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Bioengineering

चूहा में हृदय गति रुकने के लिए सेल आधारित चिकित्सा: रोधगलन के लिए डबल thoracotomy और प्रकोष्ठों और Biomatrix की epicardial आरोपण

Published: September 22, 2014 doi: 10.3791/51390

Summary

एक कृंतक मॉडल में लाड बंधाव द्वारा प्रेरित रोधगलन के इलाज के लिए एक biograft का आरोपण पारंपरिक दो खुले दिल की सर्जरी की आवश्यकता है. मृत्यु दर को कम करने और कोशिकाओं के साथ जुड़े ठोस और पतला biomatrices के निर्धारण के लिए इष्टतम स्थिति प्रदान करने के लिए, कम आक्रामक प्रक्रियाओं को विकसित किया गया है.

Abstract

कार्डिएक सेल थेरेपी की कोशिकाओं के साथ जुड़े biomaterials के हित और आरोपण में वृद्धि हासिल की है मायोकार्डियल सेल वितरण का अनुकूलन करने के लिए एक प्रमुख मुद्दा बन गया है. रोधगलन के कृंतक मॉडल (एमआई) धमनी (लाड) बंधाव सामान्यतः एक thoracotomy के माध्यम से प्रदर्शन किया गया उतरते वाम पूर्वकाल से मिलकर; एक sternotomy के माध्यम से एक दूसरे ओपन हार्ट सर्जरी परंपरागत उपचार के एपिकार्डियल आवेदन के लिए प्रदर्शन किया गया है. लाड बंधाव मॉडल का वर्णन के बाद से, के बाद सर्जरी मृत्यु दर हालांकि दूसरी सर्जरी महत्वपूर्ण बनी हुई है, 35-13% से गिरा दिया गया है. दर्द और संक्रमण के बाद सर्जरी वसूली में सुधार लाने और कम करने के लिए, कम आक्रामक सर्जिकल प्रक्रियाओं प्रस्तुत कर रहे हैं. दो thoracotomies, बालक बंधाव के लिए प्रारंभिक एक और उपचार एपिकार्डियल प्रशासन के लिए एक दूसरे प्रदर्शन किया गया. ठोस या जेल प्रकार matrices के साथ जुड़े कोशिकाओं से मिलकर Biografts infarcted की गिरफ्तारी पर लागू किया गयाईए. 2 और 6 सप्ताह के बाद किया इकोकार्डियोग्राफी द्वारा की पुष्टि के रूप में लाड बंधाव दिल समारोह के नुकसान के परिणामस्वरूप. Goldner दिल वर्गों पर प्रदर्शन trichrome धुंधला transmural निशान गठन की पुष्टि की. पहली और दूसरी सर्जरी कम है कि 10% पोस्ट ऑपरेटिव मृत्यु दर में हुई.

Introduction

19 वीं सदी के अंत के बाद से, हृदय रोग औद्योगिक देशों में नंबर एक सीरियल किलर बनी हुई है. उनमें से, कोरोनरी धमनी की बीमारी के मुख्य एटियलजि का प्रतिनिधित्व करता है. रोधगलन (एमआई) और में तीव्र चरण के परिणाम की उत्तरोत्तर एक जीर्ण अवस्था और गंभीर दिल की विफलता की ओर विकसित करता है कि maladaptive remodeling द्वारा पीछा किया जाता है. हाल ही में महत्वपूर्ण तकनीकी और चिकित्सीय प्रगति के बावजूद, कारण दिल की विफलता की प्रगति के लिए रुग्णता और मृत्यु दर अभी भी 1 से बढ़ रहा है. इस संदर्भ में, सेल थेरेपी दिल विफलता की ओर रोग की प्रगति को रोकने के लिए और मायोकार्डियम की हाल ही में पहचान पुनर्योजी क्षमता को प्रोत्साहित करने के लिए एक नई चिकित्सकीय विकल्प के रूप में बढ़ती रुचि का फायदा हुआ है. प्रायोगिक और नैदानिक ​​जांच के विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के हृदय प्रत्यारोपण के बाद प्राप्त लाभकारी प्रभाव की सम्मोहक सबूत उपलब्ध कराई है. मेजर परिणामों में सुधार cardi शामिलएसी सिकुड़ा समारोह, बाएं निलय remodeling कमी आई रोधगलितांश आकार को कम कर, और infarcted क्षेत्र में संवहनी घनत्व में वृद्धि हुई. हालांकि, सेल इंजेक्शन के बाद कम सेल नंबर प्रतिधारण एक महत्वपूर्ण दोष बने रहे. सेल वितरण 2 का सुधार करने के लिए एक biomatrix साथ कोशिकाओं की एसोसिएशन ने हाल ही में शोधकर्ता और नैदानिक ​​हितों को बढ़ावा दिया है.

