Introduction
زرع القرنية هو أحد الأنواع الأكثر نجاحا وشيوعا لزرع أجريت في البشر. الأسباب يتم تنفيذ هذه الجراحة هي نتيجة الإصابات والأمراض المعدية 1، أو أشكال أخرى من أمراض القرنية غير المعدية 2. شخصيات من جمعية بنك العيون الأمريكية تشير إلى أن أكثر من 46،000 أجريت في عام 2011 (انظر موقع على شبكة الإنترنت على العنوان التالي: restoresight.org/eye_banks/eye_banks.html). مؤشرا على نجاحها هو أن معدلات الفشل سنة واحدة لترقيع القرنية خيفي تتراوح 10-15٪ وعلى 5 سنوات من النجاح هو ما يزيد على 70٪ 3-8. كما أظهرت العديد من الدراسات أن نجاح المغايرة القرنية يرتبط مباشرة إلى حقيقة أن العين هي موقع متميز مناعيا. العوامل المسؤولة عن وضع القرنيات كموقع امتياز المناعة تشمل عدم وجود كل من الأوعية الدموية والليمفاوية في القرنية، والغياب النسبي للمستضد تقديم الخلايا، والعوامل التي تنتجها القرنية التي قامعليالي funtions المستجيب المناعة 9-15 والتعبير انخفاض MHC المستضدات 16، والتعبير عن FASL 17-20.
ومع ذلك، وعلى الرغم من هذه العوامل المهيئة هذه الطعوم للنجاح، وأنها لا تخضع لرفض 3-7. وبالتالي، فهم تلك الآليات التي تتوسط هذا الرفض وكذلك اختبار مختلف العلاجات لمنع الرفض هي ذات أهمية حاسمة. تحقيقا لهذه الغاية، وصفنا هنا نموذج الفئران من زرع القرنية التي تم استخدامها لأكثر من 20 عاما لدراسة زرع القرنية في بيئة تسيطر التجريبية. منذ ردود زرع تشمل العديد من العوامل المختلفة العاملة في الحفل الذي سيكون في نهاية المطاف تحديد ما إذا فشلت أو نجحت الأنسجة المزروعة، فمن غير الممكن أن نفهم أهمية هذه العوامل في أي نموذج في المختبر. وبالتالي، هناك حاجة لدراسات باستخدام حيوانات سليمة لتحديد ما هي عوامل مهمة إما نجاح أو failuإعادة الأنسجة المزروعة.
بينما الأنواع الأخرى من الحيوانات التي استخدمت لدراسة زرع القرنية، ونموذج الفئران ديها العديد من المزايا بالمقارنة مع استخدام الأنواع الأخرى. الأول هو وجود العديد من سلالات الفئران التي تعبر عن بعض الجينات المحورة أو تم استهداف الجينات تفتقر إلى التعبير عن عوامل مناعية معينة وظيفتها في زرع يمكن دراستها بشكل أفضل. وبالإضافة إلى ذلك، هناك العديد من الكواشف (عوامل المؤتلف والأجسام المضادة التي تحييد العوامل) التي هي محددة للفئران والتي لا وجود لها بالنسبة لكثير من الأنواع الأخرى من الحيوانات. بسبب وجود هذه العوامل، وقد استخدم هذا النموذج على نطاق واسع لتحديد العوامل ذات الصلة المشاركة في الردود المزروع القرنية الحادة 15، 17،18،20 -29. وعلاوة على ذلك، ومن المعروف أن العديد من العوامل التي تدخل في زرع القرنية أيضا لتكون وظيفية في زرع الأنسجة الأخرى.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ملاحظة: يتم التعامل مع جميع الحيوانات المستخدمة في هذا الإجراء وفقا للجمعية للبحوث في الرؤية وبيان العيون لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث الرؤية فضلا عن المبادئ التوجيهية التي وضعتها لجنة الرقابة الحيوان في جامعة سانت لويس.
