Abstract
Renal lesão de isquemia e reperfusão (IRI) é uma causa comum de lesão renal aguda (IRA) em pacientes com oclusão do fluxo sanguíneo renal é inevitável durante o transplante renal. Modelos experimentais de que precisa e reproduzível recapitulam IRI renal são cruciais em dissecar a fisiopatologia da LRA e do desenvolvimento de novos agentes terapêuticos. Apresentado aqui é um modelo do rato do IRI renal que resulta em reprodutível AKI. Isto é conseguido por uma abordagem laparotomia mediana para a cirurgia com uma incisão que permite tanto uma nefrectomia direita que fornece tecido controlo e de aperto do pedículo renal esquerda para induzir isquémia do rim esquerdo. Por cuidadosa monitorização da posição de aperto e a temperatura do corpo durante o período de isquémia este modelo consegue lesão funcional e estrutural reprodutível. Os ratinhos sacrificados 24 horas após a cirurgia demonstrar a perda da função renal com a elevação do nível de creatinina no soro ou no plasma, bem como estruturasdanos nos rins tural com necrose tubular aguda evidente. A função renal melhora e a lesão tecidual aguda resolvida no decurso de 7 dias após o IRI renais tais que este modelo pode ser usado para estudar a regeneração renal. Este modelo de IRI renal tem sido utilizada para estudar a fisiopatologia molecular e celular do AKI, bem como a análise da regeneração renal subseqüente.
Introduction
Isquemia lesão de reperfusão (IRI) é um modo comum de lesão de múltiplos órgãos, incluindo o rim, coração e cérebro. Renal IRI pode levar à lesão renal aguda (LRA) em pacientes e nenhum tratamento específico está disponível. AKI como resultado da IRI tem uma patogênese complicada que envolve tanto a resposta imune inata e adaptativa 1. Um modelo experimental de IRI renal oferece o potencial para dissecar as células-chave e mediadores envolvidos na patogênese da IRA, bem como a regeneração renal subseqüente que segue ao longo de dias subseqüentes. Além disso, os efeitos dos agentes terapêuticos sobre os processos de doença podem ser avaliadas.
O objetivo geral do modelo experimental de IRI renal descrito aqui é induzir tanto lesão renal funcional e estrutural aguda. Alguns investigadores utilizaram um modelo que envolve a indução de IRI bilaterais 2. Embora o modelo IRI renal bilateral é de uso, o ren unilateralmodelo al IRI tem a vantagem de uma nefrectomia direita a ser realizado no momento da cirurgia. O tecido nefrectomia direita serve como tecido de controlo valiosa em estudos envolvendo uma etapa de pré-tratamento que tanto induz ou reprime a expressão de um gene ou proteína. Por exemplo, temos usado este modelo para avaliar os efeitos pré-condicionamento do heme arginato (ha) de injeção de 24 horas antes da IRI renal 3. A indução bem sucedida do citoprotector enzima heme-oxigenase-1 (HO-1) por HA antes IRI foi confirmada no tecido controlo nefrectomia direita 4. HA reduzido IRI renal em camundongos idosos, em parte, através de um HO-1 mecanismo dependente. Da mesma forma, temos utilizado o modelo em estudos de depleção de macrófagos para examinar o papel dos macrófagos em IRI renal 5. A análise imunohistoquímica do tecido nefrectomia direita pode ser usado para confirmar a eficácia do método de ablação. O tecido nefrectomia direita pode, portanto, ser utilizada tanto para confirmar e quantificar o nível de induction ou inibição da molécula de interesse de cada animal experimental individual. Este modelo será de interesse para os pesquisadores que estão usando drogas ou outros compostos para modular a expressão de genes ou proteínas, etc, antes da indução da IRI renal.
