Summary
Denna uppsats beskriver hur Elvax 40W kan användas som en långsam frisättning metod för läkemedelstillförsel till vuxen råtta näthinnan. Protokollet för framställning, lastning, och att leverera den läkemedels-harts-komplexet till ögat beskrivs.
Abstract
Sjukdomar hos näthinnan är svåra att behandla eftersom näthinnan ligger djupt inuti ögat. Behövs ofta invasiva metoder för tillförsel av läkemedel för behandling av dessa sjukdomar. Kroniska retinala sjukdomar, såsom retinal ödem eller neovaskularisation kräver vanligtvis multipla intraokulära injektioner för att effektivt behandla tillståndet. Men riskerna med dessa injektioner ökar med upprepad tillförsel av läkemedlet. Därför alternativa leveransmetoder måste fastställas för att minimera riskerna för återinjektion. Flera andra undersökningar har utvecklat metoder för att leverera läkemedel under längre tid, genom material som kan släppa kemikalier långsamt in i ögat. I denna undersökning har vi beskriva användningen av Elvax 40W, ett sampolymerharts, för att fungera som en vehikel för tillförsel av läkemedel till den vuxna råttan näthinnan. Hartset görs och laddad med läkemedlet. Läkemedels-harts-komplexet implanteras sedan in i glaskroppen, där den långsamt frigör läkemedlet över timig. Metoden testades med användning av 2-amino-4-phosphonobutyrate (APB), en glutamatanalog som blockerar ljus respons av näthinnan. Det visades att APB långsamt släpptes från hartset, och kunde blockera näthinnans svar från 7 dagar efter implantation. Detta indikerar att långsam frisättning läkemedelsavgivning med användning av detta sampolymerharts är effektiv för behandling av näthinnan, och skulle kunna användas terapeutiskt med ytterligare provning.
Introduction
Behandlingen av kroniska sjukdomar som diabetes och högt blodtryck innebär många utmaningar, eftersom dessa sjukdomar kräver i allmänhet behandling för längre tid, ofta för livet. Detta har krävt utveckling av långsam frisättning läkemedel leveranssystem, vilket minskar behovet av frekvent dosering. Effektiviteten i dessa metoder långsam frisättning har visats genom utvecklingen av insulinpumpar, för att minska antalet insulininjektioner behövs för att behandla diabetes. Kroniska sjukdomar i ögat, särskilt de som påverkar dess inre skikten, kräver frekvent administrering av läkemedel genom invasiva procedurer. En sådan kronisk sjukdom som påverkar det mänskliga ögat är åldersrelaterad makuladegeneration (AMD). Det påverkar den centrala näthinnan, som är ett skikt av nervvävnad ligger på baksidan av ögat som ansvarar för initiering av syn. AMD är den vanligaste orsaken till blindhet i västvärlden 1. En särskild utmaning med behandling av retinal sjukdomar är att läkemedlet krävs för att nå denna djupa skikt i ögat, som ofta kräver invasiva metoder för leverans. Läkemedel administreras vanligen till den glasartade kammaren och näthinnan med användning av intravitreala injektioner. Men med varje injektion finns det en risk för injicering komplikationer, inklusive endoftalmit, näthinneavlossning, katarakt och glasartad blödning 2. Denna risk multipliceras med varje återföring av läkemedlet.
