Abstract
माउस मॉडल व्यवहार तंत्रिका विज्ञान के क्षेत्र में तेजी से लोकप्रिय हो, और विशेष रूप से प्रयोगात्मक स्ट्रोक के अध्ययन में किया है. मॉडल अग्रिम के रूप में, यह माउस के लिए विशेष रूप से संवेदनशील व्यवहार के उपायों को विकसित करने के लिए महत्वपूर्ण है. वर्तमान प्रोटोकॉल स्ट्रोक के माउस मॉडल में इस्तेमाल के लिए एक कुशल मोटर कार्य का वर्णन करता है. पास्ता मैट्रिक्स सटीक परिणाम डेटा इकट्ठा करने और प्रतिपूरक रणनीतियों (यानी, गैर उपयोग सीखा) और पुनर्वास प्रशिक्षण ध्यान केंद्रित सहित मानव नैदानिक घटना की नकल करने के लिए अंग उपयोग में हेरफेर करने के लिए प्रयोगकर्ताओं कि परमिट एक बहुमुखी और संवेदनशील व्यवहार परख के रूप में कार्य कार्यों तक पहुंचना. Neuroanatomical उपकरण के साथ संयुक्त, इस कार्य को भी स्ट्रोक के बाद समारोह (या अभाव क्या है) के व्यवहार वसूली का समर्थन करने वाले तंत्र का पता लगाने के लिए शोधकर्ताओं ने परमिट. कार्य फू के विषय में कई शोध प्रश्नों के लिए प्रशिक्षण और परीक्षण के विकल्प की एक किस्म की पेशकश, सरल और सस्ती स्थापित करने के लिए और आचरण दोनों हैचोट के बाद nctional परिणाम. कार्य स्ट्रोक के माउस मॉडल को लागू किया गया है, हालांकि यह भी अन्य ऊपरी सिरा चोट मॉडल में कार्यात्मक परिणाम की पढ़ाई में फायदेमंद हो सकता है.
Introduction
माउस मॉडल की वजह से भाग में अपनी सुविधा और सामर्थ्य है, साथ ही अन्य अनुप्रयोगों के बीच में vivo इमेजिंग के लिए उपयुक्त हैं कि ट्रांसजेनिक लाइनों की उपलब्धता को प्रयोगात्मक स्ट्रोक अनुसंधान के लिए तेजी से लोकप्रिय हो गए हैं. इस प्रयोगात्मक मॉडल में लोकप्रियता बढ़ के साथ चोट के बाद कार्यात्मक परिणाम की संवेदनशील व्यवहार के मूल्यांकन विकसित करने में रुचि भी 1-7 बढ़ गया है. मानव स्ट्रोक बचे द्वारा प्रयोग किया जाता पुनर्वास और प्रतिपूरक रणनीतियों दोनों की नकल है कि जानवर प्रशिक्षण प्रोटोकॉल का विकास सफलतापूर्वक क्लिनिक 8 में उपयोग करने के लिए प्रयोगात्मक जानवरों के अध्ययन से निष्कर्ष अनुवाद करने की क्षमता में सुधार. टास्क (PMRT) तक पहुँचने पास्ता मैट्रिक्स पर मोटर कौशल प्रशिक्षण पहले ज्ञानेन्द्रिय प्रांतस्था 3 की इस्कीमिक अपमान निम्नलिखित मोटर कौशल परिणाम का एक संवेदनशील व्यवहार मूल्यांकन के रूप में स्थापित किया गया है.
प्राथमिक हित में से एकस्ट्रोक अनुसंधान चिंताओं पुनर्वास और अपमान के बाद समारोह की बेहतर वसूली को बढ़ावा देने कि व्यवहार रणनीतियों के विकास और समझ में है. वर्तमान में, मानव में पुनर्वास रणनीति अधूरी वसूली 8 में परिणाम. इसके अलावा, पुनर्वास चिकित्सक पूरी तरह से उनके प्रभावित अंग (एस) के समारोह में हासिल करने के लिए अपनी क्षमता को कमजोर कर सकते हैं कि स्ट्रोक बचे वसूली के दौरान विकसित कि प्रतिपूरक रणनीति का मुकाबला करना होगा. उदाहरण के लिए, ऊपरी सिरा समारोह को प्रभावित करता है कि एकतरफा स्ट्रोक के बाद, मनुष्य अपने कम प्रभावित अंग 9, 10 पर निर्भरता को विकसित करते हैं. अल्पावधि में कार्य करने के लिए एक व्यक्ति की क्षमता में सुधार करते हुए, इस प्रभावित अंग की गैर उपयोग सीखा पशु मॉडल 11-13 में प्रदर्शन के रूप में अपने अंतिम वसूली संभावित बाधा हो सकती है. पशुओं में इन निष्कर्षों को मनुष्य के 14 में बाधा प्रेरित आंदोलन चिकित्सा के विकास और उपयोग के बारे में सूचित करने के लिए मदद की है. पशु मॉडल beneficia हैंशोधकर्ताओं आगे बढ़ाना कि neurobiological तंत्र का पता लगाने और समारोह की वसूली को बढ़ावा देने के लिए अनुमति देकर पुनर्वास रणनीतियों में सुधार के लिए एल. स्ट्रोक के बाद समारोह का एक प्रभावी व्यवहार मूल्यांकन होने के अलावा, PMRT ज्ञानेन्द्रिय स्ट्रोक 15 के बाद सुधार कार्यात्मक परिणाम को बढ़ावा देने के लिए एक प्रभावी पुनर्वास की रणनीति के रूप में स्थापित किया गया है. PMRT भी प्रभावित अंग की प्रभावी ढंग से नकल सीखा गैर उपयोग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और इसलिए प्रारंभिक बावजूद कार्यात्मक वसूली में सुधार हो सकता है कि व्यवहार जोड़तोड़ में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं पर निर्भरता कम प्रभावित अंग 13 पर.
