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Medicine

मानव विकास के सभी तीन trimesters के दौरान बराबर शराब के लिए चूहों का पर्दाफाश किया भाप मंडलों का निर्माण

Published: July 13, 2014 doi: 10.3791/51839

Summary

हम एक साथ 6 माउस पिंजरों है कि घर में आसानी से उपलब्ध सामग्री का उपयोग शराब वाष्प कक्षों के निर्माण का प्रदर्शन. हम आगे मानव गर्भावस्था के सभी 3 trimesters के बराबर भ्रूण शराब जोखिम के एक माउस मॉडल में उनके उपयोग का वर्णन. इस प्रतिमान के गर्भ और प्रसव के बाद दिन 1-12 दौरान पशुओं को उजागर करता है.

Abstract

विकास के दौरान शराब के संपर्क में सामूहिक रूप से भ्रूण शराब स्पेक्ट्रम विकार (FASDs) के रूप में जाना जाता है कि रूपात्मक और व्यवहार असामान्यताएं की एक नक्षत्र में परिणाम कर सकते हैं. स्पेक्ट्रम की सबसे गंभीर अंत में विकास मंदता, craniofacial dysmorphology, और neurobehavioral घाटे विशेषता द्वारा भ्रूण शराब सिंड्रोम (एफएएस), है. कृन्तकों सहित पशु मॉडल, साथ अध्ययन FASDs के pathophysiology में शामिल कई आणविक और सेलुलर तंत्र elucidated है. गर्भवती कृन्तकों के लिए इथेनॉल प्रशासन गर्भावस्था के पहले और दूसरे trimesters के दौरान मानव जोखिम मॉडल करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. मानव में तीसरी तिमाही इथेनॉल खपत नवजात कृन्तकों मॉडलिंग का उपयोग किया गया है. हालांकि, कुछ कृंतक अध्ययन मानव गर्भावस्था, गर्भवती महिलाओं में आम है कि जोखिम के एक पैटर्न के सभी तीन trimesters के बराबर दौरान इथेनॉल जोखिम के प्रभाव की विशेषता है. यहाँ, हम ओ आसानी से वाष्प कक्षों का निर्माण करने के लिए दिखानेप्रत्येक छह मानक माउस पिंजरों को समायोजित कर सकते हैं कि btainable सामग्री. हम सभी तीन trimesters के दौरान, कम से कम हैंडलिंग के साथ, इथेनॉल के लिए जोखिम मॉडल करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि एक भाप कक्ष प्रतिमान का वर्णन. हमारे अध्ययन से गर्भवती बांधों इथेनॉल के लिए महत्वपूर्ण चयापचय सहिष्णुता विकसित दिखाना है कि. हालांकि, नवजात चूहों चयापचय सहिष्णुता और भ्रूण की संख्या, भ्रूण वजन, नाल वजन, पिल्ले / कूड़े की संख्या, मृत पिल्ले / कूड़े की संख्या विकसित नहीं किया, और पिल्ला वजन काफी इथेनॉल जोखिम से प्रभावित नहीं थे. इस प्रतिमान का एक महत्वपूर्ण लाभ आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों के साथ अध्ययन करने के लिए इसके लागू है. साथ ही, यह प्रतिमान जानवरों की हैंडलिंग, भ्रूण शराब अनुसंधान के क्षेत्र में एक प्रमुख उलझाना कम करता है.

Introduction

गर्भावस्था के दौरान शराब पीने काफी प्रभावित व्यक्तियों और उनके परिवारों के लिए जीवन की गुणवत्ता में कमी है कि कई अंगों और प्रणालियों में लगातार परिवर्तन के कारण भ्रूण को नुकसान पहुँचा सकते हैं. यह महिलाओं की लगभग 10-30% एक द्वि घातुमान पैटर्न 1,2 में 1-8% पीने के साथ, अमेरिका में गर्भावस्था के दौरान पीने का अनुमान है. भ्रूण के विकास के दौरान इथेनॉल जोखिम द्वारा उत्पादित प्रभाव की सीमा सामूहिक रूप से भ्रूण शराब स्पेक्ट्रम विकार (FASDs) के रूप में जाना जाता है. हाल के अनुमान FASDs अमेरिका 3 में 2-5% के रूप में उच्च व्यापकता के साथ एक प्रमुख सार्वजनिक स्वास्थ्य समस्या है कि संकेत मिलता है. FASDs के और अधिक गंभीर अभिव्यक्ति विकास मंदता, craniofacial असामान्यताएं, और सीखने विकलांग सहित neurobehavioral घाटे, की विशेषता है, जो भ्रूण शराब सिंड्रोम (एफएएस), है. एफएएस की व्यापकता अमेरिका 3 में 0.2-0.7% होने का अनुमान लगाया गया है. FASDs के लिए वर्तमान में उपलब्ध उपचार केवल आंशिक रूप से प्रभावी हैंऔर अधिक प्रभावी उपचार के विकास से जुड़ी समस्याओं के इस जटिल स्पेक्ट्रम के सेलुलर और आणविक आधार के गरीब समझ के द्वारा सीमित है.

राष्ट्रीय जन्म दोष निवारण अध्ययन (NBDPS) से डेटा गर्भावस्था के गर्भ 2 के बाद के चरणों के दौरान पता चला, संयम से पालन किया गया है इससे पहले कि गर्भवती महिलाओं को सबसे अधिक, 1 सेंट तिमाही के दौरान पीने संकेत मिलता है कि. NBDPS भी हमल के दौरान इथेनॉल खपत का दूसरा सबसे आम पैटर्न गर्भावस्था 2 के सभी trimesters भर पीने शामिल पाया. इस के लिए कारणों भ्रूण इथेनॉल जोखिम (यहां तक कि कम मात्रा में), प्रसव पूर्व देखभाल के लिए सीमित उपयोग, neuropsychiatric विकारों के लिए सकारात्मक इतिहास, और के दुरुपयोग या इथेनॉल 4 पर निर्भरता के हानिकारक प्रभाव के बारे में जागरूकता की कमी शामिल है. दिलचस्प है, NBDPS खपत के तीसरे सबसे आम पैटर्न 1 के दौरान संयम है कि इसमें शामिल की सूचना 3 तिमाही के दौरान खपत द्वारा पीछा 2 एन डी trimesters. इस neuronal सर्किट गहरा शोधन 2 गुजरना जब एक अवधि है क्योंकि हालांकि, 3 तिमाही इथेनॉल प्रेरित तंत्रिका तंत्र को नुकसान के लिए उच्च संवेदनशीलता की अवधि है. NBDPS भी 1 और 3 तिमाही के दौरान 2 संयम द्वारा पीछा 2 एन डी trimesters भर खपत सहित गर्भावस्था के दौरान होने वाले शराब की खपत के अन्य, कम अक्सर पैटर्न की पहचान की.