Att minska behovet av flera injektioner skulle vara en stor fördel vid behandling av AMD. För att behandla den våta formen av AMD, där ny kärltillväxt är ett kännemärke, är etablerad terapeutisk strategi för att rikta de endoteliala tillväxtfaktorer (VEGF) med användning av VEGF-hämmare 3. För närvarande är dessa levereras genom upprepade intravitreala injektioner. Likaså vid behandling av makulaödem, en vanlig komplikation av diabetesretinopati är kortikosteroider levereras genom upprepade injektioner Föreställningen om en långsam frisättning läkemedelsavgivningssystem beskrevs först med användning av en silikongummi fordon för att leverera små molekyler in i djurvävnader 5. Sedan dess har andra metoder långsam frisättning utvecklats för att leverera större molekyler, varav flera har testats i ögat. Partikel bärare, såsom biologiskt nedbrytbara mikrosfärer, poly-laktid-sam-glykolid (PLGA) nanopartiklar och fosfolipidvesiklar (liposomer) kan vara användbara som avgivningsvehiklar 6,7. PLGA nanopartiklar och liposomer har jämförts i en in vitro-miljö för deras förmåga att leverera mot cancer i hela sklera över tiden 7. Båda fordonen var effektiva i långsamt släppa drogerna. Men den studien endast genomförts i en in vitro miljö. Bochot et al. (2002) 8 testadeeffekten av liposomer för att leverera molekyler till näthinnan in vivo. De har visat att liposomer framgångsrikt leverera små oligonukleotider till kanin näthinnan. Författarna föreslog att liposomer skulle kunna vara fördelaktig vid behandling av retinala sjukdomar 8. Men arten av dessa vesiklar att flyta i glaskroppen betyder att de sannolikt kommer att sudda eller försämra synen 9. Okabe et al. (2003) 10 används icke biologiskt nedbrytbara polymerskivor som består av 33% eten-vinylacetat tillämpa beta-methasone i kaniner. De implanterade skivor i en skleral fickan och visade den effektiva frisättning av läkemedlet i glaskroppen och näthinnan i upp till en månad 10. Men i detta protokoll, implantatet var relativt stora och stela, och krävde en mer komplex operation inklusive en stor skleralt snitt och suturering. En tidigare studie undersökte tissue svar på olika polymera fordon genom att implantera dem i hornhinnan i kaninögon, och fann att eten och vinylacetat tvättas i alkohol inte orsaka inflammation eller irritation. Dessa komplex visade att upprätthålla leveransen av större föreningar i djurvävnader under längre perioder, en del mer än upp till 100 dagar beroende på drogen 11. En sådan typ av sampolymerharts har utvecklats industriellt i form av Elvax 40W (40 vikt% eten-vinylacetat sammonomerhalt med ett "W" amidtillsatts att förbättra pelletshantering). Denna sampolymer harts är en inert substans som är stabil både rum och kroppstemperatur. Det har inte visat sig orsaka allergier eller toxicitet i biologisk vävnad. Detta harts har faktiskt levererat en stor mängd narkotika i olika experimentella modeller som undersöker funktionerna av olika system, såsom bröstgångsystemet 12, den primära hörselbarken 13,14 </ Sup> och grodan visuella systemet 15. Detta harts har också använts i ögat för att avge läkemedel till utvecklings sköldpadda 16,17, kycklingembryo 18,19, och vuxen iller näthinnor 20. I rått centrala nervsystemet, har hartset endast använts i hjärnan 21-23, men dess användning i råtta öga har inte dokumenterats. Fördelarna med att använda denna sampolymerharts för att avge läkemedel långsamt till näthinnan jämfört med andra metoder, är att den är en stabil förening som inte orsakar inflammation eller irritation i ögat. Till skillnad från partikelbärare, skulle den läkemedels-harts-komplexet inte försämra synen efter implantation, eftersom det vanligen återstår på platsen för leverans i stället för flytande i glaskroppen. Det skulle endast kräva en enkel implantation process in i glaskroppen nära limbus i ögat, och skulle inte kräva suturering efter implantering. Nyligen har det funnits en växten i flera nya tillförselsystem, såsominkapslade cellteknologi (ECT) 24,25, hydrogeler 26, och mikrofilmer 27. Emellertid den metod som används i den aktuella studien för att förbereda och leverera läkemedel-harts-komplexet är både lätt att följa och billig, och därigenom vara mer fördelaktiga för användning i en grundforskning miljö. Utmaningen för att använda detta komplex att leverera långsiktiga läkemedelsbehandlingar är att bestämma den optimala koncentrationen av läkemedlet som kommer att maximera de terapeutiska fördelarna av att ha färre intravitreala injektioner. Denna uppsats syftar till att demonstrera användningen av läkemedels-harts-komplex för långtidsbehandling av den vuxna råttan näthinnan. Effekten av denna metod att förlösa testas med hjälp av glutamat analog 2-amino-4-phosphonobutyrate (APB) som drogen. APB blockerar ljuset respons av ON bipolära celler genom att härma glutamat, en endogen signalsubstans i näthinnan 28. När APB konkurrerar med glutamat för sin receptor, den blockerar light svar. APB har använts i fysiologiska studier för att kontrollera näthinnefunktion och mäta dess effekt med hjälp av elektrofysiologiska metoder såsom elektroretinografi (ERG). I tidigare studier har APB använts för både kortsiktiga 29 och långtidsbehandling av utvecklings näthinnan; den senare inblandad ger en singeldos via intraokulär injektion dagligen i 30 dagar 30. Samma mängd APB (0,092 mg i steril saltlösning, vid en koncentration av 50 | iM) användes för alla injektioner såsom föreslås i tidigare arbete 28,29,31. Vi valde APB att testa läkemedels-harts-komplex som en långsam-frigörande fordon för att avge läkemedel in i ögat. De metoder som beskrivs i denna studie liknar tidigare beskrivna metoder som rör planering av drogen-harts-komplexet 16,32; Men vi också specificera dess användning speciellt i vuxen råtta ögat. Efter kirurgisk implantation av APB belastade harts i ögat, var ERG utfördes för att fastställa om APB avskaffar retinal lätta svar, och därmed om APB har framgångsrikt ut i glaskroppen och näthinnan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla experiment som utförts var enligt ARVO uttalande för användning av djur i ögon och Vision Research, och med godkännande av universitetet i L'Aquila djuretikkommittén och Australian National University djurförsöks etikkommitté. Vuxna råttor (P100-200) användes i hela denna studie.