PMRT का निर्माण पहले से 3 में वर्णित किया गया है. संक्षेप में, पहुँचने के चैम्बर एक खुला ऊपर और नीचे के साथ (20 सेमी लंबा 15 सेमी लंबा, और 8.5 सेमी चौड़ा) चार Plexiglas दीवारों से बना है. कार्य करता है कि चैंबर के सामने दीवार के नीचे आधार से देने के लिए एक केंद्र भट्ठा (13 सेमी लंबा और 5 मिमी चौड़ा) हैतक पहुँचने एपर्चर (चित्रा 1 ए) के रूप में. पास्ता मैट्रिक्स ब्लॉक की गहराई के माध्यम से पूरी तरह से drilled 1 मिमी व्यास छेद के साथ (8.5 सेमी लंबी 5 सेमी चौड़ा और 1.5 सेमी लंबा) एक भारी शुल्क प्लास्टिक ब्लॉक है. 260 छेद की कुल प्रत्येक छेद (चित्रा 1 बी) के बीच 2 मिमी के साथ तक पहुँचने खिड़की से 2 मिमी शुरुआत कर रहे हैं. पास्ता मैट्रिक्स सूखी, खड़ी उन्मुख पास्ता टुकड़े उजागर पास्ता टुकड़ा के लगभग आधे के साथ मैट्रिक्स चरण की पूरी गहराई के माध्यम से विस्तार है कि इस तरह बनाया गया है. भूमि के ऊपर प्लास्टिक या cardstock के एक हटाने योग्य टुकड़ा आकार में कटौती और मैट्रिक्स के नीचे करने के लिए सुरक्षित रूप से टेप किया जाना चाहिए. इस दौरान परिवहन मैट्रिक्स से बाहर गिरने से पास्ता टुकड़े को रोकता है और टूट पास्ता टुकड़े की आसान हटाने के लिए अनुमति देता है.
PMRT सटीक परिणाम डेटा इकट्ठा करने और नैदानिक घटना की नकल करने के लिए अंग उपयोग में हेरफेर करने के लिए प्रयोगकर्ताओं कि परमिट एक बहुमुखी और संवेदनशील व्यवहार परख है. एक व्यवहार ओ के रूप मेंutcome उपाय, PMRT प्रयोगकर्ताओं अधिक सही रोधगलितांश आकार 3, 16 के पारंपरिक उपाय की तुलना में एक पुनर्वास रणनीति की प्रभावशीलता को प्रतिबिंबित व्यवहार डेटा एकत्र करने के लिए अनुमति देता है. एक व्यवहार हेरफेर के रूप में, PMRT प्रयोगकर्ताओं में चूहों में ऊपरी अंग उपयोग को नियंत्रित करने के लिए अनुमति देता है पुनर्वास के नैदानिक अनुभव (यानी प्रभावित अंग प्रशिक्षण) या सीखा गैर उपयोग (यानी कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण) की नकल करने के लिए. Neuroanatomical तरीकों के साथ संयुक्त, PMRT स्ट्रोक के बाद प्रतिपूरक अंग इस्तेमाल के बाद समारोह या maladaptive plasticity के व्यवहार वसूली का समर्थन करने वाले तंत्र का पता लगाने के लिए एक अवसर के साथ शोधकर्ताओं प्रदान करता है. PMRT आगे इस तरह के घाव मस्तिष्क की चोट के रूप में मस्तिष्क की चोट और ऊपरी सिरा हानि के अन्य murine मॉडल, के लिए लागू किया जा सकता है. PMRT का एक अन्य लाभ यह है कि अपनी सामर्थ्य है. कार्य के लिए आवश्यक उपकरण घर में काफी हद तक निर्माण किया जा सकता है, डेटा संग्रह करता हैअंतरिक्ष या वित्तीय संसाधनों की एक बड़ी राशि की आवश्यकता होती है, और कार्य मज़बूती से डेटा एकत्र करने के लिए स्नातक छात्रों के लिए काफी सरल है नहीं. इसके अलावा, PMRT भी छोटे व्यवहार घाटे 3, 13 के लिए संवेदनशील है. इस प्रोटोकॉल, मोटर कौशल सीखने का आकलन चोट के बाद व्यवहार वसूली को बढ़ावा देने, और स्ट्रोक की स्थापना की एक murine मॉडल में नकल सीखा गैर उपयोग घटना के लिए एक सरल और प्रभावी तरीका प्रदान करता है.