Outros estudos usaram incisões flanco para acessar os rins. O modelo descrito aqui utiliza uma única cirurgia na linha média abdominal para executar tanto a nefrectomia direita e induzir isquemia reperfusão do rim esquerdo. Esta abordagem cirúrgica oferece excelente visualização do campo cirúrgico, incluindo os pedículos renais e alterações de cor que seguem renal fixação do pedículo. A nossa experiência com o modelo publicado 4-6 indica que os ratos se recuperar rapidamente da cirurgia com uma taxa de sobrevivência de perto de 100%.
Por fim, a análise da cinética do modelo ao longo de um período de 7 dias, indicam que este modelo exibe restauração de tanto a função renal e integridade tubular, comproliferação de células epiteliais tubulares significativa.
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Protocol
NOTA:. Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos impostos pelos Animais (Scientific Procedures) Act 1986 procedimentos foram realizados utilizando (autoclavados) instrumentos e consumíveis cirúrgicos estéreis. Embora o modelo de murino de IRI renal apresentado aqui foi realizada num macho de 8 semanas de idade Balb / c do rato pode ser executada de forma reprodutível em uma variedade de estirpes de murinos de ambos os sexos com idades compreendidas tipicamente entre 7-15 semanas, com a idade ser óptima 8 semanas. Os dados apresentados na seção de resultados representante foi obtido de ambos Balb / c e camundongos FVB. A aplicação de uma solução salina aquecida é usada para manter os intestinos e área cirúrgica húmido mas deve ser cuidadosamente controlada e mantida a um mínimo, como uma aplicação excessiva de fluidos pode levar a um artefacto abaixamento do soro ou plasma, os níveis de creatinina, o que é um importante leitura experimental.
1. Preparação Animal e Laparotomia
<ol>2. Divisão Ureter e nefrectomia direita
- Com cuidado, empurre o intestino para o lado esquerdo da cavidade abdominal usando cotonetes esterilizados autoclavados umedecidas com soro fisiológico para expor o rim e do ureter direito. Cubra os intestinos com cortinas umedecido para evitar a secagem.
- Levante o ureter direito com uma pinça em ângulo. Ligadura do ureter direito duas vezes, utilizando 6/0 silsutura k-trançado. Para os experimentos de longo prazo, utilizar suturas absorvíveis para todas as cirurgias abdominais.
- Dividir o ureter entre as suturas. Embora a junção vesico-ureteral deve evitar que a urina escorra para o peritoneu da bexiga do ureter é ligado como uma salvaguarda contra qualquer fuga no pós-operatório durante as experiências de longo prazo.
- Para permitir o acesso mais fácil ao realizar a nefrectomia direita, empurre o fígado para cima e para a direita com um cotonete umedecido e mantenha no lugar usando gaze umedecida para expor a artéria renal direita e veia.
- Bluntly dissecar o tecido conectivo e a gordura ao longo do aspecto medial do rim direito quanto à artéria renal direita, e a veia.
- Criar um canal de debaixo da artéria e veia renal cuidadosamente a pinça deslizante angulares por baixo dos vasos sanguíneos. Orientar a pinça por baixo com as pontas fechadas e remover suavemente com as pontas abertas, a fim de facilitar a formação do canal.
- Repetir o passo 2.6 até que as pontas das pinças são visíveis através dos tecidos conjuntivos, logo acima da artéria e veia renal. Uma vez visível esfregar suavemente as pontas das pinças contra as pontas de um outro conjunto de pinças anguladas para quebrar delicadamente o tecido conjuntivo.
- Com a artéria e veia renal claramente acessível eles agora podem ser ocluído. Deslize cuidadosamente uma pinça em ângulo abaixo da artéria renal e veia com as pontas fechadas. Uma vez no local abrir as pontas das pinças e orientar o aplicador clipe hemostático entre as pontas e firmemente aplicar um clipe hemostático na artéria e veia renal próxima ao rim. Em alternativa, a artéria e veia renais podem ser ligados utilizando 6/0 de seda trançada sutura.
- Dividir a oclusão da artéria renal e veia perto do rim, o qual pode agora ser removido de qualquer tecido conjuntivo aderente remanescente.