يتم تعقيم جميع الأدوات والحلول الجراحية قبل الجراحة للحد من العدوى الميكروبية للعين: ملاحظة. تجدر الإشارة إلى أنه في حين أن الحيوانات لا تواجه بعض الألم من هذا الإجراء، ونحن لا توظف المسكنات. السبب في ذلك هو لأن جميع المسكنات هي مضادة للالتهابات ومنذ زرع القرنية الردود تنطوي الالتهاب، فإن استخدام العقاقير المضادة للالتهابات بخرق قدرتنا على تحديد ما هي العوامل التي تشارك في فشل الكسب غير المشروع القرنية.
1. التخدير
- وضع الفئران المانحة والمتلقية تحت التخدير العام عن طريق الحقن IP من الكيتامين (86.98 ملغ / كلغ) وزيلازين (13.04 ملغم / كغم).
- الحفاظ على الماوس المتلقي تحت التخدير طوال الإجراء الذي يأخذ عادة 30 دقيقة إلى ساعة. بالتالي، ترصد باستمرار الماوس عن أي دلائل على استعادة وعيه.
- تطبيق مرهم للعين puralube أنه لن يخضع لعملية جراحية بعد تخدير الحيوان لمنع جفاف.
2. مسمار القرنية
- الحصول على زر المانحة القرنية.
- مرة واحدة يتم تخدير الحيوان بالكامل، وتحقيق توسع حدقة العين وافية من قبل إدارة بضع قطرات العين 1٪ و 2.5٪ تروبيكاميد فينيليفرين هيدروكلوريد.
- وضع رأس الحيوان المانحة أفقيا على لوحة وضعت على دعم قوي المنقولة. إصلاح الرأس مع شريط من الشريط عبر العنق لضمان أن العين هي في وضع أفقي في جميع أنحاء العملية برمتها.
- باستخدام 2 مم منقب، الذي كان مصبوغ باللون الأزرق الميثيل طرف، خارجيبطن الموقع القرنية الكسب غير المشروع المركزي.
- مع شفرة حادة، تخترق القرنية وحقن healon في الغرفة الأمامية لتعميق ذلك لتقليل فرصة حدوث ضرر لبطانة المانحة والعدسة الأساسية.
- استئصال الكسب غير المشروع مع الجهات المانحة vannas مقص ووضعها في طبق يحتوي هانكس "محلول ملحي متوازن حتى الاستخدام.
- بعد أن كان الكسب غير المشروع المانحة على إزالتها، الموت ببطء الماوس المانحة عن طريق الاستنشاق CO 2.
- إعداد السرير الكسب غير المشروع.
- تكرار نفس الخطوات كما هو موضح في 2.1.1 خلال 2.1.2 للمتلقي.
- استخدام 1.5 مم منقب، الخطوط العريضة للموقع الكسب غير المشروع المستفيدة.
- مع شفرة حادة، تخترق القرنية وحقن healon في الغرفة الأمامية لتعميق ذلك لتقليل فرصة من الأضرار التي لحقت العدسة الأساسية.
- إزالة زر القرنية المركزية المذكورة من المستلم باستخدام مقص vannas وتجاهل.
- خياطةتطعيم
- وضع القرنية المانحة على الكسب غير المشروع سرير في القرنية المستلم. مما لا شك فيه أن healon كافية تحت القرنية المانحة لحماية الخلايا البطانية المانحة من التلف عن طريق الاتصال المباشر مع العدسة.
- باستخدام microforceps يميل السوبر غرامة، ومكان اللدغة الأولى من النايلون 11-0 خياطة إلى جانب الجهات المانحة، من خلال الجهات المانحة مع عمق 90٪ من سمك الكامل إلى جانب المستلم، ثم تعادل خارج.
- مرة واحدة يرتكز القرنية في مكانه، نفذ خيوط متقطعة midcardinal بحيث القرنية ديها 8 إلى 10 مجموع الغرز واصطف القرنية المانحة بشكل آمن حتى مع وتعلق على المتلقي السرير الكسب غير المشروع القرنية.
- تعميق الغرفة الأمامية
- تعميق الغرفة الأمامية عن طريق حقن HBSS أو فقاعة الهواء في الغرفة الأمامية وتحقق بلطف على سلامة القرنية الكسب غير المشروع للتسرب مع الاسفنج السليلوز.