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Protocol
निम्न विधियों ऑस्टिन में टेक्सास विश्वविद्यालय और इलिनोइस Wesleyan पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार कर रहे हैं. यह शोधकर्ताओं दस्ताने पहनना या किसी भी प्रयोगशाला पशु के साथ व्यवहार प्रशिक्षण में उलझाने जब उचित सावधानियों (हाथ धोने से पहले और बाद) ले कि या तो सिफारिश की है. सर्जरी के लिए और के दौरान तैयारी में पशुओं को संभालने जब दस्ताने पहने किया जाना चाहिए.
1. आदी होना और खाद्य प्रतिबंध
नोट: PMRT एक भूख बढ़ाने वाला कार्य है, यह तक पहुँचने प्रतिक्रिया को प्रेरित करने और प्रशिक्षण सत्र के दौरान तृप्ति को रोकने के क्रम में पूर्व प्रशिक्षण की शुरुआत के लिए खिलाने की राशि और समय को सीमित करने के लिए फायदेमंद है.
- पूर्व कार्य प्रशिक्षण की शुरुआत करने के लिए कम से कम 1 सप्ताह शुरुआत एक प्रतिबंधित खिला समय पर प्लेस चूहों. वें के रूप में निर्धारित कर रहे हैं जो मुक्त खिला वजन, स्थापित करने से पहले खाद्य प्रतिबंध की शुरुआत करने के लिए प्रत्येक माउस वजनप्रतिबंधित खिलाने के पहले दिन पर प्रत्येक जानवर का ई भार.
- (उदाहरण के लिए एक पिंजरे में रखे 4 चूहों हैं, तो पिंजरे दैनिक भोजन के 10 ग्राम प्राप्त होगा) प्रत्येक माउस प्राप्त ~ दिन प्रति मानक कृंतक चाउ की 2.5 ग्राम के साथ, एक बार दैनिक चूहों फ़ीड. खिला, प्रत्येक दिन एक ही समय पर होता है अधिमानतः समय पर दैनिक प्रशिक्षण सत्र समाप्त होने की उम्मीद कर रहे हैं सुनिश्चित करें.
- कोई माउस उनके मुक्त खिला वजन के 10% से अधिक खो देता है यह सुनिश्चित करने के लिए नियमित रूप से जानवरों के वजन. नोट: उचित वजन के रखरखाव को बढ़ावा देने के हिसाब से दैनिक भोजन मात्रा समायोजित करें. वे परिपक्व के रूप में चूहों आम तौर पर स्थिर खाद्य प्रतिबंध चूहे PMRT प्रशिक्षण / मूल्यांकन की अवधि के लिए खाद्य प्रतिबंध पर रहना भी साथ वजन.
- उनके घर के पिंजरे में पास्ता के छोटे टुकड़े (1.6 सेमी) में कटौती करने के लिए पशुओं को बेनकाब neophobic प्रतिक्रियाओं पर काबू पाने के क्रम में पूर्व प्रशिक्षण के लिए कई बार. नोट: आमतौर पर जोखिम के 5-10 दिनों माउस प्रावधानों के अनुसार लगभग 4 टुकड़ों के साथ, पर्याप्त हैंप्रत्येक खिलाने में ded.
- एक रेजर ब्लेड का उपयोग कर आकार (3.2 सेमी) करने के लिए पास्ता टुकड़े काटें. नोट: यह पास्ता टुकड़े की एक अतिरिक्त पिछले दिन के प्रशिक्षण और एक कंटेनर में संग्रहीत अप्रयुक्त टुकड़े शुरुआत करने के लिए काट रहे हैं सिफारिश की है. Capellini पास्ता मैट्रिक्स को भरने के लिए प्रयोग किया जाता है. पास्ता के रूप में विभिन्न ब्रांडों पास्ता तोड़ने के लिए चूहों के लिए मैट्रिक्स या आवश्यक बल की राशि में पास्ता की स्थिरता को प्रभावित कर सकता है, जो बनावट और व्यास में भिन्नता है, यह DeCecco ब्रांड पास्ता प्रशिक्षण और परीक्षण के दौरान इस्तेमाल किया जा सिफारिश की है.
- मैट्रिक्स में सभी उपलब्ध छेद (चित्रा 1 ए) भरने, पास्ता मैट्रिक्स में कच्चा Capellini पास्ता टुकड़े रखें.
- एक सामने रखा पूरा पास्ता मैट्रिक्स (चित्रा 1 ए) और परीक्षण कक्ष के तल पर खाने के लिए पास्ता के कई टुकड़े के साथ परीक्षण के चैम्बर के लिए चूहों आदत डालना. 5-10 मिनट के 3 सत्रों के लिए चूहों आदत डालना. नोट: चूहे habitua दौरान पास्ता के लिए तक पहुँचने के लिए प्रोत्साहित नहीं किया जाना चाहिएtion प्रशिक्षण. चूहे आमतौर पर एपर्चर के माध्यम से इसे सूँघने से पहुँचने के चैंबर के बाहर स्थित पास्ता में रुचि दिखाने लगते हैं. यह अगर वांछित एक ही कक्ष में दो पिंजरे साथी आदत डालना संभव है, लेकिन चूहों के आकार का है और व्यक्तिगत रूप से प्रशिक्षित किया जाना चाहिए. प्रत्येक जानवर व्यवहार तंत्र में रखा गया है पहले और बाद में सभी सतहों 70% इथेनॉल या एक समान, सुरक्षित disinfecting के समाधान के साथ साफ किया जाना चाहिए.
