Summary
الجلكى البحر تفقد المرارة والقنوات الصفراوية خلال التحول، وهي عملية مشابهة لرتق القناة الصفراوية الإنسان. تم تعديل طريقة التثبيت الجديدة والتوضيح (وضوح) لتصور الشجرة الصفراوية بأكملها باستخدام المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهري. وهذه الطريقة توفر أداة قوية لدراسة الضمور الصفراوية.
Abstract
رتق القناة الصفراوية هو مرض نادر من مرحلة الطفولة، مع ما يقدر بنحو 1 في 15،000 تردد في جنوب شرق الولايات المتحدة، ولكن أكثر شيوعا في بلدان شرق آسيا، مع تردد تقارير عن 1 في 5،000 في تايوان. على الرغم من أن يعرف الكثير عن إدارة رتق القناة الصفراوية، المرضية له لا يزال بعيد المنال. الجلكى البحر (Petromyzon مارينوس) يوفر فرصة فريدة لدراسة آلية وتطور الضمور الصفراوية. الجلكى البحر تتطور من خلال ثلاث مراحل حياة متميزة: اليرقات والطفيلية، والكبار. خلال الانتقال من اليرقات الطفيلية إلى الأحداث، الجلكى البحر الخضوع التحول مع إعادة تنظيم وإعادة دراماتيكية في التشكل الخارجي، والأعضاء الداخلية. في الكبد، يتم فقدان نظام الصفراوي بأكمله، بما في ذلك المرارة والشجرة الصفراوية. تم تعديل طريقة تم تطويرها حديثا يسمى "وضوح" لتوضيح الكبد كامل وتقاطع مع الأمعاء المتحولة في الجلكى البحر. الوتصور عملية انحطاط الصفراوي وتمييزها خلال البحر الجلكى التحول باستخدام المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهري. وهذه الطريقة توفر أداة قوية لدراسة رتق القناة الصفراوية في نموذج حيواني فريدة من نوعها.
Introduction
الجلكى البحر تتطور من خلال ثلاث مراحل متميزة حياة 1،2. الجلكى البحر اليرقات (L) يقضون معظم الوقت في الجحور كما مغذيات الترشيح القاعية. بعد أن يمر سبع مراحل المتحولة من تغييرات جذرية في التشكل الخارجي، وإعادة التنظيم في الأعضاء الداخلية 3، والأحداث الناتجة (JV) تدخل مرحلة الطفيلية خلالها تتغذى على الدم وسوائل الأنسجة من الأسماك المضيف، وزيادة كتلة الجسم أكثر من 100 مرة . بعد 1،0-1،5 سنوات تتغذى على الأسماك المضيف في المحيط أو البحيرات الكبيرة، البالغين وقف التغذية في أوائل الربيع وتهاجر إلى الأنهار لتفرخ ثم يموت 1،2.
أثناء التحول، والكبد الجلكى البحر يفقد المرارة والشجرة الصفراوية بأكمله، وهو النمط الظاهري متحولة التطوري الذي يحاكي المرض الرضع الإنسان رتق القناة الصفراوية. رتق القناة الصفراوية الرضع هو مرض الكبد للأطفال نادرة مع مضاعفات طبية شديدة 4،5،6،7، 8،9،10، ولكن المرضية ومسببات رتق القناة الصفراوية غير معروفة إلى حد كبير 4. المرضى الذين يعانون من رتق القناة الصفراوية يموت في غضون عامين بعد الولادة ما لم يتم تنفيذ التدخل الجراحي (إجراء كاساي) 5. في وقت لاحق، هؤلاء المرضى تتطلب إدارة السريرية واسعة وغالبا ما زرع الكبد 6. لقد تم اقتراح العديد من النظريات من الصفراوي رتق etiopathogenesis، مثل العدوى الفيروسية، والتشوهات الخلقية، وأمراض المناعة الذاتية، وإهانة السامة. ومع ذلك، فإن مساهمة كل منهما في تطوير رتق القناة الصفراوية تظل غير حاسمة 7،8،9،10.
على عكس الأطفال الذين يعانون رتق القناة الصفراوية المرضية، الجلكى البحر الخضوع المبرمج تنمويا رتق القناة الصفراوية دون necroinflammation واسعة، والتليف أو التشمع 10. الحيوانات قد تعاني ركود صفراوي عابرة خلال هذه العملية 10، ولكن التكيف مع هذا الشرط التنمويةعبر دي نوفو التوليف وإفراز أملاح الصفراء في الأمعاء بعد رتق القناة الصفراوية التنموية، بالإضافة إلى الآليات المعروفة مثل الحد من التوليف الملح الصفراوية في الكبد 11. هذه العملية التنموية في الجلكى البحر يتيح الفرصة الوحيدة المعروفة لدراسة تطور رتق القناة الصفراوية.