ملاحظة: إذا كان لا يمكن إصلاحه الغرفة الأمامية ثم هناك احتمال كبير لجataract الأمر الذي سيجعل التقييمات المستقبلية للقرنية المزروعة صعبة للغاية وسوف أيضا أن تؤدي إلى ضعف بطانة القرنية المانحة وبالتالي فشل الكسب غير المشروع.
- تعميق الغرفة الأمامية عن طريق حقن HBSS أو فقاعة الهواء في الغرفة الأمامية وتحقق بلطف على سلامة القرنية الكسب غير المشروع للتسرب مع الاسفنج السليلوز.
- التقييم النهائي
- مراقبة العين لتحديد أن التلميذ هو جولة وعمق الغرفة الأمامية أمر طبيعي.
ملاحظة: إذا كان التلميذ ليست جولة هذا يدل على أنه خلال خياطة القزحية تضررت وبالتالي يعتبر الكسب غير المشروع عطل فني. - تطبيق مرهم مضاد حيوي للعين. اختياري: قم بإغلاق غطاء العين مع خياطة الحرير 7-0.
- مراقبة الفئران حتى تكون مستيقظا تماما وبشكل فردي ثم إيوائهم مدة لا تقل عن يومين بعد الجراحة.
- مراقبة العين لتحديد أن التلميذ هو جولة وعمق الغرفة الأمامية أمر طبيعي.
3. إزالة خياطة
- في تلك الحالات التي يستخدم فيها الغطاء خياطة، تخدير الفئران كما هو موضح أعلاه وإزالة خياطة غطاء في 48 ساعة.
- تخدير الفئران في يوم 7 بعد العمل الجراحي. إزالة suturوفاق تأمين الكسب غير المشروع القرنية. مرة واحدة يتم إزالة الغرز وأيقظت الحيوان تماما، إعادته إلى قفصه.
4. التقييم السريري
- فحص العين للمؤشرات لمضاعفات الإجرائية التي تشمل الساد (تغيم العدسة)، تحدمية (الدم في الغرفة الأمامية)، والغرفة الأمامية ليست على عمق مناسب، أو غموض كبير من القرنية. نظر في تلك التي تثبت هذه المضاعفات مثل "خطر" والموت ببطء لهم عن طريق الاستنشاق CO 2.
- إجراء كافة الفحوص التي أجريت على الفئران unanesthetized. عقد الماوس بيد واحدة وبالتالي تقييد الماوس بحيث يمكن من ناحية أخرى proptose العين لتمكين رؤية أفضل للعين. وبمجرد الانتهاء من الملاحظات، يعود الحيوان إلى قفصه.
- وقد مراقب غير مألوف مع مجموعات العلاج وتقييم زرع القرنيات من 2 إلى 3 مرات في الأسبوع لعلامات الكسب غير المشروع القرنيةحلقة الرفض أو الفشل الكسب غير المشروع القرنية. استخدام إما المجهر الجراحي أو الأفقي biomicroscope شق مصباح لهذه الملاحظات.
- تقييم كل القرنية لالتعتيم باستخدام مقياس من 0 إلى 5. يتم تعريف نطاق كما يلي:
- تعيين على درجة من 0 إلى تلك القرنيات التي ليس لها علامات التعتيم.
- تعيين على درجة من 1 إلى تلك القرنيات التي تظهر أدنى غموض سطحية.
- تعيين النتيجة من 2 إلى القرنيات التي تعرض غموض خفيف وأعمق ولكن التلميذ وقزحية الكامنة لا تزال ملحوظ.
- تعيين النتيجة من 3 إلى القرنية التي تعرض انسجة التعتيم حيث لا يمكن رؤيتها القزحية بالتفصيل باستثناء هامش التلميذ.
- تعيين النتيجة من 4 إلى القرنية التي تعرض انسجة كثيفة التعتيم وإذا لم الهياكل يمكن عرضها.
- تعيين على درجة من 5 إلى القرنية التي تعرض التعتيم الكامل وانسجة ذمة مكثفة، مع التلميذ وقزحية العين تحجب تماما.
