Summary
我々は、同時に6マウスのケージを収容し、容易に入手可能な材料を用いてアルコール蒸気室の構成を示す。我々はさらに、人間の妊娠のすべての3学期に相当胎児性アルコール暴露のマウスモデルでの使用を記載している。このパラダイムは、妊娠や出産後の日1月12日の間、動物を公開します。
Abstract
開発中のアルコールへの暴露をまとめて胎児性アルコールスペクトラム障害（FASDs）として知られており、形態学的および行動異常の星座になることがあります。スペクトラムの最も深刻な終わりに発育遅延、頭蓋顔面異形学、および神経行動赤字が特徴胎児性アルコール症候群（FAS）が、ある。げっ歯類を含む動物モデルを用いた研究は、FASDsの病態に関与する多くの分子·細胞メカニズムを解明した。妊娠中のげっ歯類のエタノール投与は、妊娠の第一および第二の妊娠期にヒトへの暴露をモデル化するために使用されている。ヒトでの妊娠後期のエタノール消費は、新生児げっ歯類を用いてモデル化されています。しかし、いくつかの齧歯類の研究は、ヒトの妊娠、妊娠中の女性に共通しているエクスポージャーのパターンの全3学期に相当時のエタノール曝露の効果を特徴としている。ここでは、O容易からの蒸気室を構築する方法を示してそれぞれが6つの標準のマウスのケージに収容することができbtainable材料。我々は、すべての3つの学期中に、最小の取り扱いで、エタノールへの曝露をモデル化するために使用することができる蒸気室パラダイムを記載している。我々の研究は、妊娠中のダムがエタノールに重要な代謝の耐性を開発したことを示している。しかし、新生仔マウスは、代謝寛容と胎児の数、胎児体重、胎盤重量、子犬/リットルの数、死者の子犬/リットルの数を開発していない、と子犬重量が大幅にエタノール曝露による影響を受けなかった。このパラダイムの重要な利点は、遺伝子組み換えマウスを用いた研究への適用である。さらに、このパラダイムは、動物の取り扱い、胎児性アルコール研究の主要な交絡を最小限に抑えます。
Introduction
妊娠中に飲むと有意な影響を受けた個人とその家族の生活の質を低下させる多くの臓器やシステムに永続的な変化を引き起こし、胎児に害を与えることができます。それは、女性の約百分の10から30までは、どんちゃん騒ぎパターン1,2 1-8％の飲用で、米国では妊娠中に飲んでいると推定されている。胎児の発育中にエタノール曝露によって生じる効果の範囲は、集合的に胎児性アルコールスペクトラム障害（FASDs）として知られている。最近の推定値はFASDs米国3 2-5％と高い有病率との公衆衛生上の大きな問題であることを示している。 FASDsのより深刻な症状は発育遅延、頭蓋顔面異常、および学習障害などの神経行動障害、ことを特徴としている胎児性アルコール症候群（FAS）、である。 FASの有病率は、米国で3 0.2から0.7パーセントであると推定されている。 FASDsに現在利用可能な治療は部分的にのみ有効であるより効果的な治療法の開発は、障害のこの複雑なスペクトルの細胞および分子基盤の理解不足によって制限されます。
妊娠は妊娠2の後の段階の間に、検出された禁欲続いてきた前に、国民の先天異常の予防研究（NBDPS）からのデータは、妊娠中の女性は、最も一般的に1 番目の学期中に飲むことを示している。 NBDPSも妊娠中のエタノール消費の第二の最も一般的なパターンは、妊娠2のすべての学期全体の飲酒を伴うことがわかった。この理由は、胎児のエタノール曝露（たとえ低線量で）、妊婦管理へのアクセスが制限され、精神神経疾患のための肯定的な歴史、および虐待またはエタノール4への依存の潜在的に有害な影響についての意識の欠如が含まれています。興味深いことに、NBDPSは、消費の3番目の最も一般的なパターンは1時に禁欲を関与することが報告