وهناك طريقة المطورة حديثا يسمى "وضوح" تمكن التصوير ذات الدقة العالية في الجهاز العصبي لدى الثدييات المعقدة عن طريق تحويل أنسجة سليمة إلى هيدروجيل نانوية مسامية شفافة بصريا 12. باستخدام الكبد الجلكى البحر وبروتوكول تعديل وضوح، والتصوير أنسجة سليمة من انحطاط المرارية يمكن أن تكون موثقة في جميع أنحاء التحول الكبد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. إعداد الحل
- جعل 1 L 10X 0.1 M العازلة الفوسفات المالحة (PBS، ودرجة الحموضة 7.4): وزن 26.2 فوسفات الصوديوم ز (أحادى)، 115 غ فوسفات الصوديوم (ثنائي القاعدة)، و87.66 غرام كلوريد الصوديوم. تذوب في حوالي 800 مل المقطر H 2 O، وضبط درجة الحموضة، وجعل حجم ما يصل الى 1 لتر مع H 2 O. المقطر
- جعل 1 L 0.1 M العازلة الفوسفات المالحة (الرقم الهيدروجيني 7.4): خذ 100 مل 10X PBS، وإضافة 900 مل المقطر H 2 O.
- جعل 1 L 0.1 M العازلة الفوسفات المالحة (درجة الحموضة 7.4) مع 0.1٪ تريتون X-100: خذ 100 مل 10X PBS، إضافة 1 مل تريتون X-100، وجعل حجم ما يصل الى 1 لتر مع H 2 O. المقطر
- جعل 1 L 10X 0.1M العازلة الفوسفات (PB، ودرجة الحموضة 7.4): وزن 26.2 فوسفات الصوديوم ز (أحادى) و 115 غ فوسفات الصوديوم (ثنائي القاعدة). تذوب في حوالي 800 مل المقطر H 2 O، وضبط درجة الحموضة، وجعل حجم ما يصل الى 1 لتر مع H 2 O. المقطر
- جعل 1 L 0.1 M العازلة الفوسفات (درجة الحموضة 7.4): خذ 100 مل 10X PB،وإضافة 900 مل المقطر H 2 O.
- جعل 1 L 0.1 M العازلة الفوسفات (درجة الحموضة 7.4) مع 0.1٪ تريتون X-100: خذ 100 مل 10X PB، إضافة 1 مل تريتون X-100، وجعل حجم ما يصل الى 1 لتر مع H 2 O. المقطر
- جعل حل 400 مل هيدروجيل مونومر (4٪ الأكريلاميد، 0.25٪ مكرر الأكريلاميد، 4٪ بارافورمالدهيد، فوق كبريتات الأمونيوم 0.0075٪، 0.0005٪ سابونين في 0.1 M PBS): وزن 0.3 غ فوق كبريتات الأمونيوم و 0.2 غرام سابونين. إضافة 210 مل المقطر H 2 O، 40 مل 40٪ الأكريلاميد، 10 مل 2٪ مكرر الأكريلاميد، 40 مل 10X PBS (درجة الحموضة 7.4)، و 100 مل 16٪ بارافورمالدهيد، وتخلط جيدا.
- جعل 4 L حل المقاصة (4٪ SDS في 0.2 M حمض البوريك): وزن 49.464 غرام حمض البوريك و160 غ SDS. تذوب في حوالي 3.5 L المقطر H 2 O، وضبط درجة الحموضة إلى 8.5 مع هيدروكسيد الصوديوم، وجعل حجم ما يصل الى 4 L.
- جعل 1 L 80٪ الحل الجلسرين: قياس 800 مل الجلسرين، إضافة 200 مل المقطر H 2 O، وتخلط جيدا.
2. تحضير الأنسجة
- إعداد هيدروجيل حل مونومر وقسامة 10 مل لكل 15 مل أنبوب الطرد المركزي.
- تشريح الأنسجة كله وإصلاح في هيدروجيل لمدة 2 أيام في 4 درجات مئوية. تأكد من أن الحل هو هيدروجيل من 10X حجم الأنسجة على الأقل.
