Summary
우리는 동시에 6 마우스 새장을 수용 쉽게 사용할 재료를 사용하여 알코올 증기 챔버의 구조를 보여줍니다. 우리는 더 이상 인간의 임신 3의 삼보 격에 해당하는 태아 알코올 노출의 마우스 모델에서의 사용에 대해 설명합니다. 이 패러다임은 임신과 출생 후의 일 1-12 동안 동물을 노출합니다.
Abstract
개발하는 동안 알코올에 노출 공동으로 태아 알코올 스펙트럼 장애 (FASDs)로 알려진 형태 학적 및 행동 이상의 별자리가 발생할 수 있습니다. 스펙트럼의 가장 심각한 끝에 성장 지연, 두개 안면 dysmorphology 및 신경 행동 결손에 의해 특징 태아 알콜 증후군 (FAS)가있다. 설치류 동물 모델과 연구 FASDs의 병태 생리에 관련된 많은 분자 및 세포 메커니즘을 해명했다. 임신 한 쥐에 에탄올 투여는 임신의 제 1 및 제 2 삼보 격 동안의 인체 노출을 모델링하는 데 사용되었습니다. 인간의 세 번째 임신 에탄올 소비는 신생아 설치류를 사용하여 모델링되었다. 그러나, 몇몇 설치류 연구는 인간 임신, 임산부 일반적인 노광 패턴의 세 학기 제로에 상당 동안 에탄올 노출의 효과를 특징으로 하였다. 여기, 우리는 O를 쉽게에서 증기 챔버를 구축하는 방법을 보여줍니다각각 여섯 표준 마우스 케이지까지 수용 할 수있는 btainable 재료. 우리는 모든 세 학기 제로 중에 최소 처리와, 에탄올에 노출을 모델링하는데 사용될 수있는 증기 챔버 패러다임을 설명한다. 우리의 연구는 임신 댐 에탄올에 중요한 대사 내성을 개발 한 것을 보여줍니다. 그러나, 신생아 마우스는 신진 대사 관용과 태아의 수, 태아 무게, 태반 무게, 강아지 / 고양이 모래의 수, 죽은 강아지 / 고양이 모래의 수를 개발하지 않았고, 강아지 무게는 크게 에탄올 노출에 의해 영향을받지 않았다. 이 패러다임의 중요한 장점은 유전자 조작 쥐의 연구에의 적용이다. 또한,이 패러다임은 동물의 취급, 태아 알코올 연구에 큰 혼동을 최소화한다.
Introduction
임신 중 음주는 크게 영향을받는 개인과 그 가족의 삶의 질을 감소 많은 기관과 시스템의 지속적인 변화를 일으키는 원인이 태아에 나쁜 영향을 줄 수 있습니다. 그것은 여성의 약 30 %가 파티 패턴 1,2 1-8 % 년 음주와 함께, 미국에서 임신 중에 마시는 것으로 추정된다. 태아 발달 동안 에탄올 노출에 의해 생산 효과의 범위는 공동으로 태아 알코올 스펙트럼 장애 (FASDs)로 알려져있다. 최근 추정 FASDs 미국 3 2-5 %의 높은 유병률과 주요 공중 보건 문제가 있다는 것을 나타냅니다. FASDs의 가장 심각한 증상은 성장 지연, 두개 안면 기형, 학습 장애 등의 신경 행동 학적 결손 특징으로 태아 알코올 증후군 (FAS)입니다. FAS의 유행은 미국 3에서 0.2 ~ 0.7 %로 추정하고있다. FASDs의 현재 치료는 부분적으로 만 효과가 있습니다보다 효과적인 치료법의 개발은 질환의 복잡한 스펙트럼의 세포 및 분자 토대의 이해 부족에 의해 제한됩니다.
