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Medicine

Heterotopic माउस दिल Transplantion के लिए एक संशोधित विधि

Published: June 23, 2014 doi: 10.3791/51423
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1
1Collaborative Transplant Laboratory, University of Sydney

Abstract

चूहे के कारण अक्सर उपलब्ध ट्रांसजेनिक चूहों और अभिकर्मकों की विस्तृत श्रृंखला के लिए प्रत्यारोपण इम्यूनोलॉजी के अध्ययन में हृदय प्रत्यारोपण दाताओं और प्राप्तकर्ताओं के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं. एक कठिनाई की वजह से जानवर के छोटे आकार और हृदय प्रत्यारोपण में शामिल microsurgery की काफी तकनीकी चुनौतियों को प्रस्तुत किया है. विशेष रूप से, जल्दी प्रत्यारोपण के बाद तकनीकी विफलता के एक उच्च दर प्राप्तकर्ता मौत और इस तरह के पिछले अंग पक्षाघात या एक गैर दिल की धड़कन के रूप में पोस्ट ऑपरेटिव जटिलताओं से हो सकता है. इधर, heterotopic माउस हृदय प्रत्यारोपण के लिए पूरी तकनीक एक प्राप्तकर्ता माउस में दाता दिल और इसके बाद के आरोपण कटाई से जुड़े, प्रदर्शन किया है. दाता दिल तुरंत आरोही महाधमनी और फुफ्फुसीय धमनी की ठंड heparinized खारा और transection साथ सीटू छिड़काव में निम्नलिखित काटा जाता है. प्राप्तकर्ता आपरेशन द्वारा पीछा किया, उदर महाधमनी और अवर रग Cava (IVC) की तैयारी शामिल हैएक एकल चल 10-0 microsuture और प्राप्तकर्ता IVC साथ दाता फेफड़े के धमनी की एक समान सम्मिलन का उपयोग प्राप्तकर्ता महाधमनी के साथ दाता महाधमनी के अंत करने के पक्ष सम्मिलन. आपरेशन के बाद जानवरों की 0.6 मिलीलीटर सामान्य खारा subcutaneously इंजेक्शन के साथ और एक 37 डिग्री सेल्सियस हीटिंग पैड पर ठीक करने के लिए अनुमति दी है. 227 माउस हृदय प्रत्यारोपण से परिणाम 86.8% की 48 घंटे में एक सफलता दर के साथ संक्षेप हैं. 15 (6.6%) 48 घंटे के भीतर मृत्यु हो गई, जबकि 48 घंटा के भीतर 13.2% विफलताओं की, 5 (2.2%), इस्कीमिक चोट और / या घनास्त्रता भ्रष्टाचार की वजह से एक गैर दिल की धड़कन था पिछले अंग पक्षाघात, 10 (4.4%) का अनुभव .

Introduction

अंग प्रत्यारोपण के पशु मॉडल नैदानिक ​​प्रत्यारोपण के रोगियों के उपचार में सुधार के लिए बहुमूल्य जानकारी प्रदान कर सकते हैं. माउस मॉडल कारण आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों और अन्य पशु मॉडल 1-3 के लिए उपलब्ध नहीं हैं कि चूहों के लिए विशिष्ट अभिकर्मकों की विस्तृत श्रृंखला के लिए अंग प्रत्यारोपण अस्वीकृति या स्वीकृति के प्रतिरक्षा तंत्र के अध्ययन के लिए विशेष रूप से उपयोगी हैं. प्रत्यारोपण के माउस मॉडल के साथ एक चुनौती संतोषजनक परिणाम प्राप्त करने के लिए काफी तकनीकी कौशल की आवश्यकता है जो दाताओं और प्राप्तकर्ताओं के छोटे आकार के है.

