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Murine प्रत्यारोपण: ठोस अंग प्रत्यारोपण के सबसे आम रूप अध्ययन के लिए एक मॉडल

Published: November 17, 2014 doi: 10.3791/51830
Automatic Translation
1, 1, 1
1Department of Ophthalmology, Saint Louis University

Introduction

प्रत्यारोपण मानव में प्रदर्शन किया प्रत्यारोपण के सबसे सफल और आम प्रकार से एक है. इस सर्जरी से किया जाता है कारण चोट, संक्रामक रोग 1, या गैर-संक्रामक कार्निया रोग 2 के अन्य रूपों का परिणाम होते हैं. अमेरिका के नेत्र बैंक एसोसिएशन से आंकड़े 46,000 से अधिक (: restoresight.org/eye_banks/eye_banks.html पर वेब साइट देखें) 2011 में प्रदर्शन किया गया है कि संकेत मिलता है. अपनी सफलता का एक संकेत एलोजेनिक कॉर्निया ग्राफ्ट के लिए एक वर्ष असफलता की दर 10 से 15% करने के लिए और सफलता 70% 3-8 से अधिक है 5 साल में सीमा होती है. कई अध्ययनों से पता चला है के रूप में, कॉर्निया allografts की सफलता सीधे आंख एक immunologically विशेषाधिकार प्राप्त साइट है कि इस तथ्य से संबंधित है. एक प्रतिरक्षा विशेषाधिकार साइट के रूप में कॉर्निया की स्थिति के लिए जिम्मेदार कारकों कि suppres कॉर्निया द्वारा उत्पादित कॉर्निया में दोनों रक्त और लसीका वाहिकाओं की कमी, प्रतिजन पेश कोशिकाओं के एक रिश्तेदार अभाव, कारकों में शामिलप्रतिरक्षा प्रेरक funtions 9-15 है, एमएचसी की कम अभिव्यक्ति 16 एंटीजन, और FasL 17-20 की अभिव्यक्ति.

हालांकि, सफलता के लिए इन ग्राफ्ट predisposing इन कारकों के बावजूद, वे अस्वीकृति 3-7 से गुजरना है. नतीजतन, इस अस्वीकृति मध्यस्थता कि उन तंत्र को समझने के साथ ही अस्वीकृति को रोकने के लिए विभिन्न उपचारों के परीक्षण के महत्व का है. कि अंत करने के लिए, हम यहां एक नियंत्रित प्रयोगात्मक वातावरण में प्रत्यारोपण का अध्ययन करने के लिए 20 साल के लिए उपयोग में किया गया है कि प्रत्यारोपण के एक murine मॉडल का वर्णन. प्रत्यारोपण प्रतिक्रियाओं परम प्रत्यारोपित ऊतक विफल रहता है या सफल होता है या नहीं यह निर्धारित होगा कि संगीत कार्यक्रम में काम कर रहे कई विभिन्न कारकों को शामिल है, यह किसी भी इन विट्रो मॉडल में उन कारकों के महत्व को समझने के लिए संभव नहीं है. नतीजतन, अक्षत जानवरों का उपयोग अध्ययन सफलता या failu या तो महत्वपूर्ण हैं क्या कारकों का निर्धारण करने के लिए आवश्यक हैंप्रत्यारोपित ऊतक के पुन.

जानवरों की अन्य प्रजातियों प्रत्यारोपण अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है जबकि अन्य प्रजातियों का उपयोग करने के लिए जब तुलना में, murine मॉडल के कई फायदे हैं. पहले कुछ transgenes व्यक्त या जिसका समारोह प्रत्यारोपण में बेहतर अध्ययन किया जा सकता विशिष्ट प्रतिरक्षा कारकों की अभिव्यक्ति की कमी के लिए जीन-लक्षित किया गया है कि चूहों के कई उपभेदों का अस्तित्व है. इसके अलावा, पशुओं के कई अन्य प्रजातियों के लिए मौजूद नहीं है चूहों के लिए विशिष्ट हैं और जो कि कई अभिकर्मकों (कारकों को बेअसर कि पुनः संयोजक कारकों और एंटीबॉडी दोनों) कर रहे हैं. इन कारकों के कारण अस्तित्व का, इस मॉडल तीव्र कॉर्निया allograft प्रतिक्रियाएं 15, 17,18,20 -29 में शामिल प्रासंगिक कारकों की पहचान करने के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है. इसके अलावा, प्रत्यारोपण में शामिल कारकों में से कई को भी अन्य ऊतकों के प्रत्यारोपण में कार्यक्षम होने के लिए जाना जाता है.