- Remova qualquer gaze usada para manter o fígado e os intestinos substituir com cotonetes.
- Com cuidado, empurre o intestino para o lado direito da cavidade abdominal com cotonetes para expor o rim esquerdo e do ureter e cubra com cortinas umedecidos. Se necessário, os pâncreas pode ser desviado com gaze umedecida para permitir o acesso mais fácil.
- Use dissecção romba para quebrar delicadamente os tecidos conjuntivos anterior e posterior à artéria renal esquerda e veia, e, em seguida, criar um canal sob os vasos de forma semelhante ao descrito no Ureter Divisão e nefrectomia direita passo 2.4.
- Induzir isquémia do rim esquerdo, aplicando um clipe serrafine micro na artéria e veia renal. Isquémia bem sucedida pode ser confirmada visualmente por um escurecimento uniforme gradual do rim. Os vasos sanguíneos para além da artéria renal esquerda e a veia pode, ocasionalmente, fornecer o rim. Se estiver presente, também vai precisar destes vasos sanguíneos adicionais a serem fechados com grampos serrafine micro a fim de sucessoinduzir isquemia de todo o rim.
- Substitua os intestinos e cuidadosamente garantir que não haja torções bruscas que podem levar à isquemia intestinal resultados comprometedores. Temporariamente fechar o peritônio com uma única sutura.
- Após a indução de isquemia colocar imediatamente o rato sobre um cobertor homeotérmicos, com um termistor rectal ligado a uma unidade de controlo que vai manter a temperatura do corpo a 37 ° C durante a duração do período de isquémia. Para definir o comprimento apropriado da isquemia necessária para induzir o desejado grau de lesão renal e insuficiência renal, recomenda-se que uma titulação de ser executada para cada estirpe e operador cirúrgico.
- Pouco antes do final do período de isquemia reabrir o peritoneu e posicionar cuidadosamente o intestino para permitir o acesso ao grampo e visualizar o rim. A inserção do afastador, como mostrado no vídeo, não é necessário e foi apenas realizada para fins de apresentação.
- Retire o clamp após o período de isquemia concluiu. Imediatamente após a remoção do rim vai rapidamente mudar de cor de um marrom escuro para um rosa escuro saudável indicando reperfusão bem sucedida.
- Novamente assegurar que os intestinos não são torcidos antes do fechamento do peritoneu com um ponto cobertor com 6/0 sutura de seda trançada. Em seguida, feche a pele usando clipes de pele metálicos.
- Para minimizar o risco de infecção pós-operatória, aplicam-se um anti-séptico tal como uma solução de iodo / álcool para a área cirúrgica.
4. Pós-operatório de Recuperação e Cuidados
- Anestesia parcialmente inversa com cloridrato de atipamezol (2 mg / kg) por via subcutânea e administrar fluidos com uma injecção subcutânea de 1 mL de soro fisiológico aquecido para evitar a desidratação após a cirurgia.
- Acompanhar atentamente os ratos até que tenham recuperado a consciência, parece alerta e são capazes de endireitar-se.
- Permitir ratinhos para recuperar numa caixa aquecida mantida a 29 ° C, locciado em um ambiente tranquilo, por 24 horas. Ratos terá uma capacidade diminuída para regulação térmica devido à anestesia e, por conseguinte, é essencial que eles estão alojados a uma temperatura elevada para permitir a recuperação eficaz. Alimento humedecido também pode ser fornecida para estimular a ingestão de fluidos e da nutrição.
- Para os experimentos de recuperação a longo prazo fornecer analgésicos em curso e retirar grampos de pele 7 dias após a cirurgia.
5. Avaliação Funcional e Estrutural lesão renal e Regeneração
- O sangue pode ser recolhido a partir da veia da cauda durante as experiências ou por punção cardíaca na hora da eutanásia no final da experiência. Medir a função renal pela creatinina sérica, usando um método baseado creatinase e uréia (BUN) em um analisador bioquímico centrífuga como descrito anteriormente 7. A função renal de ratos normais e saudáveis precisa ser determinado antes de estabelecer um modelo de insuficiência renal, pois isso pode variar acentuadamente depending no método de análise utilizado, por exemplo a reacção de Jaffe e métodos creatinase base para a medição da creatinina dar resultados diferentes.