कोरोनरी धमनी (लाड) उतरते बाईं पूर्वकाल के ligation transmural रोधगलन और एक परिपक्व निशान में यह परिणाम है कि छोटे पशु मॉडल में एमआई के लिए एक संदर्भ विधि है. एमआई की जीर्ण अवस्था में लागू सेल थेरेपी एक दूसरे शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप की आवश्यकता है. एक औसत sternotomy आमतौर पर कोशिकाओं या biografts की एपिकार्डियल आरोपण के intramyocardial इंजेक्शन अनुमति देने के लिए किया जाता है. इस तरह की आक्रामक सर्जिकल प्रक्रियाओं मृत्यु दर, के बाद सर्जरी वसूली समय, दर्द, और संक्रमण के खतरे को बढ़ा. यहाँ प्रस्तुत न्यूनतम इनवेसिव दृष्टिकोण न केवल इस तरह के पूर्वाग्रह से बचाता है, लेकिन यह भी ओ प्रदान करता हैउपचार आवेदन के लिए दिल की ptimal अभिगम्यता. एमआई और एक जेल प्रकार biomatrix के साथ जुड़े कोशिकाओं की एपिकार्डियल आरोपण छोड़ दिया पसलियों के बीच thoracotomies के माध्यम से एक दिल की धड़कन पर प्रदर्शन कर रहे हैं.

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Protocol

नोट: लुईस नर और मादा चूहों, 200-220 ग्राम मानक प्रयोगशाला परिस्थितियों (12 घंटा रोशनी और अंधेरे चक्र, यथेच्छ पानी और भोजन, IVC पिंजरे) के तहत रखे गए थे. सभी जानवरों पशु संरक्षण पर FELASA और स्विस कानून की सिफारिशों के अनुपालन में इलाज किया गया.

1 सेल तैयार: अस्थि मज्जा से mesenchymal स्टेम सेल अलगाव

  1. 5 मिनट के लिए एक प्रेरण कक्ष में isoflurane 5% और ओ 2 5 एल / मिनट के साथ चूहों anesthetize. संज्ञाहरण प्रणाली से जुड़े एक नाक शंकु में पशु के थूथन रखें. बेहोश करने की क्रिया की पुष्टि के लिए एक पैर की अंगुली या पूंछ चुटकी प्रदर्शन करना.
  2. कूल्हे को टखने से त्वचा में कटौती करके कैंची से पैर से त्वचा निकालें. मांसपेशियों निकालें और पशु exsanguination के लिए ऊरु धमनी में कटौती. हिप संयुक्त बेनकाब और फीमर सिर हटाना. यह फीमर सिर को नुकसान करने के लिए महत्वपूर्ण नहीं है. एक 50 मिलीलीटर की प्लास्टिक ट्यूब में बाँझ पीबीएस में हड्डियों रखें.
  3. सभी म्यू निकालेंउन्हें तोड़ने के बिना हड्डियों से scles और स्नायुबंधन. नोट: यह हड्डी इथेनॉल के साथ निस्तब्धता समाधान या संदूषण के संबंध से बचने के लिए भी बरकरार है कि महत्वपूर्ण है. 5 मिनट के लिए 70% इथेनॉल में खुली हड्डियों कुल्ला.
  4. बाँझ लामिना का प्रवाह हुड के तहत, कैंची से हड्डियों के दोनों सुझावों काटा. हड्डी छोर से बाँझ पीबीएस इंजेक्शन द्वारा अस्थि मज्जा फ्लश. एक 15 मिलीलीटर ट्यूब में मज्जा लीजिए. 300 x जी पर अपकेंद्रित्र 7 मिनट.
  5. सतह पर तैरनेवाला निकालें. लाल रक्त कोशिका lysis बफर के 3 मिलीलीटर में गोली निलंबित. 300 x जी पर 7 मिनट के लिए फिर से कताई से पहले कमरे के तापमान पर 1 मिनट के लिए निलंबन सेते हैं. एक 150 मिलीलीटर संस्कृति फ्लास्क में, बाँझ सेल संस्कृति माध्यम (395 मिलीलीटर IMDM मध्यम, 5 एमएल कलम / strep, 100 मिलीलीटर FBS) जोड़ सकते हैं और कोशिकाओं बीज.
  6. Nonadherent कोशिकाओं को दूर करने के दूसरे दिन मध्यम बदलें.
    1. वांछित सेल मात्रा प्राप्त की है, जब तक 2-3 सप्ताह के लिए हर दूसरे दिन मध्यम परिवर्तन.
    2. वैकल्पिक रूप से, बीज से biograft तैयारजरूरत है और 3 कहीं वर्णित के रूप में ठोस मैट्रिक्स पर कोशिकाओं आईएनजी.
  7. हृदय आरोपण के दिन, कोशिकाओं को तैयार है या सिर्फ एपिकार्डियल आवेदन से पहले biograft फसल.
    1. Accutase सेल टुकड़ी समाधान का उपयोग कोशिकाओं को इकट्ठा. कोशिकाओं की गणना. वांछित सेल मात्रा प्राप्त करने के लिए गणना की सेल निलंबन की मात्रा के साथ एक 1.5 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब भरें. 300 XG पर 7 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र और सतह पर तैरनेवाला हटायें.
    2. वैकल्पिक रूप से, बाँझ पीबीएस में कुल्ला, सेल संस्कृति के माध्यम से biograft फसल, और सीरम के बिना ताजा संस्कृति के माध्यम में रहते हैं.