- إحضار الأنسجة هيدروجيل الثابتة (في 15 مل أنبوب الطرد المركزي) لغطاء الدخان.
- بلمرة الأنسجة الثابتة هيدروجيل بإضافة 5 ميكرولتر TEMED، وتخلط جيدا، وترك الجلوس في غطاء الدخان في درجة حرارة الغرفة لمدة 2-3 ساعة.
- إزالة هلام الزائدة بدقة. ملاحظة: سوف هلام إضافية تعيق عملية المقاصة واختراق الأجسام المضادة خلال تلطيخ.
- احتضان الأنسجة الثابتة في 10 مل الحل في تطهير شاكر حاضنة وضعت في 70 دورة في الدقيقة و 50 درجة مئوية لعدة أيام حتى يصبح الأنسجة شفافة. تغيير الحل تطهير مرة واحدة في اليوم على الأقل، وإزالة هلام الزائدة من الأنسجة عند تغيير الحل المقاصة.
- شطف الأنسجة في 10 مل 0.1 M PB مع 0.1٪ تريتون X-100 في 70 صمساء و 37 درجة مئوية خلال الليل. كرر هذه الخطوة 3 مرات وإزالة هلام الزائدة من الأنسجة عند تغيير الحل العازلة.
- احتضان الأنسجة أوضح في حل الأجسام المضادة الأولية في PB مع 0.1٪ تريتون X-100 على 70 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية لمدة 2 ايام. ملاحظة: تأكد بما فيه الكفاية حل الأجسام المضادة الأولية لغمر النسيج كله.
- شطف الأنسجة في 10 مل PB مع 0.1٪ تريتون X-100 على 70 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية خلال الليل. كرر هذه الخطوة 3 مرات وإزالة هلام الزائدة من الأنسجة عند تغيير الحل العازلة.
- نفذ الخطوات التالية في غرفة مظلمة أو تحت ضوء خافت. تغطية العينات مع احباط لمنع تبييض الصورة.
- احتضان الأنسجة أوضح مع الفلورسنت حل الضد الثانوية في PB مع 0.1٪ تريتون X-100 و المصل حجب في 70 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية لمدة 1 يوم.
- شطف الأنسجة في 10 مل PB مع 0.1٪ تريتون X-100 على 70 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية خلال الليل. كرر هذه الخطوة 3 مرات وإزالة هلام و الزائدةROM الأنسجة عند تغيير الحل العازلة.
- شطف الأنسجة في 10 مل PBS في 70 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية خلال الليل. كرر هذه الخطوة 3 مرات وإزالة هلام الزائدة من الأنسجة عند تغيير الحل العازلة.
- احتضان الأنسجة أوضح في الجلسرين 80٪ في 70 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية خلال الليل.
- تخزين الأنسجة الملون فلوري في 4 درجات مئوية قبل المجهري متحد البؤر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تحدث العديد من الفعاليات التنموية الهامة في النظام الكبد خلال البحر الجلكى التحول. القناة الصفراوية والمرارة الخضوع لموت الخلايا المبرمج والمنحطة (الشكل 1). الجمع بين أسلوب التوضيح تعديل وتلطيخ مع الكبد علامة الخلية cytokeratin 19 (CK19، موجودة في كل خلايا الكبد وcholangiocytes قبل وبعد التحول 13) ومكافحة أفكارك Bcl2 علامة باستخدام متحد البؤر المجهري، اعتقل النظام الصفراوي بأكمله على طول المحور Z ( الشكل 2) وهيكل 3 الابعاد أعيد بناؤها (الشكل 3). تم استخدام المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهري لأداء القسم البصرية من خلال الكبد سليمة منذ أكثر من نظام الصفراوي مضمن داخل الكبد باستثناء تقاطع حيث يدخل القناة الصفراوية في الأمعاء. تحدث عملية التنكسية في مراحل المتحولة 2-4، بدءا من الطرفية القنيات الصفراوية الصغيرة نحو intrahep مركزية كبيرةاتيك القناة الصفراوية المشتركة (الشكل 2)، بما يتفق مع الدراسات السابقة 10.