- Examine estrutura renal por histopatologia em parafina cortes de tecido do rim corados com hematoxilina e eosina (H & E) ou ácido periódico Schiff (PAS). Capturar entre 5 - 10 imagens em 200x de ampliação dentro da faixa externa da medula externa (OSOM) para cada rato. Avaliar o nível de lesão no OSOM como esta região é ferido neste modelo porque é altamente vulnerável à hipóxia.
- Use qualquer um dos dois sistemas de pontuação detalhadas abaixo para medir necrose aguda tubular (RTA) ou regeneração. Morfologia representativa das classificações utilizadas nestes sistemas é ilustrada na Figura 1.
- Use um sistema binário simples para marcar ATN. Com base na integridade celular e marca morfologia e contar túbulos tanto como viável (a morfologia das células intactas) ou necrose (inte célula comprometidagrity, morfologia celular anormal, ou perda de células).
- Exprime-se o número de túbulos necróticas como uma percentagem do número total de túbulos (necrótica túbulos%).
- Classificar regeneração utilizando outro sistema com base na integridade celular, a morfologia e o número de núcleos. Mark e contam túbulos tão saudável, necrótica, feridos ou em recuperação de acordo com os critérios indicados nas etapas seguintes.
- Tal como acontece com o sistema de pontuação ATN (detalhado no passo 5.4) túbulos marca com células normais saudáveis intactas como túbulos enquanto mostrando a integridade das células comprometidas, morfologia celular anormal ou perda celular evidente devem ser marcados como necrótica.
- Classifique túbulos como feridos se eles têm um citoplasma diluído contendo alguns núcleos. Em contraste, designar túbulos contendo mais núcleos com mais morfologia celular normal, tal como a recuperação.
- Expresse cada classificação túbulo como uma porcentagem do número total de túbulos.
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Representative Results
Lesão tubular e recuperação pode ser avaliada por H & E ou coloração PAS de cortes de tecido seguintes IRI renal. Túbulos localizados dentro do OSOM são classificados como saudável, feridas, necrose ou a recuperação de acordo com a morfologia da célula, a integridade e o número de núcleos (Figura 1). A lesão funcional e estrutural neste modelo é dependente da duração da isquemia. Um aumento progressivo da gravidade da disfunção renal, avaliada pela concentração plasmática de creatinina e BUN, é evidente que a duração da isquemia é aumentada por incrementos de 2min (Figura 2). A extensão da lesão renal estrutural, inferida a partir da pontuação ATN, segue uma tendência semelhante com mais severa ATN acompanha isquemia mais prolongado (Figura 3). Após uma titulação inicial de diferentes durações de isquemia, este modelo de IRI renal deverá atingir uma taxa de sucesso de quase 100%, com todos os ratos em desenvolvimento lesão funcional e estrutural seguinte surgery. Este modelo de IRI renal também permite um bom nível de controle sobre o grau de lesão com variação limitada observada entre animais (Figuras 2 e 3). O uso de diferentes durações de isquémia permite intervenções terapêuticas para ser examinado quanto à sua capacidade para modular a diferentes níveis de gravidade da lesão. Por exemplo, com base na duração da isquemia do ferimento resultante pode ser classificada como suave (20 min), moderado (22 min) ou alta (24 min). Estes valores são para camundongos Balb / c machos com 8 semanas e estão incluídos como orientação apenas. Os investigadores devem estabelecer as suas próprias condições experimentais como estes irão variar de acordo com a tensão do mouse, a idade, o sexo eo ensaio bioquímico usado para avaliar a função renal.