妊娠中の女性で観察されたエタノール消費の異なるパターンをモデル化する試みにおいて、発達エタノール曝露パラダイムの数が最も一般的であり、5,6、ラットおよびマウスで、多様な動物種を使用して確立されている。これらの動物における妊娠期間、通常、ラス人間の妊娠の1 番目と2 番目の学期に相当し、約3週間と、TS。多くのげっ歯類の研究では、この期間中の様々な用量およびエタノール曝露のパターンの影響を評価している。頻繁に妊娠したマウスやラットにエタノールを投与するために使用される方法の例としては、流動食7,8を経由して投与を含む、飲料水9,10、サッカリン甘くソリューション11の自発的な飲酒、胃強制経口投与12、蒸気の吸入13にエタノールを加えて、および皮下または腹腔内注射14。これらの研究の結果は、妊娠の初期段階での暴露は（6,15に概説されている）、脳全体に神経回路を損傷するのに十分であることを実証し、FASDsとヒトで観察赤字のいくつかをで要約している。
げっ歯類を用いた実験も証明されていることを第 3と同等の間の暴露16-18、胃内挿管19、皮下注射瘻孔20内を介して供給することを含む様々な方法、および蒸気吸入21,22を使用して、これらの動物に投与されている。これらの研究は、説得力のある脳の成長のスパートがエタノール6の発達への影響に対する高い脆弱性の周期であることを実証した。
上述したように、妊娠のすべての学期中に飲酒は、女性2におけるエタノール消費の一般的なパターンです。しかしながら、比較的少数の研究は、動物モデルを用いて露光のこのパターンの影響を評価している。これらの研究のいくつかはadvantagをとっている第3学期と同等のラットおよびマウスの場合と同様に、 子宮内ではなく、新生児期に発生した大規模な動物のE。これらの動物モデルは、ヒト以外の霊長類23,24と羊25〜27が含まれています。しかしながら、これらの動物モデルが広くコスト高と専門医療施設の必要性、部分的には、FASDs研究に使用されていない。げっ歯類は、より一般的に胎児の発育5に全三半期のエタノール曝露の効果を特徴付けるために使用されてきた。モルモットは、人間28,29のそれに脳の成熟に彼らの大規模な出生前の開発との類似点が与えられ、この点で特に有利で あった。モルモットでは、ヒト第3三半期の等価開発期間を含む子宮内エタノール曝露の効果を特徴付けることが可能であった。これらの動物の比較的高いコスト、ならびにそれらの妊娠の比較的長い持続時間（〜67日）、FASDs研究に取り組んでいくつかの研究室にその使用を制限している。
そのため、生物医学研究での費用対効果と幅広い用途のため、研究者らは、妊娠のすべての妊娠期にエタノールへの暴露をモデル化するために、ラットを用いてきた。初期の研究では、ラットを0.08グラム/デシリットルのダムのピーク血中エタノール濃度（BEC）、その結果胃人工的に飼育する新生児（出生後日数（P）1月10日）を経てエタノールを投与し、続いて流動食を経由して、妊娠中に暴露したそして子犬0.16グラム/デシリットル中。このパラダイムは視神経髄鞘に長期的な変化を引き起こし、小脳30〜32におけるバーグマングリア繊維の数を減少させた。 第3トリメスター相当（P4-9）33,34の一部の間新生児政権が続く胃内挿管を経由してどんちゃん騒ぎ状に妊娠したラットのダムにエタノールを投与した人工的な飼育条件を使用して同様に、マイヤーとの共同研究。 PEAK母体およびPUP BECはは妊娠20日目及びP6の両方で0.3グラム/デシリットルた。この全学期の露出パラダイムは、妊娠33の選択された期間中に公開されるの仔で観察されるものよりも有意に大きかった成長遅延をもたらした。さらに、すべての三半期の間に相当のエタノールに暴露したラットは、小脳プルキンエそれ以外の期間34中に暴露した動物で観察されたものより大きかった顆粒細胞の数の減少を示した。海馬細胞数の減少もこのパラダイムで報告したが、これらの効果は35学期相当の3 回目の間に、主に暴露の結果であると思われた。妊娠ラットおよび新生児マウスの両方に胃内胃管栄養法を介して、エタノール投与することを含む方法は、すべての妊娠初期露光36をモデル化するために使用されている。ダムでの0.13グラム/デシリットル（妊娠17日目）およびP6の仔での0.24グラム/ DLの前記下部電極が得られ、この方法は、誘発されLON海馬と視床下部におけるモノアミン神経伝達物質レベルのG-持続的変化、および海馬37,38で結合タンパク質2 DNAメチルトランスフェラーゼとメチル化CpGの発現を増加させた。