الشكل 1. المرارة الضمور خلال البحر الجلكى التحول. الجلكى البحر تفقد المرارة (الأسهم السوداء) أثناء التحول. أخذت عينات من الحيوانات مع التشكل الخارجي بين مراحل المتحولة 2 و 3؛ أي العين الجولة دون (المرحلة 2) أو مع (المرحلة 3) تمايز حاد في قزحية والتلميذ، والإسقاطات مثل حليمة بارزة على السطح الظهري الداخلي من الفم هود (مرحلتي)، سان هود عن طريق الفم (المرحلة 2) تشكيل مدخل مستطيل في تجويف الفم (المرحلة 3)، أو "تشبه الصلصال" خطم (المرحلة 3) 3 سميكة. لاحظ أن المرارة أيضا تغيير لون يدل الاختلافات في إنتاج الصفراء.الأول: الأمعاء. L: الكبد الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. الصور متحد البؤر تظهر الشجرة الصفراوية في الكبد الجلكى البحر خلال التحول. وكانت العينات من الحيوانات مع التشكل الخارجي بين مراحل المتحولة 2 و 3. تؤخذ الأعلى وحات من الأمامي، والجزء الأسفل من لوحات من نهاية الخلفي. صور من الكبد علامة الخلية cytokeratin 19 (1:100 الماوس المضادة للCK19؛ ملطخة 2 ميكروغرام / مل اليكسا فلور 350 الماعز المضادة للماوس مفتش، أزرق) وعلامة مكافحة أفكارك Bcl2 (1:100 أرنب المضادة لل Bcl2؛ ملطخة 2 ميكروغرام / مل اليكسا فلور 488-حمار المضادة للأرنب مفتش؛ الأخضر) يتم فرضه على توليد الصور المدمجة. تشير السهام البيضاء بشجرة iliary. السهام السوداء تشير إلى شجيري الظلام أبحث الخلايا أفكارك والمحيطة نفيق وقنيات في الكبد. الأول: الأمعاء. L: الكبد. شريط مقياس: 500 ميكرون الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
تم بناؤها الرقم 3. صور 3D المدمجة بناؤها من متحد البؤر Z-سلسلة. صور 3D من متحد البؤر Z-سلسلة من ثلاث مراحل بين كبد المتحولة 2 و 3. المقاطع البصرية من الصور المدمجة من الكبد علامة الخلية cytokeratin 19 (1:100 الماوس مكافحة CK19؛ ملطخة 2 ميكروغرام / مل اليكسا فلور 350 الماعز المضادة للماوس مفتش، أزرق) وعلامة مكافحة أفكارك Bcl2 (1:100 أرنب المضادة للBcl2؛ ملطخة 2 ميكروغرام / مل اليكسا فلور 488-حمار المضادة للأرنب مفتش؛ الأخضر) يتم بناؤها مع برنامج الشركة المصنعة لتوليد الصور 3D. تؤخذ لوحات أعلى من الأمامي، والجزء الأسفل من لوحات من نهاية الخلفي. السهام البيضاء تدل على الشجرة الصفراوية. السهام السوداء تشير إلى شجيري الظلام أبحث الخلايا أفكارك والمحيطة نفيق وقنيات في الكبد. الأول: الأمعاء. L: الكبد. شريط مقياس: 500 ميكرون الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
. الرقم 4 قسم متحد البؤر البصرية تظهر القناة الصفراوية مع قطرات الصفراوية في لمعة صورة مدموجة من 3 قنوات الفلورسنت؛ الزرقاء: الماوس المضادة للج MYC (1:100) / 2 ميكروغرام / مل اليكسا فلور 350 الماعز المضادة للماوس مفتش؛ الخضراء: 2 ميكروغرام / مل نيسل الخضراء؛ أحمر: أرنب المضادة للTGFβRII (1:100) / 2 ميكروغرام / مل اليكسا فلور 594-حمار المضادة للأرنب. شريط مقياس: 500 ميكرون. يشار إلى قطرات الصفراوية التي كتبها السهام السوداء. تم أخذ عينة الكبد بين المرحلة المتحولة 2 و 3. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يتم تعديل هذا البروتوكول من أسلوب جديد يسمى "وضوح" 12، التي crosslinks الأنسجة سليمة مع بولكرلميد لتشكيل هيدروجيل نانوية مسامية، ثم يجرد بعيدا غشاء البلازما من الأنسجة لتحقيق الشفافية البصرية ونفاذية الجزيئات. "وضوح" يسمح التصوير أنسجة سليمة من الإسقاط طويلة المدى والأسلاك الدوائر المحلية في الجهاز العصبي. هذه الطريقة الجديدة يمكن استخدامها لتصور نظام الصفراوي كامل في الكبد الجلكى البحر خلال التحول. ذلك هو التحدي في علم الأحياء للحصول على معلومات عالية الدقة والحفاظ على منظور عالمي من نظام معقد مثل نظام الصفراوي بأكمله أو الجهاز العصبي المركزي باستخدام التضمين التقليدية وباجتزاء الأساليب. هذا الأسلوب يسمح ضوح تعديل شعاع الليزر لاختراق من خلال الجلكى البحر الكبد سليمة اليرقات حتى بسمك 1-2 ملم باستخدام الطاقة المنخفضة الهدف الفلورسنت (4X) في المسح الضوئي ليزر العادية confocaل المجهر. ويمكن تحقيق أعمق الاختراق باستخدام متعدد الفوتون المجهر متحد البؤر أكثر تقدما. صور ثلاثية الأبعاد يمكن بناؤها باستخدام برامج إعادة الإعمار 3D. أن تحقيق نتائج مماثلة باستخدام الأساليب التقليدية تكون شاقة، التي تنطوي على إعادة البناء التدريجي لكثير من المقاطع، وستقتصر على وحدات تخزين الأنسجة الصغيرة. يوفر هذا الأسلوب الجديد معلومات قيمة من التحليلات الهيكلية كاملة من أنظمة سليمة 12، هو أقل وأكثر كفاءة واستنساخه كثيفة العمالة.
ميزة أخرى لهذا الأسلوب الجديد هو أن العينة يمكن إعادة استخدامها عدة مرات لتلطيخ مع الأجسام المضادة مختلفة 12. وهذا يجعل المقارنة بين الواسمات الجزيئية مختلفة في نفس العينة أكثر موثوقية وقابلة للتكرار. في إطار مستقر التي تولدها هيدروجيل يسمح إزالة فعالة من الأجسام المضادة دون وقوع خسائر هيكل غرامة ويحافظ على استضداد لالصغرىنانوغرام الوقت 12. الحل المقاصة يبدل طبيعة الأجسام المضادة ويعطل ملزمة، وبالتالي القيام بدور حل تجريد الأجسام المضادة 12. وقد أجريت عدة جولات من تلطيخ في عينات الكبد الجلكى البحر وبقي هيكل وتلطيخ الأمثل.
هناك نوعان من التعديلات الرئيسية في هذا البروتوكول من البروتوكول الأصلي "وضوح" 12. (1) استخدمت الكواشف توليد الراديكالية الحرة (فوق كبريتات الأمونيوم وTEMED) لبدء والإسراع في بلمرة من هيدروجيل بدلا من VA044. VA044 هو حساس وغير متوفرة في الولايات المتحدة (2) لا يستخدم مبنية خصيصا غرفة الكهربائي. في الأسلوب وضوح 12، وذلك بسبب حجم الأنسجة (مخ الفأر مقابل الكبد الجلكى)، مطلوب تطهير الأنسجة الكهربي للإسراع في استخراج غشاء البلازما. لتجنب التكلفة الأولية لغرفة الكهربائي مبنية خصيصا، ونحن استخدم لأول مرة EXIاللدغة الأجهزة الكهربائي للهلام الاغاروز في مختبرنا. أثبت هذا أن تكون فعالة للغاية. ومع ذلك، الحضانة في حل المقاصة مع درجة الحرارة التي أثيرت (50 ° C) هي فعالة جدا في إزالة غشاء البلازما.
على الرغم من أن الكتاب ل "وضوح" حذر من استخدام سابونين في هيدروجيل، فإنه يحسن الشفافية في الأنسجة الجلكى البحر في إجراءاتنا. عيب واحد للتصوير مبائر هو أن الأنسجة الجلكى البحر لديه قوية لصناعة السيارات في مضان. يجب أن يتم اختبار اختيار fluorophores من خلال مقارنة الصور قبل وبعد تلوين مناعي.