गर्भवती महिलाओं में मनाया इथेनॉल खपत का अलग पैटर्न मॉडल के प्रयास में, विकास इथेनॉल जोखिम मानदंड की एक संख्या सबसे आम 5,6 जा रहा चूहों और चूहों के साथ, विविध जानवरों की प्रजातियों का उपयोग कर स्थापित किया गया है. इन जानवरों में गर्भावस्था की अवधि आम तौर पर लासलगभग 3 सप्ताह, 1 अनुसूचित जनजाति और मानव गर्भावस्था के 2 एन डी trimesters से मेल खाती है जो टीएस. कई कृंतक अध्ययनों से इस अवधि के दौरान विभिन्न खुराक और इथेनॉल जोखिम के पैटर्न के प्रभाव का आकलन किया है. अक्सर गर्भवती चूहों को इथेनॉल प्रशासन के लिए इस्तेमाल किया तरीकों और चूहों के उदाहरण तरल आहार 7,8, पीने के पानी 9,10 के लिए इथेनॉल के अलावा, साकारीन मीठा समाधान की स्वैच्छिक पीने 11, गैस्ट्रिक नलिका - पोषण 12, भाप साँस लेना 13 के माध्यम से प्रशासन में शामिल , और चमड़े के नीचे या intraperitoneal इंजेक्शन 14. इन अध्ययनों के परिणामों गर्भावस्था के प्रारंभिक दौर के दौरान (6,15 में समीक्षा) मस्तिष्क में neuronal सर्किट को नुकसान करने के लिए पर्याप्त है कि जोखिम है, प्रदर्शन FASDs साथ मनुष्य में मनाया घाटे के कई recapitulated है.

कृन्तकों के साथ प्रयोग भी दिखा दिया है कि 3 करने के लिए बराबर के दौरान जोखिम 16-18, intragastric इंटुबैषेण 19, चमड़े के नीचे इंजेक्शन 20 में gastrostomy के माध्यम से खिला सहित तरीकों की विविधता,, और भाप साँस लेना 21,22 का उपयोग कर इन जानवरों को दिलाई गई है. इन अध्ययनों से खांसने मस्तिष्क विकास तेजी इथेनॉल 6 की विकासात्मक प्रभाव के लिए उच्च जोखिम की अवधि है कि प्रदर्शन किया है.

जैसा कि ऊपर कहा, गर्भावस्था के सभी trimesters के दौरान पीने महिलाओं 2 में इथेनॉल खपत का एक आम तरीका है. हालांकि, अपेक्षाकृत कुछ अध्ययनों पशु मॉडल का उपयोग कर जोखिम की इस पद्धति के प्रभाव का आकलन किया है. इन अध्ययनों में से कुछ लाभ ले लिया है3 तिमाही के समकक्ष चूहों और चूहों के मामले में के रूप में गर्भ के बजाय नवजात की अवधि में होता है, जहां बड़े जानवरों के ए. इन पशु मॉडल गैर मानव प्राइमेट 23,24 और भेड़ 25-27 शामिल हैं. हालांकि, इन पशु मॉडल व्यापक रूप से, क्योंकि उच्च लागत और विशेष देखभाल की सुविधा के लिए की जरूरत है, इस भाग में, FASDs अनुसंधान में इस्तेमाल नहीं किया गया है. कृंतक अधिक सामान्यतः भ्रूण के विकास के लिए 5 पर सभी तिमाही इथेनॉल जोखिम के प्रभाव को चिह्नित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. गिनी सूअरों मनुष्य 28,29 की है कि मस्तिष्क परिपक्वता में उनकी व्यापक जन्म के पूर्व का विकास और समानता को देखते हुए इस संबंध में विशेष रूप से लाभप्रद हो गया है. गिनी सूअरों के साथ, यह मानव 3 तिमाही के बराबर विकास की अवधि भी शामिल है कि गर्भ में इथेनॉल जोखिम के प्रभाव को चिह्नित करना संभव हो गया है. इन पशुओं के अपेक्षाकृत उच्च लागत, साथ ही उनकी गर्भावस्था की अपेक्षाकृत लंबी अवधि(~ 67 दिन), FASDs शोध पर काम कर रहे कुछ प्रयोगशालाओं के लिए उनके उपयोग सीमित है.

क्योंकि जैव चिकित्सा अनुसंधान के क्षेत्र में उनकी लागत प्रभावशीलता और व्यापक उपयोग के कारण, जांचकर्ताओं गर्भावस्था के सभी trimesters के दौरान इथेनॉल के लिए जोखिम मॉडल करने के लिए चूहों का इस्तेमाल किया है. प्रारंभिक अध्ययन में चूहों 0.08 ग्राम / डीएल के बांधों में शिखर रक्त इथेनॉल का स्तर (सी) में जिसके परिणामस्वरूप gastrostomy कृत्रिम रूप से पाला को नवजात शिशुओं (प्रसव के बाद दिन (पी) 1-10) के माध्यम से इथेनॉल के प्रशासन द्वारा पीछा तरल आहार के माध्यम से गर्भावस्था के दौरान अवगत कराया गया और पिल्ले 0.16 ग्राम / डीएल में. इस प्रतिमान ऑप्टिक तंत्रिका myelination में लंबे समय से स्थायी परिवर्तन के कारण होता है और सेरिबैलम 30-32 में Bergmann glia फाइबर की संख्या कम हो. 3 तिमाही के बराबर (पी 4-9) 33,34 के हिस्से के दौरान नवजात प्रशासन द्वारा पीछा intragastric इंटुबैषेण के माध्यम से एक द्वि घातुमान की तरह ढंग से गर्भवती चूहे बांधों को इथेनॉल प्रशासित कृत्रिम पालन शर्तों का उपयोग इसी तरह, Maier और सहयोगियों. पीeak मातृ और पिल्ला BECs गर्भावधि दिन 20 और P6 दोनों में 0.3 ग्राम / डीएल थे. यह सब तिमाही जोखिम प्रतिमान हमल 33 के चयनित अवधि के दौरान उजागर पिल्ले में मनाया है कि तुलना में काफी अधिक था कि विकास मंदता में हुई. इसके अलावा, सभी trimesters के बराबर दौरान इथेनॉल के संपर्क में चूहों अनुमस्तिष्क Purkinje और अन्य अवधियों 34 के दौरान उजागर पशुओं में मनाया तुलना में अधिक था कि ग्रेन्युल कोशिकाओं की संख्या में कमी का प्रदर्शन किया. हिप्पोकैम्पस सेल संख्या में कटौती भी इस प्रतिमान के साथ सूचना दी, लेकिन इन प्रभावों को 35 तिमाही के समकक्ष 3 के दौरान मुख्य रूप से जोखिम का एक परिणाम होना दिखाई देते थे. गर्भवती चूहों और नवजात चूहों दोनों को intragastric नलिका - पोषण के माध्यम से इथेनॉल प्रशासन शामिल है एक विधि को भी सभी तिमाही के जोखिम 36 मॉडल का उपयोग किया गया है. बांधों में 0.13 ग्राम / डीएल (गर्भावधि दिन 17) और P6 पिल्ले में 0.24 ग्राम / डीएल, प्रेरित लंदन के BECs सामने आए जो इस विधि,monoamine neurotransmitter हिप्पोकैम्पस और हाइपोथेलेमस में स्तरों, और हिप्पोकैम्पस 37,38 में प्रोटीन 2 बंधन डीएनए methyltransferases और मिथाइल CPG की वृद्धि की अभिव्यक्ति में जी स्थायी परिवर्तन. इसी तरह के एक जोखिम प्रतिमान (बांधों और पिल्ले में 0.2 ग्राम / डीएल में बीईसी = 0.14-0.2 ग्राम / डीएल) का उपयोग करना, गिल-Mohapel एट अल. 39 वयस्क चूहों के दांतेदार गाइरस में नई अपरिपक्व न्यूरॉन्स की संख्या में वृद्धि का पता चला है कि वयस्क जन्म न्यूरॉन्स की परिपक्वता में इथेनॉल प्रेरित neuronal नुकसान या एक परिवर्तन के लिए एक प्रतिपूरक तंत्र का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं. जांचकर्ताओं ने यह भी तरल आहार के माध्यम से बांधों को उजागर या गर्भावस्था और स्तनपान 9,40 दोनों के दौरान पीने के पानी की सभी तिमाही इथेनॉल जोखिम मॉडल करने का प्रयास किया है. यह आम तौर पर कम पिल्ला BECs (; 41,42 जैसे, .002-.05 जी / डीएल) में यह परिणाम हालांकि, क्योंकि उनकी मां के दूध के माध्यम से पिल्ले को प्रकाश में लाने की उपयोगिता सीमित है.