Este modelo tem sido utilizado com sucesso para estudar a regeneração após IRI renal com função e estrutura renal recuperando ao longo dos dias que se seguiram. Um declínio gradual da creatinina plasmática e os níveis de uréia são observed, com creatinina plasmática retornando aos níveis basais no dia 7 (Figura 4). Uma avaliação de secções de tecidos coradas em H & E indica que um aumento do número de tubos são classificados como saudável ou recuperar pelo dia 7 em comparação com o dia 4, indicando que a regeneração do tecido está a ter lugar (Figura 5). A administração de 5-bromo-2'-desoxiuridina (BrdU) antes de serem sacrificados facilita a imunocoloração de tecido renal para BrdU e subsequente quantificação da proliferação das células tubulares. Dramático expressão nuclear de BrdU é observada 4 dias após o IRI renal, indicando que os tubos são submetidos a proliferação de células marcadas, a fim de restaurar a integridade e função dos túbulos (Figura 6). A combinação de avaliação da função renal, marcando para a melhoria estrutural e BrdU immunostaining permite que este modelo a ser utilizado para estudar a regeneração após IRI renal. Isto permite que os efeitos a longo prazo da intervenção terapêutica para ainvestigado.
Por fim, a utilidade deste modelo é dependente da indução da isquemia global, a todo o rim e pode ser prejudicado pela presença de vasos sanguíneos que abastecem o rim, para além da artéria renal esquerda. Se estes vasos adicionais não são presas, em seguida, parte do rim não vai ser submetido a lesão isquémica (Figura 7).
Figura 1 Scoring de lesão tubular estrutural e regeneração -. Morfologia. Representante saudável, recuperando, feridos e túbulos necróticos cortes de tecido de um rim removido 4 dias após IRI renal são corados com PAS para avaliação. Palhinha localizados no OSOM são classificadas como saudáveis, ferido, necrótica ou recuperação de acordo com amorfologia celular, integridade e número de núcleos com exemplos representativos destaque. Túbulos saudáveis são intacta, com uma morfologia celular normal. Túbulos necróticas exibem uma monocamada comprometida com a perda de células e evidente perda de morfologia celular. Túbulos feridos apresentam uma monocamada celular diluído e contêm menos núcleos. Em contraste, os túbulos recuperando exibem uma morfologia celular normal mais e um número semelhante de núcleos de túbulos saudáveis. Ampliação:. 400x Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2 Lesão -. Renal isquemia prejudica a função renal Masculino camundongos Balb / c com 8 semanas foi submetido a uma nefrectomia direita eo.pedículo renal esquerda foi pinçada para 20, 22 ou 24 min (n = 4 por grupo). Os ratinhos foram sacrificados a 24 h seguintes IRI renal. Creatinina plasmática e uréia no sangue mostram uma tendência crescente de gravidade como a duração da isquemia aumentou. A linha tracejada representa os níveis de creatinina plasmática e uréia no sangue encontrados em ratos normais de controle. Dados apresentados como média ± EPM e analisados por ANOVA de uma via. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
. Figura 3 Lesão - isquemia renal induz necrose tubular aguda significante se murganhos machos Balb / c com 8 semanas foram submetidos a uma nefrectomia direita e o pedículo renal esquerda foi cl.empolgado para 20, 22 ou 24 min (n = 4 por grupo). Os ratinhos foram sacrificados a 24 h seguintes IRI renal. Fotomicrografias representativas (Ampliação: 200x) do OSOM das seções renais H & E manchados de controle e rins feridos ilustrar ATN. Scoring formal de ATN (expressa como a percentagem de túbulos necróticas) confirma o aumento do nível da lesão com o aumento da duração da isquemia. Dados apresentados como média ± SEM e analisados por ANOVA de uma via (**** = P ≤ 0,0001). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