1. Förbered sampolymerharts Pellets
- Placera 20 Elvax 40W pellets i en liten glasbägare i dragskåpet.
- Fyll bägaren med 100% etanol säkerställer att täcka alla pellets.
- Täck bägaren med Parafilm och blöta pellets i 100% etanol i rumstemperatur i 7-10 dagar. OBS: Från detta steg framåt, använd inte metall eller plast för att hantera eller lagra hartsen.
2 Förbered Drug lösning Loading
- Lös drogen val i 0,1% dimetylsulfoxid (DMSO). Gör läkemedelslösningen upp till 40 l volym.Ladda hartset med tre gånger den koncentration av läkemedlet som skulle ges i en enda dos.
3 Förbered och Ladda Narkotikaharts Complex
- Överför 20 tvättade pellets till en annan liten glasbägare. Lös upp pelletsen i 4 ml diklormetan under cirka 45 min. Täck bägaren med Parafilm medan pellets upplösning.
- Bered en lösning av Snabb Grönt FCF genom upplösning i 0,1% DMSO till en koncentration av 0,001 mg / ml.
- Ta en pipett, och upprätta 40 pl läkemedelslösning som framställts tidigare. Ladda annan pipett med 40 pl Snabb grön lösning.
- Lägg de två lösningarna samtidigt i bägaren. Blanda snabbt med användning av en omrörningsstav av glas tills det gröna färgämnet är likformigt fördelad i hela blandningen.
- Omedelbart överföra bägaren på torris i 10 min för att snabbt frysa hartset.
- Skapa ett "avdunstningskammare" för att avdunsta lösningsmedlet. Fyll enstörre behållare upp till en tredjedel med kalciumsulfat småsten. Skapa en bra i småsten, och försiktigt placera bägaren i brunnen så att småsten nå upp till hälften av bägaren, för att stabilisera bägaren i kammaren.
- Täck den större utanför behållaren med Parafilm.
- Överför avdunstningskammaren till frysen. Förvara vid -20 ° C under 2-3 veckor.
4 Förbered Drug-hartskomplex för kirurgisk implantation
- Avlägsna avdunstningskammaren från frysen. Överför den fasta läkemedels-harts-block till en glasskål hölls på is.
- Med hjälp av ett mikroskop eller lupp, skär en bit ungefär 0,05 mm i diameter och 0,1 mm i längd från blocket med hjälp av en trefin eller stansverktyg.
- Vira Återstoden av blocket i frysttätt material (t.ex. aluminiumfolie) och hålls vid -20 ° C tills de behövdes.
5. Kirurgiskt Implant Drug-hartskomplex i Rat Eye
OBS: Lignokain Hydrochloride minimizes lokalt obehag.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Full-fältet elektroretinografi (ERG) användes för att detektera effekten av APB på näthinnan. Mer information om hur ERG utfördes, se följande studierna 33,34. I korthet, efter anesthetizing djuret ades en guldelektrod placeras på hornhinnan i ögat, och den referenselektrod placerades i främre hårbotten mellan ögonen, för att spela in den elektriska aktiviteten i retina. Stimuli genererades med hjälp av en elektronisk blixt och intensiteten varierade från 10-10 juni fotoisomerisering, som representerar antalet ljuskänsliga molekyler aktiveras per stav. I dessa experiment var ERG inspelningar tagen 1 och 7 dagar efter förfarandet. Det högra ögat på varje djur implanterades med läkemedels-harts-komplexet, medan den karl vänstra ögat användes som en icke behandlad intern kontroll.