2. आकार देने पहुंच
- 3-5 बार दैनिक को आकार देने परीक्षणों से अधिक तक पहुंच को आकार देने के द्वारा प्रत्येक जानवर के पसंदीदा अंग निर्धारित करते हैं. 10 मिनट या पहले से होता है जो 10 बार की कुल तक पहुँचने के लिए चूहों की अनुमति.
- आदी होना प्रशिक्षण (चित्रा 1 ए) के रूप में चैंबर के सामने एक पूर्ण पास्ता मैट्रिक्स के साथ परीक्षण कक्ष में अलग - अलग चूहों रखें.
- अलग से अधिकार के साथ पहुंचता है और छोड़ दिया अंगों की संख्या denoting, प्रत्येक अंग के साथ पहुंचता की संख्या रिकॉर्ड. विस्तार के रूप में एक पहुंच परिभाषित करेंकलाई चैंबर के विमान टूट जाता है कि इस तरह के पहुँचने के छेद के माध्यम से अंग की; पहुंच की ओर निर्देशित या पास्ता के साथ संपर्क बनाने के लिए किया जा करने के लिए यह आवश्यक नहीं है.
- तक पहुँचने के लिए अनिच्छुक हैं कि चूहों को प्रोत्साहित करने के लिए पहुँच रहा एपर्चर के माध्यम से सिर्फ सदन के अंदर पास्ता के कई टुकड़े पकड़. माउस इस प्रकार पीछे हटते पास्ता टुकड़े के बाद तक पहुंचने के लिए उन्हें प्रोत्साहित करने, ब्याज (जैसे सूँघने, काट) से पता चलता है जब पास्ता टुकड़े बाहर ड्रा. चूहों शुरू में शुष्क पास्ता में रुचि नहीं दिखाते हैं, तो उन्हें और अधिक स्वादिष्ट बनाने के लिए गर्म पानी के एक छोटे कप में पास्ता टुकड़े के सुझावों गीला.
- एक माउस एक भी अंग के साथ अपने दैनिक पहुंचता का 70% की एक न्यूनतम दर्शाती है जब अंग वरीयता निर्धारण करते हैं. इस तक पहुँचने कार्यों की 17 प्रशिक्षण भाग के दौरान मनाया सीखने की मात्रा को सीमित कर सकते हैं, जानवरों के आकार पर नहीं करते. चूहों के आकार का है एक बार PMRT प्रशिक्षण शुरू. नोट: प्रशिक्षण के रूप में जल्द ही नेक्स के रूप में शुरू किया जा सकता हैटी दिन, लेकिन यह आकार देने और प्रशिक्षण प्रक्रियाओं के बीच कई दिनों के इंतजार के लिए भी स्वीकार्य है.
3. तक पहुंचना प्रशिक्षण
- ट्रेन चूहों PMRT पर प्रवीणता स्थापित करने के क्रम में पूर्व अपमान करने के लिए एक बार दैनिक. नोट: प्रत्येक परीक्षण जो भी पहले होता है 15 मिनट या (सफल और असफल) पर्यवेक्षक द्वारा गिना 100 तक पहुँच, की एक अधिकतम के होते हैं. चूहे ही उनके पसंदीदा अंग के साथ तक पहुँचने के लिए प्रशिक्षित किया जाता है. एक अधिक गहन प्रशिक्षण प्रतिमान 18 वांछित है अगर चूहे प्रति दिन दो परीक्षणों को बर्दाश्त नहीं करेगा.
- फ्रंट (चित्रा 1 बी) में रखा एक आधा भरा मैट्रिक्स के साथ परीक्षण कक्ष में चूहों रखें. ट्रेन चूहों चूहों उनके शरीर के midline के पार पहुंच बाद वरीय अंग को मैट्रिक्स contralateral का ही पक्ष भरने के द्वारा अपने पसंदीदा अंग साथ ही तक पहुँचने के लिए. एस नहीं होगा जो इस अंग (साथ पहुंच प्रयास को हतोत्साहित करने के क्रम में न भरे unpreferred अंग को इसी मैट्रिक्स के हिस्से को छोड़ दोuccessful वे पास्ता तक पहुँचने) और पसंदीदा अंग साथ ही पहुँचने के लिए प्रोत्साहित नहीं कर सकते हैं.
- यह चूहों को सफलतापूर्वक प्रारंभिक प्रशिक्षण सत्र के दौरान टुकड़ों को तोड़ने में मदद करने के लिए मैट्रिक्स में है, जबकि पास्ता पर दबाव की एक छोटी राशि रखें. माउस के लिए पास्ता टुकड़े मत तोड़ो. हल्के से पीछे एक या दो पास्ता टुकड़े पकड़ और इरादा पहुँचने के लक्ष्य को सीधा करके इस लक्ष्य को हासिल. समर्थन की यह छोटी राशि वे शुरू में काम सीख रहे हैं के रूप में चूहों को काबू करने के लिए काफी लचीला और मुश्किल है जो पतली पास्ता, स्थिर में मदद करता है.