2 प्रथम thoracotomy और बालक Ligation

  1. चूहे वजन. 37 डिग्री सेल्सियस पर हीटिंग पैड पर मुड़ें. 5-7 मिनट के लिए एक प्रेरण कक्ष में 5 isoflurane% और 5 एल / मिनट 100% ओ 2 के साथ चूहे anesthetize. बेहोश करने की क्रिया की पुष्टि के लिए एक पैर की अंगुली या पूंछ चुटकी प्रदर्शन करना. हीटिंग पैड पर चूहा रखें.
  2. एक साथ 14 पशु Intubateजी चतुर्थ कैथेटर. 2.5 एल / मिनट ऑक्सीजन, 2.5 isoflurane%, 2 मिलीलीटर की ज्वार की मात्रा, और / मिनट 90 साँस की एक श्वास आवृत्ति के लिए प्रोग्राम एक कृंतक वेंटीलेटर की इंटुबैषेण कैथेटर कनेक्ट करें.
  3. 0.1 मिलीग्राम / किग्रा में एक buprenorphine समाधान तैयार है. Subcutaneously समाधान की एक तिहाई इंजेक्षन. छाती के बाएं हिस्से दाढ़ी. एक 1% Betadine समाधान के साथ कीटाणुरहित.
  4. चौथे पसलियों के बीच अंतरिक्ष में उरोस्थि को सीधा त्वचा काटकर अलग कर देना. 3 वक्ष मांसपेशियों की परतों (वक्षपेशी प्रमुख, आरोही वक्षपेशी, और बाहरी तिरछा वक्षपेशी) अलग. (पसलियों 4 और 5 के बीच) चौथे पसलियों के बीच अंतरिक्ष खोलें.
  5. पसलियों का प्रसार करने और दिल को बेनकाब करने के लिए एक छोटा सा प्रत्याकर्षक का प्रयोग करें. ध्यान से पेरीकार्डियम खोलें. जानें और अलिंद नीचे एक 7.0 सीवन 4 मिमी के साथ कोरोनरी धमनी (लाड) उतरते बाईं पूर्वकाल ligate.
  6. 3.0 टांके का उपयोग कर दो टांके के साथ पसलियों के बीच अंतरिक्ष को बंद करें. उरोस्थि से proximally और distally दो टांके स्थिति. सबसे पहले, टीबाहर का सिवनी ighten. छाती फुलाना और किसी भी वातिलवक्ष से बचने के क्रम में 2 सेकंड के लिए वेंटीलेटर निकास ट्यूबिंग दबाना. दूसरा सीवन कसो. (कोई टांके की जरूरत है) वापस जगह में मांसपेशियों परतों की स्थिति. एक 5.0 सीवन के साथ त्वचा को बंद करें.
  7. 1% Betadine समाधान के साथ सीवन कीटाणुरहित. Buprenorphine समाधान के बाकी इंजेक्षन. संज्ञाहरण प्रणाली को बंद कर दें. इंटुबैषेण कैथेटर निकालें.
  8. 1-2 घंटे के लिए एक गर्म दीपक के नीचे पिंजरे में चूहे रखें. पिंजरे में एक थर्मामीटर रखें और ताप अधिक से बचने के लिए गर्म दीपक और पिंजरे के बीच की दूरी को नियंत्रित. IVC इकाई में चूहे लौटें. Subcutaneously Buprenorphine 0.05-0.1 मिलीग्राम / किग्रा पोस्ट इंजेक्षन -operatively 48 घंटे के लिए हर 6-12 घंटे.