चूहे भी extens इस्तेमाल किया गया हैविकास इथेनॉल जोखिम के प्रभावों को चिह्नित करने के लिए ively. इस पशु मॉडल कई आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस उपभेदों 5 उपलब्ध हैं कि अतिरिक्त लाभ के साथ, चूहे पशु मॉडल के लिए ऊपर वर्णित ताकत के कई शेयरों. चूहे सफलतापूर्वक 1, 2 या गर्भावस्था 43,44 के 3 trimesters के दौरान इथेनॉल के प्रभाव को चिह्नित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. यह तकनीकी रूप से अधिक कठिन मानव गर्भावस्था के सभी trimesters के बराबर दौरान चूहों को बेनकाब करने के लिए है क्योंकि हालांकि, इन जानवरों पर सभी तिमाही के जोखिम के प्रभाव अच्छी तरह से होती नहीं किया गया है. उदाहरण के लिए, चूहों में सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया गया है जो कृत्रिम पालन और गैस्ट्रिक नलिका - पोषण, चूहों 45 में अधिक विशिष्ट प्रक्रियाओं की आवश्यकता है. हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए तिथि करने के लिए केवल एक अध्ययन चूहों का उपयोग सभी तिमाही इथेनॉल जोखिम के प्रभाव का अध्ययन करने का प्रयास किया गया है; इन जानवरों को पानी duri पीने में इथेनॉल समाधान से अवगत कराया गयाएनजी गर्भावस्था और स्तनपान के 46. मातृ BECs 0.07 ग्राम / डीएल और पिल्ला BECs निर्धारित है, लेकिन बांधों में उन का एक अंश होने की उम्मीद नहीं कर रहे थे थे.

यहाँ, हम शराब वाष्प साँस लेना कक्षों के माध्यम से गर्भवती बांधों और नवजात शिशुओं दोनों को दिलाई है जहाँ चूहों के सभी तिमाही इथेनॉल प्रदर्शन के लिए एक नए मॉडल का वर्णन. भाप कक्षों पिछले एक डिजाइन 47 के आधार पर बनाया गया था. हम साँस लेना कक्षों का निर्माण और जोखिम प्रक्रियाओं को पूरा करने के लिए पर विस्तृत निर्देश प्रदान करते हैं. हम भी प्राप्त किया जा सकता है कि BECs और पिल्ला अस्तित्व और विकास पर जोखिम के प्रभाव के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं.

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Protocol

सभी पशु प्रक्रियाओं न्यू मैक्सिको स्वास्थ्य विज्ञान विश्वविद्यालय केंद्र संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.

1. भाप कक्ष विधानसभा

  1. (चित्रा 1 और 1 टेबल) ऊपर, नीचे, आगे, पीछे, पक्ष, और दरवाजे के लिए वीडियो में प्रदान की आयामों को एक परिपत्र देखा या आरा के साथ काट polycarbonate चादरें.
  2. एक परिपत्र देखा या पहेली के साथ, सामने पैनल के बीच में विस्तृत 16 इंच से 8 इंच ऊंची एक खोलने में कटौती.
  3. उपाय और चैम्बर का दरवाजा बन जाएगा कि 10 इंच polycarbonate शीट से 18 इंच पर पियानो काज के लिए छेद निशान.
  4. दरवाजा में, एक 5/16 इंच ड्रिल बिट के साथ काउंटर सिंक छेद ड्रिल, और एक 3/16 इंच ड्रिल बिट के साथ, शिकंजा के लिए छेद ड्रिल. पेंच सिर के लिए दरवाजा अंदर पर काउंटर सिंक छेद ड्रिल करने के लिए सुनिश्चित करें.
  5. वेल्डिंग के लिए पॉली कार्बोनेट शीट तैयार करें.
  6. Fro इकट्ठाNT, # 16 वेल्ड पर उपयोग कर नीचे पैनल पर वापस, और साइड पैनल.
  7. # 16 वेल्ड पर साथ पैनल के बीच किसी भी अंतराल सील.
  8. # 16 वेल्ड पर साथ शीर्ष पैनल देते हैं.
  9. वेल्ड इलाज जबकि जगह में सब कुछ पकड़ बार clamps या भारी पाठ्य पुस्तकों का प्रयोग करें.
  10. दरवाजा काज की कुर्की के लिए खोलने के नीचे सामने पैनल 1 इंच पर पॉली कार्बोनेट का एक 12 इंच टुकड़ा द्वारा एक 1 इंच देते हैं.
  11. इलाज करने के लिए वेल्ड पर के लिए कम से कम 24 घंटे की अनुमति दें.
  12. 12 इंच लंबी और 1 इंच लंबे PEX टयूबिंग के 1 टुकड़ा PEX टयूबिंग के 2 टुकड़े काटें.
  13. एक 5/16 ड्रिल बिट के साथ एक छोर से 12 इंच PEX टयूबिंग में से प्रत्येक में लगभग 1-2 इंच में एक छेद ड्रिल.
  14. दूर कनेक्टर से स्थित छेद के साथ एक 3/8 इंच टी कनेक्टर को 2 एक्स 12 इंच PEX टयूबिंग देते हैं.
  15. 3/8 इंच प्लग के साथ PEX टयूबिंग के खुले अंत टोपी.
  16. 4-40 मशीन शिकंजा और पागल उपयोग कर सामने पैनल और दरवाजे पर पियानो काज संलग्न करें.
  17. एक गाइड के रूप में दरवाजे का उपयोग करना, मीटरचैंबर के सामने पैनल पर 1 इंच स्पेसर पर पियानो काज के लिए आवश्यक छेद सन्दूक.
  18. एक 3/16 इंच ड्रिल बिट के साथ, पियानो काज के लिए सामने पैनल में छेद ड्रिल.
  19. 4-40 मशीन शिकंजा और पागल उपयोग कर सामने पैनल के लिए दरवाजे और पियानो काज संलग्न करें.
  20. तरफ हाथ के दोनों तरफ एक वॉशर और अखरोट के साथ वीडियो में दिखाया गया है टॉगल clamps इकट्ठे.
  21. मार्क और ड्रिल टॉगल के लिए 3/16 इंच के छेद सामने पैनल पर clamps और 4-40 मशीन शिकंजा और पागल के साथ clamps टॉगल देते हैं.
  22. दरवाजे के अंदर करने के लिए 3/8 इंच रबर बल्ब जवानों जोड़ें.
  23. एक 5/8 इंच उबाऊ ड्रिल बिट के साथ, प्रवेश पोर्ट के लिए शीर्ष पैनल के बीच में एक छेद ड्रिल.
  24. बाहर निकलने के बंदरगाह के लिए वापस पैनल के नीचे / केंद्र में एक 1/2 इंच छेद ड्रिल.
  25. बाहर निकलने के बंदरगाह छेद में भाप कक्ष के पीछे की दीवार के माध्यम से के माध्यम से दीवार एडेप्टर 3/8 इंच की पिरोया हिस्सा जोर से बाहर निकलने के बंदरगाह को इकट्ठा करो. से अखरोट अटैचजगह में धारण करने के लिए चैंबर के अंदर.
  26. पॉली कार्बोनेट शीट से सुरक्षा कवर निकालें.
  27. टी कनेक्टर को PEX टयूबिंग की 1 इंच टुकड़ा देते और अंदर से कक्ष के शीर्ष में छेद के माध्यम से PEX टयूबिंग मजबूर.
  28. बाहर से 1 इंच PEX टयूबिंग के शीर्ष पर एक 3/8 इंच 90 कोहनी देते हैं.
    नोट: दरवाजा में एक 1/2 इंच छेद ड्रिल और छेद में एक 1/2 इंच मुहर SEPTA डालें.
  29. हवा ही कक्ष नियंत्रण के लिए दोहराएँ 1-22 कदम.