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Protocol

नोट: इस प्रक्रिया में उपयोग किए गए सभी जानवरों विजन फॉर रिसर्च एसोसिएशन और नेत्र विज्ञान बयान नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में पशुओं के उपयोग के लिए और साथ ही सेंट लुइस विश्वविद्यालय में पशु निरीक्षण समिति द्वारा नीचे निर्धारित दिशा निर्देशों के अनुसार किया जाता है.
नोट: सभी शल्य चिकित्सा उपकरण और समाधान की आंख के सूक्ष्म जीवाणु संक्रमण को सीमित करने के लिए सर्जरी से पहले निष्फल रहे हैं. यह जानवरों इस प्रक्रिया से कुछ दर्द का अनुभव करते हैं, जबकि हम दर्दनाशक दवाओं को रोजगार नहीं है कि ध्यान दिया जाना चाहिए. सभी दर्दनाशक दवाओं विरोधी भड़काऊ हैं और प्रत्यारोपण प्रतिक्रियाओं सूजन शामिल है, क्योंकि विरोधी भड़काऊ दवाओं के उपयोग कॉर्निया भ्रष्टाचार विफलता में शामिल कर रहे हैं क्या कारकों का निर्धारण करने की क्षमता समझौता होगा क्योंकि इस का कारण है.

1. संज्ञाहरण

  1. Ketamine (86 के आईपी इंजेक्शन द्वारा सामान्य संज्ञाहरण के तहत दाता और प्राप्तकर्ता चूहों रखें.98 मिलीग्राम / किग्रा) और xylazine (13.04 मिलीग्राम / किग्रा).
  2. आम तौर पर एक घंटा 30 मिनट लगते हैं, जो प्रक्रिया के दौरान संज्ञाहरण के तहत प्राप्तकर्ता माउस रखें. नतीजतन, लगातार चेतना वापस आ के किसी भी लक्षण के लिए माउस की निगरानी.
  3. पशु सूखापन को रोकने के लिए anesthetized है के बाद सर्जरी से गुजरना नहीं होगा कि आंख को puralube मरहम लागू करें.

