Summary
Neredeyse tüm S. içeren protein mikrodiziler kullanarak cerevisiae proteom paralel protein-protein etkileşimleri, binlerce hızlı tarafsız sorgulama için incelenir. Bu yöntem, protein-küçük molekül, translasyon sonrası modifikasyon ve yüksek verimlilik Diğer tahliller için kullanılabilecektir.
Abstract
~ 4200 rekombinant maya proteinleri içeren yüksek yoğunluklu fonksiyonel bir protein mikrodizileri okuması için V5-epitop etiketi ihtiva eden bir afinite saflaştınldı maya kinaz füzyon proteini kullanılarak kinaz, protein-protein etkileşimleri için incelenir. Saflaştırılmış kinaz bir kinaz-V5 füzyon GAL uyarımlı promotör altında yapıyı içeren bir plazmid yüksek kopya protein üretimi için optimize edilmiş bir maya suşu kültürü ile elde edilir. maya,% 2 galaktoz ile endüksiyon ile, ardından 6 saat boyunca nötr bir karbon kaynağı ile kısıtlayıcı ortamda yetiştirilir. Daha sonra, kültür hasat edilir ve kinaz deneyinde kullanılmak için yüksek ölçüde saflaştırılmış protein kinaz elde etmek üzere standart afinite kromatografik teknikleri kullanılarak saflaştırılır. Saflaştırılmış kinaz deneyi için uygun bir aralığı, kinaz tamponu ile seyreltilir ve protein mikro-dizileri, protein önce mikroarray ile hibridizasyon için bloke edilir. Hibritlemeden sonra, diziler monoklonal V5 antib ile sondalandıODY kinaz-V5 proteiniyle bağlanmış proteinleri belirlemek için. Son olarak, diziler, standart bir mikrodizi tarayıcısı kullanılarak tarandı ve veriler, in vivo aşağı doğru doğrulama için protein etkileşimleri belirlenen yüksek bir güven belirlemek için alt bilişim analiz 1,2 ekstre edilir.
Introduction
Protein biyokimya ve in vivo bağlanma faaliyeti küresel analizlerini gerçekleştirmek için gerek protein-protein etkileşimlerini (PPIs) ve bütün proteomlarda 1,3-8 arasında post-translasyonel modifikasyonlar profil için yeni yöntemlerin geliştirilmesine yol açmıştır. Protein mikrodizileri antikorları 10,11 ihtiva 4-6,8,9 tam uzunlukta fonksiyonel proteinleri kullanılarak fonksiyonel bir protein mikrodizilerinin veya analitik protein mikrodizilerinin olarak imal edilir. Bunlar 12 analiz, geniş kapsamlı biyokimyasal iletmek için gereken deney koşulları çeşitli kolaylaştırmak için yüzey kimyaları çeşitli mikroskop lamları üzerine dizilmiş, proteinlerin yüksek yoğunluklu içeren tasarlanmıştır. Bu tür diğerleri 13 arasında afinite eki için His-etiketli proteinler ve glutatyon takmak için nikel şelatlı slaytlar olarak lizin veya afinite eki yöntemleri ile kimyasal bağlanması için nitroselüloz ve aldehit yüzey kimyaları. protein-protein etkileşimleri tespit etmek için fonksiyonel protein mikrodizilerinin kullanımı yüksek kaliteli, fonksiyonel bir protein kitaplığına 14 erişim gerektirir. S. cerevisiae yüksek verimli kromatografik saflaştırma teknikleri protein takılı yapılar yüksek kopya afinitesi eşleştirme yoluyla bu tür bir kütüphane üretilmesi için müsait olan. Maya genomunun büyük bir çoğunluğu dizilenmiştir ve neredeyse tüm proteom saflaştırma için yüksek kopya plazmid eksprese edilebilir ve biyokimyasal 12 analiz eder. Proteinler elde edilir ve 384 oyuklu formatta dizilmiş sonra, bunlar, hızlı paralel çok parametre biyokimyasal analizler ve biyoinformatik sorgulama 8,14-16 sağlayan bir mikroskop lamı üzerine basılır. Protein mikrodizileri diğer birçok uygulamalar arasında proteinler, lipidler, küçük moleküller, ve nükleik asitler ile enzimatik deney ve etkileşimleri için kullanılmıştır. proteomun yüzeyi üzerinde proteinlerin erişilebilirlikdiziler de dahil olmak üzere, analitik tespiti farklı immün afinite onları müsait hale plazmon rezonansı, floresans ve pek çok başka teknik yüzeyler. Ayrıca, in vivo yapmak zor olabilir deneysel koşul ince kontrol sağlar.