एक दूसरा thoracotomy उपचार के माध्यम से 3 epicardial प्रशासन

  1. दोहराएँ 2.1-2.3 कदम.
  2. पांचवें पसलियों के बीच अंतरिक्ष में उरोस्थि को सीधा त्वचा काटकर अलग कर देना. 3 परत अलगवक्ष मांसपेशियों की है (वक्षपेशी प्रमुख, आरोही वक्षपेशी और बाहरी तिरछा वक्षपेशी). (पसलियों 5 और 6 के बीच) पांचवें पसलियों के बीच अंतरिक्ष खोलें.
  3. पसलियों का प्रसार करने और दिल को बेनकाब करने के लिए एक छोटा सा प्रत्याकर्षक का प्रयोग करें. कुछ पालन नहीं है, तो ध्यान से ठीक संदंश के साथ उन्हें हटा दें.
  4. संयुक्ताक्षर नीचे एक पीला क्षेत्र के रूप में प्रकट होता है कि रोधगलितांश क्षेत्र जानें. नोट: जब आवश्यक हो, बेहतर बाएं वेंट्रिकल कल्पना करने के लिए शीर्ष पर डाला सिवनी की एक 10 सेमी टुकड़ा (7.0) का उपयोग करें. दिल का पर्दाफाश करने के लिए एक क्लैंप से शिथिल बनाए रखा सिवनी को धीरे से खींच.
  5. निम्नलिखित उपचार में से एक को लागू करें:
    1. दिल की सतह पर biograft स्थिति. 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर prewarmed प्रीफिल्ड आतंच सीलेंट सिरिंज का प्रयोग करें. एक 25 जी Luer सुई का उपयोग biograft तहत आतंच सीलेंट की एक बूंद (50-100 μl) लागू करें. Biograft पूरी तरह से सील कर दिया है कि जाँच करें.
    2. वैकल्पिक रूप से, सतह ओ पर एक विंदुक टिप के साथ एकत्र सेल गोली लागूसंयुक्ताक्षर नीचे पीला क्षेत्र पर दिल च. सेल गोली पर आतंच सीलेंट की एक बूंद (50-100 μl) लागू करें.
  6. एपेक्स से सिवनी का टुकड़ा निकालें.
  7. दोहराएँ 2.6-2.8 कदम.

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Representative Results

सभी जानवरों thoracotomies के बाद 1 घंटा के भीतर बरामद किए. घाव भरने तेजी थी. कोई संक्रमण या शोफ मनाया गया.

डबल बाईं thoracotomy दिल के इष्टतम उपयोग (चित्रा 1) की अनुमति दी. दर्द और बाद सर्जरी मृत्यु दर कम थे. पशु शल्य चिकित्सा से जल्दी से बरामद किया और (चित्रा 2) वजन प्राप्त की. कापलान मीर अस्तित्व प्रतिशत पहली thoracotomy के लिए 96% थी. 104 से अधिक चार चूहों एक दूसरे thoracotomy के माध्यम से 24 घंटे इलाज के बाद आवेदन के भीतर मृत्यु हो गई. जानवर एक दूसरे thoracotomy लेकिन कोई उपचार (नकली) प्राप्त जब 100%, एमएससी के लिए 96% और आतंच सीलेंट समूह, या पशु एमएससी प्राप्त जब 86% से विभिन्न कापलान-मीर अस्तित्व प्रतिशत सीधे मायोकार्डियम (चित्रा 3) के भीतर इंजेक्शन.