एक तकनीक पहले बाद में Corry एट अल 5 द्वारा माउस हृदय प्रत्यारोपण के लिए अनुकूलित किया गया था जो चूहों 4 में दिल की heterotopic प्रत्यारोपण के लिए वर्णित किया गया था. इस तकनीक से पहले दाता आपरेशन करने के लिए प्राप्तकर्ता और प्रतिरोपित दिल या टी के अस्तित्व के लिए समझौता करने की संभावना है, जो दोनों के दाता दिल का कोई छिड़काव की तैयारी शामिलवह प्राप्तकर्ता. मूल रूप से प्रत्यारोपण अस्वीकृति और सहिष्णुता 6-8 के तंत्र की जांच करने के रूप में वर्णित प्रक्रिया को व्यापक रूप से इस्तेमाल किया गया है. दूसरों चूहों 9,10 में हृदय प्रत्यारोपण के लिए ओनो और लिंडसे का मूल चूहा हृदय प्रत्यारोपण प्रक्रिया ढाल लिया है. अभी हाल ही में एक तकनीक Corry एट अल 11 की विधि से जुड़ी समस्याओं में से कुछ overcame कि माउस हृदय प्रत्यारोपण के लिए प्रकाशित किया गया था. प्रोटोकॉल यहाँ वर्णित शामिल हैं जो Mottram एट अल 12 की विधि के आधार पर हमारे संशोधनों को शामिल: सीटू छिड़काव में ठंड heparinized खारा के साथ तुरंत thoracotomy के बाद और प्राप्तकर्ता संचालन समय को कम करने के लिए प्राप्तकर्ता ऑपरेशन से पहले दाता आपरेशन प्रदर्शन. इसके अलावा, हम छोटे atraumatic पोत clamps के बजाय 6-0 रेशम संबंधों का उपयोग करें. पोत clamps अधिक स्थान लेने के नुकसान है हालांकि वे भी तंग या ढीले नहीं होना चाहिए, जो संबंधों से नियंत्रित करने के लिए आसान कर रहे हैंऔर clamps से दूर करने के लिए कम सीधा कर रहे हैं. प्रारंभिक शिक्षा में एक विकल्प टांके के evenness सुनिश्चित करने और इस प्रकार सम्मिलन की प्रत्यक्षता को प्रॉक्सिमल और बाहर कोनों में रहने टांके का उपयोग करने के लिए है चरणों हालांकि हमारे विधि, पोत सम्मिलन के लिए एक एकल चल सीवन का उपयोग करता है.

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Protocol

पूर्व प्रयोगों के प्रारंभ करने की योजना बनाई प्रयोगों के लिए प्रासंगिक संस्था के पशु की देखभाल आचार समिति से अनुमोदन प्राप्त करते हैं. आपकी संस्था की आवश्यकताओं के अनुसार चूहों को बनाए रखें. निम्नलिखित प्रोटोकॉल सिडनी विश्वविद्यालय और रॉयल प्रिंस अल्फ्रेड अस्पताल समितियों द्वारा अनुमोदित किया गया है.

पहले सर्जरी शुरू करने, सभी उपकरणों को अच्छी तरह से साफ किया जाना चाहिए और 80% इथेनॉल में भिगोने से निष्फल. कुछ संस्थानों हालांकि इस लंबी अवधि में ठीक microsurgical उपकरणों को नुकसान पहुंचा सकता वाष्पदावी बंधेज. जहां संभव हो उपयोग बाँझ डिस्पोजेबल उपकरण.

1. संज्ञाहरण

  1. एक मोहरबंद कंटेनर में isoflurane के साथ माउस anesthetize तो जल्दी संवेदनाहारी नाक शंकु जोड़ने, एक ऑपरेटिंग बोर्ड पर यह लापरवाह जगह है. कोई पलटा है यह सुनिश्चित करने के लिए हिंद पैर pinching द्वारा संज्ञाहरण की टेस्ट पर्याप्तता.
  2. एक सर्जिकल ब्लेड से त्वचा दाढ़ी और80% इथेनॉल के साथ बाँझ. इसके अलावा, 70% isopropyl शराब में 2% chlorhexidine त्वचा नसबंदी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. संज्ञाहरण के शामिल होने के दौरान isoflurane एकाग्रता 3% है, लेकिन रखरखाव के लिए 1-1.5% करने के लिए यह कम. नियमित रूप से श्वास और दिल की दर बनाए रखने के लिए इस एकाग्रता को मामूली समायोजन करें. एक हीटिंग पैड पर पशु का तापमान बनाए रखें.