同じような露出パラダイム（ダムや子犬での0.2グラム/デシリットル中のBEC = 0.14〜0.2グラム/デシリットル）を使用して、ギル·Mohapel ら 39は、成体ラットの歯状回における新しい未熟な神経細胞の数の増加を検出したことをエタノール誘発神経損傷または成人生まれのニューロンの成熟の変化に代償機構を表すことができる。捜査官はまた、流動食を経由してダムを公開するか、妊娠中や授乳9,40の両方の間に水を飲むことによって、すべての学期エタノール曝露をモデル化しようとしました。それは、典型的には、低子犬BECは（; 41,42 例えば 、0.002〜0.05グラム/デシリットル）になるので、自分の母乳を経由して子犬を暴露の有用性は限られている。
マウスもextensを使用されている発達エタノール曝露の影響を特徴づけるためにively。この動物モデルの多くの遺伝子改変されたマウス系統が5利用可能な付加的な利点を、ラット動物モデルのため、上記の強みの多くの株式。マウスは正常に1 番目 、2 番目または妊娠43,44の第3三半期中にエタノールの効果を特徴付けるために使用されてきた。それはヒトの妊娠三半期のすべてに相当する時にマウスを露出させるために技術的に困難であるので、これらの動物のすべての妊娠初期暴露の影響は、十分に特徴付けられていない。例えば、ラットで成功裡に使用されている人工飼育し、胃の強制経口投与では、マウス45でのより専門的な手順が必要です。我々の知る限り、これまでの唯一の研究では、マウスを使用して、すべての学期エタノール曝露の効果を研究しようとしました。これらの動物を、飲料水デュリエタノール溶液に曝露した妊娠·授乳46 ng の 。母親のBECはは0.07グラム/デシリットルと子犬前記下部電極が決まったが、ダムのものの割合であることが期待されていないでした。
ここでは、アルコールは蒸気吸入室を経由して、妊娠中のダムや新生児の両方に投与されたマウスの全ての三半期のエタノール曝露のための新しいモデルを説明します。蒸気室は従来の設計47に基づいて建設された。私たちは、吸入室を構築し、露出手続きを行う方法についての詳細な手順を提供する。また、達成することができBECはと仔の生存と成長に暴露の影響に関する情報を提供します。
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Protocol
すべての動物の手続きは、ニューメキシコ州 - 健康科学大学センター施設内動物管理使用委員会によって承認された。
1。蒸気商工総会
- 上、下、前、後、サイド、ドア（ 図1、表1）のためのビデオで提供さ寸法に丸鋸やジグソーで切断のポリカーボネートシート。
- 丸鋸やジグソーで、フロントパネルの中央にある幅の広い16インチ×8インチの高さの開口部をカット。
- 測定し、室のドアになります10インチのポリカーボネートシートで18インチの上にピアノのヒンジ用の穴をマーク。
- ドアに、5/16インチのドリルビットとカウンターシンク穴を開け、3/16インチのドリルビットとネジ用の穴を開けます。ネジの頭のためにドアの内側にカウンターシンク穴を開けていることを確認してください。
- 溶接用ポリカーボネートシートを準備します。
- あちこちに組み立てるNT、＃16ウェルドオンを用いたボトムパネル上に戻し、サイドパネル。
- ＃16溶接式とパネル間のギャップをシール。
- ＃16溶接式で上部パネルを取り付けます。
- 溶接部が硬化しながら、所定の位置にすべてのものを保持するためにバークランプまたは重い教科書を使用してください。
- ドアヒンジを取り付けるための開口部以下のフロントパネル1インチ上にポリカーボネートの12インチピースで1インチを取り付けます。
- 治すために溶接式のために少なくとも24時間を許可します。
- 12インチ、長さ1インチの長さのPEX管の1枚PEX管の2枚をカット。
- 5月16日のドリルビットを使用すると、一方の端から12インチPEX管のそれぞれ約1〜2インチで穴を開けます。
- 離れてコネクタからある穴に3/8インチのT型コネクタに2×12インチのPEXチューブを取り付けます。
- 3/8インチのプラグがPEX管の開放端にキャップ。
- 4-40小ねじとナットを使用してフロントパネルやドアにピアノヒンジを取り付けます。