- पहुँचता है, सफल पहुंचता की संख्या, और सफल पहुंचता के स्थानों की कुल संख्या रिकार्ड. सफल पहुँचता है, एपर्चर के माध्यम से पहुँच पास्ता का एक टुकड़ा ले लो, और मैट्रिक्स से इसे हटाने के लिए पास्ता के टुकड़े को तोड़ने के लिए माउस की आवश्यकता होती है. नोट: पास्ता टुकड़े परीक्षण समाप्त होने के बाद जब तक मैट्रिक्स में नहीं बदला जाना चाहिए. प्रारंभिक प्रशिक्षण में, चूहों कई पास्ता टुकड़े नहीं टूटेगा.
- (दिनों से अधिक टुकड़े से अधिक नहीं 2 अधिक या कम के साथ पास्ता की कम से कम 9 टुकड़े को तोड़ने) के अनुरूप प्रदर्शन के कम से कम 3 दिन (और अप करने के लिए 5 दिन) के रूप में परिभाषित किया गया है जो प्रवीणता को PMRT, पर रेल चूहों. यह अक्सर प्रवीणता के लिए युवा वयस्क चूहों को प्रशिक्षित करने के लिए 15-20 के बीच दिन लगते हैं.
4. कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण
- (पसंदीदा / प्रभावित और less-affected/unpreferred अंगों पर स्पष्टीकरण के लिए चित्र 2 देखें) वरीय तक पहुँचने अंग को contralateral मोटर प्रांतस्था को इस्कीमिक अपमान के बाद चार दिनों शुरुआत कम प्रभावित अंग (यानी, पूर्व ऑपरेटिव unpreferred अंग) ट्रेन . एक बार दैनिक 15 मिनट या 100 पहुंच प्रशिक्षण सत्र प्रशासन.
- पास्ता के पहले स्तंभ निकालें (यानी, तक पहुँचने एपर्चर से देने अधिकांश औसत दर्जे खड़ी स्तंभ) को सुनिश्चित करने के क्रम में कम से प्रभावित अंग प्रशिक्षण के पहले सप्ताह के लिए है कि जल्दी प्रभावित अंग के साथ पहुंचता है सफल नहीं रहे हैं.
- तक पहुँचने एपर्चर के माध्यम से इस अंग के विस्तार मजबूत करके कम प्रभावित अंग के साथ तक पहुँचने के लिए प्रोत्साहित करें. चूहों तक पहुँचने के चैंबर के फर्श पर पास्ता का एक छोटा सा (1/2 टुकड़ा) की परवाह किए बिना पहुंच सफल होता है या नहीं, के प्रशिक्षण जगह के पहले कुछ दिनों में कम से प्रभावित अंग का विस्तार है.
- 100 तक पहुँच कुल की ओर कम प्रभावित अंग के साथ बनाया केवल उन तक पहुँच गणना. पहुंचता की कुल संख्या की ओर प्रभावित अंग के साथ गुप्त प्रयास भरोसा मत करो.
- कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण के पहले 7 दिनों के बाद मैट्रिक्स के लिए पास्ता के सबसे औसत दर्जे खड़ी स्तंभ लौटें.
- पहुँचता है, सफल पहुंचता की संख्या, और succ के स्थानों की संख्या रिकॉर्डessful तक पहुँचता है. नोट: ये आंकड़े कम प्रभावित अंग के साथ पैटर्न तक पहुँचने में मतभेद निरीक्षण करने के लिए विश्लेषण किया जा सकता है, लेकिन पहले से सूचित नहीं किया है.
5. तक पहुंचना विश्लेषण
कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण के बाद PMRT कार्य पर प्रभावित अंग का आकलन करने से प्रभावित अंग के समारोह की वसूली पर कम प्रभावित अंग उपयोग के प्रभाव का निर्धारण करें. कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण दिनों की वांछित संख्या (आमतौर पर 14 दिन) पूरा होने के बाद यह आकलन होता है.
- (भरा पसंदीदा अंग को मैट्रिक्स contralateral के आधे के साथ यानी,) प्रशिक्षण प्रक्रियाओं को हूबहू उन्मुख चैंबर के सामने मैट्रिक्स, रखें. नोट: यह उनके प्रभावित (और पहले से वरीय) अंग के साथ तक पहुँचने के लिए चूहों मजबूर करता है.
- पूर्व स्ट्रोक प्रदर्शन के स्तर के साथ तुलना के लिए पहुंचता है, सफल पहुंचता की संख्या, और सफल पहुंचता के स्थानों की कुल संख्या रिकार्ड. प्रदर्शन की जांच न करेंइन प्रभावित अंग जांच के रूप में कम से प्रभावित अंग प्रशिक्षण के दौरान प्रभावित अंग प्रभावित अंग की वसूली पर प्रभाव पड़ सकता है कि प्रशिक्षण सत्र के रूप में कार्य कर सकते हैं.