2. दाता ऑपरेशन

  1. एक छाती दीवार फ्लैप के लिए फार्म xiphisternum के स्तर पर एक अनुप्रस्थ काट द्वारा पीछा बगल रिब किनारे से रिब पिंजरे के दोनों पक्षों के माध्यम से छाती को काटने से दिल और वाहिकाओं का पर्दाफाश करने के लिए एक thoracotomy बनाओ. सिर के पास इस फ्लैप उठाकर परिचालन बोर्ड को पिन. दिल और वाहिकाओं का पर्दाफाश करने पेरीकार्डियम आंसू.
  2. एक हाथ में और IVC के माध्यम से दिल के लिए अन्य इंजेक्षन 1 मिलीलीटर ठंड heparinized खारा समीपस्थ साथ संदंश के साथ अवर रग Cava लिफ्ट, फिर preven करने IVC पर एक छोटे धमनी दबाना डालवापस सुई के छेद के माध्यम से छिड़काव समाधान की टी प्रवाह.
  3. धुंध और एक कपास कली का प्रयोग, आरोही महाधमनी और फुफ्फुसीय धमनी को बेनकाब करने के लिए नीचे दिल वापस लेना. महाधमनी और फुफ्फुसीय धमनी के बंडल को चैनल (अनुप्रस्थ साइनस) पीछे के माध्यम से microscissors की एक जोड़ी में से एक ब्लेड दर्रा और सम्मिलन के लिए पर्याप्त लंबाई को सुनिश्चित करने के रूप में दूर distally संभव के रूप में एक साथ महाधमनी और फुफ्फुसीय धमनी में कटौती.
  4. टाई और IVC, सही बेहतर रग Cava (एसवीसी) विभाजित, 6-0 रेशम धागे का उपयोग एसवीसी और फेफड़े के नसों छोड़ दिया. अलग IVC और सही एसवीसी टाई तो फेफड़े के नसों के साथ एक साथ छोड़ा एसवीसी घेरना और यह टाई करने के लिए दिल को एक ही धागे पीछे जगह है. प्रत्यारोपण तक 4 डिग्री सेल्सियस पर ठंडा बाँझ खारा में दुकान तो, संबंधों को बाहर का वाहिकाओं काटने से दाता साइट से दिल हार्वेस्ट. इस Exsanguination से दाता की मौत में परिणाम है.