국립 출생 결함 예방 연구 (NBDPS)의 데이터는 임신이 임신 2 이후 단계에서 감지 절제 다음되기 전에 임신 한 여성은 가장 일반적으로, 1 일의 임신 기간 중에는 술을 나타냅니다. NBDPS은 회임 기간 동안 에탄올 소비의 두 번째 가장 일반적인 패턴은 임신 2의 모든 삼보 격에 걸쳐 술을 포함 것으로 나타났습니다. 그 이유는 태아 에탄올 노출 (도 낮은 복용시), 태아 치료에 대한 제한된 액세스, 신경 정신 질환에 대한 긍정적 인 역사, 그리고 남용 또는 에탄올 4에 대한 의존도의 잠재적으로 해로운 영향에 대한 인식의 부족이 (가) 있습니다. 흥미롭게도, NBDPS 소비의 세 번째 가장 일반적인 패턴은 1시 절제를 포함보고
임산부에서 관찰 에탄올 소비량 다른 패턴을 모델링하기위한 시도에서 개발 에탄올 노광 패러다임 수가 가장 일반적인 5,6 되 래트 및 마우스 함께, 다양한 동물 종을 사용하여 구축되었다. 이 동물의 임신 기간 일반적으로 라스약 2 주, 1 일 및 임신 여성의 2 차 삼보 격에 해당하는 ts를. 많은 설치류 연구는이 기간 동안 다양한 투여 량 및 에탄올 노광 패턴의 영향을 평가 하였다. 자주 임신 한 마우스에 에탄올을 관리하는 데 사용되는 방법과 쥐의 예는 액체 다이어트 7,8, 식수 9,10에 에탄올을 첨가, 사카린 연유 솔루션의 자발적인 음주 11, 위 위관 (12), 증기 흡입 (13)를 통해 관리를 포함 , 피하 또는 복강 내 주사 14. 이러한 연구의 결과는 임신의 초기 단계 (6,15에서 검토) 뇌를 통해 신경 회로를 손상시키기에 충분한이 노출되어 보여 FASDs와 인간에서 관찰 된 적자의 여러 가지를 효과적으로 요약했다.
설치류 실험도 입증이 3 번째에 해당하는 기간 동안 노출 16-18, 위내 삽관 19, 피하 주사 (20)에 위루를 통해 먹이 등의 다양한 방법, 증기 흡입 (21, 22)를 사용하여 이러한 동물에 투여되었다. 이러한 연구는 설득력 두뇌 성장기 에탄올 (6)의 개발 효과가 높은 취약점의 기간임을 증명하고있다.
전술 한 바와 같이, 임신의 모든 학기 제로 중에 마시는 여성이 에탄올 소비의 일반적인 패턴이다. 그러나, 비교적 소수의 연구는 동물 모델을 이용하여 노광이 패턴의 영향을 평가 하였다. 이러한 연구 중 일부는 advantag를 촬영했다3 차 - 삼 당량 래트 및 마우스의 경우에서와 같이 자궁보다는 신생아시기에 발생하는 큰 동물의 전자. 이 동물 모델은 인간이 아닌 영장류 (23, 24)와 양을 25 ~ 27 있습니다. 그러나, 이러한 동물 모델은 광범위하기 때문에 높은 비용과 전문 의료 시설에 대한 필요성을 부분적으로 FASDs 연구에 사용되지 않았다. 설치류는 더 일반적으로 태아의 발달 5에 모든 임신 에탄올 노출의 효과를 특성화하는 데 사용되었습니다. 기니 돼지는 인간 (28, 29)의 그것과 뇌의 성숙에서의 광범위한 태아 발달과 유사점을 적용하는 경우이 점에서 특히 유리했습니다. 기니아 피그, 그것은 인간 3 차 임신의 등가 개발 기간을 포함 자궁 에탄올 노출의 효과를 특징 짓는 것이 있었다. 이러한 동물의 비교적 높은 비용뿐만 아니라, 임신의 비교적 긴 기간(~ 육십칠일), FASDs 연구 작업을 몇 실험실에 사용을 제한하고있다.
때문에 생물 의학 연구에서의 비용 효율성 및 넓은 사용으로, 연구진은 임신의 모든 삼보 격시 에탄올에 노출을 모델로 쥐를 사용했습니다. 초기 연구에서, 쥐가 0.08 g / DL의 댐에 최대 혈중 에탄올 농도 (BEC)의 결과 위루 인위적으로 사육하는 신생아 (생후 일 (P) 1-10)을 통해 에탄올을 투여 한 다음 액체 다이어트를 통해 임신 중 노출 된 그리고 새끼 0.16 g / DL에. 이 패러다임은 시신경 수초에서 오래 지속되는 변화의 원인과 소뇌 30-32에서 Bergmann은 글리 섬유의 수를 감소시켰다. 3 차 임신 상당 (P4-10) 33, 34의 부분에서 신생아 관리 다음 위내 삽관을 통해 파티와 같은 방식으로 임신 한 쥐의 댐에 에탄올을 투여 인공 사육 조건을 사용하여 유사하게, 마이어와 공동. 피EAK 임산부와 강아지를 BECs는 임신 20 일째와 P6 모두에서 0.3 g / DL했다. 