2. कॉर्नियल कलम बांधने का काम

  1. दाता कॉर्निया बटन प्राप्त करने के.
    1. पशु पूरी तरह anesthetized है एक बार, 1% tropicamide और 2.5% phenylephrine हाइड्रोक्लोराइड की आंख बूंदों के एक जोड़े के प्रशासन द्वारा पर्याप्त mydriasis हासिल.
    2. क्षैतिज एक तगड़ा चल समर्थन पर रखा एक बोर्ड पर दाता पशु के सिर की स्थिति. आँख पूरे ऑपरेशन के दौरान एक क्षैतिज स्थिति में है कि यह सुनिश्चित करने के लिए गर्दन के पार टेप की एक स्ट्रिप के साथ सिर को ठीक करें.
    3. बाहर, जिसका टिप मिथाइल नीले रंग के साथ रंगे गया था एक 2 मिमी व्यास trephine, का उपयोगकेंद्रीय कॉर्निया भ्रष्टाचार साइट लाइन.
    4. एक तेज ब्लेड के साथ, कॉर्निया घुसना और दाता अन्तःचूचुक और अंतर्निहित लेंस को नुकसान की संभावना को कम करने के लिए यह गहरा करने के लिए पूर्वकाल कक्ष में healon इंजेक्षन.
    5. Vannas कैंची से दाता भ्रष्टाचार उत्पाद शुल्क और उपयोग करें जब तक हैंक्स 'संतुलित नमक समाधान युक्त एक डिश में जगह है.
    6. दाता भ्रष्टाचार हटा दिया गया है के बाद, सीओ 2 साँस लेना के माध्यम से दाता माउस euthanize.
  2. भ्रष्टाचार बिस्तर तैयारी.
    1. प्राप्तकर्ता के लिए 2.1.2 के माध्यम से 2.1.1 में वर्णित के रूप में एक ही कदम दोहराएँ.
    2. एक 1.5 मिमी व्यास trephine का उपयोग करना, प्राप्तकर्ता भ्रष्टाचार साइट रूपरेखा.
    3. एक तेज ब्लेड के साथ, कॉर्निया घुसना और अंतर्निहित लेंस को नुकसान की संभावना को कम करने के लिए यह गहरा करने के लिए पूर्वकाल कक्ष में healon इंजेक्षन.
    4. Vannas कैंची का उपयोग प्राप्तकर्ता से उल्लिखित केंद्रीय कॉर्निया बटन निकालें और त्यागने.
  3. Suturingकलम
    1. प्राप्तकर्ता का कॉर्निया में बिस्तर भ्रष्टाचार खत्म दाता कॉर्निया रखें. पर्याप्त healon लेंस के साथ सीधे संपर्क से क्षति से दाता endothelial कोशिकाओं की रक्षा के लिए दाता कॉर्निया के तहत है कि सुनिश्चित करें.
    2. सुपर ठीक इत्तला दे दी microforceps का उपयोग करना, फिर बंद टाई, प्राप्तकर्ता के पक्ष को पूर्ण मोटाई के 90% गहराई के साथ दाता के माध्यम से, दाता पक्ष में 11-0 नायलॉन सीवन की पहली काटने जगह है.
    3. कॉर्निया जगह में लंगर डाले जाने के बाद, कॉर्निया 8 से 10 कुल टांके है और दाता कॉर्निया सुरक्षित रूप से लाइन में खड़ा करके प्राप्तकर्ता कॉर्निया भ्रष्टाचार बिस्तर से जुड़ा हुआ है कि इस तरह के midcardinal बाधित टांके प्रदर्शन करते हैं.
  4. पूर्वकाल कक्ष गहरा
    1. पूर्वकाल कक्ष में HBSS या हवा बुलबुला इंजेक्शन द्वारा पूर्वकाल कक्ष गहरा और धीरे से एक सेलूलोज़ स्पंज के साथ रिसाव के लिए कॉर्निया भ्रष्टाचार की अखंडता की जाँच करें.
      नोट: पूर्वकाल चैम्बर सुधार नहीं किया जा सकता है, तो सी के एक उच्च संभावना हैप्रतिरोपित कॉर्निया का भविष्य मूल्यांकन बहुत मुश्किल कर देगा और भी संभावित दाता कॉर्निया अन्तःचूचुक रोग है और इस तरह भ्रष्टाचार की विफलता के लिए नेतृत्व करेंगे जो ataract.
  5. अंतिम मूल्यांकन
    1. छात्र दौर है और पूर्वकाल कक्ष की गहराई सामान्य है कि निर्धारित करने के लिए आंख का निरीक्षण करें.
      नोट: इस आईरिस suturing के दौरान क्षतिग्रस्त हो गया था कि यह संकेत करता है और इस प्रकार भ्रष्टाचार एक तकनीकी विफलता माना जाता है दौर शिष्य नहीं है.
    2. आंखों के लिए एंटीबायोटिक मलहम लागू करें. वैकल्पिक: एक 7-0 रेशम सीवन के साथ आंख ढक्कन बंद करें.
    3. वे पूरी तरह से जाग रहे हैं और उसके बाद अलग-अलग के बाद सर्जरी दो दिनों की एक न्यूनतम के लिए उन्हें घर तक चूहों को ध्यान से देखें.

3. सीवन हटाना

  1. ढक्कन सिवनी प्रयोग किया जाता है जहां उन मामलों में, जैसा कि ऊपर वर्णित चूहों anesthetize और 48 घंटा पर ढक्कन सिवनी को हटा दें.
  2. Postoperatively के दिन 7 पर चूहों anesthetize. Sutur निकालेंतों कॉर्निया भ्रष्टाचार हासिल. टांके हटा रहे हैं और जानवर पूरी तरह जागृत हो जाने के बाद, अपने पिंजरे को वापस.