2. रैक और एयर डिलिवरी विधानसभा

  1. सामग्री सूची में उल्लिखित गाड़ी / रैक पर कक्षों रखने, तो निर्माता के निर्देशों के अनुसार गाड़ी को इकट्ठा करो.
  2. स्पेयर नट और बोल्ट के साथ, airflow नियामकों धारण करने के लिए रैक करने के लिए पॉली कार्बोनेट का एक टुकड़ा स्क्रैप देते हैं.
  3. कहीं भी पॉली कार्बोनेट, मार्क और ड्रिल airflow के नियामकों के लिए 3/4 इंच के छेद के स्क्रैप टुकड़े पर और पागल के साथ नियामकों देते हैंप्रदान की.
  4. हवा का प्रवाह नियामकों के इनलेट और आउटलेट बंदरगाहों के माध्यम से दीवार अनुकूलक 3/8 इंच देते हैं.
  5. वेंटिलेशन पत्थर, # 8 डाट और लाइन कनेक्टर्स जल्दी रिलीज के साथ इथेनॉल कुप्पी इकट्ठे.
  6. चित्र 1 में दिखाया के रूप में 3/8 इंच Tygon टयूबिंग का उपयोग, वायु पंप और इथेनॉल कुप्पी प्रवाह नियामकों कनेक्ट.
  7. चित्र 1 में दिखाया के रूप में हवा ही कक्ष के लिए, इनलेट 3/8 इंच 3/8 इंच Tygon टयूबिंग के साथ 90 कोहनी के लिए airflow नियामक के निकास बंदरगाह देते हैं.

चित्रा 1
वाष्प कक्षों के विन्यास का चित्रा 1. योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व. एक टी कनेक्टर कम शोर हवा पंप से जुड़ा हुआ है. टी योजक के एक तरफ सीधे हवा केवल भाप कक्ष के लिए एक airflow नियामक से जुड़ा है. अन्य एसआईडीई फिर से विभाजित है और 2 अलग airflow नियामकों, हवा के लिए एक और इथेनॉल के लिए एक से जुड़ा हुआ है. के रूप में दिखाया हवा कक्ष सीधे नियामक से जुड़ा है. इथेनॉल वाष्प कक्ष के लिए, एक airflow नियामक फिल्टर कुप्पी में तरल इथेनॉल में डूबे फावड़ा पत्थर से जुड़ा है. संकेत के रूप में फिल्टर कुप्पी की ओर हाथ बंदरगाह हवा नियामक के उत्पादन के साथ जुड़ा हुआ है. विलय कर दिया इथेनॉल वाष्प और हवा तब इथेनॉल वाष्प कक्ष के प्रवेश से जुड़ा है. () नहीं दिखाया आउटलेट ट्यूबों कमरे में एक वेंटिलेशन आउटलेट से जुड़े हैं.

3. टेस्ट भाप मंडलों और इथेनॉल के स्तर को समायोजित

  1. , फिल्टर कुप्पी 190 प्रमाण इथेनॉल की 600 मिलीलीटर जोड़ें वातन पत्थर डालने, और कुप्पी की ओर हाथ करने के लिए ट्यूब इनलेट को हुक.
  2. बंद कक्ष के दरवाजे और वायु पंप पर बारी.
  3. लगभग आधे के रूप में ज्यादा हवा के साथ मिलाया जाता है हवा के रूप में तरल शराब के माध्यम से बहती है, ताकि airflow के नियामकों को समायोजित करें. Adjusइथेनॉल चैंबर के शराब और हवा के संयुक्त प्रवाह करने के लिए हवा ही airflow टी.
  4. कक्षों हवा इथेनॉल एकाग्रता को मापने से पहले कम से कम 30 मिनट के लिए संतुलित करने की अनुमति दें.
  5. पट के माध्यम से एक 18G सुई और एक 60 मिलीलीटर सिरिंज के साथ हवा के 5 मिलीलीटर निकालने के द्वारा हवा इथेनॉल एकाग्रता उपाय. वापस 60 मिलीग्राम (1:12 कमजोर पड़ने) के लिए सवार ड्राइंग द्वारा कमरे में हवा के साथ कि नमूना पतला. निर्माता के निर्देशों के अनुसार श्वास का उपयोग कर हवा इथेनॉल स्तर को मापने. कक्ष हवा के कमजोर पड़ने श्वास का पता लगाने सीमा के भीतर शराब वाष्प के स्तर को प्राप्त करने की जरूरत है.
    नोट: शराब जोखिम के विभिन्न स्तरों का उपयोग अगर कमजोर पड़ने समायोजित करने की आवश्यकता हो सकती है.
  6. लगभग 4.5-5 ग्राम / डीएल (हवा का डीएल प्रति वाष्पीकृत शराब के छ) के एक हवाई शराब एकाग्रता प्राप्त करने की आवश्यकता के रूप में एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में, airflow के नियामकों को समायोजित.

4. पशु प्रजनन

  1. समूह घर महिलाओं डिम्बग्रंथि चक्र सिंक्रनाइज़ करने के लिए कम से कम 1 सप्ताह के लिए 6 / चूहों (2-3 महीने पुराने) C578BL.
  2. व्यक्तिगत रूप से कम से कम 2 सप्ताह के लिए पुरुष C57BL 6 / चूहों (2-5 महीने पुराने) घर.
  3. सिंक्रनाइज़ करने के बाद, संभोग के लिए अनुमति देने के लिए 5 दिनों के लिए एक भी पुरुष के साथ एक भी महिला में डाल दिया.
  4. संभोग के बाद, पुरुषों को हटाने और व्यक्तिगत रूप से घर महिलाओं और कक्षों में उन्हें जगह है.

5. पूर्व और प्रसवोत्तर इथेनॉल भाप एक्सपोजर

  1. पिल्ला मौत को रोकने के लिए जन्म के दिन को छोड़कर प्रकाश चक्र के दौरान 10 बजे शुरू होने वाले प्रति दिन 4 घंटे (06:00-6:00 से पर रोशनी) के लिए इथेनॉल वाष्प को गर्भवती बांधों बेनकाब.
  2. गर्भधारण पर नजर रखने के लिए गर्भावधि दिन (G) 5, G13-G14, और G18-G20 पर बांधों वजन; बिस्तर पर महिलाओं से निपटने के लिए कम से कम करने के लिए तौला गया कि दिन पर बदल गया था.
  3. प्रत्येक दिन उन्हें में समाहित किसी भी इथेनॉल के साथ छर्रों की खपत से बचने के लिए इथेनॉल उजागर समूहों के लिए भोजन की जगह.
  4. के दिनजन्म जानवरों का खुलासा नहीं करते. जन्म के बाद P1-P12 से 10 बजे शुरू होने वाले प्रति दिन 4 घंटे के लिए बांधों और पिल्ले को बेनकाब.
  5. P2, P8, P12, और P25 पर पिल्ले वजन; और अतिरिक्त निपटने के लिए कम से कम करने के लिए P8 और P12 पर बिस्तर बदल जाते हैं.
  6. इसके तत्काल बाद पिछले जोखिम (P12) के बाद, एक मानक पशु आवास के कमरे में पिंजरों हस्तांतरण.