. Figura 4 Regeneração - A função renal se recupera após isquemia renal Masculino ag camundongos FVB.ed 8 - 10 semanas foram submetidos a uma nefrectomia direita antes de 25 min de isquemia para o rim esquerdo. Os ratinhos foram sacrificados após 1 dia (n = 10), 4 dias (n = 10) ou 7 dias (n = 6) seguinte IRI renal. Ambos creatinina plasmática e uréia diminuir progressivamente ao longo de sete dias, com creatinina plasmática retornando aos níveis basais, ilustrando a recuperação da função renal. Dados apresentados como média ± SEM e analisados por ANOVA de uma via (*** = P ≤ 0,001, * = P ≤ 0,05). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5 Regeneração -. Renal tecido mostra sinais de recuperação após rena . l isquemia camundongos FVB masculinos com idades 8 - 10 semanas foram submetidos a nefrectomia direita antes de 25 min de isquemia para o rim esquerdo. Os ratinhos foram sacrificados 4 dias (n = 10) ou 7 dias (n = 6) seguinte IRI renal. As fotomicrografias representativas (ampliação: 200x) do OSOM seguir a indução de isquemia são mostrados. Pontuação formal do número de saudável, recuperando, feridos ou túbulos necróticos dentro do OSOM foi avaliada em parafina PAS manchada. No dia 4, após IRI renal uma grande proporção de túbulos dentro do OSOM ainda aparecem feridos. No entanto por 7 dias, há um aumento considerável na proporção de túbulos que são classificados como saudável ou recuperando indicativo de regeneração renal. Dados apresentados como média ± SEM. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
. Figura 6 Regeneração - Dramatic proliferação tubular é evidente quatro dias seguintes isquemia renal camundongos FVB Masculino com 8 -. 10 semanas passou por uma nefrectomia direita antes de 25 min de isquemia para o rim esquerdo. BrdU (50 mg / kg) foi administrado por injecção intraperitoneal 24 horas antes do sacrifício. Os ratinhos foram sacrificados 4 dias (n = 10) ou 7 dias (n = 6) seguinte IRI renal. As fotomicrografias representativas (ampliação: 200x) do OSOM a partir de ratinhos sacrificados no dia 4 e no dia 7 após a indução de isquemia são mostrados. Proliferação celular Tubular foi avaliada por imunohistoquímica BrdU em seções renais parafina. Proliferação de células epiteliais tubulares foi quantificada através da contagem do número de núcleos positivos para BrdU no OSOM com o aumento da proliferação de célulasevidente no dia 4. Dados apresentados como média ± SEM e analisados pelos alunos t-test (*** = P ≤ 0,001). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 7. Esquerda renal isquêmica com os vasos sanguíneos renais adicionais não-ocluído. Falta de ocluir os vasos sanguíneos adicionais fornecendo o rim leva a isquemia inconsistente. (A) A ausência de isquemia renal global está indicada por uma mudança de cor uniforme (seta branca), quando o grampo está em micro serrafine posição. (B) Depois da remoção do grampo serrafine micro, a artéria e veia renal principal são visíveis (seta branca) juntamente com o recipiente de fornecimento de sangue adicionalo pólo médio e inferior do rim (seta preta). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Renal IRI é uma importante causa de LRA sem tratamento específico disponível. O estudo experimental de IRI renal tem sido altamente informativos com trabalhos anteriores demonstrando o papel de macrófagos, células dendríticas, linfócitos T, células-regulação, assim como outras células e mediadores na indução de tanto a lesão aguda e da fase de cicatrização de 5,8 - 16. Além disso, o IRI renal experimental foi usado para avaliar o efeito de vários agentes terapêuticos 4,17-19.
O modelo de IRI renal detalhado aqui utiliza uma abordagem laparotomia mediana para realizar uma nefrectomia direita e induzir isquemia no rim esquerdo usando braçadeiras. Tal como ilustrado pelos resultados representativos, modificando o tempo de isquemia podem controlar a gravidade da lesão. Por conseguinte, este modelo pode ser ajustado para induzir leve, moderado ou elevado grau de lesão renal, conforme exigido pela pergunta colocada experimental. No entanto, uma limitação deste modelo é que elenão é adequado para a indução da lesão renal muito grave por isquemia renal prolongada. A disfunção renal aguda resultante pode conduzir a uma mortalidade significativa.