4. नैदानिक ​​मूल्यांकन

  1. (पूर्वकाल कक्ष में रक्त) मोतियाबिंद (लेंस के झाई युक्त), hyphema शामिल हैं जो प्रक्रियात्मक जटिलताओं के संकेत के लिए आंख, उचित गहराई, या कॉर्निया की महत्वपूर्ण अस्पष्टता की नहीं है कि एक पूर्वकाल कक्ष की जाँच करें. "समझौता" के रूप में इन जटिलताओं दिखाना है कि उन पर विचार करें और सीओ 2 साँस लेना द्वारा उन्हें euthanize.
    1. Unanesthetized चूहों पर सभी परीक्षाओं को पूरा करें. दूसरी ओर आंख का एक बेहतर विचार सक्षम करने के लिए आँख proptose कर सकते हैं ताकि एक ओर इस प्रकार माउस निरोधक साथ माउस पकड़. टिप्पणियों पूरा हो जाने के बाद, अपने पिंजरे में पशु वापसी.
  2. उपचार समूहों के साथ अपरिचित एक पर्यवेक्षक कॉर्निया भ्रष्टाचार के संकेत के लिए कॉर्निया 2 से 3 बार एक सप्ताह प्रतिरोपित का मूल्यांकनअस्वीकृति एपिसोड या कॉर्निया भ्रष्टाचार विफलता. सर्जिकल माइक्रोस्कोप या इन टिप्पणियों के लिए एक क्षैतिज भट्ठा-दीपक biomicroscope या तो उपयोग करें.
    1. निम्नानुसार पैमाने परिभाषित किया गया है 5. 0 के पैमाने का उपयोग अस्पष्टता के लिए हर कॉर्निया का मूल्यांकन करें:
      1. अस्पष्टता के कोई संकेत नहीं है कि उन कॉर्निया को 0 के स्कोर निरुपित.
      2. न्यूनतम सतही अस्पष्टता पता चलता है कि उन कॉर्निया को 1 के स्कोर निरुपित.
      3. हल्के और गहरे अस्पष्टता प्रदर्शित लेकिन अंतर्निहित छात्र और आईरिस अभी भी discernable हैं कि कॉर्निया को 2 के स्कोर निरुपित.
      4. आईरिस शिष्य मार्जिन के अपवाद के साथ विस्तार से नहीं देखा जा सकता है जिसमें स्ट्रोमल अस्पष्टता प्रदर्शित कि कॉर्निया को 3 के स्कोर निरुपित.
      5. घने स्ट्रोमल अस्पष्टता को प्रदर्शित करने और कोई अंतर्निहित संरचनाओं देखा जा सकता है कि यदि कॉर्निया को 4 के स्कोर निरुपित.
      6. पूरी तरह से छिप छात्र और आईरिस के साथ पूरा अस्पष्टता और गहन स्ट्रोमल शोफ, प्रदर्शित है कि कॉर्निया को 5 के स्कोर निरुपित.
    2. इसके अलावा, रक्त वाहिनियों की घुसपैठ (neovascularization) यह पूरा करने के लिए 1 8 के एक दर्ज़ा पैमाने का उपयोग करते हुए की डिग्री के लिए हर कॉर्निया का मूल्यांकन 4 बराबर quadrants से मिलकर रूप में कॉर्निया को देखने और एक साथ इन quadrants में से प्रत्येक में रक्त वाहिकाओं की राशि का निर्धारण कि वृत्त का चतुर्थ भाग के व्यापक vascularization के लिए 2 0 (कोई वाहिकाओं) से कि इच्छा रेंज स्कोर. अंतिम neovascularization स्कोर की गणना करने के लिए प्रत्येक वृत्त का चतुर्थ भाग से व्यक्तिगत स्कोर जोड़ें.
    3. वे 5 सप्ताह तक बताते समय के लिए लगातार दो टिप्पणियों के लिए 3 के स्कोर के रूप में यदि तीव्रता से खारिज कर दिया कॉर्निया वर्गीकृत.
    4. जिसका कॉर्निया 5 हफ्तों में स्पष्ट थे चूहों वर्गीकृत लेकिन आया देर तक कॉर्निया allograft अस्वीकृति होने के रूप में,> 45 दिनों के लगातार दो बार के अंक के लिए 3 के स्कोर के साथ, engraftment पोस्ट समय पर अपारदर्शन विकसित करना. भ्रष्टाचार के अस्तित्व का विश्लेषण करने के लिए कापलान-मायर अस्तित्व घटता प्रयोग करें.