이 모든 임신 노출 패러다임은 임신 33 선택한 기간 동안 노출 된 새끼에서 관찰 된 것보다 훨씬 더 컸다 성장 지연의 결과. 또한, 모든 학기 제로에 상당하는 동안 에탄올에 노출 된 래트 소뇌 조롱박 유용한 기간 (34) 동안 노출 된 동물에서 관찰 된 것보다 큰 과립 세포의 수의 감소를 나타냈다. 해마 세포 수의 감소는이 패러다임으로보고 있지만, 이러한 효과는 35 임신 - 상응하는 제 3 회 동안 주로 노출의 결과로 표시했다. 임신 한 쥐와 신생아 마우스 모두 위내의 위관을 통해 에탄올 관리를 포함하는 방법은 모든 임신의 노출 (36)를 모델로 사용되어왔다. 댐에서 0.13 g / DL (임신 하루 17) 및 P6 새끼 0.24 g / DL, 유도 경도의를 BECs을 산출이 방법은,모노 아민 신경 전달 물질의 해마와 시상 하부에있는 수준과 해마 37,38에 단백질이 결합 된 DNA의 methyltransferases 메틸 소비재의 발현 증가에 G-지속적인 변경. 비슷한 노출 패러다임 (댐 및 새끼에서 0.2 g / DL에 BEC = 0.14-0.2 g / DL)을 사용하여, 길 - Mohapel 등. 39 성인 쥐의 치아 이랑 (dentate gyrus)의 새로운 미성숙 신경 세포의 수의 증가를 감지하는 성인에서 태어난 뉴런의 성숙 에탄올에 의한 신경 세포의 손상이나 변경에 대한 보상 메커니즘을 나타낼 수있다. 조사는 또한 액체 다이어트를 통해 댐을 노출 또는 임신과 수유 9,40 둘 중에 물을 마시는 모든 임신 에탄올 노출을 모델링하기 위해 시도했습니다. 그것은 일반적으로 낮은 강아지를 BECs (, 41, 42 예를 들어, 0.002-0.05 G / DL)에 발생하기 때문에, 자신의 모유를 통해 새끼를 노출의 유용성이 제한됩니다.
마우스는 또한 extens를 사용되었습니다발달 에탄올 노출의 영향을 특성화 ively. 이 동물 모델의 많은 유전자 변형 마우스 종자 5 사용할 수있는 또 다른 장점으로, 쥐 동물 모델 위에서 설명한 장점 중 많은 주식. 마우스는 성공적으로 1 차, 2 차 또는 임신 43, 44의 3 차 학기 제로시 에탄올의 효과를 특성화하는데 사용되어왔다. 기술적으로 더 어려운 인간의 임신의 모든 삼보 격에 해당하는 기간 동안 쥐를 노출하는 것입니다 때문에,이 동물의 모든 임신 노출의 영향은 잘 특징되지 않았습니다. 예를 들어, 쥐에서 성공적으로 사용 된 인공 사육 및 위 위관은 쥐 45보다 전문적인 과정을 필요로한다. 우리가 아는 한, 지금까지 단 하나의 연구는 마우스를 사용하는 모든 임신 에탄올 노출의 효과를 연구하기 위해 시도했습니다; 이 동물은 물 두리를 마시는 에탄올 용액에 노출 된NG 임신 및 수유 46. 모자를 BECs는 0.07 g / DL 및 강아지를 BECs가 결정하지만, 댐 이들의 일부가 될 것으로 예상되지 않은이었다.
여기, 우리는 알코올 증기 흡입 챔버를 통해 임신 댐 및 신생아 모두에게 투여 마우스의 모든 임신 에탄올 노출에 대한 새로운 모델을 설명합니다. 증기 챔버는 이전의 디자인 (47)에 따라 건설되었다. 우리는 흡입 챔버를 구축하고 노출이 절차를 수행하는 방법에 대한 자세한 지침을 제공합니다. 또한 달성 될 수를 BECs와 강아지의 생존 및 성장에 대한 노출의 영향에 대한 정보를 제공한다.
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Protocol
모든 동물의 절차는 뉴 멕시코 - 건강 과학 센터 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 증기 챔버 어셈블리
- (그림 1 및 표 1) 위, 아래, 앞, 뒤, 옆, 도어 용 비디오에서 제공하는 차원에 원형 톱 또는 실톱으로 잘라 폴리 카보네이트 시트.
- 원형 톱 또는 퍼즐로, 전면 패널의 중앙에있는 넓은 십육인치 8 인치 높이 개구부를 잘라.
- 측정 챔버의 문이 될 것입니다 10 인치 폴리 카보네이트 시트에 의해 18 인치에 피아노 경첩 구멍을 표시합니다.
- 문에, 5 / 16 인치 드릴 비트 카운터 싱크 구멍을 드릴, 및 3 / 16 인치 드릴 비트와 나사 구멍을 뚫습니다. 나사 머리의 도어 안쪽의 카운터 싱크 구멍을 드릴 수 있는지 확인하십시오.