- ガイドとしてドアを用いて、m個室内のフロントパネルに1インチのスペーサー上にピアノのヒンジのために必要な穴を箱舟。
- 3月16日インチのドリルビットを使用すると、ピアノのヒンジのフロントパネルに穴を開けます。
- 4-40小ねじとナットを使用してフロントパネルのドア、ピアノヒンジを取り付けます。
- サイドアームの両側にワッシャーとナットが付いているビデオのようにトグルクランプを組み立てる。
- フロントパネル上のトグルクランプ用のマークとドリル3/16インチの穴と4-40小ねじとナットでトグルクランプを取り付けます。
- ドアの内側に3/8インチのゴム球シールを追加します。
- （5/8インチ）退屈なドリルビットを使用すると、入口ポートのトップパネルの中央に穴を開けます。
- 出口ポートは、背面パネルの下部/中心部の1/2インチの穴を開けます。
- 出口ポート穴に蒸気室の奥壁を貫通した貫通壁のアダプター3/8インチのネジ部を押すことにより、出口ポートを組み立てます。からナットを取り付け所定の位置に保持するために、チャンバー内。
- ポリカーボネートシートから保護カバーを取り外します。
- T型コネクタにPEX管の1インチのピースを取り付け、内側からチャンバの上部の穴からPEXチューブを強制します。
- 外部から1インチPEX管の上部に3/8インチ90肘を取り付けます。
注：ドアに1/2インチの穴を開け、穴に1/2インチのシールセプタムを挿入します。 - 空気だけで室内を制御するために繰り返して1から22を繰り返します。
2。ラックおよびエアー配達国会
- マテリアルリストに記載されているカート/ラックにチャンバーを配置する場合は、製造元の指示に従って、カートを組み立てる。
- 予備のナットとボルトで、気流制御因子を保持するために、ラックにポリカーボネートのスクラップピースを取り付けます。
- どこでもポリカーボネート、マークとドリル気流レギュレータの3/4インチの穴のスクラップピースオンとナットでレギュレータを添付提供しました。
- 空気流量調節器の入口と出口のポートに3/8インチのスルーACアダプタを接続します。
- エアレーション石、＃8栓とクイックリリースのインラインコネクタをエタノールフラスコを組み立てます。
- 図1に示すように、3/8インチTYGONチューブを用いて、空気ポンプおよびエタノールフラスコに流量レギュレータを接続する。
- 図1に示すように、空気のみ室は、入口3/8インチ、3/8インチのタイゴンチューブ90肘に気流調整器の出口ポートを接続します。
図1は、蒸気室の構成の概略図。T-コネクタは、低雑音エアポンプに取り付けられている。 T-コネクタの一方の側にのみ空気が直接蒸気チャンバのための空気流調節器に接続されている。他のSIDEを再度分割し、2つの異なる気流調整器、空気用とエタノール1に取り付けられている。示すように、空気室に直接レギュレータに接続されている。エタノール蒸気室、一つの空気流調整器は、フィルターフラスコ内の液をエタノールに浸漬エアレータ石に接続されている。示されるように、フィルターフラスコのサイドアームポートは、エアレギュレータの出力に接続されている。マージされたエタノール蒸気及び空気は、エタノール蒸気室の入口に接続されている。出口管（図示せず）は、室内の換気口に接続されている。
3。テスト蒸気チェンバースとエタノールレベルを調整
- 、フィルターフラスコに190プルーフエタノール600ミリリットルを追加エアレーション石を挿入し、フラスコのサイドアームにチューブ入口にフック。
- 閉鎖室のドアとエアーポンプをオンにします。
- 約半分の空気がそれと混合されている空気のような液体アルコール流れるように気流制御因子を調整します。 Adjusエタノール室のアルコールと空気の混合流への空気だけエアフロートン。
- チャンバは空気エタノール濃度を測定する前に少なくとも30分間平衡化することができます。
- 隔壁を介して18G針及び60mlのシリンジで空気を5mlを抽出することにより、空気エタノール濃度を測定する。バック60ミリリットル（1：12希釈）にプランジャーを描くことで室内空気と、そのサンプルを希釈する。製造業者の指示に従って、飲酒を用いて空気エタノールレベルを測定する。室内空気の希釈は、飲酒の検出範囲内のアルコール蒸気のレベルを達成するために必要とされる。