3. प्राप्तकर्ता ऑपरेशन

  1. चतनाशून्य करना(खंड 1) के रूप में ऊपर प्राप्तकर्ता. ध्यान से retractors के लिए फार्म तुला xiphisternum और पेपर क्लिप का उपयोग कर वापस लेना pubis से midline चीरा द्वारा एक laparotomy कर तब, जलन से बचने के पेट दाढ़ी. गर्म बाँझ खारा लथपथ धुंध में आंत्र लपेटें और पेट के ऊपरी सही करने के लिए वापस लेना.
  2. बुनियादी गुर्दे महाधमनी और IVC का पर्दाफाश करने के लिए, एक दाग़ना डिवाइस का उपयोग काठ जहाजों से उन्हें विभाजित करके श्रोणिफलक विभाजन के लिए बाईं गुर्दे धमनी और शिरा से महाधमनी और IVC के बंडल क्षेत्रों को मुक्त. दाग़ना सही तापमान पर है और पोत सिरों को विभाजित और सील करने के लिए पर्याप्त समय के लिए प्रयोग किया जाता है कि अपना ध्यान रखना.
  3. महाधमनी और distally और proximally IVC क्षेत्रों के लिए छोटे atraumatic पोत clamps लागू करें. पहले एक 30 जी सुई के साथ एक छेद puncturing द्वारा महाधमनी के सामने की दीवार में एक चीरा बनाने; तो दाता महाधमनी के आकार से मिलान करने के लिए microscissors के साथ खड़ी एक चीरा काटा. किसी भी बीएल दूर करने के लिए heparinized खारा साथ महाधमनी लुमेन फ्लशई. के थक्के.
  4. ठंड खारा में भिगो धुंध के साथ कवर प्राप्तकर्ता साइट पर दाता दिल ले आओ और पेट के दाहिने हिस्से को यह जगह. दाता महाधमनी प्राप्तकर्ता महाधमनी और अगले प्राप्तकर्ता IVC के लिए तैनात दाता फेफड़े के धमनी पर अगले चीरा तैनात करने के लिए सुनिश्चित करें.
  5. पशु 180 डिग्री के माध्यम से घुमाया जा रहा है मंच जिस पर बाहर कोने तक पहुँचने तक पहले बाईं ओर के साथ समीपस्थ कोने और suturing से शुरू 10-0 नायलॉन टांके चल उपयोग कर प्राप्तकर्ता महाधमनी के दाता महाधमनी को समाप्त करने के पक्ष दो भागों का आपस में मिलाना. धीरे महाधमनी के दाएं बेनकाब और समीपस्थ अंत करने के लिए बाहर का अंत से महाधमनी दीवार के सही पक्ष के माध्यम से suturing जारी रखने के लिए पेट के बाईं ओर करने के लिए दाता दिल चाल है. महाधमनी सम्मिलन बंद करने से पहले, धीरे किसी भी थक्का और हवा निकालने के लिए heparinized खारा साथ लुमेन फ्लश.
  6. प्राप्तकर्ता IVC साथ दाता फेफड़े के धमनी (पीए) को समाप्त करने के पक्ष दो भागों का आपस में मिलाना. एक चीरा देखें बनाओtically धमनी सम्मिलन के अनुसार एक साइट पर IVC के सामने की दीवार में microscissors के साथ. IVC के लुमेन के अंदर रवाना दीवार के बाहर का अंत से शुरू 10-0 नायलॉन टांके चलाने के साथ प्राप्तकर्ता IVC को दाता पीए दो भागों का आपस में मिलाना. समीपस्थ अंत तक पहुँचने के बाद, सम्मिलन पूरा करने के लिए बाहर का अंत करने के लिए ऊपर सामने दाएं दीवार के साथ टांके बने हुए हैं. सम्मिलन बंद करने से पहले, धीरे किसी भी थक्के और हवा निकालने के लिए लुमेन फ्लश.
  7. रक्तस्तम्भन हासिल की है जब तक एक कपास applicator के साथ पोत clamps, सम्मिलन स्थलों के आसपास Gelfoam की जगह टुकड़े, और लागू कोमल दबाव जारी करने से पहले. Revascularization के समय, समीपस्थ दबाना द्वारा पीछा किया, पहले बाहर का दबाना जारी.
  8. Revascularization के बाद इसकी वसूली की सहायता के लिए बाहर से भ्रष्टाचार को 37 डिग्री सेल्सियस पर गर्म खारा लागू होते हैं. भ्रष्टाचार आमतौर पर तुरंत फिब्रिलेशन शुरू होता है और कुछ ही मिनटों के भीतर साइनस लय को अनायास बदल जाती है. गर्म 0.6 मिलीलीटर इंजेक्षनप्राप्तकर्ता का हाइड्रेशन बनाए रखने के लिए खारा subcutaneously. सर्जरी से पहले के पूरा करने के लिए analgesia के लिए buprenorphine subcutaneously इंजेक्षन
  9. दोनों परतों के लिए एक 5-0 absorbable चल सीवन के साथ पेट में घाव को बंद करें. भीतरी परत को पूरा करने के द्वारा शुरू करो और त्वचा के साथ जारी है.