Existem vários aspectos deste modelo que são cruciais para atingir lesão renal previsível e reproduzível. Uma fonte principal de variabilidade com este modelo pode ser originado a partir da temperatura do corpo durante o período de isquemia de 20. É, portanto, essencial que a temperatura do corpo é mantida a um nível constante e controlada durante todo o período isquémico. Neste protocolo de uma unidade de controlo com as sondas de temperatura e manta homoeothermic foi usada para auto-regular a temperatura do corpo a 37 ° C. A influência da temperatura do corpo, da susceptibilidade do rim de lesão isquémica está bem descrita. Trabalhos anteriores mostraram que a temperatura do corpo atinge a gravidade de IRI renal 20 e variação da temperatura do corpo dos ratos é um confundidor potencialfator que pode afetar a interpretação dos resultados. Outra consideração importante é que os ratos podem apresentar variação anatômica com os vasos sanguíneos adicionais que fornecem o rim esquerdo. É essencial que esses vasos sanguíneos adicionais são identificados e tapada quando se realiza a nefrectomia direita e induzindo isquémia global no rim esquerdo. Não fazer isso irá resultar em isquemia inconsistente todo o rim. Do mesmo modo, a mudança de cor do rim seguinte aperto esquerda do pedículo renal esquerda deve ser cuidadosamente analisadas quanto à ausência de uma alteração de cor globais sugere a presença de uma artéria renal adicional que inicialmente não tinham sido identificados.
Em contraste com os modelos que utilizam a isquemia renal bilateral, este modelo vai ser de interesse para investigadores que utilizam a administração profilática de medicamentos ou outros agentes para modular a expressão de genes, proteínas, etc, antes de lesão renal. A sondatecido nefrectomia ht pode ser usado tanto para confirmar e quantificar o nível de indução ou inibição da molécula de interesse de cada animal experimental individual. Este modelo também será de interesse para os investigadores que estudam regeneração renal como a fase de lesão aguda é seguida pela proliferação tubular proeminente.
Alguns modelos experimentais de inflamação renal são limitadas como doença significativa só pode ser induzida em determinadas estirpes de ratinhos. Em contraste, o modelo de IRI renal descrito aqui é versátil e pode ser aplicado a ambos macho e fêmea 5 4 ratos, diferentes estirpes de ratinhos, assim como ratinhos envelhecidos 4.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tissue scissors | Fine Science Tools | 14072 - 10 | |
| Micro-Adson forceps (Rat toothed) | Fine Science Tools | 11019 - 12 | |
| S&T JFA-5bTC Forceps - SuperGrip Angled | Fine Science Tools | 00649-11 | |
| Colibri retractor | Fine Science Tools | 17000 - 04 | |
| Micro clip applicator | Fine Science Tools | 18057-14 | |
| Micro serrafines | Fine Science Tools | 18055-04 | |
| Olsen-Hegar needle holder | Fine Science Tools | 12002 - 12 | |
| Hemoclip Plus Ligating Clips Small | Weck | 533837 | |
| Autoclip Wound Clip System, 9mm | Harvard Apparatus | PY2 52-3748 | |
| Silk Black Braided Suture, Size 6-0 | Harvard Apparatus | 723288 | |
| Standard Heat Matt | |||
| Homeothermic Blanket & Control Unit | Harvard Apparatus | ||
| Lacri-Lube | Allergan | ||
| Vetasept Chlorhexidine | AnimalCare | ||
| Vetalar : Ketamine hydrochloride | 100 mg/ml solution | ||
| Domitor : medetomidine hydrochloride | 1 mg/ml | ||
| Vetergesic : Buprenorphine hydrochloride | 0.3 mg/ml | ||
| Antisedan : Atipamezole hydrochoride | 5 mg/ml |
References
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