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Representative Results

चित्रा 2A गर्भवती चूहों और नवजात वंश दोनों कक्षों में अपेक्षाकृत स्थिर इथेनॉल वाष्प सांद्रता के संपर्क में थे कि पता चलता है. इन लेकर 4-6 ग्राम / डीएल के बीच. चित्रा 2B समय के एक समारोह के रूप में गर्भवती चूहों में हासिल BECs से पता चलता है. BECs एक मानक शराब डिहाइड्रोजनेज आधारित परख 48 का उपयोग कर मापा गया. G5 पर, BECs जल्दी से जोखिम की शुरुआत के बाद ~ 60 मिमी 2 घंटा तक पहुंचे और 4 घंटा जोखिम अवधि के अंत में नुकीला. BECs धीरे - धीरे जोखिम के अंत के बाद एक अतिरिक्त 4 घंटा बाद ~ 12 मिमी तक की कमी हुई. G13-14, G5 पर पता चला के स्तर के लगभग 60% तक BECs में एक नाटकीय कमी थी. इसके अलावा, BECs का स्तर अधिक धीरे गुलाब और गर्भवती चूहों के रक्त में इथेनॉल की एक छोटी उपस्थिति में जिसके परिणामस्वरूप, और अधिक तेजी से कमी आई है. निकट अवधि (G18-20) में, BECs आगे G5 पर पता चला स्तरों का लगभग 30% तक कम हो गई थी. इन निष्कर्षों के विकास के साथ संगत कर रहे हैंगर्भवती चूहों में इथेनॉल के लिए तेजी से चयापचय सहिष्णुता के ईएनटी. चित्रा -2 नवजात संतानों 30 मिमी के पास BECs से अवगत कराया गया है कि पता चलता है. BECs धीरे - धीरे 4 घंटा जोखिम अवधि के अंत में एक शिखर तक पहुँचने, इन जानवरों में गुलाब और धीरे - धीरे 8 बजे 4 घंटा जोखिम प्रतिमान के अंत के बाद आधारभूत स्तर को कम. गर्भवती बांधों के विपरीत, जल्दी (P2) अवगत कराया गया है कि नवजात शिशुओं में मापा BECs के बीच कोई अंतर नवजात की अवधि में बनाम देर p7 (-P12) वहाँ था. इन निष्कर्षों को नवजात चूहों इथेनॉल के लिए चयापचय सहिष्णुता विकसित नहीं किया है कि संकेत मिलता है.

चित्रा 2
इथेनॉल के स्तर का आंकड़ा 2. विशेषता. ए) इथेनॉल वाष्प कक्ष का स्तर जोखिम paradig के गर्भावधि और प्रसव के बाद के चरणों के दौरान अपेक्षाकृत स्थिर बने रहेएम. इन के स्तर को मापने के लिए, चैम्बर हवा परिवेशी वायु के साथ पतला, रबर पट के माध्यम से एक सिरिंज के साथ वापस ले लिया, और (विवरण के लिए वीडियो देखें) श्वास के इनलेट पोर्ट में निष्कासित कर दिया गया था. मान क्रमश: गर्भावधि और प्रसवोत्तर चरणों के लिए 5 और 4 अलग जोखिम दौर से प्राप्त किया गया. बी) गर्भवती बांधों (एन = 5-7 बांधों) में संकेत अनुमानित गर्भावधि दिनों के लिए अलग अलग समय बिंदुओं पर मापा रक्त इथेनॉल का स्तर. कानूनी नशा सीमा (17.4 मिमी या 0.08 ग्राम / डीएल) बिंदीदार रेखा ने संकेत दिया है. ग्रे पट्टी) बांधों इथेनॉल बी के रूप में. सी) उसी को अवगत कराया गया समय इंगित करता है लेकिन अलग litters से नवजात चूहों के लिए (एन = 5-9 पिल्ले.

चित्रा 3 जोखिम प्रतिमान काफी वजन बांधों में लाभ या पिल्ले को प्रभावित नहीं किया है दिखाता है. तालिका 2 इथेनॉल जोखिम काफी व्यवहार्य fetu की संख्या को प्रभावित नहीं किया है कि पता चलता हैSES, (निकट अवधि में मापा) resorbed भ्रूण, भ्रूण वजन, और नाल वजन. 2 टेबल की संख्या भी कूड़े और पिल्ला मृत्यु दर प्रति पिल्ले की संख्या में काफी इथेनॉल जोखिम से प्रभावित नहीं थे कि पता चलता है. एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें इस आंकड़े की.

चित्रा 3
बांध और पिल्ला वजन पर इथेनॉल जोखिम का एक प्रभाव का आंकड़ा 3. अभाव. एक अनुमान के अनुसार गर्भ दिन के समारोह (एन = 8-12) के रूप में एक) बांध वजन. अनुमानित गर्भावधि दिन 5 पर वजन एक उम्र के समारोह (एन = 7-9) के रूप में जोखिम का पहला दिन. बी) पिल्ला वजन पर मापा वजन से मेल खाती है. दोनों पैनलों के लिए, त्रुटि सलाखों के प्रतीकों से छोटे हैं. <एक href = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/51839/51839fig3highres.jpg" लक्ष्य = "_blank"> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

आयाम (इंच) ऊंचाई चौडाई
शीर्ष 32 22
तल 32 22
सामने 32 14
वापस 32 14
साइड 1 21.5 14
साइड 2 21.5 14
दरवाजा 18 10

तालिका 1. पॉली कार्बोनेट शीट के आयाम.

हवा EtOH
7.50 ± 1.08, एन = 6 7.33 ± 1.52, एन = 6
औसत भ्रूण वजन (छ): ~ E18 1.04 ± 0.09, एन = 6 0.82 ± 0.09, एन = 6
औसत अपरा वजन (छ): ~ E18 0.12 ± 0.003, एन = 6 0.14 ± 0.01, एन = 6
फिर से अवशोषित भ्रूण की संख्या: ~ E18 0.50 ± 0.34, एन = 6 0.50 ± 0.50, एन = 6
पिल्ले / कूड़े की संख्या 7.11 ± 0.67, एन = 9 6.89 ± 0.42, एन = 9
मृत पिल्ले / कूड़े की संख्या 0.11 ± 0.11, एन = 9 0.66 ± 0.24, एन = 9

तालिका 2. पूर्व और माउस वाष्प जोखिम प्रतिमान के प्रसवोत्तर लक्षण वर्णन.