Figur 1 visar förändringarna i amplituden för den b-vågen med en ökning av fotoisomerisering per stav(Φ). I kontroll ögat, ökar amplituden av b-vågen som för blixtintensitet ökar. I figur 1 A, är retinala svars inspelningar ges 1 dag efter implantation. Den implanterade öga visade ett liknande amplitud mönster till kontrollögat. Amplituden skillnaden mellan de två ögonen blev signifikant olika vid 10 6 φ (p <0,0001). Detta tyder på att i detta tidiga skede, inte drogen-harts-komplexet inte har en effekt på retinal svar fram till att nå högre blixtintensitet. Figur 1B visar förändringar i ERG svar vid 7 dagar efter implantation. The b-vågen slopas på alla nivåer av blixtintensitet i den implanterade ögat, i jämförelse med kontrollögat, som har amplituder som är jämförbara med de 1 dag inspelningar. Detta är signifikant olika för alla amplituder för den inopererade öga på en dag (p <0,0001). Detta visar att näthinnans svar har avskaffats av (en vecka) efter implantatipå den läkemedels-harts-komplexet in i ögat.
Figur 1. Amplituden för b-vågen vid en dag och en vecka efter implantationen av läkemedels-harts-komplexet. Till båda panelerna är styr öga visas i apelsin (fyrkanter), medan den implanterade öga visas i grönt ( cirklar). Symbolen * betecknar signifikans vid denna punkt mellan de två ögonen, där p <0,0001. För alla grupper, n = 5. (A) Amplituden för b-vågen en dag efter implantation av läkemedels-harts-komplexet in i ögat. Amplituden för b-vågen i förhållande till blixtintensitet (fotoisomerisering per spö φ) är en indikator på retinal respons. Det finns ingen signifikant skillnad i b-vågsamplitud mellan ögonen på alla flash intensiteter utom vid 10 6 φ, där den implanterade ögathar en lägre amplitud. (B) Amplituden för b-vågen en vecka (7 dagar) efter implantering. Amplituderna spelats in från båda ögonen är signifikant olika på alla flash intensiteter. I den implanterade näthinnan, var amplituden b-vågen inte mätbar vid någon stimulans intensiteter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Detta papper demonstrerade användningen av ett läkemedels-harts-komplex för den långsam-frisättning av läkemedel till näthinnan. Vi syftar till att presentera en metod som är relativt billig och lätt att applicera i en liten djurmodell.
Med tanke på att funktionen av APB är att fungera som en glutamat analog, kommer det att blockera retinal respons i ögat. Resultaten visar att APB orsakade blockering av retinala responsen av en vecka implantationen. Detta tyder på att APB framgångsrikt släpptes in i glaskroppen och näthinnan, och att dess effekt var begränsad till ögat som läkemedels-harts-komplexet implanteras i. Den fulla effekten av läkemedlet blev uppenbart en vecka efter implantation (Figur 1B). Figur 1A visar att vid en dag efter implantation, en betydande minskning av b-vågen var bara närvarande vid 10 6 φ intensitet i den implanterade ögat. Detta kan tyda på att i detta tidiga tidpunkt, barakon-vägen, som svarar högre ljusintensitet, påverkades. För att bestämma hur lång tid att hartset kan leverera APB till näthinnan bör ytterligare tidpunkter undersökas. Det föreslås att inspelningar på ytterligare tidpunkter inom 0-7 dagar span bör vidtas, exempelvis vid 3 och 5 dagar efter implantation, för att avgöra exakt när näthinnans svar är helt avskaffas. Dessutom bör inspelningar tas efter 7 dagar, för att avgöra hur länge APB släpps för. Detta skulle vara uppenbart eftersom näthinnans svar skulle fortsätta att avskaffas om APB kontinuerligt släpps långsamt in i glaskroppen.
