . Bu 6 ayrı odası takımları yuvası hangi altı delik B içerir: Her insert 4 bileşenden oluşmaktadır; Bir görüntüleme clip, bir görüntüleme insert, bir lummox zar ve bir O-ring. Klip ve insert siyah asetil plastikten lathed vardır, biz bu test plastiklerin düşük otoflüoresanı bulunmuştur. O-ring PVC An yapılırd hava sıvı arayüzü (ALI) oluşturan ucun alt üzerine lummox membran sıkıştırmak için kullanılır. Görüntüleme klipsi (siyah asetil) izin vermek için çok sayıda delik bulunur kültür ortamı sirkülasyon C:. Klibin Merkezi şaft cildi monte etmek için sağlam bir şekilde düz bir yüzey sağlamak için kullanılmadan önce% 1 agaroz ile doldurulur. Cilt agaroz ve lummox membran arasındaki sandviç deri, içine doğru itilmiş önce dikiş ipliği ile klipin tutturulur. Insert, daha sonra kültür ortamı ile doldurulur D:. Bir tek diş fırçası, bir bambu kebap şiş düz sonunda bir yarık içine monte edilmiş kıl embriyonik cildi incelemek ve işlemek için. Saç çubuk bir çift embriyonik deri incelemek ve görüntüleme odası içinde monte etmek için ince forseps ile bir arada kullanılabilir E:.. AC ayrıntılı bileşenlerin Fotoğraf tıklayın Burada bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için.
Şekil 2,. Paralel kaydedilmiştir 6 filmlerin Örnek sonuçlanır. AF: sisteminin yeteneklerini göstermek için paralel olarak kaydedilen 6 filmlerden Takip sonuçları. Her bir film (karşılık gelen paneller A ve G için film Filmler 1-3) 18 saatlik bir toplam 2 dakikalık zaman noktalarında kaydedildi. Filmin bir çerçeve içindeki hücrelerin pozisyonları gösterilir ve izleme sonuçları üzerinde üst üste GL:. Veri izleme sıfırlanmış olarak izleme sonuçlarının özeti çizilmiştir.
d/51352/51352fig3.jpg "/>
Şekil 3 AX saç folikül gelişimi ve bir melanoblast geçiren mitoz zaman atlamalı filmleri Temsilcisi görüntüler:.. Seçilmiş, Movie 1 kareleri kırpılmış İlköğretim saç köklerinin 0-18 saat cilt kültürünün dönemde görünür hale gelir.. Bir LUT görüntülere uygulanan A'-X. ': Seçilmiş, Movie 2 kareleri kırpılmış gelişmekte epidermis ve tek bir hücre içinde göç Melanoblastlardan Temsilcisi görüntüleri (A ok bakın.' ('T ok) geçiren mitoz) . , bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.
Film 1: 18-saat time-lapse deneyde iletilen ışık kanalın Temsilcisi sonucu. <Kültür ilerledikçe, filmin başlangıcında belirgin değildir daha belirgin hale gelir, ancak, birincil saç folikülü model> / strong.
Movie 2: . bir 18 saat time-lapse deneyde YFP kanalın Temsilcisi sonucu melanoblast nüfus son derece dinamik ve göçmen nüfusu. Nadir sabit hücreler genellikle (bkz. Şekil 3) mitoz geçiriyor.
Film 3: . bir 18 saat time-lapse deneyde bileşik kanalın Temsilcisi sonucu melanoblast nüfus gelişmekte epidermis içinde göç ve gelişen saç folikülleri ile etkileşim görülebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Biz ters konfokal mikroskoplar üzerinde canlı hücre görüntüleme müsait özellıgıdır kültür embriyonik cilt için bir yöntem açıklanmaktadır. Yöntemi 6 kültürler paralel olarak görüntülü ve matrigel ve orijinal yönteme 6 Nüklepor zarlar üzerindeki güveni ortadan kaldırır izin son iyileştirmeler içerir. Benzer tekniklerinden önemli teknik bir fark, bir hava arayüzü sıvı kurmak için ve aynı zamanda bir lamel olarak hareket için bir gaz-geçirgen zarın lummox kullanılmasıdır. Biz başarıyla kadar 48 saat boyunca sürekli konfokal görüntüleme ile kültürleri korumuştur. Konfokal görüntülerin gürültü oranı yüksek çözünürlüklü ve mükemmel sinyal otomatik hücre izleme çıkan time-lapse film melanoblast davranışlarını analiz etmeyi sağlar.
Bu tekniği kullanarak bu melanoblast dağılma dinamiklerini araştırmak ve epidermis ve gelişen saç folikülleri ile etkileşimlerini incelemek mümkündür. Kritik stprotokolünde eps gelişmekte epidermise zarar vermez ve bükülme veya gerilmeler olmadan agaroz karşı deri örnekleri dermal tarafı monte etmek dikkatli bir diseksiyon yürütmek için vardır. Bu yazıda anlatılan prosedür E13.5 ve E15.5 arasında iyi çalışır. E13.5 önce cilt çok hassastır ve E15.5 sonra konfokal mikroskobu ile nüfuz nispeten kalın ve sert olduğunu. Kullanılan mikroskop sistemi yetenekleri de çok önemlidir. Biz genellikle Nikon'un özel mükemmel odaklama sistemi (PFS) ile donatılmış bir Nikon A1R konfokal mikroskop kullanın. PFS'yi kullanarak büyük ölçüde sahne sürüklenme nedeniyle oluşan kötü film sayısını azaltan, benzer sistemler diğer platformlar için kullanılabilir.