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Discussion

यहाँ, हम विस्तार से भाप साँस लेना कक्षों के निर्माण के लिए विधियों का वर्णन. कक्षों के निर्माण के लिए आवश्यक सामग्री और उपकरण वाणिज्यिक आपूर्तिकर्ताओं में से एक नंबर से आसानी से उपलब्ध हैं और कक्षों के निर्माण के लिए कदम अपेक्षाकृत सीधा कर रहे हैं. हम यहाँ वर्णन है कि प्रणाली वापस प्रवाह और मिश्रण को रोकने के लिए किसी भी क्षेत्र में लाइन चेक वाल्व शामिल नहीं है. हम हवा में हम हवा केवल कक्षों में किसी भी मिश्रण या इथेनॉल की पीठ प्रवाह नहीं है, सुझाव है कि केवल कक्षों किसी भी detectable इथेनॉल उपाय करने में असमर्थ थे. केवल कक्षों समय - समय इथेनॉल वाष्प के लिए जाँच की जानी चाहिए हवा (यह हवा कक्ष हमेशा श्वास और / या सिरिंज में उपस्थित अवशिष्ट इथेनॉल वाष्प का पता लगाने से बचने के लिए पहले इथेनॉल चैम्बर के लिए परीक्षण किया जाना चाहिए कि ध्यान दिया जाना चाहिए). आदर्श रूप में, कक्षों माउस पिंजरों लगातार ई की अवधि के लिए रखे जा सकते हैं, जहां जानवरों की देखभाल की सुविधा में समर्पित कमरों में रखा जाना चाहिएचूहों के परिवहन के लिए नष्ट करने की जरूरत xposure प्रतिमान, जिससे तनाव को कम करने. एक वेंटिलेशन आउटलेट के साथ एक मानक के कमरे इस प्रतिमान के लिए आवश्यक है कि सभी है. कमरे के अन्य जांचकर्ताओं के साथ साझा किया जाता है, तो हालांकि, यह इथेनॉल गंध को अन्य जानवरों के जोखिम को कम करने के लिए अलग कर केबिन के साथ एक कमरे में कक्षों स्थान के लिए आवश्यक हो सकता है. प्रत्येक कक्ष यह उदाहरण के लिए की तुलना में जोखिम के एक कम श्रम गहन विधि, intragastric नलिका - पोषण कर रही है, 6 मानक माउस पिंजरों को समायोजित कर सकते हैं.

जोखिम प्रतिमान आसानी से एक विशिष्ट प्रयोग की जरूरत के हिसाब से संशोधित किया जा सकता है. पशु मानव गर्भावस्था के सभी trimesters के बराबर दौरान इथेनॉल से अवगत कराया जा सकता है. यह मानव विकास के लिए कृंतक विकास समकक्ष माना जाता है और विकास की क्या प्रक्रिया एक (न्यूरोजेनेसिस, synaptic एकीकरण, आदि) में रुचि है क्या मस्तिष्क क्षेत्र के आधार पर भिन्न हो सकते हैं कि ध्यान दिया जाना चाहिए. इस अध्ययन में, हम तीसरे सप्ताह में तीन परिभाषितMester समकक्ष मस्तिष्क विकास तेजी अवधि के रूप में. शोधकर्ताओं समय 49 के अनुवाद वेबसाइट से परामर्श करने के लिए प्रोत्साहित किया जाता है. चित्रा 2B में दिखाया गया है परिणामों के आधार पर हमने जोखिम इथेनॉल वाष्प (जैसे, ~ 3 जी / डीएल) की एक निचले स्तर पर शुरू कर दिया और धीरे - धीरे चयापचय सहिष्णुता के विकास के लिए क्षतिपूर्ति करने के लिए बढ़ाया जा सलाह देते हैं. प्रक्रिया के कार्यान्वयन के दौरान जांचकर्ताओं को बारीकी से इस गर्भवती बांधों में अधिक स्थिर स्तर में परिणाम निर्धारित करने के लिए अलग गर्भावधि दिनों में BECs की निगरानी करनी चाहिए. शराब डिहाइड्रोजनेज के एक अवरोध वाष्प कक्षों 50 में इथेनॉल के संपर्क में चूहों में सहिष्णुता के विकास को रोकने के लिए इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, यह अध्ययन यह परिणाम 51,52 की व्याख्या जटिल हो सकता है कि संभवतः टेराटोजेनिक असर पड़ता सुझाव है क्योंकि इस एजेंट गर्भवती चूहों में इस्तेमाल किया जा सिफारिश की है कि नहीं है. इसके अलावा, किसी भी रूप के इंजेक्शन गर्भवती बांध करने के लिए अतिरिक्त तनाव का कारण होगा,संभावित प्रयोग 53 confounding.

गर्भवती बांधों के विपरीत, नवजात की अवधि के दौरान भाप कक्ष जोखिम चयापचय सहिष्णुता के विकास में परिणाम नहीं था. BECs P2 और P7-12 चूहों के बीच अलग नहीं थे. पीक BECs G13-14 पर बांधों में पाया उन लोगों के लिए इसी तरह की और G18-20 पर पाया उन लोगों की तुलना में थोड़ा अधिक थे. हालांकि, BECs पिल्ले में आधारभूत पर लौटने के लिए समय लगा. गर्भावधि अवधि के दौरान वाष्प कक्षों में इथेनॉल जोखिम इथेनॉल metabolize करने नवजात संतानों की क्षमता को बदल देता है अगर यह निर्धारित किया है. हालांकि, साहित्य पर आधारित है, यह एक थोड़ा कम या इथेनॉल 54,55 उपापचय को अपरिवर्तित क्षमता का प्रदर्शन करने के लिए इथेनॉल के लिए गर्भ के दौरान अवगत कराया गया कि पिल्ले के लिए उम्मीद की होगी. हमारे अध्ययन में हम औसत पिल्ला वजन में कोई फर्क पालन नहीं किया था, और हमारे डेटा हमल के अंत तक, मातृ BECs मुश्किल से कोई mor के लिए कानूनी नशे से ऊपर उठकर बताते हैं कि2 घंटा से ई. इन आंकड़ों माताओं काफी प्रसवोत्तर अवधि के दौरान शराब जोखिम से प्रभावित नहीं हैं, सुझाव देते हैं. जानवरों उच्च इथेनॉल स्तर को उजागर कर रहे हैं फिर भी, यह विशेष रूप से आगे का पता लगाया जाना चाहिए.