- 용접 용 폴리 카보네이트 시트를 준비합니다.
- 이리저리 조립NT, # 16 용접에를 사용하여 하단 패널에 백업하고, 측면 패널.
- # 16 용접에와 패널 사이의 틈새를 밀봉.
- # 16 용접에와 상단 패널을 연결합니다.
- 용접은 치료하는 동안 자리에 모든 것을 잡아 바 클램프 또는 무거운 교과서를 사용합니다.
- 문 경첩의 첨부 파일 열기 아래의 전면 패널의 1 인치에 폴리 카보네이트 (polycarbonate)의 12 인치 조각으로 1 인치를 연결합니다.
- 치료 용접에 적어도 24 시간을 허용합니다.
- 십이인치 길이 1 인치 길이 PEX 배관의 1 개 PEX 배관의 2 개 조각을 잘라.
- 5 / 16 드릴 비트, 일 단부로부터 12 인치 PEX 튜브의 각 약 1-2인치에 구멍을 드릴.
- 멀리 커넥터에서있는 구멍 3 / 8 인치 T-커넥터에 2 × 12 인치 PEX 튜브를 연결합니다.
- 3 / 8 인치 플러그와 PEX 튜브의 개방 단부를 모자.
- 4-40 기계 나사와 너트를 사용하여 전면 패널과 도어에 피아노 경첩을 연결합니다.
- 참조 문을 사용하여, m챔버의 전면 패널의 1 인치 스페이서 상 피아노 힌지 필요한 구멍 방주.
- 3 / 16 인치 드릴 비트, 피아노 경첩에 대한 전면 패널에 구멍을 뚫습니다.
- 4-40 기계 나사와 너트를 사용하여 전면 패널에 문 피아노 경첩을 연결합니다.
- 사이드 아암의 양쪽에 와셔와 너트 비디오 같이 토글 클램프를 조립한다.
- 마크와 드릴 토글 3 / 16 인치의 구멍은 전면 패널 클램프 및 4-40 기계 나사와 너트와 클램프 토글 연결합니다.
- 도어 안쪽에 3 / 8 인치 고무 전구 씰을 추가합니다.
- 5 / 8 인치 천공 드릴 비트와 함께, 유입구위한 상부 패널의 중앙에 구멍을 드릴.
- 출력 포트에 대한 백 패널의 하단 / 중앙에 1 / 2 인치의 구멍을 드릴.
- 출구 포트 구멍 증기 챔버의 상부 벽을 통해 관통 벽 어댑터 3 / 8 인치의 나사부를 추진하여 출력 포트를 조립한다. 에서 너트를 부착장소에서 개최 챔버의 내부.
- 폴리 카보네이트 시트에서 보호 덮개를 제거합니다.
- T-커넥터에 PEX 배관의 1 인치 조각을 부착하고 내부에서 챔버의 상부에있는 구멍을 통해 PEX 튜브를 강제로.
- 외부로부터의 1 인치 PEX 배관의 상단에 3 / 8 인치 (90) 팔꿈치를 연결합니다.
참고 : 문에 1 / 2 인치의 구멍을 뚫고 구멍에 1 / 2 인치 씰 격막을 삽입합니다. - 공기는 챔버 제어를위한 반복 1-22 단계를 반복합니다.
2. 랙 및 공기 공급 어셈블리
- 물질리스트에서 언급 카트 / 선반에 챔버를 배치하면, 제조업체의 지시에 따라 카트를 조립한다.
- 여분의 볼트와 너트로, 공기 조절기를 장착 할 랙에 폴리 카보네이트 (polycarbonate)의 스크랩 조각을 연결합니다.
- 어디서나 폴리 카보네이트 (polycarbonate), 마크 드릴 공기 조절기 3 / 4 인치 구멍의 스크랩 조각과 견과류와 레귤레이터를 부착제공.
- 공기 유동 조절기의 입구 및 출구 포트를 통해 벽 어댑터 3 / 8 인치를 부착.
- 폭기 돌, # 8 스토퍼 라인 커넥터 빠른 릴리스 에탄올 플라스크를 조립합니다.
- 도 1에 도시 된 바와 같이 3 / 8 인치 타이곤 튜브를 사용하여, 에어 펌프 및 에탄올을 플라스크에 유량 조절기를 연결한다.
- 도 1에 도시 된 바와 같이 공기만을 챔버를 들면, 입구 (3) / 8 인치 3 / 8 인치 타이곤 튜브와 엘보우 (90)에 공기 조절기의 출력 포트를 연결.