मॉडल के 5. हेरफेर

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  • तिल्ली से एकल कक्षों की तैयारी.
    1. एकल कक्षों को तैयार करने के लिए, पहली दाता माउस euthanize. फिर, तिल्ली हटा दें.
    2. एक सेल झरनी में तिल्ली प्लेस और यह एक 3 मिलीलीटर सिरिंज से एक सिरिंज सवार के साथ बाधित.
    3. हैंक्स बैलेंस्ड नमक समाधान के 10 एमएल में कोशिकाओं और resuspend धो लें.
    4. सेल निलंबन के 10 μl निकालें और 0.4% trypan के 10 μl के लिए नीले और मिश्रण जोड़ें. केंद्रीय ग्रिड में कोशिकाओं hemocytometer में जोड़ें और गिनती. ट्यूब में कोशिकाओं की संख्या सेल गिनती 10 x 4 एक्स 2 (trypan नीले रंग में कमजोर पड़ने कारक) 10 (ट्यूब में मात्रा) x है.
  • पूर्वकाल कक्ष में इंजेक्शन.
    1. पहले बताए अनुसार चूहों anesthetize.
    2. एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग इंजेक्शन प्रदर्शन करना. प्रत्येक intracameral इंजेक्शन के लिए, 10 6 एक 0.005 मिलीग्राम मात्रा में तिल्ली कोशिकाओं और एक 33 जी सुई के साथ लगे एक 0.25 मिलीग्राम microliter सिरिंज का उपयोग करें.
      नोट: अन्य जोड़तोड़मॉडल की एक विशेष कारक Orthotopic कॉर्निया allograft सर्जरी के बाद निभा सकते हैं कि भूमिका निर्धारित करने के लिए या तो विरोधी या एगोनिस्ट के रूप में कार्य है कि अभिकर्मकों के साथ पशुओं के उपचार के द्वारा किया जा सकता है.

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    Representative Results

    प्रत्यारोपण के murine मॉडल को सफलतापूर्वक कॉर्निया allograft अस्वीकृति 19-23 और कॉर्निया allograft स्वीकृति 13, 15,16,18, 24-27 दोनों के तंत्र को चिह्नित करने के लिए 20 साल के लिए इस्तेमाल किया गया है. इस मॉडल FasL कमी है कि जानवरों में, कॉर्निया allograft स्वीकृति में FasL अभिव्यक्ति के महत्व को स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था कॉर्निया allografts 15 को स्वीकार करने में सक्षम नहीं थे. यह भी कि संवहनी endothelial वृद्धि कारक रिसेप्टर 1 morpholino उपचार काफी कॉर्निया भ्रष्टाचार अस्तित्व 28 बढ़ जाती है प्रदर्शित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. Corticosteroids के किसी भी चिकित्सीय लाभ 29 आयोजित के साथ एक बहुत ही ताजा रिपोर्ट में इस मॉडल कॉर्निया engraftment से पहले चूहों की pretreatment कि क्या परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. लेखकों ऐसे pretreatment के कॉर्निया allografts 29 के जीवित रहने की दर में सुधार किया था कि पता चला है. इन रिपोर्टों में स्पष्ट रूप से इस मॉडल का प्राथमिक लाभ यह है कि प्रदर्शितएक एक जीवित जानवर में मनुष्यों में कार्निया प्रत्यारोपण की सफलता के लिए महत्वपूर्ण माना जाता है कि उन बातों का अध्ययन कर सकते हैं.