- تقييم أيضا كل القرنية لدرجة تسلل الأوعية الدموية (اتساع الأوعية الدموية) باستخدام مقياس تقييم من 1 إلى 8. ولتحقيق ذلك، عرض القرنية أنها تتكون من 4 الأرباع متساوية وتحديد مقدار الأوعية الدموية في كل من هذه الأرباع مع النتيجة التي سوف تتراوح من 0 (أي السفن) إلى 2 لواسعة من الأوعية الدموية التي رباعي. إضافة عشرات الفردية من كل رباعي لحساب النتيجة النهائية اتساع الأوعية الدموية.
- تصنيف القرنيات رفضت تماما كما لو كان لديهم على 3 نقاط عن ملاحظتين متتالية للمرة يشير تصل إلى 5 أسابيع.
- تصنيف الفئران التي كانت واضحة في 5 أسابيع ولكن القرنيات تطوير عتامة في بعض الأحيان> 45 آخر أيام engraftment، برصيد 3 نقاط زمنية لمدة متتالية، وبعد أن خضع أواخر الأجل رفض المزروع القرنية. استخدام كابلان-ماير منحنيات البقاء على قيد الحياة لتحليل بقاء الكسب غير المشروع.
- تقييم كل القرنية لالتعتيم باستخدام مقياس من 0 إلى 5. يتم تعريف نطاق كما يلي:
5. التلاعب نموذج
في اليسار: 40px؛ ">- لتحضير الخلايا واحدة، الموت ببطء أولا الماوس المانحة. ثم، وإزالة الطحال.
- وضع الطحال في مصفاة الخلية وتعطيل ذلك مع المكبس من حقنة حقنة 3 مل.
- غسل الخلايا وresuspend في 10 مل من محلول الملح المتوازن هانكس.
- إزالة 10 ميكرولتر من تعليق خلية وإضافة إلى 10 ميكرولتر من 0.4٪ التريبان الأزرق والمزيج. إضافة إلى أن عدادة الكريات وعدد الخلايا في الشبكة المركزية. عدد الخلايا في الأنبوب هو عدد خلايا × 10 4 × 2 (عامل التخفيف باللون الأزرق التريبان) × 10 (وحدة التخزين في الأنبوب).
- تخدير الفئران كما هو موضح سابقا.
- إجراء الحقن باستخدام مجهر تشريح. لكل حقن intracameral، استخدم 10 6 خلايا الطحال في حجم 0.005 مل وميكروليتر حقنة 0.25 مل مزودة إبرة 33 G.
ملاحظة: التلاعب أخرىالنموذج يمكن أن يقوم بها معالجة الحيوانات مع الكواشف التي تعمل إما الخصوم أو منبهات لتحديد الدور الذي يمكن أن تلعبه عاملا خاصا التالية مثلي جراحة القرنية المزروع.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم استخدام نموذج الفئران من زرع القرنية لأكثر من 20 عاما لتوصيف آليات كل من رفض المزروع 19-23 القرنية والقرنية قبول المزروع 13، 15،16،18، 24-27 بنجاح. وقد استخدم هذا النموذج لتحديد أهمية FASL التعبير في قبول المزروع القرنية، في أن الحيوانات التي تفتقر FASL لم تكن قادرة على قبول المغايرة القرنية 15. كما تم استخدامه لإثبات أن عامل نمو بطانة 1 مستقبلات العلاج morpholino الوعائية يزيد بشكل كبير القرنية بقاء الكسب غير المشروع 28. في تقرير حديث جدا تم استخدام هذا النموذج لاختبار ما إذا كانت المعالجة من الفئران قبل engraftment القرنية مع الستيرويدات القشرية عقد أي فوائد علاجية (29). أظهرت الباحثون أن هذه المعالجة لم تحسين معدل البقاء على قيد الحياة من 29 المغايرة القرنية. تثبت هذه التقارير بوضوح إلى أن الميزة الأساسية لهذا النموذج هي أنيمكن للمرء أن يدرس في الحيوانات الحية تلك الأشياء التي يعتقد أنها مهمة لنجاح عمليات زراعة القرنية في البشر.