एम मोड एचोकर्दिओग्रफिक मूल्यांकन 2 सप्ताह लाड बंधाव 44 ± 3% से आंशिक छोटा (एफएस) में कमी देखी गई पोस्ट प्रदर्शन22 ± 4% करने के लिए. विधि (चित्रा 4) के repeatability के सबूत प्रदान की 104 जानवरों 2 सप्ताह डाक लाड बंधाव पर दर्ज एफएस की आवृत्ति प्रतिनिधित्व. भिन्नता का गुणांक (सीवी) 17% थी. इसके अलावा, इकोकार्डियोग्राफी इंजेक्शन फ्रैक्शन (एफई) की कमी और पाद लंबा और प्रकुंचन में एल.वी. संस्करणों की वृद्धि ने सुझाव दिया है दिल की विफलता की ओर प्रगति 2 और 6 सप्ताह के बाद लाड बंधाव पर दिखाया प्रदर्शन (आंकड़े 4 और 5). नकली संचालित समूह में एक transmural रोधगलितांश के विकास के दिल पार वर्गों की Goldner धुंधला (चित्रा 6) द्वारा पुष्टि की गई.

चित्रा 1
चित्रा 1 (ए) thoracotomy. लाड बंधाव निम्नलिखित दिल को प्रत्याकर्षक अनुमति दी पहुँच का उपयोग 2 सप्ताह पहले प्रदर्शन किया थाऔर सिवनी दिखाई (तीर) है. Epicardial उपचार आवेदन दिल की न्यूनतम बाह्यीकरण के साथ प्रदर्शन किया गया था. (बी) कोशिकाओं आतंच सीलेंट के साथ तय की गोली infarcted क्षेत्र की सतह पर बनाए रखा गया.

चित्रा 2
चित्रा 2 रोज़ पश्चात अनुवर्ती 2 दिनों के लिए बाद सर्जरी वजन घटाने दिखाया. रिकवरी सभी जानवरों में वजन के लाभ के साथ साथ गया था. वजन विविधताओं उपचार के प्रकार के स्वतंत्र थे.

चित्रा 3
चित्रा 3 कापलान-मीर ग्राफ का प्रतिनिधित्व प्रतिशत अस्तित्व पोस्ट लाड बंधाव (ए) और एक के माध्यम से इलाज के बाद दूसरा thoracotomy (बी) दोनों सर्जरी जानवरों की कम नुकसान के परिणामस्वरूप दिखाया. नियंत्रण समूह में कोई सर्जरी की थी कि स्वस्थ पशु का प्रतिनिधित्व करता है. दो हफ्ते पहले thoracotomy के बाद, जानवर (एमएससी इंजेक्शन) आतंच सीलेंट, या कोशिकाओं के साथ तय की कोशिकाओं सीधे मायोकार्डियम के भीतर इंजेक्शन, अकेले सीलेंट आतंच, एक नकली आपरेशन लेकिन कोई उपचार (नकली) या तो प्राप्त किया.

चित्रा 4
चित्रा 4 (ए) प्रतिनिधि एम मोड इकोकार्डियोग्राफी छवियों पंजीकृत पूर्व (स्वस्थ) और 2 सप्ताह के बाद लाड बंधाव (infarcted). आंशिक छोटा मूल्यों का (बी) आवृत्ति वितरण दर्ज दो सप्ताह के बाद लाड बंधाव (एन = 104).

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चित्रा 5 दिल समारोह 2dimentional इकोकार्डियोग्राफी (बीप्लैन सिम्पसन की विधि) द्वारा मूल्यांकन और 2 और 6 सप्ताह लाड बंधाव. पशु दो thoracotomies था लेकिन कोई उपचार प्राप्त पोस्ट दर्ज की गई थी. मतलब ± एसडी के रूप में अच्छी तरह से व्यक्तिगत मूल्यों इंजेक्शन फ्रैक्शन (ए) प्रकुंचन (बी) में एल.वी. मात्रा और पाद लंबा (सी) के लिए प्रतिनिधित्व कर रहे हैं. सांख्यिकीय विश्लेषण एक बनती nonparametric Wilcoxon परीक्षण का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया.

चित्रा 6
2 सप्ताह (ए) और 6 सप्ताह (बी) के पद लाड बंधाव पर तंतुमय निशान (हरा) और व्यवहार्य मायोकार्डियम (लाल) दिखा धुंधला 6 चित्रा प्रतिनिधि Goldner.