    इस प्रयोगशाला से पिछले अध्ययनों कॉर्निया allograft अस्वीकृति के लिए जिम्मेदार प्रमुख तंत्र की एक कॉर्निया allograft 19, 20 से व्यक्त विशिष्ट alloantigens के लिए प्रणालीगत देरी प्रकार अतिसंवेदनशीलता (डीटीएच) की स्थापना है कि सूचना दी है. हम के बाद से दाता कॉर्निया allograft द्वारा व्यक्त alloantigens के लिए प्रणालीगत alloantigen डीटीएच सहिष्णुता की स्थापना ऐसे grafts के अस्तित्व को बेहतर बनाता है कि क्या परीक्षण करने के लिए इस मॉडल का इस्तेमाल किया है. चित्र 1 में दिखाया गया है, BALB / ग चूहों इन कॉर्निया allografts के लिए मतलब अस्तित्व समय के द्वारा मापा के रूप में कॉर्निया allograft स्वीकृति में सुधार नहीं किया C57BL / 10 (B10) alloantigens को tolerized. इस प्रकार अस्वीकार कर दिया कॉर्निया के लिए मतलब अस्तित्व समय चूहों tolerized या नहीं गया कि क्या एक ही था. हम भी एक साधन के रूप में त्वचा भ्रष्टाचार प्रतिक्रियाओं का उपयोग इसी तरह के अध्ययन का प्रदर्शनके प्रणालीगत डीटीएच tolerization की प्रभावशीलता का परीक्षण. इन अध्ययनों से डीटीएच सहिष्णुता B10 alloantigens की ओर BALB / ग चूहों में स्थापित किया गया था, जब त्वचा असर ग्राफ्ट दिखा दिया कि कुछ (B10.D2 और C.B10-एच 2 बी) या किसी भी प्रदर्शित नहीं किया B10 alloantigens के सभी (अस्तित्व समय मतलब वृद्धि हुई चित्रा 2). हम प्रतिजन विशेष डीटीएच प्रतिक्रियाओं की स्थापना की थी कि BALB / ग चूहों कार्निया या त्वचा allografts के लिए या तो ऐसे सहिष्णुता से किसी भी औसत दर्जे का लाभ प्राप्त नहीं किया था कि इन अध्ययनों से यह निष्कर्ष निकाला. ये आंकड़े भी प्रत्यारोपण के एक murine मॉडल का अध्ययन उत्पन्न जानकारी, समय पर, ठोस ऊतक प्रत्यारोपण के अन्य रूपों को सीधे लागू हो जाएगा कि संकेत मिलता है.

    चित्रा 1
    चित्रा 1. BALB / ग चूहों C57BL / 10 (B10) चूहों से 10 6 तिल्ली कोशिकाओं के साथ पूर्वकाल कक्ष में इंजेक्शन थे. (P> 0.05) का प्रदर्शन नहीं किया.

    चित्रा 2
    पूर्वकाल कक्ष में तिल्ली कोशिकाओं के चित्रा 2. इंजेक्शन एलोजेनिक त्वचा grafts के अस्तित्व को प्रभावित नहीं करता है. BALB / ग चूहों C57BL / 10 चूहों से 10 6 तिल्ली कोशिकाओं के साथ पूर्वकाल कक्ष में इंजेक्शन थे. एक सप्ताह बाद इन चूहों अलग N = 10, B10.D2, एन = 7, C.B10-एच -2 बी, एन = 7 चूहों, C57BL / 10 से त्वचा के साथ engrafted और की तुलना में थेइंजेक्शन और C57BL / 10 त्वचा के साथ engrafted, एन = 10 परिणाम मतलब अस्तित्व समय + SEM के रूप में व्यक्त कर रहे हैं नहीं कर रहे थे कि चूहों.