NOTE：アルコール暴露の異なるレベルを使用する場合、希釈を調整する必要があり得る。 - 約4.5〜5グラム/デシリットル（空気のデシリットル当たりの気化アルコールのグラム）の風アルコール濃度を達成するのに必要な出発点として、空気流調整器を調整する。
4。動物の繁殖
- グループの家の女性は、卵巣のサイクルを同期させるために、少なくとも1週間/ 6マウス（2〜3ヶ月）をC578BL。
- 個別に少なくとも2週間のオスのC57BL / 6マウス（2-5ヶ月）を収容する。
- 同期した後に、交配を可能にするために5日間、独身男性と独身女性の中に入れた。
- 交尾の後、男性を削除し、個別に、女性を収容し、室内に配置します。
5。前産後エタノール蒸気暴露
- 子犬の死を防ぐために、出生日を除いて（午前6時 - 午後6時から点灯）ライトサイクル中の午前10時から始まる1日4時間、エタノール蒸気に妊娠中のダムを公開します。
- （G）5、G13-G14、およびG18-G20は妊娠を監視するために妊娠の日にダムを量る;寝具は、女性が取り扱いを最小限にするために体重を測定したことを日に変更されました。
- 毎日それらに吸収され、任意のエタノールを用いてペレットの消費を避けるために、エタノール暴露群のための食糧を交換してください。
- 当日の誕生は、動物にさらさないでください。出産後、P1〜P12から午前10時から始まる1日4時間にわたってダムや子犬を公開します。
- P2、P8、P12、およびP25に子犬を比較検討する。と追加の取り扱いを最小限に抑えるためにP8とP12にベッドを変更してください。
- すぐに最後の暴露（P12）の後に、標準的な動物飼育室にケージを移す。
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Representative Results
図2Aは、妊娠マウスおよび新生児の子孫の両方が室内の比較的安定したエタノール蒸気の濃度に暴露されたことを示している。これらの4-6グラム/デシリットルの範囲であった。 図2Bは、前記下部電極は、時間の関数として妊娠マウスで達成を示しています。前記下部電極は、標準的なアルコール脱水素酵素ベースのアッセイ48を使用して測定した。 G5で、BECははすぐに暴露開始後〜60 mMの2時間に上昇し、4時間曝露期間の終了時にピークとなった。 BECは、徐々に暴露終了後さらに4時間後〜12 mMまで低下した。 G13-14により、G5で検出されたレベルの約60％に前記下部電極の劇的な減少がありました。また、BECはレベルはよりゆっくりと上昇し、妊娠したマウスの血液中のエタノールの短い存在で、その結果、より急速に減少した。近い将来（G18-20）で、前記下部電極は、さらに、G5で検出されたレベルの約30％まで減少した。これらの知見は、developmですと一致している妊娠マウスにおけるエタノールへの迅速な代謝寛容のENT。 図2Cは、新生児の子孫を30mmに近い前記下部電極にさらされたことを示しています。 BECは、徐々に4時間曝露期間の終了時にピークに達し、これらの動物で上昇し、徐々に8時間4時間曝露のパラダイムの終了後にベースラインレベルに減少する。妊娠中の母動物とは対照的に、初期（P2）に曝露した新生児において測定前記下部電極との間の差は、新生児期における後期対（P7〜P12）がなかった。これらの知見は、新生児マウスはエタノール代謝の耐性を開発していないことを示している。
図2。エタノールレベルの特性であって、a）エタノール蒸気室レベルが露出paradigの妊娠および出生後の段階を通して比較的一定であったM。これらのレベルを測定するために、室内空気は（詳細についてはビデオ参照）、ゴム隔壁を介してシリンジで引き出さ周囲空気で希釈して、飲酒の入口ポートに排出した。値は、それぞれ、妊娠および出生後の段階に対して丸め5,4異なる露光から得られた。妊娠中の母た（n = 5-7で示したダム推定妊娠日間の異なる時点で測定B）血中エタノールレベル）。法的中毒制限（17.4ミリモルまたは0.08グラム/デシリットル）を点線で示している。灰色のバー）は、Bと同様であるが、新生仔マウスのためのC）と同じ。ダムをエタノールに暴露された時刻を示している（N =別の仔から5-9匹。