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Discussion

बालक की स्थायी बंधाव अपरिवर्तनीय दौरे चोट के कारण. पहले पशु मॉडल तब से, यह पुरानी एमआई के लिए एक मानक और उपयुक्त मॉडल के रूप में माना गया है. 1960 4 में वर्णित किया गया था. इसकी स्थिरता और reproducibility एमआई 5 के लिए चिकित्सा के प्रायोगिक मूल्यांकन की अनुमति दी. प्रारंभिक विवरण निम्न सुधार प्रक्रियाओं 35-13% 6 के एक ऑपरेटिव मृत्यु दर की सूचना दी.

जैसी कि उम्मीद थी, बालक बंधाव 2 हफ्तों के भीतर मनाया बिगड़ा दिल समारोह प्रेरित किया. दिल समारोह में एक और कमी 6 सप्ताह का समय दर्ज की गई और transmural तंतुमय निशान के साथ जुड़े थे. इसके अलावा, एल.वी. फैलने सहित एल.वी. remodeling स्पष्ट रूप से 6 सप्ताह बंधाव पोस्ट मनाया गया.

पहली और दूसरी सर्जरी के बीच 2 सप्ताह के अंतराल में चुना गया था. वे 1 सप्ताह कामकाज करने के बाद भी प्रचुर मात्रा में थे के रूप में इस हालत में, दूसरा thoracotomy, adherences के अभाव से मदद की थीइष्टतम स्थितियों में एमए दूसरी सर्जरी. इसके अलावा, 2 सप्ताह उपचार आवेदन के लिए एक इष्टतम समय सीमा का प्रतिनिधित्व किया और ischemia द्वारा प्रेरित सूजन के प्रारंभिक तस्वीर से बचने के लिए और फैलाव का एक सघन तंतुमय ऊतक और प्रगति के गठन से पहले उपचार लागू करने की अनुमति दी.

पार्श्व thoracotomy आजकल छोटे जानवरों पर लाड बंधाव के लिए मानक शल्य प्रक्रिया है, एक मंझला sternotomy आमतौर पर सेल थेरेपी आवेदन 7 के लिए किया जाता है. उपचार आवेदन के लिए प्रस्तुत दूसरा पसलियों के बीच thoracotomy एक उपन्यास, कम आक्रामक दृष्टिकोण है; यह हड्डियों को काटने के बिना और मांसपेशियों बंटवारे से पसलियों के माध्यम से दिल के लिए उपयोग की अनुमति देता है. पालन ​​की घटना पहली thoracotomy निम्नलिखित कारण छोटे और सीमित निशान से कम है और इन उपचार आवेदन की उपलब्धि के साथ हस्तक्षेप नहीं करते. दृष्टिकोण नकसीर, जल्दी पश्चात की बहुत कम जोखिम में हुईवसूली, कम मृत्यु दर, दर्द, और संक्रमण का खतरा. यह दूसरा न्यूनतम दर्दनाक प्रक्रिया सर्जरी के लिए और मैट्रिक्स निर्धारण के लिए 20 मिनट तक का समय 20 मिनट तक चली. तेजी से प्रक्रिया और दिल को कम से कम कार्डियक ऊतक सुखाने के सीमित जोखिम. पोस्ट ऑपरेटिव अल्ट्रासाउंड इमेजिंग प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य माप विश्लेषण के लिए अच्छी गुणवत्ता छवि अधिग्रहण में हुई. इमेजिंग प्रभावित हो सकती है कि कोई रक्तगुल्म थे.

दिल की पहुंच infarcted मायोकार्डियम के इष्टतम दृश्यता के साथ ही ठोस और जेल प्रकार biografts 8-10 सहित एपिकार्डियल उपचार के आवेदन के लिए दिल का एक अच्छा प्रदर्शन की अनुमति दी.