Bu protokolün amacı, protein-protein etkileşimleri tespit etmek için fonksiyonel protein mikrodizilerinin uygun kullanımını göstermektir. Bu uygulama, ilgi konusu bir yüksek ölçüde saflaştırılmış analiti (protein) kullanılarak protein bağlanma faaliyetleri, yüksek verimli, paralel biyokimyasal analiz sağlar. Bir C-terminali (ucu karboksi) ilgi V5-füzyon yem proteini, protein saflaştırma için optimize edilmiş bir maya suşunda bir yüksek kopya plazmid elde edilir etiketli. C-terminali etiketleme tam boyda bir protein çevrildi sağlar. Bu çalışmada kullanılan protein His6X etiketi ile nikel afinite reçinesi kullanılarak saflaştırılır Tda1-V5 füzyon protein kinaz vardır. Tda1-V5 füzyon konstrüksiyont tahlilinde kullanım için en fazla zenginleştirilmiş fraksiyonu elüt edilmesi için bir imidazol gradyanı kullanılarak, seri elüsyon yoluyla saflaştırılır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Probe Hazırlık
- Kültür ve aşağıdaki gibi diğer proteinler ile etkileşimini incelemek için kullanılmıştır V5 füzyon kinaz probları saflaştırılması:
- Taze çizgili maya suşu Y258 kullanın (MATa pep4-3, his4-580, ura3-53, leu2-3,112) (GATEWAY vektör pYES-DEST52 ifade edilen) V5-füzyon proteini içeren. Mikrodiziler üzerinde prob olarak izole edilmiş proteini kullanın. Sentetik tam-urasil (Sc-Ura) /% 2 dekstroz / Agar maya Plate ve dondurulmuş kültürünün (-80 ° C gliserol stoku) 3 gün boyunca 30 ° C'de büyütülmüştür.
- Tek bir koloniden başlatıcı kültürleri (5.20 mi) aşılamak ve 30 ° C 'de platformun (220-250 rpm) veya tekerlek çalkalama SC-Ura /% 2 dekstroz içinde bir gece boyunca büyür.
- Ertesi sabah, bir nihai OD 0.1 600 yeterli starter kültür ile Sc-Ura /% 2 rafinoz kültürünün 400 ml aşılamak.
- 0.6 600 V5-kinaz fu galaktoz indüksiyon ardından OD inokulantlar büyütünyon şekilde galaktoz nihai konsantrasyonu,% 2, 3 kat endüksiyon ortamı seyreltilmesi için yeterli eklenerek,% 6 galaktoz ile takviye edilmiş 3x Maya Özü / Pepton (YEP) içindeki bir çözeltisi ilave edilerek ifade yapısı.
- Bir çalkalama platformu üzerinde 6 saat boyunca 30 ° C'de hücre neden. Uygun havalandırma sağlamak için 2 L Erlenmeyer şişesi kullanın.
- 4 ° C'de 5 dakika boyunca 1000 x g'de hücre süspansiyonu 400 ml eğirme bir JA-10 (ya da eşdeğeri) bir rotor kullanılarak hasat hücreleri.
- Buz, 50 ml soğuk PBS tamponu ve 50 ml konik tüp transferi ile bir kez hücreler yıkanır. Liziz tüpleri kapaklı ek ml 2 liziz ve transferi için kullanılan (deterjanlar veya diğer katkı maddeleri hariç), buz gibi soğuk PBS tamponu içinde yeniden pelet yıkayın.
- Bir pelet ve bir pipet uzaklıkta tamponu, 4 ° C'de 1 dakika boyunca 20,000 xg'de hücreleri dönerler.
- Buz üzerinde tüpler yerleştirin ve parçalama adımla devam edin.
- Lyse hücreleri (250-350 ul pelet) 0 ile1: 1 .5 mm zirkonyum boncukları hücre peleti, taneler, ve fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 1 hacim 4 ° C 'de 2 dakika aralıklarla tampon ve vorteks ajitasyon platformunu 3 kez kullanılarak karışımın lizis.