図3は、露光パラダイムが大幅にダムや仔の体重増加に影響を与えなかったことを示しています。 表2は、エタノール曝露が大幅に実行可能なfetuの数に影響を与えなかったことを示していSES、（短期的で測定）再吸収された胎児、胎児体重および胎盤重量。 表2の数もゴミや子犬の死亡率あたりの仔の数が大幅にエタノール曝露による影響を受けなかったことを示しています。 拡大バージョンを表示するには、こちらをクリックしてくださいこの図の。
図3。ダムと子犬の重みに対するエタノール曝露の効果の欠如。 A）ダムの重み推定妊娠日の関数としてのゲイン（N = 8-12）。推定妊娠5日目の体重は、年齢の関数（N = 7-9）のような暴露の最初の日。B）子犬の体重増加で測定された重量に対応しています。両方のパネルについては、エラーバーは記号よりも小さい。 <HREF = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/51839/51839fig3highres.jpg"ターゲット= "_blank">この図の拡大版を表示するには、こちらをクリックしてください。
| 寸法（インチ） | 高さ | 幅 |
| トップ | 32 | 22 |
| ボトム | 32 | 22 |
| フロント | 32 | 14 |
| バック | 32 | 14 |
| サイド1 | 21.5 | 14 |
| サイド2 | 21.5 | 14 |
| ドア | 18 | 10 |
表1。ポリカーボネートシートの寸法。
| 空気 | エタノール | |
| 7.50±1.08、nは6 | 7.33±1.52、nは6 | |
| 平均胎児重量（g）：〜E18 | 1.04±0.09、N = 6 | 0.82±0.09、N = 6 |
| 平均プラセンタ重量（g）：〜E18 | 0.12±0.003、nは6 | 0.14±0.01、N = 6 |
| 再吸収された胎児の数：〜E18 | 0.50±0.34、nは6 | 0.50±0.50、nは6 |
| 子犬/リットルの数 | 7.11±0.67、nは9 | 6.89±0.42、N = 9 |
| 死んだ子犬/リットルの数 | 0.11±0.11、N = 9 | 0.66±0.24、nは9 |
表2。マウスの蒸気暴露パラダイムの前後の出生特性評価。
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Discussion
ここでは、詳細に蒸気吸入室の構築のための方法を記載する。チャンバーを構築するために必要な材料とツールは、商業的供給者の数から容易に入手可能であり、チャンバーの建設のための手順は比較的簡単です。我々はここで説明するシステムは、逆流や混合を防止するために、任意のインラインチェックバルブが含まれていません。私たちは、空気中に私たちはどんな混合または空気中へのエタノールの逆流のみの室を持っていないことを示唆しているだけのチャンバーを任意の検出可能なエタノールを測定することができませんでした。空気は、チャンバは、（それが空気室は、常に飲酒および/またはシリンジ中に存在する残留エタノール蒸気の検出を避けるために、従来のエタノールチャンバにテストされるべきであることに留意されたい）を定期的にエタノール蒸気をチェックすべきである。理想的には、チャンバーは、マウスのケージは、連続してEの期間中に収納することができる動物飼育施設で、専用の部屋に配置する必要がありますマウスを輸送する必要性を排除xposureパラダイムは、それによって応力を低減する。換気口スタンダードルームは、このパラダイムのために必要とされることだけです。部屋は他の研究者と共有されている場合は、それはエタノール臭の他の動物の曝露を最小限にするために、分離された小部屋の部屋でチャンバを配置する必要があり得る。各チャンバーは例えば、胃内強制経口投与、より露出の少ない労働集約的方法作り、6標準のマウスのケージに収容することができます。