I denna studie var den läkemedels-harts-komplexet befunnits vara säkra för leverans till näthinnan. APB löstes i 0,1% DMSO. Vid koncentrationer lika med eller högre än 0,6%, kan DMSO orsaka retinal toxicitet. Emellertid 0,1% DMSO har befunnits vara ett säkert vehikel för leverans av föreningar tillråtta ögat 35, och denna koncentration användes i alla experiment i denna studie. Implantaten sattes in transclerally in i glaskroppen vid ora serrata. Implantaten observerades ligga kvar på ora serrata i kryosnitt av råtta ögat, som samlades in efter att ERG inspelningarna gjordes. Denna positionering av implantatet garanterar att läkemedels-harts-komplexet orsakar inte synskada. Denna metod som omfattar läkemedels-harts-komplexet har testats med andra föreningar (publicerings förberedelse), och det visade sig att någon strukturell eller funktionell skada på ögat observerades upp till två månader efter implantation. Totalt 60 djur implanterades, och i 90% av fallen implantatläget var oförändrad.
Flera modifieringar kan göras till den teknik vid behov. I dessa experiment var tre gånger koncentrationen av en enda dos av APB laddas in i hartset (50 | iM x 3 = 150 | iM) och denna should användas som en riktlinje för att framställa läkemedelslösningen för lastning. Emellertid är den effektiva koncentrationen av läkemedlet i hartset variabel och bör testas och ändras i enlighet därmed. De tidpunkter då analysen bedrivs kan också ändras, för att avgöra hur länge plasten är effektiva på att släppa drogen. I dessa experiment visade det sig att den stabila effektiva dosen av drogen avges genom läkemedels-harts-komplex under minst en vecka, så rekommenderas det att analys av vävnaden utföres åtminstone en vecka efter implantering. Under läkemedelsladdning steget invägdes Snabb Grönt används för att säkerställa att blandningen hade homogeniserades. Andra biologiskt säkra färg färgämnen kan användas som ett alternativ till Snabb Green, att visualisera likformighet av läkemedlet i hartset. En begränsning med denna metod är att den Snabb Grönt färgämne är det enda måttet på jämn blandning. Denna teknik kan också testas med hjälp av alternativa djurmodeller och droger, med endast mindre annonsanpassningar till metoden. Om en större mängd av läkemedlet som skall levereras, kan en större implantatstorlek vara nödvändig. Om det lyckas i dessa modeller, kan detta sampolymerharts betraktas som ett terapeutiskt alternativ för att leverera droger långsamt till näthinnan för att ha en fortsatt effekt över tiden.
Det finns flera viktiga steg i protokollet där extra försiktighet bör iakttas. Plast och metall instrument bör inte användas under hela syntesen och hantering av hartset. Detta förhindrar förorening av polymeren, som diklormetan kan lösa upp plast och korrodera metall. Korrekt torrhet i läkemedels-harts blocket bör uppnås innan den används för kirurgisk implantation. Se till att bägaren innehållande läkemedlet och hartset är fullt exponerade för kalciumsulfat, för att avdunsta lösningsmedlet. Alternativt kan en lyofilisator användas för att frystorka den läkemedels-harts. Drogen-hartsblocket är klart för användning när lösningsmedlet har avdunstat helt, ochendast en fast blåaktig blocket kvar i bägaren. Vid kapning en bit från blocket för implantation bör varje bit endast beredas omedelbart före operationen eftersom bitarna är mycket små och är svåra att lagra. En trephine eller stansverktyg bör användas för att skära bitar av samma storlek, så att varje del innehåller ungefär samma mängd av läkemedlet. Slutligen när du sätter pjäsen i sår som gjorts av 25 G nål, använder fina, spetsiga pincett för att försiktigt styra bit in i såret. En operationsmikroskop eller hög effekt lupp bör användas som ett visuellt stöd.