इस प्रदर्शन के प्रतिमान कुछ सीमाएँ हैं. वे इस अवधि के दौरान पुरुषों के साथ पैदा कर रहे हैं क्योंकि मादा चूहों गर्भावस्था के पहले पांच दिनों के दौरान संपर्क में नहीं थे. एक छोटा प्रजनन अंतराल का प्रयास किया जा सकता है (उदाहरण के लिए, 2-3 दिनों के लिए), लेकिन यह गर्भवती हो गई है कि महिलाओं की संख्या में कमी हो सकती है. वैकल्पिक रूप से, जानवरों शयन प्लग के लिए जाँच की एक कम समय और महिलाओं के लिए पैदा किया जा सकता है. एक और सीमा एक दिया कक्ष में सभी चूहों ही इथेनॉल वाष्प का एक भी एकाग्रता से अवगत कराया जा सकता है. इसके अलावा, इथेनॉल वाष्प कक्ष जोखिम प्रतिमान के कुछ पहलुओं में इस तरह के बांधों अकेले हमल के बहुमत भर में रखे जाते हैं और सामने आ रहे हैं कि तथ्य के रूप में, तनावपूर्ण रहे हैंमजबूत इथेनॉल गंध करने के लिए. यह इथेनॉल वाष्प जोखिम बांधों और / या पिल्ले के श्वसन प्रणाली में कुछ परिवर्तन का कारण बनता है कि यह भी संभव है. इसके अलावा, नवजात चूहों के लिए जोखिम तीसरी तिमाही (जैसे, अपरा भ्रूण इकाई इस मॉडल में मौजूद नहीं है) के दौरान मानव जोखिम का एक आदर्श मॉडल नहीं है. फिर भी, हम इस प्रतिमान के फायदे अपनी कमजोरियों पल्ला झुकना तर्क है कि, और यह FASDs के pathophysiology में शामिल तंत्र को चिह्नित करने के लिए एक उपयोगी मॉडल हो सकता है.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 और K12-GM088021 स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा अनुदान का समर्थन किया. लेखकों तकनीकी सहायता और डीआरएस के लिए सामन्था एल Blomquist धन्यवाद. गंभीर रूप से पांडुलिपि और वीडियो के मूल्यांकन के लिए केविन काल्डवेल और डोनाल्ड तीतर.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Polycarbonate 1/4" clear 48" x 24" McMaster-Carr 8574K23 10
Foam Rubber bulb seal 3/8"w x 7/32"h McMaster-Carr 93085K67 10 ft
Weld-on #16 McMaster-Carr 7515A11 3
Piano hinge 12" long McMaster-Carr 1658A11 2 x 1 ft
Hold-down toggle clamps standard McMaster-Carr 5126A26 8
PEX tubing 1/2" McMaster-Carr 51275K88 10 ft
Barbed Tee tube fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5463K608 1
Barbed plug fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5462K79 1
Barbed Elbow tube fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5463K596 1
3/8" Through-Wall Adapters, Tube to Threaded Pipe McMaster-Carr 5463K851 1
Phillips Machine screw 4-40 McMaster-Carr 91772A112 1
Machine screw hex nut 4-40 McMaster-Carr 90480A005 1
Panel-mount flowmeter 2-20 McMaster-Carr 41945K76 3
FLASK, FILTER 1,000 ml 6/PACK VWR 89001-800 2
Precision Seal Septa VWR 89084-490 1
VWR Black Rubber Stopper #8 1-hole VWR 59581-367 1
TUBE TYGON R3603 3/8X9/16 50' VWR 89068-556 1
TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50' VWR 89068-502 1
Aerator Stone P2120 VWR 32573-007 1
3/8" T-connectors Pk of 20 VWR 46600-060 1
VWR Disconnectors tapered Pk of 10 VWR 46600-110 1
3/8 Hose Barb valved in-line coupling Colder Products Company HFCD17612 1
Air pump medium capacity LMI Manufacturers DB60L 1
Nexelate Wire Shelving 36"W X 24"D X 63"H Global industrial T9A990135 1
Stem Casters Set of (4) 5" Polyurethane Wheel Global industrial T9A500591 1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). World Health Organization Who. Alcohol use and binge drinking among women of childbearing age--United States. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 61 (28), 534-538 (2012).
  2. Ethen, M. K., et al. Alcohol consumption by women before and during pregnancy. Matern Child Health J. 13, 274-285 (2009).
  3. May, P. A., et al. Prevalence and epidemiologic characteristics of FASD from various research methods with an emphasis on recent in-school studies. Dev Disabil Res Rev. 15, 176-192 (2009).
  4. Wendell, A. D. Overview and epidemiology of substance abuse in pregnancy. Clin Obstet Gynecol. 56, 91-96 (2013).
  5. Cudd, T. A. Animal model systems for the study of alcohol teratology. Exp Biol Med (Maywood. 230, 389-393 (2005).
  6. Valenzuela, C. F., Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper, L. Does moderate drinking harm the fetal brain? Insights from animal models). Trends Neurosci. 35, 284-292 (2012).
  7. Sliwowska, J. H., Song, H. J., Bodnar, T., Weinberg, J. Prenatal Alcohol Exposure Results in Long-Term Serotonin Neuron Deficits in Female Rats: Modulatory Role of Ovarian Steroids. Alcohol Clin. Exp. Res. 10, (2013).
  8. Sutherland, R. J., McDonald, R. J., Savage, D. D. Prenatal exposure to moderate levels of ethanol can have long-lasting effects on hippocampal synaptic plasticity in adult offspring. Hippocampus. 7, 232-238 (1997).
  9. Naassila, M., Daoust, M. Effect of prenatal and postnatal ethanol exposure on the developmental profile of mRNAs encoding NMDA receptor subunits in rat hippocampus. J Neurochem. 80, 850-860 (2002).
  10. Servais, L., et al. Purkinje cell dysfunction and alteration of long-term synaptic plasticity in fetal alcohol syndrome. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 9858-9863 (2007).
  11. Brady, M. L., Allan, A. M., Caldwell, K. K. A limited access mouse model of prenatal alcohol exposure that produces long-lasting deficits in hippocampal-dependent learning and memory. Alcohol Clin Exp Res. 36, 457-466 (2012).
  12. Bake, S., Tingling, J. D., Miranda, R. C. Ethanol exposure during pregnancy persistently attenuates cranially directed blood flow in the developing fetus: evidence from ultrasound imaging in a murine second trimester equivalent model. Alcohol Clin Exp Res. 36, 748-758 (2012).
  13. Cuzon, V. C., Yeh, P. W., Yanagawa, Y., Obata, K., Yeh, H. H. Ethanol consumption during early pregnancy alters the disposition of tangentially migrating GABAergic interneurons in the fetal cortex. J Neurosci. 28, 1854-1864 (2008).
  14. Godin, E. A., et al. Magnetic resonance microscopy defines ethanol-induced brain abnormalities in prenatal mice: effects of acute insult on gestational day 7. Alcohol Clin Exp Res. 34, 98-111 (2010).
  15. Gil-Mohapel, J., Boehme, F., Kainer, L., Christie, B. R. Hippocampal cell loss and neurogenesis after fetal alcohol exposure: insights from different rodent models. Brain Res Rev. 64, 283-303 (2010).
  16. Diaz, J., Samson, H. H. Impaired brain growth in neonatal rats exposed to ethanol. Science. 208, 751-753 (1980).
  17. Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Neonatal ethanol exposure impairs eyeblink conditioning in weanling rats. Alcohol Clin Exp Res. 22, 270-275 (1998).
  18. West, J. R., Hamre, K. M., Pierce, D. R. Delay in brain growth induced by alcohol in artificially reared rat pups. Alcohol. 1, 213-222 (1984).
  19. Tran, T. D., Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Binge-like ethanol exposure during the early postnatal period impairs eyeblink conditioning at short and long CS-US intervals in rats. Dev Psychobiol. 49, 589-605 (2007).
  20. Ikonomidou, C., et al. Ethanol-induced apoptotic neurodegeneration and fetal alcohol syndrome. Science. 287, 1056-1060 (2000).
  21. Heaton, M. B., Paiva, M., Madorsky, I., Siler-Marsiglio, K., Shaw, G. Effect of bax deletion on ethanol sensitivity in the neonatal rat cerebellum. J Neurobiol. 66, 95-101 (2006).
  22. Ryabinin, A. E., Cole, M., Bloom, F. E., Wilson, M. C. Exposure of neonatal rats to alcohol by vapor inhalation demonstrates specificity of microcephaly and Purkinje cell loss but not astrogliosis. Alcohol Clin Exp Res. 19, 784-791 (1995).