وأفادت دراسات سابقة من هذا المختبر أن أحد رؤساء الآليات المسؤولة عن الرفض المزروع القرنية هو إقامة النظامية تأخر من نوع فرط الحساسية (DTH) لalloantigens محددة أعربت عنها المزروع القرنية 19، 20. وقد استخدمنا منذ هذا النموذج لاختبار ما إذا كان إنشاء مستضد خيفي النظامية التسامح DTH لalloantigens التي أعرب عنها المزروع القرنية المانحة يحسن البقاء على قيد الحياة من هذه الطعوم. كما هو مبين في الشكل 1، tolerized الفئران BALB / ج لC57BL / 10 (B10) alloantigens لم يحسن قبول المزروع القرنية مقاسا الوقت يعني بقاء لهذه المغايرة القرنية. وبالتالي فإن بقاء الوقت نفسه عن رفض القرنيات نفسها سواء كانت الفئران tolerized أم لا. نحن أيضا دراسات مماثلة أجريت باستخدام الردود الكسب غير المشروع الجلد كوسيلةاختبار فعالية النظامية DTH tolerization. وأظهرت هذه الدراسات أنه عندما تأسست التسامح DTH في BALB / ج الفئران نحو B10 alloantigens، ترقيع الجلد تحمل بعض (B10.D2 وC.B10-H-2 ب) أو كل B10 alloantigens لم يظهر أي زيادة الوقت يعني بقاء ( الشكل 2). استنتجنا من هذه الدراسات أن BALB / ج الفئران التي أنشأت الردود DTH مستضد معين لا تستمد أي فائدة من مثل هذا التسامح يمكن قياسها إما المغايرة القرنية أو الجلد. وتشير هذه البيانات أيضا أن المعلومات التي سوف تدرس نموذج الفئران من زرع القرنية، في بعض الأحيان، تكون قابلة للتطبيق مباشرة إلى أشكال أخرى من زراعة الأنسجة الصلبة.
تم حقن الرقم 1. BALB / ج الفئران في الغرفة الأمامية مع 10 6 خلايا الطحال من C57BL / 10 (B10) الفئران. (ع> 0.05).
الشكل 2. حقن خلايا الطحال في الغرفة الأمامية لا يؤثر بقاء ترقيع الجلد خيفي. تم حقن الفئران BALB / ج في الغرفة الأمامية مع 10 6 خلايا الطحال من C57BL / 10 الفئران. بعد أسبوع واحد هذه الفئران تم المغروسة بشكل منفصل مع الجلد من C57BL / 10، ن = 10، B10.D2، ن = 7، C.B10-H-2 ب، ن = 7 الفئران ومقارنةالفئران التي لم تحقن والمغروسة مع C57BL / 10 الجلد، ن = 10. يتم التعبير عن النتائج على الوقت يعني بقاء + SEM.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نموذج الفئران من زرع القرنية هو موضح هنا تمكن الباحث لدراسة المزروع رفض القرنية البشرية في نموذج تنبؤي هو ما هي أفضل عوامل ترتبط مع كل من رفض 15،17،18،20، 26-30 و21-25 القبول من القرنية المغايرة. خلافا لزرع القرنية البشرية، حيث يتم إعطاء المرضى سواء الموضعية أو الجهازية العلاج الستيرويد إما لعلاج أو منع رفض 31، وعادة ما يستخدم هذا النموذج لتحديد تلك العوامل التي لها صلة المزروع الرفض في حالة عدم وجود مثل هذا العلاج. بالإضافة إلى نموذج للرفض الحاد المزروع القرنية، والذي يحدث عادة في غضون 30 إلى 40 يوما من زرع، ونحن أيضا تقديم نموذج أواخر الأجل لهذا الرفض الذي يحدث 45 يوما بعد engraftment في الفئران ويقلد العديد من الميزات في الآونة الأخيرة الاجل والرفض المزمن الذي 32،33 حتى الآن لم يتم غرار لدى الحيوانات.