4. वसूली और भ्रष्टाचार निगरानी

  1. संक्रमण के प्रोफिलैक्सिस के लिए एम्पीसिलीन इंजेक्षन और वसूली के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक हीटिंग पैड पर प्राप्तकर्ता जगह है. अधिकांश जानवरों के तेजी से उबरने और आमतौर पर पीने और अक्सर 3 घंटा के भीतर खा रहे हैं. माउस संकट के लक्षण दिखाता है, कारण का पता लगाने के लिए बारीकी से जांच करते हैं. कोई स्पष्ट कारण हैं, buprenorphine साथ इलाज के लिए और बारीकी से निगरानी. लक्षण गंभीर हैं या अधिक से अधिक 8 घंटे जारी रहती है, तो एक पशु चिकित्सक से परामर्श और इच्छामृत्यु पर विचार करें. यदि आवश्यक हो, लक्षण को हल जब तक buprenorphine के 12 घंटेवार इंजेक्शन जारी रखने दे. माउस संकट के लक्षण दिखाता है 8 घंटे के बाद जारी 12 देbuprenorphine के प्रति घंटा इंजेक्शन वे मामले के निपटारे तक. लक्षण अधिक से अधिक 48 घंटे के लिए जारी है और यदि आवश्यक हो तो euthanize अगर पशु चिकित्सक से परामर्श करें.
  2. प्रत्यक्ष पेट टटोलने का कार्य द्वारा भ्रष्टाचार के दिल की धड़कन की निगरानी और + + + + के रूप में एक स्वस्थ कारण उन्नत अस्वीकृति को कमजोर हरा के लिए + में भ्रष्टाचार और के लिए हरा की ताकत रिकॉर्ड - भ्रष्टाचार की अस्वीकृति को पूरा करने के लिए न होने के कारण पिटाई के रूप में. प्रयोग की अवधि के लिए प्रति सप्ताह फिर 3x पहले 10 दिनों के लिए दैनिक चूहों मॉनिटर.

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Representative Results

एक प्रारंभिक प्रशिक्षण अवधि के बाद, हमारे समूह में माउस heterotopic हृदय प्रत्यारोपण के 227 मामलों का विश्लेषण किया गया. पहले 24 घंटे के भीतर सफलता दर 90.3% थी और 48 घंटे में यह 86.8% थी. 48 घंटा के भीतर 30 (13.2%) विफलताओं की, 5 (2.2%) पिछले अंग पक्षाघात अनुभवी और euthanized किया जाना था, 10 (4.4%) है, जबकि 15 की वजह से भ्रष्टाचार ischemia चोट और / या घनास्त्रता के लिए एक गैर दिल की धड़कन था (6.6%) 48 घंटे के भीतर मृत्यु हो गई. कुछ प्रयोगात्मक भ्रष्टाचार उत्तरजीविता तनाव संयोजनों की एक किस्म के साथ तालिका 1 में दिखाया गया. गैर समान तनाव के बीच प्रत्यारोपण खारिज कर दिया गया है, जबकि एक ही दाता और प्राप्तकर्ता के तनाव के बीच हृदय प्रत्यारोपण लंबे समय तक स्वीकार किए गए.

प्रतिरोपित दिल की उपस्थिति चित्र 1 में दिखाया गया है. दिल दिल की उपस्थिति के साथ संयोजन में धड़कन बंद कर दिया जब हृदय प्रत्यारोपण की विफलता के कारण आम तौर पर प्रत्यारोपण के बाद समय से निर्धारित होता है. यदि आवश्यक हो, कारणधड़कन की समाप्ति के दिल के histological विश्लेषण द्वारा पुष्टि की जानी चाहिए. उदाहरण के लिए, एक डी बी / 2 दाता हृदय प्रत्यारोपण के एक C57BL 6 / तनाव प्राप्तकर्ता में, दिल unsensitized प्राप्तकर्ताओं में अस्वीकृति आमतौर पर कम से कम एक सप्ताह लगता है के रूप में सबसे असामान्य है, जो दिन 2 पर पिटाई रह गए हैं. चित्रा 1A इस से दिल से पता चलता है घनास्त्रता और हृदय के ऊतकों की रोधगलन के सबूत के साथ प्राप्तकर्ता. C57BL / 6 प्राप्तकर्ता को C57BL 6 / दाता के तनाव संयोजन में, दिल को अस्वीकार कर दिया नहीं गया था और> 100 दिन (चित्रा 1 बी) के लिए बच गया. इस मामले में दिल की वजह से अपनी गैर जीवन बनाए रखने की स्थिति के लिए माध्यमिक पेशी शोष के लिए आकार में थोड़ा कम था. इसके विपरीत, C57BL / 6 प्राप्तकर्ता को डी बी / 2 दाता के खारिज तनाव संयोजन में, प्रत्यारोपित दिल सुबह 7 से हरा करने के लिए रह गए हैं और अस्वीकृति का सबूत (चित्रा 1C) से पता चला था. यह दिन 100 (चित्रा -1) द्वारा पूरी तरह से तांतव और सिकुड़ा हुआ था.