증기 챔버의 구성도 1. 도식 표현. T-커넥터는 저잡음 공기 펌프에 부착된다. T-커넥터의 한쪽은 직접 공기 만 증기 챔버에 대한 공기 흐름 레귤레이터에 접속된다. 기타의IDE를 다시 분할 및 2 개의 다른 공기 조절기, 공기 하나는 에탄올 하나에 연결되어 있습니다. 도시 한 바와 같이 기실 직접 레귤레이터에 접속된다. 에탄올 증기 챔버를 들어, 하나의 기류 레귤레이터 필터 플라스크에서 액체 에탄올에 침지 폭기 돌에 접속된다. 표시된 바와 같이 필터 플라스크의 측면 팔 포트는 공기 조절기의 출력과 연결된다. 병합 에탄올 증기 및 공기이어서 에탄올 증기 챔버의 입구에 연결된다. (도시하지 않음) 출구 관은 방에있는 공기 배출구에 연결되어 있습니다.
3. 테스트 증기 챔버와 에탄올의 레벨을 조정
- 필터 플라스크에 190 증거 에탄올 600 mL를 넣고 폭기 돌을 삽입하고 플라스크의 측면 팔에 튜브 입구까지 연결.
- 닫기 실 문 및 공기 펌프의 전원을 켭니다.
- 약 절반 정도 공기가 혼합 된 공기와 같은 액체 알코올을 통해 흐르도록 공기 조절기를 조절합니다. Adjus에탄올 챔버의 주류와 공기의 조합 플로우에 공기보기에만 기류를 t.
- 챔버 공기 에탄올 농도를 측정하기 전에 적어도 30 분 동안 평형을 허용합니다.
- 격막을 통해 18G 바늘과 60 ML의 주사기로 공기를 5 ㎖를 추출하여 공기의 에탄올 농도를 측정한다. 다시 60 ㎖ (1시 12분 희석)에 플런저를 그림으로써 실내 공기에 그 샘플을 희석. 제조업체의 지시에 따라 음주 측정기를 사용하여 공기 에탄올 레벨을 측정한다. 챔버 공기의 희석은 측정기의 감지 범위 내에 알코올 증기 수준을 달성하기 위해 필요하다.
참고 : 알코올 노출의 다른 수준을 사용하는 경우 희석 조정해야 할 수 있습니다. - 약 4.5-5 g / DL (공기의 DL 당 기화 알콜 g)의 공기 알코올 농도를 달성하기 위해 필요에 따라 출발점으로, 공기 조절기를 조절한다.
4. 동물 사육
- 그룹 하우스 여성은 난소주기를 동기화하는 데 최소 1 주일 / 6 마우스 (2 ~ 3 개월)을 C578BL.
- 개별적으로 최소 2 주 동안 남성 C57BL / 6 마우스 (2-5 개월)을 수용.
- 동기화 한 후, 짝짓기 수 있도록 5 일 동안 한 남성과 한 여성을 넣어.
- 짝짓기 후, 남성을 제거하고 개별적으로 집 여성과 챔버에 배치합니다.
5. 전 및 출생 후 에탄올 증기 노출
- 강아지의 죽음을 방지하기 위해 탄생 한 날을 제외하고 빛을주기 동안 오전 10시에 시작하여 1 일 4 시간 (오전 6시에서 오후 6시까지부터 점등) 에탄올 증기에 임신 댐 노출.
- 임신을 모니터링하기 위해 임신의 날 (G) 5, G13-G14 및 G18-G20에 댐의 무게; 침구는 여성이 취급을 최소화하기 위해 칭량 (일)에 변경되었습니다.
- 매일 그들에 흡수하는 에탄올로 펠렛의 소비를 방지하기 위해 에탄올 노출 그룹에 대한 음식을 교체합니다.
- 의 날탄생은 동물에 노출하지 마십시오. 출산 후 P1-P12에서 오전 10시에 시작하여 하루에 4 시간의 댐과 새끼를 노출합니다.
- P2, P8, P12 및 P25에 새끼의 무게; 추가 처리를 최소화하기 위해 P8 및 P12에 침구를 변경합니다.
- 즉시 마지막 노출 (P12) 한 후, 표준 동물 주택 방에 새장을 전송합니다.