تيانه القوة هي النموذج الذي يمكن للمرء أن تشريح الآليات المختلفة التي تعتبر مسؤولة عن نسبة عالية نسبيا من القبول المزروع القرنية وكذلك تحديد الآليات التي هي الأكثر المسؤولة عن الفشل المزروع القرنية. يسمح هذا النموذج أيضا واحدة لاختبار الاستراتيجيات العلاجية المختلفة في الحيوانات التي تمتلك جهاز المناعة مشابه جدا لجهاز المناعة البشري. تحقيقا لهذه الغاية، فإن وجود العديد من المواد الكيميائية التي تتفاعل مع العوامل الفئران وكذلك الفئران المعدلة وراثيا والتي تستهدف الجينات، تسمح لتقييم العديد من أكثر العوامل من شأنه أن يكون عليه الحال مع الأنواع الأخرى. هذه القدرة على تقييم العديد من العوامل المختلفة التي تعتبر مهمة لكلا النجاح والفشل من المغايرة القرنية هي إيجابية كبيرة لصالح باستخدام هذا النموذج الفئران مقابل النماذج الحيوانية الأخرى التي هي أسهل عملية جراحية لأداء نظرا لزيادة حجم عيون هذه الأنواع.
في حين أن هناك العديد من نقاط الضعف في هذا النموذج،نحن نعتقد أن القوة تفوق بكثير منهم. واحدة من أهم والتي ألمح إليها أعلاه، هو الخبرة الفنية المشاركة في أداء زرع القرنية في الفئران. نظرا لصغر حجم العين الفئران، وهذا يتطلب شخص بارع في المجهرية، سواء في أداء زرع وكذلك إزالة الغرز. وبالتالي، هناك حاجة الممارسة المتكررة لإتقان وإجادة في الحفاظ على هذه التقنية. الضعف الثاني هو أنه في حين أن الفئران هي مشابهة جدا للإنسان، وأنها ليست هي نفسها. هذه الحيوانات تعرض ميل أكبر نحو اتساع الأوعية الدموية، من القيام القرنيات البشرية. وعلاوة على ذلك، فإن هذا النموذج لا تحاكي العمليات الجراحية تهدف الى علاج ضعف الخلايا البطانية مثل ضمور Fuch ل2. كانوا يعملون قبل زرع سمك كامل العام الأخير في مثل تلك المستخدمة في بروتوكول صفها. في الوقت الحاضر، وقد استخدمت عمليات زرع البطانية التي تشمل فقط الجزء البطانية من القرنية
لرفض الراحل الأجل (> 45 يوما) عاملين فريدة من نوعها لهذا الإصدار من طراز تبرز. يجب الحفاظ على ضعف الأول مع هذا النموذج من النموذج هو أن الفئران مدة لا تقل عن شهرين إلى ثلاثة أشهر من أجل دراسة الرفض أواخر الأجل. وثانيا، يجب على القرنيات البقاء على قيد الحياة لأول مرة ردود فعل الرفض الحادة المحتملة. تحدث هذه الرفض الحاد في 50 إلى 70٪ من المتلقين 17، 20 -24. وبالتالي لدراسة الرفض أواخر الأجل واحد سوف تدبر الفئران التي سيتم رفض تماما زرع ولن البقاء على قيد الحياة حتى 45 يوما بعد engraftment. من أجل التخفيف من هذا وجدنا أن نسبة الرفض في الفئران الذكور أقل من تلك التي لوحظت على الفئران الإناث (مخطوط قيد الإعداد) وهكذا لدراسة الرفض أواخر المدى ينصح أن الفئران الذكور فقطاستخدامها. حاولنا أيضا إلى إطالة أمد بقاء المزروع القرنية مع العلاج الستيرويد، ولكن هذا لم يثبت أنه مفيد بشكل خاص (الملاحظات الشخصية)، وبالتالي لا ننصح أن العلاج الستيرويد يمكن استخدامها. على الرغم من هذه التعقيدات والتحذير من أن ما يقرب من المرجح أن نصف أو أكثر قليلا من تلك المغروسة مع القرنيات خيفي ستبقى واضحة إلا بعد 45 يوما، وهذا لا يزال نموذجا مفيدا جدا لدراسة تلك العوامل التي لها صلة رفض الراحل الأجل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Surgical Microscope | Zeiss | Rebuilt | |
| 1 ml Syringe | BD | 305122 | |
| 3 ml Syringe | BD | 309657 | |
| 10 ml Syringe | BD | 309602 | |
| Vannus Scissors | Stortz | E-3387 | |
| 11-0 Sutures | Alcon | 717939M | |
| Trephine 2.0 mm | Katena | K 2-7520 | |
| Trephine 1.5 mm | Katena | K 2-7510 | |