- 4 ° C'de 10 dakika boyunca masa üstü mikrofüj içinde 20,000 x g'de santrifüjleyin lizat.
- Pipet polikarbonat yüksek hızlı santrifüj tüpüne süpernatan ve 4 ° C'de 150,000 x g'de 30 dakika boyunca ulracentrufugation berrak hale getirilmelidir.
- Histidin yakalamak için 4 ° C'de 2 saat süreyle nutator önceden yıkanmış Ni2 + afinite reçinesi (~ 100 ul) ihtiva eden bir tüpe açıklık lizat aktarın ve inkübe (His) 6X V5-füzyon proteinini etiketli.
- Yıkama Tamponu ile 4 ° C 'de 10 dakika süre ile, reçineyi üç defa yıkanır. 4 ° C'de 1000 x g'de 5 dakika boyunca masa üstü bir santrifüj kullanılarak reçine pelet ve süpernatan aspire. Her yıkama için taze yıkama tamponu ekleyin ve yıkama esnasında tüpü ajitasyon için Nutator döndürür.
- Yıkama ste sonraps tamamlandı, elüsyon için yeni bir G-25 kolonuna yıkanır reçineyi uygulayın.
- 9 fraksiyonların toplam 50 mm'lik artışlarla 500 mM imidazol, 100 mM imidazol ile başlayan aşamalı bir şekilde elüsyon tamponu 25 ul uygulanır.
- Sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel kullanılarak toplanan fraksiyonları deneyi (SDS-PAGE) ve deneyde kullanım için en fazla zenginleştirilmiş bölüm (ler) i tespit ve -80 ° C 'de% 30 ve saklamak için gliserol ekleyin Coomassie boyaması, kullanılıncaya kadar deneyi.
2. Diziler Probing
NOT: tahlili başlamadan önce antikor çözeltisi hazırlamak için bu bölümün aşamasını 2.6 bakınız.
- Etkileşimlerini tespit etmek için, numune tamponu içinde 260 ng / ml'ye kadar V5-florofor konjuge antikor (örneğin, AlexaFluor 647) sulandırılır ve çalkalama ile iyice karıştırın.
NOT: kullanımı ve nutat üzerine tüp yerleştirmek için 30 dakika kala bu antikor çözüm hazırlayında tekerlek tam karıştırma ve antikor homojen bir süspansiyon sağlamak. - 5-500 ug / ml'lik bir konsantrasyon aralığı üzerinde V5-füzyon proteini probu ile seyreltilir.
Not: Prob tamponu kullanılarak, her bir protein-protein etkileşimi deneyi için optimize edilmiştir. Optimizasyon tampon soruşturma daha sondalar ekleyerek içerir. Tipik olarak 10 ug / ml başlangıç noktası olarak kullanılır ve sinyal gücüne göre uygun şekilde ayarlanır. - Dondurucu (-20 ° C), elde edilen protein mikrodizileri çıkarın ve kullanımdan hemen önce buzdolabında 4 ° C'ye getir.
- Sızmasını önlemek için parafilm ile üst protein micorarrays içeren slayt sahibine doğrudan engelleme tampon ekleyin ve kapsamaktadır. 4 ° C 'de bir sahne üzerinde 50 rpm'de çalkalanarak 1 saat boyunca bloke edici tampon içinde dizileri bloke eder.
- Bloke edildikten sonra, 4 ° C'ye soğutulmuş, nemlendirilmiş bir odacıkta diziler transferi, doğrudan dizi yüzeye seyreltilmiş prob 90 ul ekle. Arr Yerleşimi1.5 saat boyunca 4 ° C'de nemlendirilmiş bir haznede lekelenmiştir yükseltilmiş bir kaldırma kayma ays ve statik inkübe (bir çalkalama).
- Üç 50 ml konik tüpler prob tamponunda 1 dakika her diziler 3 kere yıkayın. Tamamen slayt zarf yeterli önceden soğutulmuş prob tampon içeren konik tüplere slayt ekleyin. Kaldırıcı kayma yavaşça protein mikroarray (bu dizi yüzeyine zarar görmesine neden olabilir gibi onu zorlamayın) kapalı slayt izin verin.
- Hemen önce olduğu gibi yükseltilmiş kaldırıcı kayma yıkama (adım 2.5) ve bindirme tamamladıktan sonra diziye doğrudan antikor çözümü uygulayın. Nemlendirilmiş bir odada 4 ° C'de 30 dakika boyunca inkübe edin dizileri.
- Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca masa üstü santrifüjü içinde 800 xg'de 50 ml konik bir tüp içinde, aynı yıkama (prob tampon maddesi içinde 3 kez 1 dakika) daha önce olduğu gibi adımı, ve spin gerçekleştirin. 647 nm dizi taramadan önce 30 dakika süreyle karanlıkta bir slayt tutucu dizileri Hava kurutun.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Protein-protein etkileşimi aktivitesi Tda1-V5 protein kinaz füzyon yaklaşık 4,200 özgü S. ihtiva eden bir maya fonksiyonel bir protein mikrodizi karşı bir yem protein olarak inşa değerlendirmek için standart bir çipli okuyucu kullanılarak gözlenmiştir cerevisiae GST-füzyon proteinleri. GenePix yazılımı ile ayrıntılı sorgulama değişen şiddetlerde olayları bağlayıcı bir sürü gösterdi. afinite hedefine (V5-kinaz) bağlı bir monoklonal V5-Florofor konjuge antikor türetilen sinyalin kademeli yoğunluğu elde getirilmişti. PROCAT puanlama algoritması 2 (her bir protein dizisinde iki kez tespit edilir), iki kopya halinde deneye tabi proteinlerin her biri için iki ayrı protein mikrodizilerinin arasında, protein-protein etkileşimlerini tespit etmek için kullanıldı, daha sonra bir eşik değeri kesme gözlenen etkileşimi puanlama için belirlenmiştir.
Biri 4 teknik çoğaltır (n = 4) int belirlemek için kullanabileceğiniz elde iki dizi karşılaştırarakkorelasyon aracılığıyla er-deney varyasyonu diziler üzerinde her protein iki noktalar (R2). 9, protein-protein etkileşimleri, toplam Tda1-V5 yem protein ve eşsiz protein kinaz etkileşimleri 1 belirlenmesi için, önceden tanımlanmış bir eşik kullanılarak mikrodizi üzerindeki proteinler arasında tespit edilmiştir. Dahası, aynı proteinlerin, yanlış pozitif katkıda bulunabilir yüzey eserler değerlendirmek için bir kontrol olarak dizileri boyunca farklı pozisyonlarda tespit edilir. Farklı kinaz-V5 füzyon proteinlerinin çoklu birleşme profillerin karşılaştırılması in vivo test edilmesi için kinaz spesifik protein-protein etkileşimleri tanımlanmasını sağlar.
Bu deneyde Tda1-V5 bağlanma aktivitesi test edilmiş ve test edilen diğer kinazlara göre p-değer ile sıralanmış göre çok anlamlı PPIs tespit edilmiştir. Özellikle ilgi çekici olan önceki bir geçme s Tda1 bir fosforile edilmiş bir hedef olarak tanımlanmıştır Rim11 olduğutudy 9. Hedefleri tespit edildikten sonra, bunlar, in vivo 1 'de biyokimyasal ve fonksiyonel aktivite açısından test edilebilir.
Şekil 1:. ~ 4200 tam boy GST-füzyon proteini ile kopya halinde tespit boş vektör kontrol ile karşılaştırıldığında Tda1-V5 maya proteini mikrodizileri kontrol veya Tda1-V5 probları ile inkübe edildi. Ankastre paneli her iki dizide de aynı bölgeyi karşılaştırır. Protein-protein etkileşimi Rim11 ve Tda1-V5 ile (mavi kutular) tespit edilmiştir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Protokol başlangıçta in vivo 1'de yeni kinaz etkileşim ağlarının tanımlanmasında elde edilen maya protein kinazların farklı ve ilgili ailelerdeki bağlanma aktivitesini karşılaştırmak için 85 benzersiz bir maya protein kinaz-V5 füzyon proteinleri kullanılarak gerçekleştirildi kullanarak verilmiştir. Gelişmekte olan bir proteomik profilleme teknolojisi olarak, Yüksek Çıkan (SDP) peptid kütüphaneleri ve ökaryotik ve prokaryotik model organizmaların 8,17 dayanmıştır protein mikrodiziler kullanarak proteomların tarama geliştirilmesi; Daha sonra, bu deney, bir platform gibi bitki ve insan 5,7 daha yüksek ökaryotlardaki uygulanmıştır. Şu an piyasada mevcut maya protein dizisi var. Ancak, dizi cDNA koleksiyonları birden fazla kaynak temin edilebilir doğrulanmış
Teknik, güçlü olmasına rağmen, akılda tutulması gereken bir ihtar böylece sonuç yanlış pozitif olacak, tahlil in vitro yapıldığını ve. Bu nedenle, optimizing tahlil durumu ve stratejik filtreleme düzeni anlamlı verileri almak için tavsiye edilir. Yeni nesil proteini mikrodizi teknolojileri A da dahil olmak üzere bir canlılar sayıda karşı biyokimyasal analiz için yüksek ölçüde saflaştırılmış, fonksiyonel proteinleri çok daha fazla sayıda ihtiva thaliana, S. cerevisiae ve Homo Sapien.