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Representative Results
그림 2A는 임신 한 쥐와 신생아의 자손 모두가 챔버에서 상대적으로 안정적인 에탄올 증기 농도에 노출 된 것을 보여줍니다. 이러한 원거리 4-6g / DL 사이.도 2b는 시간의 함수로서 임신 한 생쥐에서 달성를 BECs를 나타낸다. 를 BECs는 표준 알코올 탈수소 기반 분석법 (48)를 사용하여 측정 하였다. G5에서를 BECs 신속 노광 개시 후 ~ 60 mM의 2 시간 상승 및 4 시간의 노출 기간의 끝에 만족. 를 BECs 점차 노출의 끝에 다음과 같은 추가 4 시간 후 ~ 12 mm로 감소했다. G13-14으로, G5에서 검출 수준의 약 60 %를 BECs의 극적인 감소가 발생했습니다. 또,를 BECs 레벨이 더 천천히 증가하고 임신 마우스의 혈중 에탄올 짧은 존재의 결과로, 더 빠르게 감소했다. 단기적 (G18-20)에서를 BECs 더욱 G5에서 검출 수준의 약 30 %로 감소했다. 이러한 연구 결과는 developm와 일치임신 한 쥐에서 에탄올에 대한 신속한 대사 관용의 이비인후과. 그림 2c는 신생아 자손이 30 ㎜ 근처를 BECs에 노출 된 것을 보여줍니다. 를 BECs 서서히 4 시간 노출 기간의 끝에서의 피크에 도달하는 이들 동물에서 일어나고 점차적으로 13 시간 4 시간 노출 패러다임의 끝 후에 기준선 수준으로 감소. 임신 댐과는 대조적으로, 초기 (P2)에 노출 된 신생아에서 측정를 BECs 사이의 차이는 신생아시기에 대 후반 (P7-P12)가 없었다. 이러한 연구 결과는 신생아 마우스는 에탄올 대사 내성을 개발하지 않았 음을 나타냅니다.
에탄올 농도의도 2. 특성화. A) 에탄올 증기 챔버 레벨 노광 paradig의 임신 및 출생 후의 단계에 걸쳐 비교적 일정하게 유지m. 이 수준을 측정하기 위해 챔버의 공기는 주위 공기로 희석하고, 고무 격벽을 통해 주사기로 회수하고, (자세한 내용은 비디오 참조) 측정기의 유입 포트로 배출 하였다. 값은 각각 임신과 출생 후의 단계에 대해 5 단계와 4 개의 노출 라운드에서 얻을 수 있었다. B) 임신 댐 (N = 5-7 댐)에 표시된 추정 임신 일 동안 서로 다른 시간 지점에서 측정 혈액 에탄올 수준. 법적 중독의 한계 (17.4 mm 또는 0.08 g / DL) 점선으로 표시됩니다. 회색 바) 댐 에탄올 B에서와 같이. C) 동일에 노출 된 시간을 표시하지만 다른 새끼에서 신생아 마우스의 경우 (N = 5-9 새끼.
도 3은 노광 패러다임 크게 중량 댐 이득이나 새끼 영향을 미치지 않았 음을 보여준다. 표 2에는 에탄올 노출은 상당히 실용적 fetu의 수에 영향을 미치지 않았 음을 보여준다SES, (단기적으로 측정) 흡수 된 태아, 태아 체중 및 태반 무게. 표 2의 수 또한 쓰레기와 강아지 사망률 당 새끼의 수는 크게 에탄올 노출에 의해 영향을받지 않았다 있음을 보여줍니다. 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하세요 이 그림의.
댐 강아지 무게에 에탄올 노출의 효과의 그림 3. 부족. 예상 임신 일의 기능 (N = 8-12)와 같은 A) 댐 체중 증가. 예상 임신 5 일의 무게는 연령의 기능 (N = 7-9)으로 노출의 첫 날. B) 강아지의 체중 증가에 측정 된 무게에 해당합니다. 양쪽 패널, 오차 막대는 심볼보다 작다. <HREF = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/51839/51839fig3highres.jpg"대상 = "_blank"는>이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 크기 (인치) | 신장 | 폭 |
| 상단 | 32 | 22 |
| 바닥 | 32 | 22 |
| 앞 | 32 | 14 |
| 백 | 32 | 14 |
| 1면 | 21.5 | 14 |
| 2면 | 21.5 | 14 |
| 문 | 18 | 10 |
표 1. 폴리 카보네이트 시트의 치수.
| 공기 | EtOH로 | |
| 7.50 ± 1.08, N = 6 | 7.33 ± 1.52, N = 6 | |
| 평균 태아 무게 (g) : ~ E18 | 1.04 ± 0.09, N = 6 | 0.82 ± 0.09, N = 6 |
| 평균 태반 무게 (g) : ~ E18 | 0.12 ± 0.003, N = 6 | 0.14 ± 0.01, N = 6 |
| 다시 흡수 된 태아의 수 : ~ E18 | 0.50 ± 0.34, N = 6 | 0.50 ± 0.50, N = 6 |
| 강아지 / 고양이 모래의 수 | 7.11 ± 0.67, N = 9 | 6.89 ± 0.42, N = 9 |
| 죽은 새끼 / 쓰레기 수 | 0.11 ± 0.11, N = 9 | 0.66 ± 0.24, N = 9 |
표 2. 사전 및 마우스 증기에 노출 패러다임의 출생 후 특성.