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Representative Results
PMRT विश्लेषण से परिणाम टूट पास्ता टुकड़ों की संख्या और सफल पहुंचता के पैटर्न को शामिल करना चाहिए. ज्ञानेन्द्रिय cortical घावों के साथ चूहों से परिणाम चित्रा 3 ए में प्रदर्शन के रूप में इस्कीमिक अपमान, सफल पहुंचता की संख्या के साथ ही शारीरिक पहुंच पैटर्न 3, 19, दोनों को प्रभावित करता है कि संकेत मिलता है. प्रतिनिधि पैटर्न में परिवर्तन चित्रा 3 बी में देखा जा सकता है. चूहों में सीखा गैर उपयोग प्रभावों की नकल करने के लिए PMRT की क्षमता कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण 13, 20 निम्नलिखित प्रभावित अंग की बिगड़ा वसूली द्वारा प्रदर्शन किया है. नतीजतन, प्रभावित अंग के साथ ही सफल पहुंचता विश्लेषण कर रहे हैं. ज्ञानेन्द्रिय प्रांतस्था को इस्कीमिक घावों के साथ चूहों से परिणाम इस्कीमिक स्ट्रोक के बाद कम से प्रभावित अंग प्रशिक्षण के दो सप्ताह में कम से कम सात दिनों 13 के लिए प्रभावित अंग उपयोग impairs सुझाव देते हैं. चित्रा 4 में प्रदर्शन के रूप में, कम से प्रभावित अंग टी प्राप्त कि चूहोंएकतरफा इस्कीमिक अपमान के बाद 15 दिनों के लिए बारिश हो रही प्रभावित अंग आकलन के सात दिनों में कम सफल पहुंच प्रयास दिखा रहे हैं. स्ट्रोक के बाद 15 दिनों के लिए कोई प्रशिक्षण (नियंत्रण) प्राप्त चूहों कि सफलतापूर्वक प्रभावित अंग आकलन के सात दिनों के साथ पास्ता टुकड़े को पुनः प्राप्त करने की क्षमता ठीक हो. इस आशय की कम प्रभावित प्रशिक्षण 20 निम्नलिखित बाद प्रभावित अंग आकलन के ऊपर से 28 दिनों के साथ जारी रहती पाया गया है.
PMRT भी कार्य 21 तक पहुंच गया एक गोली के साथ चूहों में अध्ययन किया गया है के रूप में पहुंचने में गुणात्मक परिवर्तन का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. चूहों में आयोजित किया जाना अभी बाकी है जो यह आकलन, PRMT में वीडियो टेप तक पहुँच के व्यवस्थित विश्लेषण की आवश्यकता होगी.
चित्रा 1. पास्ता मैट्रिक्स कार्य सामग्री तक पहुंच गया. (ए) में खड़ी उन्मुख है. आकार देने के दौरान पूरे मैट्रिक्स पास्ता से भर जाता है. हालांकि, प्रभावित या कम से प्रभावित अंग की कुशल पहुंच प्रशिक्षण के दौरान मैट्रिक्स का केवल आधा भरा है. यह एक भी अंग (जैसे, पूर्व ऑपरेटिव प्रशिक्षण के दौरान वरीय अंग) (बी) के साथ शरीर के पार तक पहुंचने के लिए माउस की आवश्यकता है. वर्तमान छवियों अनुमति 3 के साथ reprinted रहे हैं.
चित्रा 2. प्रभावितएन डी अंग कम प्रभावित. PMRT प्रभावित या कम प्रभावित अंग या तो संलग्न करने के लिए चालाकी से किया जा सकता है. ठोस काला रंग पहले दो छवियों और तीसरे छवि में कम से प्रभावित अंग में वरीय / प्रभावित अंग को इंगित करता है. इस ग्राफिक पसंदीदा अंग के संदर्भ में प्रभावित और कम प्रभावित अंग प्रदर्शन करने के लिए मदद करता है.
चित्रा 3. प्रतिनिधि प्रभावित अंग के साथ पैटर्न तक पहुंच गया. वरीय अंग विपरीत ज्ञानेन्द्रिय प्रांतस्था का एकतरफा इस्कीमिक अपमान से पहले और बाद दोनों चूहों के पैटर्न पहुँचना (ए) प्रस्तुत कर रहे हैं. पार्श्व तेजी से माउस के किनारे स्थित पास्ता टुकड़े अर्थ जबकि पूर्वकाल, माउस के सामने तेजी से आगे स्थित पास्ता टुकड़े अर्थ. प्रतिनिधि पैटर्न में परिवर्तन में देखा जा सकता है
चित्रा 4. ज्ञानेन्द्रिय प्रांतस्था का एकतरफा इस्कीमिक अपमान के बाद 15 दिनों के लिए प्रभावित अंग परिणाम पर कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण कम प्रभावित अंग की. प्रशिक्षण के प्रतिनिधि परिणाम कार्यात्मक वसूली रोकने, प्रभावित अंग की कार्यात्मक परिणाम impairs. यह आंकड़ा अनुमति 13 के साथ reprinted है.