| Tricaine Hydrochloride 0.5% | Alcon | NDC 0065-0741-12 | |
| Healon | Abbott | Healon OVD | |
| Forceps | FST | 11251-20 | |
| 7-0 Sutures | Alcon | 8065 | |
| 2.5% Phenylephrine HCl | Alcon | NDC 61314-342-02 | |
| 1% Tropicamide | Bausch & Lomb | NDC-24208-585-59 | |
| Hamilton Syringe | Hamilton | 7654-01 | |
| 33 gauge needle | Hamilton | 90033 | |
| Cell Strainer (100 μm nylon) | BD Falcon | 352360 | |
| Hemocytometer | Cardinal Health | B3175 | |
| Trypan Blue | Sigma | T8154 |
References
- Farooq, A. V., Shukla, D. Herpes simplex epithelial and stromal keratitis: an epidemiologic update. Surv. Ophthalmol. , 448-462 (2012).
- Gipson, I. K. Age-related changes and diseases of the ocular surface and. Invest. Opthlamol. Vis. Sci. 54, 48-53 (2013).
- Edwards, M., et al. Indications for corneal transplantation in New Zealand: 1991-1999. Cornea. 21, 152-155 (2002).
- Thompson, R. W., Price, M. O., Bowers, P. J., Price, F. W. Long-term survival after penetrating keratoplasty. Ophthalmol. 110, 1396-1402 (2003).
- Williams, K. A., Roder, D., Esterman, A., Muehlberg, S. M., Coster, D. J. Factors predictive of corneal graft survival. Report form the Australian Corneal Graft Registry. Ophthalmology. 99, 403-414 (1992).
- Larkin, D. F. Corneal allograft rejection. Br. J. Ophthalmol. 78, 649-652 (1994).
- Boisjoly, H. M., et al. Risk factors of corneal graft failure. Ophthalmol. 100, 1728-1735 (1993).
- Sugar, A., et al. Recipient Risk Factors for Graft Failure in the Cornea Donor Study. Ophthalmol. 116, 1023-1028 (2009).
- Namba, K., Kitaichi, N., Nishida, T., Taylor, A. W. Induction of regulatory T cells by the immunomodulating cytokines alpha-melanocyte-stimulating hormone and transforming growth factor-beta2. J. Leukoc. Biol. 72, 946-952 (2002).
- Taylor, A. W., Yee, D. G., Streilein, J. W. Suppression of nitric oxide generated by inflammatory macrophages by calcitonin gene-related peptide in aqueous humor. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1372-1378 (1998).
- Wilbanks, G. A., Mammolenti, M., Streilein, J. W. Studies on the induction of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID). III. Induction of ACAID depends upon intraocular transforming growth factor-beta. Eur. J. Immunol. 22, 165-173 (1992).
- Volpert, O. V., et al. Inducer-stimulated Fas targets activated endothelium for destruction by anti-angiogenic thrombospondin-1 and pigment epithelium-derived factor. Nat. Med. , 8-349 (2002).
- Apte, R. S., Sinha, D., Mayhew, E., Wistow, G. J., Niederkorn, J. Y. Cutting edge: role of macrophage migration inhibitory factor in inhibiting NK cell activity and preserving immune privilege. J. Immunol. 160, 5693-5696 (1998).
- Kennedy, M. C., et al. Novel production of interleukin-1 receptor antagonist peptides in normal human cornea. J. Clin. Invest. 95, 82-88 (1995).
- Shimmura-Tomita, M., Wang, M., Taniguchi, H., Akiba, H., Yagita, H., Hori, J. Galectin-9-mediated protection from allo-specific T cells as a mechanism of immune privilege of corneal allografts. PLoS One. 8, (2013).