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Discussion
여기, 우리는 세부 사항에서 증기 흡입 챔버의 건설을위한 방법을 설명합니다. 챔버를 구축하는 데 필요한 자재와 공구는 상업 공급 업체의 숫자에서 쉽게 사용할 수 있으며, 챔버의 건설을위한 단계는 비교적 간단하다. 우리가 여기에서 설명하는 시스템은 역류 및 혼합을 방지하기 위해 모든 인라인 체크 밸브가 포함되어 있지 않습니다. 우리는 공중에 우리가 공기 만 실에 어떤 혼합 또는 에탄올의 역류가없는 것을 제안 만 실을 모든 검지 에탄올을 측정 할 수 없습니다. 단 챔버가 주기적 에탄올 증기에 대해 검사되어야한다 공기는 (그것이 기실 항상 측정기 및 / 또는 주사기에 존재하는 잔류 에탄올 증기의 검출을 피하기 위하여 종래 에탄올 챔버 테스트해야 주목해야한다). 이상적으로, 챔버는 마우스 케이지 연속적 E의 기간 동안 보관 될 수있는 동물 관리 시설에서 전용 실에 배치해야생쥐를 운반 할 필요없이 xposure 패러다임, 이에 스트레스를 감소시킨다. 공기 배출구에있는 스탠다드 룸이 패러다임에 필요한 모든 것입니다. 룸은 다른 연구자들과 공유하는 경우에는 그러나, 에탄올 냄새에 다른 동물의 노출을 최소화하기 위해 분리 칸막이와 방에 챔버를 배치 할 필요가있다. 각 챔버는 예보다 노출이 덜 노동 집약적 인 방법, 위내 위관하고, 6 표준 마우스 케이지까지 수용 할 수 있습니다.
노광 패러다임 쉽게 구체적인 실험의 요구에 따라 변형 될 수있다. 동물은 인간의 임신의 모든 삼보 격에 해당하는 기간 동안 에탄올에 노출 될 수 있습니다. 그것은 인간의 발전에 쥐 발달 동등한 고려 개발 어떤 과정을 하나의 (신경 시냅스 통합 등)에 관심이 무엇 뇌 지역에 따라 다를 수 있음을 유의해야한다. 본 연구에서, 우리는 제 트라이 정의한Mester의 상당 뇌 급성장 기간으로. 연구원은 49 시간 번역 웹 사이트를 참조하는 것이 좋습니다. 도 2b에 도시 된 결과를 바탕으로 노광 에탄올 증기 (예를 들어, ~ 3g / DL)의 낮은 수준에서 시작하여 서서히 대사 내성의 발달을 보상하기 위해 증가 될 것을 추천합니다. 프로 시저의 구현 동안, 연구자들은 밀접하게이 임신 댐보다 안정적인 수준의 결과를 결정하기 위해 서로 다른 임신 일에를 BECs을 모니터링해야합니다. 알코올 탈수소 효소의 억제제는 증기 챔버 (50) 내의 에탄올에 노출 된 마우스에서 내성의 발달을 방지하기 위해 사용되었다. 그러나, 연구 결과가 (51, 52)의 해석을 복잡하게 할 수 잠재적으로 기형 유발 효과가 좋습니다 때문에 에이전트가 임신 한 마우스에서 사용하지 않는 것이 좋습니다. 또한, 어떤 형태의 주사는 임신 댐에 추가 긴장을 일으키는 원인이됩니다,잠재적으로 실험 53 혼란 함을 주죠.
임신 댐 달리, 신생아 기 동안 증기 챔버 노출 대사 내성의 발달을 초래하지 않았다. 를 BECs는 P2와 P7-12 마우스 사이에 차이가 없었다. 피크를 BECs는 G13-14의 댐에서 발견 된 것과 유사한 및 G18-20에서 검출 된 것보다 약간 높았다. 그러나,를 BECs는 새끼의 기본으로 돌아가 더 이상했다. 임신 기간 동안 증기 챔버 에탄올 노출 에탄올 대사 신생아 자식의 용량을 변경하는 경우가 판정 될 남아있다. 그러나, 문헌에 기초하여, 그것은 약간 감소 또는 에탄올 (54, 55)을 대사하는 불변 용량 전시 에탄올 회임 기간 동안 노출 된 새끼 예상된다. 우리의 연구에서 우리는 평균 강아지의 무게에 차이가 관찰되지 않았고, 우리의 데이터는 임신의 말까지, 임산부를 BECs 거의없는 MOR의 법적 중독을 극복한다는 것을 보여2 시간 이상 전자. 이 데이터는 어머니가 크게 산후 기간 동안 알코올 노출에 영향을받지 않는 것이 좋습니다. 동물 높은 에탄올 농도에 노출 될 경우 그럼에도 불구하고,이 특히 더 탐구해야한다.