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Discussion
PMRT चूहों में कुशल पहुँचने के प्रदर्शन का आकलन करने के लिए एक सरल, मात्रात्मक तरीका का प्रतिनिधित्व करता है. समय लेने वाली है, यह प्रशिक्षित किया जाना पहले से अनुभवहीन स्नातक से नीचे के केवल कुछ ही प्रशिक्षण सत्र के साथ विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य डेटा एकत्र करने के लिए संभव है. कार्य इस्कीमिक अपमान 3, 13, 15 निम्नलिखित माउस मोटर कौशल प्रदर्शन में भी मामूली परिवर्तन को मापने के लिए काफी संवेदनशील है, और क्योंकि यह अध्ययन का एक नंबर. प्रशिक्षण प्रोटोकॉल 15, 20, 22 की एक किस्म के साथ लंबी अवधि के घाटे का हवाला देते एक एकतरफा कार्य, यह भी चूहों कार्य करते हैं जिसके साथ अंग हुक्म करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. PMRT की यह विशेषता है कि यह अपमान के रूप में अच्छी तरह से कम प्रभावित अंग पर सीखा रिलायंस के साथ होते हैं कि maladaptive और प्रतिपूरक परिवर्तन निम्नलिखित दोनों अनुकूली व्यवहार और तंत्रिका plasticity के अध्ययन में प्रभावी होने के लिए अनुमति देता है. कार्य भी दबाव चूहे मॉडल में जांच की, लेकिन नहीं किया गया है जो दोनों हाथों से अंग उपयोग की पढ़ाई करने के लिए उधार देता हैently माउस 23 में.
वर्तमान प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण पहलुओं में शामिल हैं: सही पूर्व प्रशिक्षण के लिए पसंदीदा अंग का निर्धारण, पूर्व चोट के कुशल मोटर कार्य पर प्रवीणता के लिए चूहों को प्रशिक्षण, और unpreferred / कम प्रभावित अंग तक पहुँचने प्रभावित / पसंदीदा अंग से चूहों स्विचन तक पहुँचने पोस्ट ऑपरेटिव प्रशिक्षण के प्रथम सप्ताह में. सही पूर्व प्रशिक्षण के लिए पसंदीदा अंग निर्धारित करने के लिए यह चूहों को आकार देने के दौरान पूर्ण मैट्रिक्स में पास्ता के लिए तक पहुँचने के लिए अनुमति देने के लिए महत्वपूर्ण है. चूहे तक पहुँचने के लिए प्रोत्साहित किया जाना चाहिए, लेकिन वे अनजाने में वे तक पहुँचने के साथ जो अंग पूर्वाग्रह हो सकता है जो पहुंचता है, के लिए पुरस्कृत नहीं किया जाना चाहिए. आकार देने सत्र सत्र प्रशिक्षण नहीं कर रहे हैं, और इसलिए चूहों विशेष रूप से, पास्ता टुकड़े को तोड़ने के लिए व्यवहार तक पहुँचने के लिए पुरस्कृत किया, या सत्र 3 के प्रति बार के एक अत्यधिक संख्या तक पहुँचने के लिए प्रोत्साहित नहीं किया जाना चाहिए. यह चूहों मोटर पूर्व इस्कीमिक अपमान करने के लिए कौशल तो टी अधिग्रहण भी महत्वपूर्ण है किटोपी सटीक डाटा दोनों प्रभावित और कम से प्रभावित अंग की चोट के बाद प्रशिक्षण, साथ ही चोट के बाद प्रारंभिक घाटे की उचित मात्रा का ठहराव की अनुमति के लिए के प्रभाव के बारे में एकत्र किया जा सकता है. पूर्व ऑपरेटिव प्रशिक्षण (आकार देने छोड़कर) की 15 दिनों की एक न्यूनतम काम पर अधिग्रहण सुनिश्चित करने के लिए सुझाव दिया है. अंगूठे का एक अच्छा शासन जानवरों इस प्रकार दिन के कम से कम 3-5 प्रशिक्षण भर में एक स्थिर प्रदर्शन का प्रदर्शन, उनके प्रदर्शन में लगातार कर रहे हैं कि सुनिश्चित करने के लिए है. यह सबसे अच्छा नेत्रहीन सफलता पैटर्न का पालन करने के लिए प्रत्येक जानवर के लिए पूर्व ऑपरेटिव पहुँच डेटा रेखांकन के द्वारा पूरा किया जा सकता है. प्रदर्शन 3-5 दिनों (यानी, दिन भर में कम से कम 2 सफल retrievals से भिन्न होता है) पर asymptotic प्रकट होता है, यह जानवर पर्याप्त काम हासिल कर ली है कि मान सुरक्षित है. चूहे आम तौर पर 11 टुकड़े ~ की asymptotic एक सफलता के स्तर तक पहुँचने, लेकिन विस्तारित साथ (महीनों) प्रशिक्षण धीरे - धीरे 14 टुकड़े 24 ~ की सफलता के स्तर तक पहुंच सकता है. अंत में, विशेष रूप से relati साथvely छोटे घावों 13, 20, चूहों जल्दी कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण में प्रभावित अंग के साथ तक पहुँचने का प्रयास जारी रख सकते हैं. यह इस व्यवहार को हतोत्साहित करने के लिए कम से प्रभावित अंग प्रशिक्षण के पहले 7 दिनों के दौरान मैट्रिक्स से पास्ता के पहले स्तंभ को दूर करने के लिए उपयोगी है. चूहों में आधा भरा मैट्रिक्स का इस्तेमाल किया, तो उनके प्रभावित अंग के साथ पास्ता के पहले कई टुकड़े को तोड़ने में सक्षम हो सकता है, और यह सफलता आगे सफलतापूर्वक इन पहले कुछ परे टुकड़े को पुनः प्राप्त करने में असमर्थता के बावजूद पहुँचने के प्रभावित अंग के लिए प्रोत्साहित करेंगे. कम प्रभावित अंग प्रशिक्षण के पहले सप्ताह के दौरान प्रभावित पहुंचता की कुल संख्या मात्रा निर्धारित किया जा सकता है, लेकिन सफल टूट की संख्या जानकारीपूर्ण नहीं होगा. जैसा कि ऊपर कहा, केवल सफल प्रभावित अंग तक पहुँच डेटा व्याख्या के लिए विश्लेषण कर रहे हैं. आगे तक पहुँचने के कम से प्रभावित अंग को प्रोत्साहित करने के लिए, यह कम प्रभावित अंग साथ करने का प्रयास तक पहुँच के लिए पुरस्कार के रूप में छोटे (साढ़े आकार) पास्ता टुकड़े प्रदान करने के लिए उपयोगी है. इस जनसंपर्कactice चूहों कम प्रभावित अंग के साथ तक पहुँचने में कुशल हो और पास्ता टुकड़े टूट गया और पुन: प्राप्त करने के लिए सफलतापूर्वक शुरू हो जाएगा बात जिस पर कम से प्रभावित अंग प्रशिक्षण के पहले 2-3 दिनों के लिए आम तौर पर आवश्यक है.