  23. Kraemer, G. W., Moore, C. F., Newman, T. K., Barr, C. S., Schneider, M. L. Moderate level fetal alcohol exposure and serotonin transporter gene promoter polymorphism affect neonatal temperament and limbic-hypothalamic-pituitary-adrenal axis regulation in monkeys. Biol Psychiatry. 63, 317-324 (2008).
  24. Schneider, M. L., et al. Moderate-level prenatal alcohol exposure alters striatal dopamine system function in rhesus monkeys. Alcohol Clin Exp Res. 29, 1685-1697 (2005).
  25. Ramadoss, J., Hogan, H. A., Given, J. C., West, J. R., Cudd, T. A. Binge alcohol exposure during all three trimesters alters bone strength and growth in fetal sheep. Alcohol. 38, 185-192 (2006).
  26. Ramadoss, J., Lunde, E. R., Pina, K. B., Chen, W. J., Cudd, T. A. All three trimester binge alcohol exposure causes fetal cerebellar purkinje cell loss in the presence of maternal hypercapnea, acidemia, and normoxemia: ovine model. Alcohol Clin Exp Res. 31, 1252-1258 (2007).
  27. Ramadoss, J., Tress, U., Chen, W. J., Cudd, T. A. Maternal adrenocorticotropin, cortisol, and thyroid hormone responses to all three-trimester equivalent repeated binge alcohol exposure: ovine model. Alcohol. 42, 199-205 (2008).
  28. Byrnes, M. L., Reynolds, J. N., Brien, J. F. Brain growth spurt-prenatal ethanol exposure and the guinea pig hippocampal glutamate signaling system. Neurotoxicol Teratol. 25, 303-310 (2003).
  29. Catlin, M. C., Abdollah, S., Brien, J. F. Dose-dependent effects of prenatal ethanol exposure in the guinea pig. Alcohol. 10, 109-115 (1993).
  30. Phillips, D. E., Krueger, S. K. Effects of combined pre- and postnatal ethanol exposure (three trimester equivalency) on glial cell development in rat optic nerve. Int J Dev Neurosci. 10, 197-206 (1992).
  31. Phillips, D. E., Krueger, S. K., Rydquist, J. E. S. hort- Short- and long-term effects of combined pre- and postnatal ethanol exposure (three trimester equivalency) on the development of myelin and axons in rat optic nerve. Int J Dev Neurosci. 9, 631-647 (1991).
  32. Shetty, A. K., Burrows, R. C., Wall, K. A., Phillips, D. E. Combined pre- and postnatal ethanol exposure alters the development of Bergmann glia in rat cerebellum. Int J Dev Neurosci. 12, 641-649 (1994).
  33. Maier, S. E., Chen, W. J., Miller, J. A., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability regional differences in alcohol-induced microencephaly as a function of the timing of binge-like alcohol exposure during rat brain development. Alcohol Clin Exp Res. 21, 1418-1428 (1997).
  34. Maier, S. E., Miller, J. A., Blackwell, J. M., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability: regional differences in cell loss as a function of the timing of binge-like alcohol exposure during brain development. Alcohol Clin Exp Res. 23, 726-734 (1999).
  35. Livy, D. J., Miller, E. K., Maier, S. E., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability: effects of binge-like alcohol exposure on the developing rat hippocampus. Neurotoxicol Teratol. 25, 447-458 (2003).
  36. Kelly, S. J., Lawrence, C. R. Intragastric intubation of alcohol during the perinatal period. Methods Mol Biol. 447, 101-110 (2008).
  37. Perkins, A., Lehmann, C., Lawrence, R. C., Kelly, S. J. Alcohol exposure during development: Impact on the epigenome. Int J Dev Neurosci. 31, 391-397 (2013).
  38. Tran, T. D., Kelly, S. J. Alterations in hippocampal and hypothalamic monoaminergic neurotransmitter systems after alcohol exposure during all three trimester equivalents in adult rats. J Neural Transm. 106, 773-786 (1999).
  39. Gil-Mohapel, J., et al. Altered adult hippocampal neuronal maturation in a rat model of fetal alcohol syndrome. Brain Res. 1384, 29-41 (2011).
  40. Popovic, M., Caballero-Bleda, M., Guerri, C. Adult rat's offspring of alcoholic mothers are impaired on spatial learning and object recognition in the Can test. Behav Brain Res. 174, 101-111 (2006).
  41. Guerri, C., Sanchis, R. Alcohol and acetaldehyde in rat's milk following ethanol administration. Life Sci. 38, 1543-1556 (1986).
  42. Matta, S. G., Elberger, A. J. Combined exposure to nicotine and ethanol throughout full gestation results in enhanced acquisition of nicotine self-administration in young adult rat offspring. Psychopharmacology (Berl. 193, 199-213 (2007).
  43. Olney, J. W. Fetal alcohol syndrome at the cellular level). Addict Biol. 9, 137-149 (2004).
  44. Sulik, K. K. Genesis of alcohol-induced craniofacial dysmorphism. Exp Biol Med (Maywood). 230, 366-375 (2005).
  45. Lewis, S. M., et al. Modifying a displacement pump for oral gavage dosing of solution and suspension preparations to adult and neonatal mice). Lab Anim (NY). 39, 149-154 (2010).
  46. Cebolla, A. M., et al. Effects of maternal alcohol consumption during breastfeeding on motor and cerebellar Purkinje cells behavior in mice. Neurosci Lett. 455, 4-7 (2009).
  47. Becker, H. C., Hale, R. L. Repeated episodes of ethanol withdrawal potentiate the severity of subsequent withdrawal seizures: an animal model of alcohol withdrawal "kindling". Alcohol Clin. Exp. Res. 17, 94-98 (1993).
  48. Galindo, R., Valenzuela, C. F. Immature hippocampal neuronal networks do not develop tolerance to the excitatory actions of ethanol. Alcohol. 40, 111-118 (2006).
  49. Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species. J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).
  50. Becker, H. C., Diaz-Granados, J. L., Weathersby, R. T. Repeated ethanol withdrawal experience increases the severity and duration of subsequent withdrawal seizures in mice. Alcohol. 14, 319-326 (1997).
  51. Ukita, K., Fukui, Y., Shiota, K. Effects of prenatal alcohol exposure in mice: influence of an ADH inhibitor and a chronic inhalation study. Reprod Toxicol. 7, 273-281 (1993).
  52. Varma, P. K., Persaud, T. V. Influence of pyrazole, an inhibitor of alcohol dehydrogenase on the prenatal toxicity of ethanol in the rat. Res Commun Chem Pathol Pharmacol. 26, 65-73 (1979).
  53. Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. Laboratory routines cause animal stress. Contemp Top Lab Anim Sci. 43, 42-51 (2004).
  54. Arias, C., Molina, J. C., Mlewski, E. C., Pautassi, R. M., Spear, N. Acute sensitivity and acute tolerance to ethanol in preweanling rats with or without prenatal experience with the drug. Pharmacol Biochem Behav. 89, 608-622 (2008).
  55. Nizhnikov, M. E., Molina, J. C., Varlinskaya, E. I., Spear, N. E. Prenatal ethanol exposure increases ethanol reinforcement in neonatal rats. Alcohol Clin Exp Res. 30, 34-45 (2006).

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चिकित्सा अंक 89 भ्रूण इथेनॉल जोखिम प्रतिमान वाष्प विकास शराब टेराटोजेनिक पशु माउस मॉडल
मानव विकास के सभी तीन trimesters के दौरान बराबर शराब के लिए चूहों का पर्दाफाश किया भाप मंडलों का निर्माण
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Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper,More

Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper, L. A., Valenzuela, C. F. Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development. J. Vis. Exp. (89), e51839, doi:10.3791/51839 (2014).

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