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    Discussion

    यहाँ वर्णित प्रत्यारोपण की murine मॉडल कारकों सबसे अच्छा दोनों अस्वीकृति 15,17,18,20, 26-30 और कॉर्निया की स्वीकृति 21-25 के साथ जुड़े रहे हैं की भविष्य कहनेवाला है कि एक मॉडल में मानव कॉर्निया allograft अस्वीकृति का अध्ययन करने के अन्वेषक सक्षम बनाता है allografts. रोगियों का इलाज या रोकने या तो अस्वीकृति 31 को या तो सामयिक या प्रणालीगत स्टेरॉयड उपचार दिया जाता है, जिसमें मानव प्रत्यारोपण के विपरीत, इस मॉडल आम तौर पर इस तरह की चिकित्सा के अभाव में अस्वीकृति allograft के लिए प्रासंगिक हैं कि उन कारकों का निर्धारण करने के लिए प्रयोग किया जाता है. आम तौर पर प्रत्यारोपण के 30 से 40 दिनों के भीतर होता है जो तीव्र कॉर्निया allograft अस्वीकृति के लिए एक मॉडल, के अलावा, हम भी चूहों और देर की सुविधाओं के कई mimics में 45 दिनों के बाद engraftment होती है कि इस तरह की अस्वीकृति के देर तक मॉडल पेश इस प्रकार अब तक जानवरों में मॉडलिंग नहीं किया गया है, जो अवधि और पुरानी अस्वीकृति 32,33.

    टीवह मॉडल की ताकत एक कॉर्निया allograft स्वीकृति के अपेक्षाकृत उच्च दर के लिए जिम्मेदार है और साथ ही तंत्र कॉर्निया allograft विफलता के लिए सबसे अधिक जिम्मेदार हैं जो निर्धारण कर रहे हैं कि विभिन्न तंत्र काटना कर सकते हैं कर रहे हैं. यह मॉडल भी एक मानव प्रतिरक्षा प्रणाली के समान है कि एक प्रतिरक्षा प्रणाली के पास जो एक जानवर में विभिन्न चिकित्सीय रणनीतियों का परीक्षण करने की अनुमति देता है. कि अंत करने के लिए, murine कारकों के साथ-साथ ट्रांसजेनिक और जीन-लक्षित चूहों के साथ प्रतिक्रिया है कि कई अभिकर्मकों के अस्तित्व, अन्य प्रजातियों के साथ मामला होगा की तुलना में बहुत अधिक कारकों के मूल्यांकन के लिए अनुमति देते हैं. कॉर्निया allografts के दोनों सफलता और विफलता के लिए महत्वपूर्ण हैं, जो इतने सारे अलग अलग कारकों का मूल्यांकन करने की क्षमता की वजह से आंखों की वृद्धि की आकार के लिए सर्जरी प्रदर्शन करने के लिए आसान है, जिसमें अन्य पशु मॉडलों की तुलना में इस murine मॉडल का उपयोग करने के पक्ष में एक महत्वपूर्ण सकारात्मक है इन प्रजातियों.

    इस मॉडल की कई कमजोरियों हैं,हम ताकत दूर उन्हें पल्ला झुकना विश्वास करते हैं. ऊपर के लिए alluded किया गया था, जो सबसे महत्वपूर्ण में से एक, चूहों में प्रत्यारोपण प्रदर्शन में शामिल तकनीकी विशेषज्ञता है. कारण murine आँख के छोटे आकार के, इस microsurgery में, दोनों टांके के प्रत्यारोपण के साथ ही हटाने का प्रदर्शन करने में माहिर है, जो किसी की आवश्यकता है. नतीजतन, दोहराया अभ्यास गुरु और इस तकनीक में दक्षता बनाए रखने के लिए आवश्यक है. दूसरी कमजोरी चूहों मनुष्य के लिए बहुत समान हैं, जबकि वे एक ही नहीं हो रहा है. इन जानवरों को मानव कॉर्निया की तुलना में, neovascularization की दिशा में एक बड़ा प्रवृत्ति प्रदर्शित करते हैं. इसके अलावा, इस मॉडल Fuch की डिस्ट्रोफी 2 की तरह endothelial सेल रोग के इलाज के लिए होती सर्जिकल प्रक्रियाओं की नकल नहीं करेंगे. वर्णित प्रोटोकॉल में इस्तेमाल लोगों की तरह हाल ही में वर्ष के पूर्ण मोटाई प्रत्यारोपण से पहले कार्यरत थे. वर्तमान में, कॉर्निया का केवल endothelial हिस्से को शामिल एन्दोथेलिअल प्रत्यारोपण नियोजित किया गया है 34, 35> ऊपर. इस तरह के प्रत्यारोपण की वजह से इस तरह के छोटे जानवरों में इस सर्जरी प्रदर्शन करने में कठिनाई करने के लिए इस प्रकार अब तक चूहों में मॉडलिंग नहीं किया गया है.