चूहों के साथ व्यवहार डेटा एकत्रित प्रभावी और पुरस्कृत हो, लेकिन यह चूहों छोटे चूहे नहीं हैं कि याद रखना महत्वपूर्ण है सकते हैं. वे एक अद्वितीय स्वभाव और व्यवहार कार्यों के लिए विचार किया जाना चाहिए कि व्यवहार प्रदर्शनों की सूची है. , अच्छी तरह से संभाला पालतू चूहों का प्रयोग सफल व्यवहार डेटा संग्रह बढ़ जाती है. नियमित रूप से निपटने के कई हफ्तों की सिफारिश की है. इसके अलावा, चूहों कभी कभी व्यवहार प्रशिक्षण के दौरान "ध्यान केंद्रित" की आवश्यकता होती है. यह धीरे चूहों का जवाब है कि एक विशिष्ट शोर बनाने के लिए मैट्रिक्स में पास्ता टुकड़े ब्रश करने के लिए उपयोगी है. यह भी धीरे पहुँच रहा एपर्चर के अंदर ब्रश करने के लिए सहायक हो सकता है.
मौजूदा प्रोटोकॉल संग्रह ओ के लिए एक संवेदनशील व्यवहार कार्य का वर्णनच कुशल छोटे इस्कीमिक स्ट्रोक निम्नलिखित चूहों में डेटा तक पहुंच गया. मोटर impairments स्ट्रोक 25, 26 का सबसे आम है और पुरानी परिणामों में से हैं, और इसलिए बुनियादी विज्ञान अनुसंधान प्रयोगशालाओं की संख्या (जैसे, 27-32) का ध्यान केंद्रित कर रहे हैं. कुशल पहुँचने के कार्यों कृन्तकों में निपुण forelimb उपयोग की सबसे अधिक इस्तेमाल किया परीक्षण कर रहे हैं, और माउस मॉडल में उनके उपयोग काफी अक्सर होता जा रहा है, हालांकि ऐतिहासिक रूप से सबसे अधिक बार, चोट के चूहे मॉडल (जैसे, 11, 19, 28, 33) में इस्तेमाल किया गया है 34, 35. ऐसे PMRT के रूप में चूहों में कुशल पहुँचने के कार्यों के आवेदन, स्ट्रोक 3 के बेहतर माउस मॉडल के लिए अनुमति देता है और इन बुनियादी विज्ञान के प्रयोगों की तरह बेहतर translational क्षमता. क्योंकि उनके खरीदने, उपलब्ध आनुवंशिक उपकरण, और neurobiological प्रयोगशालाओं में उनके प्रसार की, चूहों स्ट्रोक तंत्र और वसूली के अध्ययन में महत्वपूर्ण औजार हैं. व्यवहार जोड़तोड़ वीं की उपलब्धतापर संवेदनशीलता, मोटर प्रदर्शन का आकलन पुनर्वास रणनीतियों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और मानव प्रतिपूरक प्रतिक्रियाओं की नकल कर सकते माउस मॉडल के आवेदन फैली हुई है. इस प्रोटोकॉल में वर्णित विधि निश्चित रूप से आगे परिष्कृत और घाव मस्तिष्क की चोट, अपमान और उप की सेवा और कार्यात्मक वसूली का समर्थन करने वाले तंत्रिका तंत्र के अध्ययन के बाद दोनों हाथों से अंग उपयोग की पढ़ाई सहित अन्य माउस चोट के मॉडल के लिए बढ़ाया जा सकता है.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reaching chamber | Reaching chambers are made in house with Plexiglas | ||
| Pasta matrix block | The Pasta matrix box is made in house using a heavy plastic block | ||
| Capellini pasta | DeCecco | DeCecco brand capellini pasta can be purchased in a grocery store or through an online retailer such as Amazon |
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