Thrombosed की चित्रा 1. सूरत, प्रत्यारोपित दिल को खारिज और गैर खारिज. (ए) डी बी ए / 2 हृदय प्रत्यारोपण के बाद thrombosed और infarcted दिल 7 दिनों दिखा C57BL / 6 प्राप्तकर्ता को प्रतिरोपित. (बी) एक अच्छी तरह से perfused और 100 दिनों के प्रत्यारोपण के बाद दिल की धड़कन. (सी दिखा C57BL / 6 प्राप्तकर्ता को प्रत्यारोपित C57BL 6 / दिल 100 दिनों प्रत्यारोपण के बाद खारिज कर दिया दिल दिखा C57BL / 6 प्राप्तकर्ता को प्रत्यारोपित 7 दिनों प्रत्यारोपण के बाद खारिज कर दिया दिल दिखा C57BL / 6 प्राप्तकर्ता को प्रतिरोपित) डी बी ए / 2 दिल. (डी) डी बी ए / 2 दिल. तीर प्रत्यारोपित दिल से संकेत मिलता है.

युग्म Survivals (दिन) n
B10.BR → B10.BR > 200 X7 7 > 200
C57BL 6 / → C57BL / 6 40, 200> X2 3 > 200
F1 → B10.BR 8 X2, 9, 12 4 8.5
178.3 → B10.BR 7 X2, 8 X2, 9, 10, 12, 13 8 8.5
C57BL 6 / → B10.BR 8 x4, 9 X2, 10 X5, 11, 12, 14 X2, 15 16 10
BALB / ग → C57BL / 6 7 एक्स 9 9 7
डी बी ए / 2 → C57BL / 6 6, 7 X10 11 7

विभिन्न दाता / प्राप्तकर्ता संयोजन में तालिका 1. हार्ट भ्रष्टाचार अस्तित्व.

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Discussion

माउस हृदय प्रत्यारोपण मास्टर को काफी शल्य कौशल की आवश्यकता है कि एक चुनौतीपूर्ण microsurgical विधि है. सबसे चुनौतीपूर्ण पहलू वाहिकाओं के छोटे व्यास है. इसके अलावा, यह प्राप्तकर्ता आपरेशन समय और खून बह रहा है सीमित करने के लिए आवश्यक है. माउस हृदय प्रत्यारोपण के लिए तकनीक पहले Corry एट अल द्वारा वर्णित किया गया था. 1973 में और बाद में Mottram एट अल 12 से. हमारे संशोधनों को निम्नलिखित बिंदुओं में शामिल हैं. सबसे पहले, जल्द ही छिड़काव के बाद महाधमनी और फुफ्फुसीय धमनी बंडल की thoracotomy और transection निम्नलिखित ठंड heparinized खारा के साथ दाता दिल की तत्काल छिड़काव फसल कटाई के दौरान गर्म ischemia से बचाता है. दूसरे, बजाय दाता से पहले प्राप्तकर्ता की तैयारी के लिए जल्द ही दाता कटाई के पूरा होने के बाद प्राप्तकर्ता तैयारी, शुरू, अस्तित्व में फलस्वरूप सुधार के साथ प्राप्तकर्ता में पेट जोखिम समय कम कर देता है. अंत में, छोटे atraumatic पोत का उपयोग करने के लिए ख clampsप्राप्तकर्ता महाधमनी / IVC बंडल के लिए बजाय संबंधों का रक्त प्रवाह, ताला, आमतौर पर जहाजों को कम नुकसान में यह परिणाम है और पिछले अंग पक्षाघात की घटनाओं को कम कर सकते हैं.