    देर तक अस्वीकृति (> 45 दिन) के लिए मॉडल के इस संस्करण के लिए अद्वितीय दो कारकों बाहर खड़े हो जाओ. कि चूहों जा रहा मॉडल के इस फार्म के साथ पहली कमजोरी देर तक अस्वीकृति का अध्ययन करने के क्रम में दो से तीन महीने की एक न्यूनतम के लिए बनाए रखा जाना चाहिए. और दूसरी बात, कॉर्निया पहले संभावित तीव्र अस्वीकृति प्रतिक्रियाओं बच चाहिए. इस तरह के तीव्र rejections के 50 में प्राप्तकर्ताओं 17 से 70%, 20 -24 के लिए होते हैं. इस प्रकार जिसका प्रत्यारोपण तीव्रता से खारिज कर दिया जाएगा चूहों उत्पन्न करना होगा देर तक अस्वीकृति एक अध्ययन करने के लिए और 45 दिनों के बाद engraftment जब तक जीवित नहीं रह जाएगा. इस कम करने के लिए हम पुरुष चूहों में अस्वीकृति दर यह केवल पुरुष चूहों की सलाह दी है देर अवधि अस्वीकृति अध्ययन करने के लिए मादा चूहों (तैयारी में पांडुलिपि) के लिए मनाया कि कम से कम है और इस तरह है कि मिल गया हैइस्तेमाल किया जाएगा. हम भी स्टेरॉयड उपचार के साथ कॉर्निया allograft अस्तित्व को लम्बा करने का प्रयास किया, लेकिन इस स्टेरॉयड उपचार में इस्तेमाल किया जा सुझा नहीं है कि इस प्रकार विशेष रूप से उपयोगी (व्यक्तिगत टिप्पणियों) साबित हो और नहीं था. इन जटिलताओं और संभावना लगभग आधा या एलोजेनिक कॉर्निया के साथ engrafted उन की कुछ अधिक 45 दिनों के बाद जब तक स्पष्ट रहेगा कि चेतावनी के बावजूद, यह अभी भी देर तक अस्वीकृति के लिए प्रासंगिक हैं कि उन कारकों का अध्ययन करने के लिए एक बहुत ही उपयोगी मॉडल है.

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    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Zeiss Surgical Microscope Zeiss Rebuilt
    1 ml Syringe BD 305122
    3 ml Syringe BD 309657
    10 ml Syringe BD 309602
    Vannus Scissors Stortz E-3387
    11-0 Sutures Alcon 717939M
    Trephine 2.0 mm Katena K 2-7520
    Trephine 1.5 mm Katena K 2-7510
    Tricaine Hydrochloride 0.5% Alcon NDC 0065-0741-12
    Healon Abbott Healon OVD
    Forceps FST 11251-20
    7-0 Sutures Alcon 8065
    2.5% Phenylephrine HCl Alcon NDC 61314-342-02
    1% Tropicamide Bausch & Lomb NDC-24208-585-59
    Hamilton Syringe Hamilton 7654-01
    33 gauge needle Hamilton 90033
    Cell Strainer (100 μm nylon) BD Falcon 352360
    Hemocytometer Cardinal Health B3175
    Trypan Blue Sigma T8154

    DOWNLOAD MATERIALS LIST

    References

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    Yin, X. T., Tajfirouz, D. A.,… More

    Yin, X. T., Tajfirouz, D. A., Stuart, P. M. Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation. J. Vis. Exp. (93), e51830, doi:10.3791/51830 (2014).

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