Endast hydrofila läkemedel och föreningar har testats med denna metod. Läkemedels-harts-komplex De har inte visat någon oönskad utfällning eller biproduktbildning, när läkemedlet blandades med polymeren och diklormetan. Det föreslås att med varje nytt läkemedel, koncentrationen, halveringstiden för effekt, och eventuella reaktioner med hartsblandningen börtestas av användaren för att bestämma om metoden är lämplig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att utlämnande.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Elvax 40W Pellets | Du Pont, DE, USA | ||
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA | ||
| 2-amino-4-phosphonobutyric acid (APB) | Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA | A1910 | |
| Dichloromethane | Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA | 34856 | |
| Fast Green FCF | Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA | ||
| Drierite, calcium sulfate | Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA | 238910 | |
| Ketamine, Ilium Ketamil | Troy Laboratories Pty. Ltd., NSW, Australia | ||
| Xylazine, Ilium Xylazil-20 | Troy Laboratories Pty. Ltd., NSW, Australia | ||
| Atropine sulphate, Minims eye drops | Bausch & Lomb Pty. Ltd., NSW, Australia | ||
| Tetracaine hydrochloride, Minims eye drops | Bausch & Lomb Pty. Ltd., NSW, Australia | ||
| Chloramphenicol, Chlorsig ointment | Aspen Pharma Pty. Ltd., NSW, Australia | ||
| Pentobarbital, Lethabarb | Virbac Australia Pty. Ltd., NSW, Australia | ||
| Lidocaine hydrochloride, Ilium Lignocaine-20 | Troy Laboratories Pty. Ltd., NSW, Australia | ||
| Uni-Core Punch Tool | World Precision Instruments Inc., FL, USA | ||
| Curved Forceps | World Precision Instruments Inc., FL, USA | ||
| Operating Microscope, Zeiss OPMI 99 | Zeiss, West Germany | ||
| 25 G Insulin needle | Terumo Corp., Tokyo, Japan | ||
| Dumont tweezers | World Precision Instruments Inc., FL, USA |
References
- Access Economics, The global economic cost of visual impairment. AMD Alliance International. , 26-27 (2010).
- Jager, R., Aiello, L., Patel, S., Cunningham, E. Risks of intravitreous injection: A comprehensive review. Retina. 24 (5), 676-698 (2004).
- Rosenfeld, P. J., et al. Ranibizumab for neovascular age-related macular degeneration. New England Journal of Medicine. 355 (14), 1419-1431 (2006).
- Cunningham, M. A., Edelman, J. L., Kaushal, S. Intravitreal steroids for macular edema: The past, the present, and the future. Survey of Ophthalmology. 53 (2), 139-149 (2008).
- Folkman, J., Long, D. M. The use of silicone rubber as a carrier for prolonged drug therapy. Journal of Surgical Research. 4 (3), 139-142 (1964).
- Herrero-Vanrell, R., Refojo, M. F. Biodegradable microspheres for vitreoretinal drug delivery. Advanced Drug Delivery Reviews. 52 (1), 5-16 (2001).
- Kim, E., et al. Human scleral diffusion of anticancer drugs from solution and nanoparticle formulation. Pharmaceutical Research. 26 (5), 1155-1161 (2009).
- Bochot, A., et al. Intravitreal delivery of oligonucleotides by sterically stabilized liposomes. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43 (1), 253-259 (2002).
- Bochot, A., Fattal, E. Liposomes for intravitreal drug delivery: A state of the art. Journal of Controlled Release. 161 (2), 628-634 (2012).
- Okabe, K., Kimura, H., Okabe, J., Kato, A., Kunou, N., Ogura, Y. Intraocular tissue distribution of betamethasone after intrascleral administration using a non-biodegradable sustained drug delivery device. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44 (6), 2702-2707 (2003).
- Langer, R., Folkman, J. Polymers for the sustained release of proteins and other macromolecules. Nature. 263 (5580), 797-800 (1976).
- Silberstein, G. B., Daniel, C. W. Elvax 40P implants: Sustained, local release of bioactive molecules influencing mammary ductal development. Developmental Biology. 93 (1), 272-278 (1982).
- Smith, A. L., et al. An investigation of the role of auditory cortex in sound localization using muscimol-releasing Elvax. European Journal of Neuroscience. 19 (11), 3059-3072 (2004).
- Anomal, R., De Villers-Sidani, E., Merzenich, M. M., Panizzutti, R. Manipulation of BDNF signaling modifies the experience-dependent plasticity induced by pure tone exposure during the critical period in the primary auditory cortex. PloS one. 8 (5), e64208 (2013).
- Tu, S., Butt, C. M., Pauly, J. R., Debski, E. A. Activity-dependent regulation of substance P expression and topographic map maintenance by a cholinergic pathway. The Journal of Neuroscience. 20 (14), 5346-5357 (2000).