露光パラダイムは容易に特定の実験の要件に応じて変更することができる。動物は人間の妊娠のすべての学期と同等の間、エタノールに露出させることができる。それは、人間開発の齧歯類発達同等とみなされ、1が（神経発生、シナプスの統合など）に興味が発達どのようなプロセスされているものの脳部位に応じて変えることができることに留意すべきである。本研究では、第3の3の規定されメスター相当の脳の成長のスパート期間として。研究者は、時間49を翻訳するWebサイトを参照することをお勧めします。 図2Bに示された結果に基づいて、露光エタノール蒸気（ 例えば 、約3グラム/デシリットル）の低いレベルで開始することを推奨し、徐々に代謝耐性の発生を補償するために増加した。プロシージャの実装時に、研究者らは、密接に、これは妊娠中のダムで、より安定した水準になるかどうかを判断するために様々な妊娠日数で前記下部電極を監視する必要があります。アルコールデヒドロゲナーゼの阻害剤は、蒸発チャンバ50内のエタノールに曝露したマウスにおける寛容の発生を予防するために使用されている。しかし、研究は、それが結果51,52の解釈を複雑にする可能性があり、潜在的に催奇形性がある示唆ため、このエージェントは妊娠マウスで使用することはお勧めできません。さらに、どのような形態の注射は、妊娠中のダムへの追加のストレスの原因となります、可能性のある実験53交絡 。
妊娠中の母とは対照的に、新生児期の蒸気室の暴露は、代謝耐性の発生には至らなかった。 BECははP2およびP7-12マウスの間で差は認められなかった。ピーク前記下部電極は、G13-14でのダムで検出されたものと同様であったとG18-20で検出されるものよりもわずかに高い。しかし、BECはは子犬のベースラインに戻るには時間がかかりました。妊娠期間中の蒸気室内のエタノール曝露がエタノールを代謝する新生仔の能力を変化させるかどうかが決定されていない。しかし、文献に基づいて、エタノール54,55を代謝するわずかに減少または不変の能力を示すためにエタノールに妊娠中に暴露した仔について予想される。我々の研究では、平均仔の重量差は観察されなかったし、我々のデータは、妊娠の終わりまでに、妊産婦のBECはかろうじて無MORのための法的中毒を超えて上昇することを示し2時間以上のE。これらのデータは、母親が大幅産後期間中にアルコール暴露から影響を受けないことを示唆している。動物はより高いエタノールレベルにさらされている場合、それにもかかわらず、これは、特に、さらに検討されるべきである。
この露光パラダイムは、いくつかの制限があります。彼らはこの期間中に雄と交配させるため、雌マウスは、妊娠の最初の5日間は公開されませんでした。短い繁殖間隔（ 例えば 、2〜3日）を図ることができるが、これは妊娠し、女性の数が減少する可能性があります。代わりに、動物は交尾栓について検査短い時間、雌で繁殖させることができる。別の制限は、所与のチャンバ内の全てのマウスしかエタノール蒸気の単一濃度に暴露することができることである。また、エタノール蒸気室露光パラダイムのいくつかの側面は、このようなダムを単独で妊娠の大半を通じて収納されており、公開されているという事実のように、ストレスのある強いエタノール臭に。これは、エタノール蒸気曝露はダムおよび/または仔の呼吸器系内のいくつかの変化を引き起こすことも可能である。また、新生ラットへの暴露は、妊娠後期（ 例えば 、胎盤胎児ユニットがこのモデルには存在しない）の間のヒトの曝露の完璧なモデルではありません。それにもかかわらず、我々は、このパラダイムの利点は、その弱点を上回ると主張し、それがFASDsの病態生理に関与するメカニズムを特徴づけるための有用なモデルとなり得ること。
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Disclosures
著者らは、開示することは何もありません。
Acknowledgments