이 노출 패러다임은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 그들은이 기간 동안 수컷과 교배되므로 암컷 생쥐는 임신의 제 오일 중에 노출되지 않았다. 짧은 번식 간격을 시도 할 수있다 (예를 들면 2-3 일) 그러나 이것은 임신 여성의 수를 감소시킬 수있다. 또한, 동물 교미 플러그 점검 짧은 시간과 여성을 위해 사육 할 수 있습니다. 또 다른 한계는 주어진 챔버 내의 모든 생쥐는 에탄올 증기의 단일 농도에 노출 될 수 있다는 것이다. 또한, 에탄올 증기 챔버 노광 패러다임의 일부 측면은 댐은 단독 임신의 대부분에 걸쳐 수납되고, 노출되어 있다는 사실로, 스트레스 아르강한 에탄올 냄새에. 이는 에탄올 증기 노출 댐 및 / 또는 새끼 호흡계에 일부 변경을 유발하는 것도 가능하다. 또한, 신생아 쥐에 노출 세 번째 임신 (예를 들어, 태반 태아 장치가이 모델에 존재하지 않는) 동안의 인체 노출의 완벽한 모델이 아닙니다. 그럼에도 불구하고, 우리는이 패러다임의 장점이 그 단점보다 많다고 주장하고 FASDs의 병태 생리에 관여하는 메커니즘을 특성화 할 수있는 유용한 모델이 될 수있다.
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Disclosures
저자가 공개하는 게 없다.
Acknowledgments
R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 및 K12-GM088021는 건강의 국립 연구소에 의해 부여 지원. 저자는 기술 지원 및 박사 부부를위한 사만다 L. Blomquist 감사합니다. 비판적 원고와 비디오를 평가하는 케빈 콜드웰 도널드 자고.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polycarbonate 1/4" clear 48" x 24" | McMaster-Carr | 8574K23 | 10 |
| Foam Rubber bulb seal 3/8"w x 7/32"h | McMaster-Carr | 93085K67 | 10 ft |
| Weld-on #16 | McMaster-Carr | 7515A11 | 3 |
| Piano hinge 12" long | McMaster-Carr | 1658A11 | 2 x 1 ft |
| Hold-down toggle clamps standard | McMaster-Carr | 5126A26 | 8 |
| PEX tubing 1/2" | McMaster-Carr | 51275K88 | 10 ft |
| Barbed Tee tube fitting (Black) Pkg 10 | McMaster-Carr | 5463K608 | 1 |
| Barbed plug fitting (Black) Pkg 10 | McMaster-Carr | 5462K79 | 1 |
| Barbed Elbow tube fitting (Black) Pkg 10 | McMaster-Carr | 5463K596 | 1 |
| 3/8" Through-Wall Adapters, Tube to Threaded Pipe | McMaster-Carr | 5463K851 | 1 |
| Phillips Machine screw 4-40 | McMaster-Carr | 91772A112 | 1 |
| Machine screw hex nut 4-40 | McMaster-Carr | 90480A005 | 1 |
| Panel-mount flowmeter 2-20 | McMaster-Carr | 41945K76 | 3 |
| FLASK, FILTER 1,000 ml 6/PACK | VWR | 89001-800 | 2 |
| Precision Seal Septa | VWR | 89084-490 | 1 |
| VWR Black Rubber Stopper #8 1-hole | VWR | 59581-367 | 1 |
| TUBE TYGON R3603 3/8X9/16 50' | VWR | 89068-556 | 1 |
| TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50' | VWR | 89068-502 | 1 |
| Aerator Stone P2120 | VWR | 32573-007 | 1 |
| 3/8" T-connectors Pk of 20 | VWR | 46600-060 | 1 |
| VWR Disconnectors tapered Pk of 10 | VWR | 46600-110 | 1 |
| 3/8 Hose Barb valved in-line coupling | Colder Products Company | HFCD17612 | 1 |
| Air pump medium capacity | LMI Manufacturers | DB60L | 1 |
| Nexelate Wire Shelving 36"W X 24"D X 63"H | Global industrial | T9A990135 | 1 |
| Stem Casters Set of (4) 5" Polyurethane Wheel | Global industrial | T9A500591 | 1 |
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