- Goldberg, M. F., Ferguson, T. A., Pepose, J. S. Detection of cellular adhesion molecules in inflamed human corneas. Ophthalmol. 101, 161-168 (1994).
- Stuart, P. M., Griffith, T. S., Usui, N., Pepose, J. S., Yu, X., Ferguson, T. A. CD95 ligand (FasL)-induced apoptosis is necessary for corneal allograft survival. J Clin Invest. 99, 396-402 (1997).
- Yamagami, S., et al. Role of Fas-Fas ligand interactions in the immunorejection of allogeneic mouse corneal transplants. Transplantation. 64, 1107-1111 (1997).
- Stuart, P. M., Pan, F., Plambeck, S., Ferguson, T. A. Fas/Fas ligand interactions regulate neovascularization in the cornea. Invest. Ophthalmmol. Vis. Sci. 44, 93-98 (2003).
- Stuart, P. M., Yin, X. T., Pan, F., Haskova, Z., Plambeck, S., Ferguson, T. A. Inhibitors of matrix metalloproteinases activity prolong corneal allograft acceptance by increasing FasL expression. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1169-1173 (2004).
- Joo, C. -K., Pepose, J. S., Stuart, P. M. T-cell mediated responses in a murine model of orthotopic corneal transplantation. Invest.Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 1530-1540 (1995).
- Sonoda, Y., Sano, Y., Ksander, B., Streilein, J. W. Characterization of cell-mediated immune responses elicited by orthotopic corneal allografts in mice. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 427-434 (1995).
- Sano, Y., Osawa, H., Sotozono, C., Kinoshita, S. Cytokine expression during orthotopiccorneal allograft rejection in mice. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1953-1957 (1998).
- Haskova, Z., Usui, N., Ferguson, T. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. CD4+ T cells are critical in corneal but not skin allograft rejection. Transplantation. 69, 483-488 (2000).
- Tan, Y., et al. Immunological disruption of antiangiogenic signals by recruited allospecific T cells leads to corneal allograft rejection. J. Immunol. 188, 5962-5969 (2012).
- Dana, M. R., Yamada, J., Streilein, J. W. Topical interleukin-1 receptor antagonist promotes corneal transplant survival. Transplantation. 63, 1501-1507 (1997).
- Cunnusamy, K., Chen, P. W., Niederkorn, J. Y. IL-17A-dependent CD4+CD25+ regulatory T cells promote immune privilege of corneal allografts. J. Immunol. 186, 6737-6745 (2011).
- Fu, H., et al. Arginine depletion as a mechanism for the immune privilege of corneal allografts. Eur. J. Immunol. 41, 2997-3005 (2011).
- Medina, C. A., Rowe, A. M., Yun, H., Knickelbein, J. E., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. Azithromycin treatment increases survival of high-risk corneal allotransplants.Cornea. , 32-658 (2013).
- Cho, Y. K., Zhang, X., Uehara, H., Young, J. R., Archer, B., Ambati, B. Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 morpholino increases graft survival in a murine penetrating keratoplasty. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 8458-8471 (2012).
- Kim, H. K., Choi, J. A., Uehara, H., Zhang, X., Ambati, B. K., Cho, Y. K. Presurgical corticosteroid treatment improves corneal transplant survival in mice. Cornea. 32, 1591-1598 (2013).
- Yamazoe, K., Yamazoe, K., Shimazaki-Den, S., Shimazaki, J. Prognostic factors for corneal graft recovery after severe corneal graft rejection following penetrating keratoplasty. BMC Ophthalmol. 13, 5 (2013).
- Panda, A., Vanathi, M., Kumar, A., Dash, Y., Priya, S. Corneal graft rejection. Surv. Ophthalmol. 52, 375-396 (2007).
- Patel, S. V. Graft survival and endothelial outcomes in the new era of endothelial keratoplasty. Exp. Eye Res. 95, 40-47 (2012).
- Anshu, A., Price, M. O., Tan, D. T., Price, F. W. Jr Endothelial keratoplasty: a revolution in evolution. Surv. Ophthalmol. 57, 236-252 (2013).