- Sernagor, E., Grzywacz, N. M. Influence of spontaneous activity and visual experience on developing retinal receptive fields. Current Biology. 6 (11), 1503-1508 (1996).
- Leitch, E., Coaker, J., Young, C., Mehta, V., Sernagor, E. GABA type-A activity controls its own developmental polarity switch in the maturing retina. The Journal of Neuroscience. 25 (19), 4801-4805 (2005).
- Park, C. M., Hollenberg, M. J. Basic fibroblast growth factor induces retinal regeneration in vivo. Developmental Biology. 134 (1), 201-205 (1989).
- Whitsel, A. I., Johnson, C. B., Forehand, C. J. An in ovo chicken model to study the systemic and localized teratogenic effects of valproic acid. Teratology. 66 (4), 153-163 (2002).
- Prusky, G. T., Ramoa, A. S. Novel method of chronically blocking retinal activity. Journal of Neuroscience Methods. 87 (1), 105-110 (1999).
- Colonnese, M. T., Constantine-Paton, M. Chronic NMDA receptor blockade from birth increases the sprouting capacity of ipsilateral retinocollicular axons without disrupting their early segregation. The Journal of Neuroscience. 21 (5), 1557-1568 (2001).
- Oliveira-Silva, P., et al. Matrix metalloproteinase-9 is involved in the development and plasticity of retinotectal projections in rats. Neuroimmunomodulation. 14 (3-4), 144-149 (2007).
- Trindade, P., et al. Evidence for a role of calcineurin in the development of retinocollicular fine topography. Neuroscience Letters. 487 (1), 47-52 (2011).
- Kauper, K., et al. Two-year intraocular delivery of ciliary neurotrophic factor by encapsulated cell technology implants in patients with chronic retinal degenerative diseases. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (12), 7484-7491 (2012).
- Birch, D. G., Weleber, R. G., Duncan, J. L., Jaffe, G. J., Tao, W. Randomized of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa. American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 283-292 (2013).
- Rauck, B. M., et al. Biocompatible reverse thermal gel sustains the release of intravitreal bevacizumab in vivo. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (1), 469-476 (2014).
- Liu, Y. C., Peng, Y., Lwin, N. C., Venkatraman, S. S., Wong, T. T., Mehta, J. S. A biodegradable, sustained-released, prednisolone acetate microfilm drug delivery system effectively prolongs corneal allograft survival in the rat keratoplasty model. PloS one. 8 (8), e70419 (2013).
- Slaughter, M. M., Miller, R. F. 2-amino-4-phosphonobutyric acid: a new pharmacological tool for retina research. Science. 211 (4478), 182-185 (1981).
- Bodnarenko, S., Jeyarasasingam, G., Chalupa, L. Development and regulation of dendritic stratification in retinal ganglion cells by glutamate-mediated afferent activity. The Journal of Neuroscience. 15 (11), 7037-7045 (1995).
- Deplano, S., Gargini, C., Maccarone, R., Chalupa, L. M., Bisti, S. Long-term treatment of the developing retina with the metabotropic glutamate agonist APB induces long-term changes in the stratification of retinal ganglion cell dendrites. Dev Neurosci. 26 (5-6), 396-405 (2004).
- Horton, J., Sherk, H. Receptive field properties in the cat's lateral geniculate nucleus in the absence of on-center retinal input. The Journal of Neuroscience. 4 (2), 374-380 (1984).
- Smith, A. L., Cordery, P. M., Thompson, I. D. Manufacture and release characteristics of Elvax polymers containing glutamate receptor antagonists. Journal of Neuroscience Methods. 60 (1), 211-217 (1995).
- Gargini, C., Bisti, S., Demontis, G. C., Valter, K., Stone, J., Cervetto, L. Electroretinogram changes associated with retinal upregulation of trophic factors: observations following optic nerve section. Neuroscience. 126 (3), 775-783 (2004).
- Maccarone, R., Di Marco, S., Bisti, S. Saffron supplement maintains morphology and function after exposure to damaging light in mammalian retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49 (3), 1254-1261 (2008).
- Tsai, T., Bui, B., Vingrys, A. Dimethyl sulphoxide dose-response on rat retinal function. Documenta Ophthalmologica. 119 (3), 199-207 (2009).