Yeni protein mikrodizileri içlerine mühendislik var gelişmişlik düzeyi yapılabilir biyokimyasal analizlerin geniş bir çeşitlilik sağlıyor. Neredeyse tüm proteom klonlanmış ve S. saflaştırılmış edilmiştir cerevisiae proteinlerinin 14 uygun post-translasyonel modifikasyon sağlamak için bir C-terminal levhası 'kütüphane kullanılarak. Ayrıca, hızlı paralel analizleri, protein mikrodizileri kullanılarak protein-protein etkileşimi ve post-translasyonel modifikasyon profil için tarafsız bir yaklaşım sağlar sundu.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Petri Dishes | VWR | NC-10747 | or comparable |
| Bacto yeast extract | Difco | 0217-17 | |
| Bacto peptone | Difco | 0118-17 | |
| Bacto agar | Difco | 0140-01 | |
| Dextrose | Sigma | D9434 | |
| Raffinose | Sigma | R0514 | |
| Galactose | Sigma | G0750 | |
| Sc-Ura drop out media | MP Bio | 114410622 | |
| Small Culture tubes | VWR/Fisher | ||
| Large Erlenmeyer Flask | VWR/Fisher | ||
| Centrifuge JA-10 rotor | |||
| Centrifuge tubes (500 ml) | |||
| Falcon tube (50 ml) | VWR/Fisher | 21008-951 | |
| PBS Tablets | Sigma | P4417 | |
| FastPrep Tubes (2 ml screw cap tube) | |||
| FastPrep Machine | MP Biomedicals | 116004500 | |
| Zircon Beads | BioSpec | 11079105 | |
| Triton X100 | Sigma | P4417 | |
| DTT | Sigma | D9779 | |
| MgCl2 | Sigma | M8266 | |
| NaCl | Sigma | S3014 | |
| Imidazole (pH = 7.4) | Sigma | I5513 | |
| PMSF | Sigma | 93482 | |
| Complete Inhibitor Cocktail (EDTA Free) | Roche | 11873580001 | |
| Phosphatase inhibitor cocktail 1 | sigma | P2850 | |
| BSA | Sigma | A2153 | |
| Tween-20 | Sigma | P1379 | |
| ATP | Sigma | A1852 | |
| Shaking Incubator (30 °C) | |||
| Nickel Affinity Resin | Life Technologies | R901-01 | |
| G25 column | GE life sciences | 27-5325-01 | |
| Nutator | VWR/Fisher | ||
| SDS-PAGE Gel (NuPage) | Life Technologies | ||
| Coomassie Blue Stain | Life Technologies | ||
| Monoclonal V5 Antibody | Life Technologies | R960-25 | |
| Alexa647 Tagged monoclonal V5 Antibody | Life Technologies | 451098 | |
| Protein Microarrays Kit | Life Technologies | PAH0525013 | |
| Genepix Scanner | Molecular Devices | ||
| Lifter Slips | Thomas Scientific | http://www.thomassci.com/Supplies/Microscope-Cover-Glass/_/LIFTER-SLIPS/ | |
| Lysis Buffer: 0.1% Triton X-100, 0.5 mM DTT, 2 mM MgCl2, 500 mM NaCl, 50 mM imidazole (pH 7.4), Complete protease inhibitor cocktail – EDTA-free, Phosphatase inhibitor Cocktail 1, 1 mM PMSF (add just prior to use) |
Add the reagents to 1x PBS (0.01 M phosphate buffer, 0.0027 M potassium chloride, 0.137 M sodium chloride; pH 7.4) to obtain the desired volume of lysis solution | ||
| Blocking Buffer: 1% bovine serum albumin (BSA), 0.1% Tween-20 | Add the reagents to 1x PBS to obtain the desired volume of blocking buffer | ||
| Probe Buffer: 2 mM MgCl2, 0.5 mM DTT, 0.05% Triton X-100, 50 mM NaCl, 500 μM ATP (for kinases), 1% BSA | Add the reagent to 1x PBS to obtain desired volume of probe buffer | ||
| Wash Buffer: 0.1% Triton X-100, 500 mM NaCl, 0.5 mM DTT, 50 mM imidazole (pH 7.4),2 mM MgCl2 | Add the reagent to 1x PBS to obtain desired volume of probe buffer | ||