خلال البحر الجلكى التحول، والانحدار من ظهارة المرارة يبدأ بين مراحل المتحولة 2 و 3. بواسطة المرحلة المتحولة 4، والمرارة يختفي تماما من الجلكى البحر الكبد 14. انحطاط القناة الصفراوية هو الأكثر جدرانماتيتش بين مراحل المتحولة 3 و 4 15. هذا الأسلوب تعديل هو أداة قوية لدراسة الآليات الخلوية والجزيئية من تدهور الجهاز الصفراوي بأكملها، والتي قد توفر رؤى لرتق القناة الصفراوية الإنسان.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
والكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
والكتاب يعترف مساهمة محطة البيولوجية هاموند خليج، مركز العلوم البحيرات الكبرى، المسح الجيولوجي الامريكية. نشكر أيضا الدكتور الإطار ميليندا في مركز متقدم المجهر في جامعة ولاية ميشيغان لها الدعم التقني في المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهري. ويدعم هذه الدراسة من المنح المقدمة من هيئة مصايد أسماك البحيرات الكبرى إلى YWCD وWML.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 40% acrylamide | Bio-Rad | 161-0140 | |
| 2% bis-acrylamide | Bio-Rad | 161-0142 | |
| TEMED | Bio-Rad | 161-0800 | |
| ammonium persulfate | Sigma | A3678-25G | |
| boric acid | Sigma | B7901-1KG | |
| saponin | Sigma | 47036 | |
| sodium dodecyl sulfate | Sigma | L337-500G | |
| sodium phosphate (monobasic) | Sigma | 04269-1KG | |
| sodium phosphate (dibasic) | Sigma | S5136-1KG | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-500ML | |
| glycerol | Sigma | G9012-500ML | |
| 16% paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710-S | |
| NaOH pellets | EMD | SX0590-3 | |
| 15 ml centrifuge tubes | Any brand | ||
| dissecting tools | Any brand |
References
- Applegate, V. C. Natural history of the sea lamprey (Petromyzon marinus) in Michigan. US Fish and Wildlife Service Special Science Report on Fishery Service. (55), (1950).
- Hardisty, M. W., Potter, I. C. The general biology of adult lampreys. The biology of lampreys. Hardisty, M. W., Potter, I. C. 1, New York Academic Press. 127-206 (1971).
- Youson, J. H., Potter, I. C. A description of the stages in the metamorphosis of the anadromous sea lamprey, Petromyzon marinus L. Can. J. Zool. 57, 1808-1817 (1979).
- Boomer, L. A., et al. Cholangiocyte apoptosis is an early event during induced metamorphosis in the sea lamprey, Petromyzon marinus L. J. Pediatr. Surg. 45, 114-120 (2010).
- Kasai, M., Suzuki, H., Ohashi, E., Ohi, R., Chiba, T., Okamoto, A. Technique and results of operative management of biliary atresia. World J. Surg. 2, 571-580 (1978).
- Suzuki, T., Hashimoto, T., Kondo, S., Sato, Y., Hussein, M. H. Evaluating patients’ outcome post-Kasai operation: a 19-year experience with modification of the hepatic portoenterostomy and applying a novel steroid therapy regimen. Pediatr. Surg. Int. 26, 825-830 (2010).
- Hartley, J. L., Davenport, M., Kelly, D. A. Biliary atresia. Lancet. 374, 1704-1713 (2009).
- Morecki, R., Glaser, J. H., Cho, S., Balistreri, W. F., Horwitz, M. S. Biliary atresia and reovirus type 3 infection. New Engl. J. Med. 307, 481-484 (1982).
- Shimadera, S., Iwai, N., Deguchi, E., Kimura, O., Fumino, S., Yokoyama, T. The inv mouse as an experimental model of biliary atresia. J. Pediatr. Surg. 42, 1555-1560 (2007).
- Sidon, E. W., Youson, J. H. Morphological changes in the liver of the sea lamprey, Petromyzon marinus L., during metamorphosis: I. Atresia of the bile ducts. J. Morphol. 177, 109-124 (1983).
- Yeh, C. -Y., Chung-Davidson, Y. -W., Wang, H., Li, K., Li, W. Intestinal synthesis and secretion of bile salts as an adaptation to developmental biliary atresia in the sea lamprey. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 109, 11419-11424 (2012).
- Chung, K., et al. Structural and molecular interrogation of intact biological systems. Nature. 497, 332-337 (2013).
- Alarcón, V. B., Filosa, M. F., Youson, J. H. Cytokeratins in the liver of the sea lamprey (Petromyzon marinus) before and after metamorphosis. Cell Tissue Res. 287, 365-374 (1997).
- Youson, J. H., Ogilvie, D. R. Ultrastructural features of degeneration of the gallbladder during lamprey biliary atresia. Tissue and Cell. 22, 477-492 (1990).
- Morii, M., et al. Onset of apoptosis in the cystic duct during metamorphosis of a Japanese lamprey, Lethenteron reissneri. Anat. Rec. 293, 1155-1166 (2010).