国立衛生研究所によってサポートされているR01-AA015614、R01-AA014973、T32-AA014127およびK12-GM088021を付与します。著者は、技術支援とDRSのためにサマンサL. Blomquistに感謝します。批判的に原稿やビデオを評価するためのケビン·コールドウェル、ドナルドパートリッジ。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polycarbonate 1/4" clear 48" x 24" | McMaster-Carr | 8574K23 | 10 |
| Foam Rubber bulb seal 3/8"w x 7/32"h | McMaster-Carr | 93085K67 | 10 ft |
| Weld-on #16 | McMaster-Carr | 7515A11 | 3 |
| Piano hinge 12" long | McMaster-Carr | 1658A11 | 2 x 1 ft |
| Hold-down toggle clamps standard | McMaster-Carr | 5126A26 | 8 |
| PEX tubing 1/2" | McMaster-Carr | 51275K88 | 10 ft |
| Barbed Tee tube fitting (Black) Pkg 10 | McMaster-Carr | 5463K608 | 1 |
| Barbed plug fitting (Black) Pkg 10 | McMaster-Carr | 5462K79 | 1 |
| Barbed Elbow tube fitting (Black) Pkg 10 | McMaster-Carr | 5463K596 | 1 |
| 3/8" Through-Wall Adapters, Tube to Threaded Pipe | McMaster-Carr | 5463K851 | 1 |
| Phillips Machine screw 4-40 | McMaster-Carr | 91772A112 | 1 |
| Machine screw hex nut 4-40 | McMaster-Carr | 90480A005 | 1 |
| Panel-mount flowmeter 2-20 | McMaster-Carr | 41945K76 | 3 |
| FLASK, FILTER 1,000 ml 6/PACK | VWR | 89001-800 | 2 |
| Precision Seal Septa | VWR | 89084-490 | 1 |
| VWR Black Rubber Stopper #8 1-hole | VWR | 59581-367 | 1 |
| TUBE TYGON R3603 3/8X9/16 50' | VWR | 89068-556 | 1 |
| TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50' | VWR | 89068-502 | 1 |
| Aerator Stone P2120 | VWR | 32573-007 | 1 |
| 3/8" T-connectors Pk of 20 | VWR | 46600-060 | 1 |
| VWR Disconnectors tapered Pk of 10 | VWR | 46600-110 | 1 |
| 3/8 Hose Barb valved in-line coupling | Colder Products Company | HFCD17612 | 1 |
| Air pump medium capacity | LMI Manufacturers | DB60L | 1 |
| Nexelate Wire Shelving 36"W X 24"D X 63"H | Global industrial | T9A990135 | 1 |
| Stem Casters Set of (4) 5" Polyurethane Wheel | Global industrial | T9A500591 | 1 |
References
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