इसके अलावा, निम्नलिखित बातों सफलता के लिए महत्वपूर्ण हैं. दाताओं और प्राप्तकर्ताओं की अधिकतम आकार 23 से 26 ग्राम के आसपास है और अधिकतम उम्र 10 से 12 सप्ताह है. बड़े जानवरों बड़े जहाजों की जरूरत नहीं है और वे अधिक वसा महाधमनी और IVC का जोखिम अधिक कठिन बना देता है. सर्जरी के दौरान प्राप्तकर्ता के निर्जलीकरण और हाइपोथर्मिया से बचा जाना चाहिए. प्राप्तकर्ता आंत्र अच्छी तरह से गर्म खारा लथपथ धुंध का उपयोग निर्जलीकरण से संरक्षित किया जाना चाहिए और प्राप्तकर्ता 37 डिग्री सेल्सियस पर एक हीटिंग चटाई पर रखा जा सकता है धुंध आपरेशन के दौरान ताजा, गर्म खारा की नियमित रूप से आवेदन द्वारा नम रखा जाना चाहिए. रक्त के थक्के और पिछले अंग पक्षाघात का कारण बन सकता है कि हवा एम्बोली को कम करने के लिए, पोत सम्मिलन साइटों को बंद करने से पहले अच्छी तरह से प्लावित होने की जरूरत है. आंत्र ध्यान से completi पर प्रतिस्थापित किया जाना चाहिएअन्त्रपेशी के किसी भी घुमा को रोकने के लिए प्रत्यारोपण के पर. जल्द ही सर्जरी के बाद नसों में तरल पदार्थ की एक बड़ी मात्रा anastomoses की उच्च रक्तचाप और खून बह रहा हो सकता है, जबकि 0.6 मिलीलीटर गर्म खारा के चमड़े के नीचे इंजेक्शन पशु वसूली सहायता करता है. प्राप्तकर्ता महाधमनी और IVC पार कम से कम 30 मिनट के लिए clamped रहे हैं कि समय को सीमित सफलता दर में सुधार होगा.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

इस काम Microsearch ऑस्ट्रेलिया के फाउंडेशन, और Myee Codrington मेडिकल रिसर्च फाउंडेशन द्वारा द्वारा, ऑस्ट्रेलिया परियोजना अनुदान 1029205 की राष्ट्रीय स्वास्थ्य और चिकित्सा अनुसंधान परिषद (NHMRC) द्वारा समर्थित किया गया.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Operating microscope  Leica, Heerbrugg, Switzerland M651 10-25X magnification
Anesthetic machine  Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia Vett3 Capable of delivering a mixture of isoflurane and oxygen in air 
Operating board  Hardware store or office supplier Dense cork or synthetic capable of taking pins
Heparinized saline (5 U/ml, 4 °C) Pfizer, USA FW25 In 1 ml syringe with 23 G needle on ice
Normal saline (37 °C) AstraZeneca Pty Ltd, Australia 4538 In 1 ml syringe with 23 G needle on warm pad
Sutures 10- nylon, 5-0 Vicryl Ethicon, Inc. NJ, USA 2870G/J421H
Buprenorphine (0.05 mg/kg in 0.1 ml saline) Reckitt Benckiser, Sydney, Australia In 1 ml syringe with 23 G needle on ice
Ampcillin (5 mg/kg in 0.1 ml saline) Aspen, Sydney, Australia In 1 ml syringe with 23 G needle on ice
Gel Foam Pharmacia & Upjohn Co. USA 801289304 Cut into small pieces
High temperature cautery device Medtronic, USA 8444000
Heating Pad/Right Temp Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790
Microsurgery instruments: Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.,  
Microneedleholders Shanghai, China WT2020
Microscissors      "          " WT1020
Microforceps (straight tip)      "          " WA3010
Microforceps (curved tip)      "          " WA3020
Micromosquito clamps (1 pair)      "          " W40350
Microvessel atraumatic clamps (1 pair)      "          " W40130/W40150

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References

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चिकित्सा अंक 88 प्रत्यारोपण माउस दिल विधि microsurgery संवहनी anastomoses
Heterotopic माउस दिल Transplantion के लिए एक संशोधित विधि
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Wang, C., Wang, Z., Allen, R.,… More

Wang, C., Wang, Z., Allen, R., Bishop, G. A., Sharland, A. F. A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion. J. Vis. Exp. (88), e51423, doi:10.3791/51423 (2014).

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