| Elution Buffer: 0.1% Triton X-100, 0.5 mM DTT, 2 mM MgCl2, 500 mM NaCl, 50 – 500 mM imidazole (pH 7.4), Complete protease inhibitor cocktail – EDTA-free, Phosphatase inhibitor Cocktail 1, 1 mM PMSF (add just prior to use) | Before you begin, it is important to note the concentration gradient of imidazole (50 – 500 mM) and to create separate tubes for each concentration (it is advisable to create the interval using 50 mM increments). Add the reagent to 1x PBS to obtain desired volume of probe buffer | ||
| 3x YEP +6% galactose: Dissolve 30 g of yeast extract and 60 g of peptone in 700 ml of H2O, and autoclave. Add 300 ml of filter sterilized 20% galactose (wt/vol) | Galactose should not be autoclaved |
References
- Fasolo, J., et al. Diverse protein kinase interactions identified by protein microarrays reveal novel connections between cellular processes. Genes. 25, 767-778 (2011).
- Zhu, X., Gerstein, M., Snyder, M. ProCAT: a data analysis approach for protein microarrays. Genome biology. 7, R110 (2006).
- Breitkreutz, A., et al. A global protein kinase and phosphatase interaction network in yeast. Science. 328, 1043-1046 (2010).
- Gavin, A. C., et al. Functional organization of the yeast proteome by systematic analysis of protein complexes. Nature. 415, 141-147 (2002).
- Jeong, J. S., et al. Rapid identification of monospecific monoclonal antibodies using a human proteome microarray. Mol Cell Proteomics. 11 (6), (2012).
- Krogan, N. J., et al. Global landscape of protein complexes in the yeast Saccharomyces cerevisiae. Nature. 440, 637-643 (2006).
- Popescu, S. C., et al. Differential binding of calmodulin-related proteins to their targets revealed through high-density Arabidopsis protein microarrays. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 4730-4735 (2007).
- Zhu, H., et al. Global analysis of protein activities using proteome chips. Science. 293, 2101-2105 (2001).
- Ptacek, J., et al. Global analysis of protein phosphorylation in yeast. Nature. 438, 679-684 (2005).
- Haab, B. B. Antibody arrays in cancer research. Molecular & cellular proteomics. Mol Cell Proteomics. 4 (4), 377-383 (2005).
- Kopf, E., Zharhary, D. Antibody arrays--an emerging tool in cancer proteomics. The international journal of biochemistry & cell biology. 39, 1305-1317 (2007).
- Berrade, L., Garcia, A. E., Camarero, J. A. Protein microarrays: novel developments and applications. Pharmaceutical research. 28, 1480-1499 (2011).
- Balboni, I., Limb, C., Tenenbaum, J. D., Utz, P. J. Evaluation of microarray surfaces and arraying parameters for autoantibody profiling. Proteomics. 8, 3443-3449 (2008).
- Gelperin, D. M., et al. Biochemical and genetic analysis of the yeast proteome with a movable ORF collection. Genes & development. 19, 2816-2826 (2005).
- Fasolo, J., Snyder, M. Protein microarrays. Methods Mol. Biol. 548, 209-222 (2009).
- Im, H., Snyder, M., et al. Preparation of recombinant protein spotted arrays for proteome-wide identification of kinase targets. Current protocols in protein science. Coligan, J. E. 27, Unit 27 24 (2013).
- MacBeath, G., Schreiber, S. L. Printing proteins as microarrays for high-throughput function determination. Science. 289, 1760-1763 (2000).