आतंच सीलेंट का उपयोग कई फायदे प्रस्तुत किया. (मैं) ठोस पैच को ठीक करने के लिए, आतंच सीलेंट का उपयोग टांके से भी कम दर्दनाक था. (Ii) जब ऐसी Bioglue (CryoLife) के रूप में अन्य गोंद के साथ तुलना में, आतंच सीलेंट कठोर संरचना और बिगड़ा दिल का गठन कि Bioglue से अधिक आज्ञाकारी थासंकुचन. (Iii) इसके polymerization के समय पर्याप्त पाड़ या सेल गोली स्थिति के लिए इष्टतम था. (Iv) आतंच सीलेंट ठोस पैच के उत्कृष्ट प्रारंभिक आसंजन की अनुमति दी. पैच कसकर कम से कम 4 सप्ताह 10 के लिए दिल की सतह पर बनाए रखा गया था. एपिकार्डियल सेल वितरण के लिए एक पाड़ के रूप में इस्तेमाल किया और तय कोशिकाओं शल्य प्रक्रिया के अंत तक infarcted क्षेत्र की सतह पर बनाए रखा गया जब (वी) आतंच सीलेंट प्रक्रिया के लिए आसान था. कोशिकाओं की अवधारण समय इस अध्ययन के ध्यान से बाहर था और आगे की जांच की मांग करेगा हालांकि, यह मैट्रिक्स प्रत्यारोपित कोशिकाओं 11-14 के बेहतर दौरे प्रतिधारण की अनुमति देता है कि प्रस्तावित किया गया है. आंशिक रूप से तेजी से निकासी समझा जा सकता है, हृदय संकुचन, साथ ही hypoxic और भड़काऊ माहौल के दौरान कोशिकाओं के बाहर धो लें. कोशिकाओं एक मैट्रिक्स के साथ जुड़े रहे हैं जब इन कमियों को कम किया जा सकता है.

मुख्य तकनीकी चुनौतियों की शल्य चिकित्सा से निपटने का संबंधएक ठोस biograft. मैट्रिक्स कठोर और nonflexible है, sutures के साथ निर्धारण इष्ट किया जाना चाहिए. निम्नलिखित महत्वपूर्ण कदम सफल प्रक्रिया के लिए विचार किया जाना चाहिए. सबसे पहले, एक विशेष ध्यान पसलियों को तोड़ने से बचने के लिए thoracotomy के दौरान दी जानी चाहिए. दूसरा, गोंद से अधिक ध्यान से दूसरों ऊतकों का पालन से बचने के लिए हटा दिया जाना चाहिए. यह रोधगलितांश आकार में परिवर्तनशीलता को कम कर सकते रूप में अंत में, एक मानकीकृत संयुक्ताक्षर स्थिति महत्वपूर्ण है. लाड प्रांगण नीचे 4 मिमी ligated है जब एक transmural रोधगलितांश प्राप्त किया जा सकता है.

अंत में, डबल thoracotomy प्रयोगात्मक नियोजन के अनुकूलन और पशु हानि की कम संख्या के पक्ष में होगा इसलिए कम मृत्यु दर, उपचार आवेदन के लिए दिल की धड़कन को पर्याप्त उपयोग के साथ एक सुरक्षित शल्य प्रक्रिया में प्रतिनिधित्व, और.

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Acknowledgments

लेखकों प्रो हेंड्रिक Tevaearai और अध्ययन के प्रारंभिक भाग के लिए वित्तीय सहायता के लिए कार्डियोवास्कुलर सर्जरी विभाग को धन्यवाद.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Polysorb 3-0 suture Covidien UL 204
Polysorb 5-0 suture Covidien UL 202
Surgipro II 7-0 Suture Covidien VP904X
Catheter Insyte 14 G BD 381267
Inspira Advanced Volume Controlled Ventilator Harvard Apparatus 557058
Dumont #7 Forceps FST Germany 11274-20
Fibrin Sealant Baxter 1501441 TISSEEL Glue, Frozen -20 °C
Castroviejo Eye Specula Harvard Apparatus 72-8925 use as retractor for the ribs
IMDM GlutaMAX Gibco 31980
Pen/Strep Gibco 15140
FBS PAA Clone       A15-101
Bone Scissors Fine Science Tools 16044-10
Red Blood Cell Lysis Solution Gentra Systems D-50k1
Accutase Cell Detachment Solution Stem Cell Technology 7920

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References

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जैव अभियांत्रिकी अंक 91 रोधगलन (एमआई) आतंच सीलेंट thoracotomy वाम पूर्वकाल अवरोही धमनी (लाड) बंधाव हृदय सेल थेरेपी हृदय microsurgery
चूहा में हृदय गति रुकने के लिए सेल आधारित चिकित्सा: रोधगलन के लिए डबल thoracotomy और प्रकोष्ठों और Biomatrix की epicardial आरोपण
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Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., More

Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, J., Giraud, M. N. Cell-based Therapy for Heart Failure in Rat: Double Thoracotomy for Myocardial Infarction and Epicardial Implantation of Cells and Biomatrix. J. Vis. Exp. (91), e51390, doi:10.3791/51390 (2014).

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