Bu tekniğin bir dezavantajı özel kültür ekipman için gerekliliktir. Ancak tasarım basit ve bölme kolayca herhangi küçük bir teknik servis tarafından monte edilebilir. Özetle biz Studie için geniş kullanım olmalıdır basit bir yöntem mevcutembriyonik gelişme ve deri melanoblast davranış s. Bu teknik aynı zamanda, bir hava-sıvı arayüz başarılı kültürü için bir gerekliliktir diğer senaryolar için modifiye edilebilir olduğu tahmin edilmektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Iş Tıbbi Araştırma Konseyi çekirdek fon tarafından desteklenmiştir. Biz teknik çizimlerini hazırlamak için Craig Nicol minnettarız. Biz onların görüntüleme desteği için Matthew Pearson ve Paul Perry minnettarız.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM high glucose | Biochrom AG | F0475 | without phenol red |
| Penicillin | Sigma | P3032 | |
| Streptomycin | Sigma | S9137 | |
| Fetal calf serum | Hyclone | SV30160.03 | |
| Glutamax | Gibco | 35050-038 | |
| Ethanol | Generic | ||
| Live imaging chamber | Custom made | ||
| Lummox dishes | Sarstedt | 94.6077.410 | |
| 6-well plate | Greiner Bio-One | 657-160 | |
| Single edged razor blade | Fisher Scientific | 1244-3170 | |
| Agarose | Biogene | 300-300 | |
| Fine pastette | Generic | ||
| PBS | Generic | ||
| Kebab skewers | Waitrose | Bamboo BBQ skewers 30 cm | |
| Toothbrush | Generic | ||
| Petri dishes | Greiner Bio-One | 633185 | |
| Suture thread | Look | SP115 | Black silk suture thread |
References
- Thomas, A. J., Erickson, C. A. The making of a melanocyte: the specification of melanoblasts from the neural crest. Pigment Cell & Melanoma Research. 21 (6), 598-610 (2008).
- Mayer, T. C. The migratory pathway of neural crest cells into the skin of mouse embryos. Developmental Biology. 34 (1), 39-46 (1973).
- Kashiwagi, M., Huh, N. Organ Culture of Developing Mouse Skin and Its Application for Molecular Mechanistic Studies of Morphogenesis. Epidermal Cells: Methods and Protocols. Turksen, K. 289, Humana Press. 39-45 (2005).
- Kashiwagi, M., Kuroki, T., Huh, N. Specific inhibition of hair follicle formation by epidermal growth factor in an organ culture of developing mouse skin. Developmental Biology. 189 (1), 22-32 (1997).
- Van Der Wel, L. I., Wei, L., Prens, E. P., Laman, J. D., Companjen, A. R. A modified ex vivo skin organ culture system for functional studies. Archives of Dermatological Research. 293 (4), 184-190 (2001).
- Mort, R. L., Hay, L., Jackson, I. J. Ex vivo live imaging of melanoblast migration in embryonic mouse skin. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (2), 299-301 (2010).
- Jordan, S. A. A., Jackson, I. J. J. MGF (KIT ligand) is a chemokinetic factor for melanoblast migration into hair follicles. Developmental Biology. 225 (2), 424-436 (2000).
- Delmas, V., Martinozzi, S., Bourgeois, Y., Holzenberger, M., Larue, L. Cre-mediated recombination in the skin melanocyte lineage. Genesis. 36 (2), 73-80 (2003).
- Srinivas, S., et al. Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus. BMC Developmental Biology. 1 (1), (2001).
- Li, A., et al. Rac1 Drives Melanoblast Organization during Mouse Development by Orchestrating Pseudopod. Driven Motility and Cell-Cycle Progression. Developmental Cell. 21 (4), 722-734 (2011).
- Li, A., et al. Activated Mutant NRas(Q61K) Drives Aberrant Melanocyte Signaling, Survival, and Invasiveness via a Rac1-Dependent Mechanism. The Journal of Investigative Dermatology. , 1-12 (2012).
- Schachtner, H., et al. Tissue inducible Lifeact expression allows visualization of actin dynamics in vivo and ex vivo. European Journal of Cell Biology. 91 (11-12), 923-929 (2012).
- Ma, Y., et al. Fascin 1 is transiently expressed in mouse melanoblasts during development and promotes migration and proliferation. Development. 140 (10), Cambridge, England. 2203-2211 (2013).
- Danielian, P. S., Muccino, D., Rowitch, D. H., Michael, S. K., McMahon, A. P. Modification of gene activity in mouse embryos in utero by a tamoxifen-inducible form of Cre recombinase. Current Biology. 8 (24), 1323-1326 (1998).
- Shea, K., Geijsen, N. Dissection of 6.5 dpc mouse embryos. Journal of Visualized Experiments. (2), (2007).
