Summary
En procedure til at undersøge, hvorvidt en alkohol associeret miljømæssig sammenhæng at udløse fornyelse af alkohol-søger adfærd hos rotter er beskrevet.
Abstract
Miljømæssige sammenhænge, hvor misbrugsstoffer forbruges kan udløse trang, et subjektivt Pavlovsk-betinget reaktion, der kan lette narkotika-søger adfærd og hurtig tilbagefald i afholdende stofbrugere. Vi har udviklet en procedure for at undersøge de adfærdsmæssige og neurale processer, der medierer effekten af kontekst på alkohol-søger adfærd hos rotter. Efter akklimatisering til smagen og farmakologiske virkninger 15% ethanol i hjemmet bur, mandlige Lang-Evans rotter modtager pavlovsk uddannelse forskelsbehandling (PDT) i conditioning kamre. I hver daglig (man-fre) PDT-session, 16 forsøg hver af to forskellige 10 sek auditive konditionerede stimuli forekomme. Under en stimulus CS + 0,2 ml 15% ethanol, leveres i en fluid port til oral indtagelse. Den anden stimulus, CS-, ikke parret med ethanol. På tværs af sessioner, poster i væsken port under CS + stige, mens poster i løbet af CS stabilisere sig på et lavere niveau, hvilket indikerer, at en Predictive association mellem CS + og ethanol er erhvervet. Under PDT hvert kammer er udstyret med en specifik konfiguration af visuelle, olfaktoriske og taktile kontekstuelle stimuli. Efter PDT, er udslettelse træning udført på samme kammer, er nu udstyret med en anden konfiguration af kontekstuelle stimuli. CS + og CS præsenteres som før, men ethanol tilbageholdes, hvilket medfører en gradvis nedgang i poster port under CS +. Ved test, der anbringes rotterne tilbage i PDT kontekst og præsenteres med CS + og CS som før, men uden ethanol. Denne manipulation udløser en robust og selektiv stigning i antallet af havnefaciliteter indtastninger foretaget i løbet af alkohol prædiktiv CS +, med ingen ændring i at reagere under CS. Denne effekt, der omtales som kontekst-induceret fornyelse, illustrerer den kraftfulde kapacitet sammenhænge forbundet med alkoholforbrug til at stimulere alkohol-søgende adfærd som reaktion på Pavlovs alkohol signaler.
Introduction
Resterende ædru er en betydelig udfordring af personer, der lider af alkoholmisbrug lidelser står over for. Afholdenhed er en tid med sårbarhed over for adfærdsmæssige, psykologiske og fysiologiske virkninger af miljømæssige stimuli, som rutinemæssigt ledsager alkohol, som kan gennem Pavlov konditionering, bliver forbundet med beruselse 1,2. Udsættelse for alkohol forudsigende tidskoder kan fremkalde betingede reaktioner såsom alkohol trang, som kan reklamere for alkohol-søger adfærd, der letter tilbagefald 3,4.
De stereotype sekvenser af adfærd, der fører til alkoholforbrug kan medføre visse typer af stimuli, der skal rutinemæssigt opleves umiddelbart før de farmakologiske virkninger af alkohol indtag. For eksempel syn, lugt og smag af alkohol er sensoriske egenskaber af alkohol, som pålideligt forud forgiftning. Ud over sådanne signaler, som er benævnt »diskret« eller »Proximal 'signaler, miljømæssige sammenhænge, hvor lægemidler anvendes regelmæssigt kan også provokere begær 5,6. Eksponering for fysiske lokaliteter, hvor narkotika tidligere har været anvendt, kan derfor være en kritisk udløser for tilbagefald 7.
Dyremodeller er blevet udviklet til at studere de neurale mekanismer, der medierer effekten af narkotika tilknyttede kontekster på narkotika-søger adfærd 8-13. Den her beskrevne procedure giver mulighed for undersøgelse af, hvordan sammenhænge forbundet med alkoholforbrug kan modulere alkohol-søger adfærd, der frembringes af en diskret, alkohol prædiktiv pavlovsk stikord.
Pavlov træning diskrimination gennemføres på en konkret miljømæssig sammenhæng, hvor rotter er uddannet til at skelne adfærdsmæssigt mellem to auditive konditionerede stimuli, en CS +, der er parret med alkohol og en CS, der ikke er. Extinction sessioner udføres derefter i en anden sammenhæng, hvor der reagerer på den CS+ Mindskes som følge af alkohol tilbageholdes. Efterfølgende reeksponering til alkohol er forbundet, Pavlov træning sammenhæng udløser en selektiv stigning i alkohol-søgende adfærd fremkaldt af CS +, med ingen ændring i at reagere på CS. Dette resultat, som vi konsekvent har gentaget 9,14-16 strækker fund fra instrumentale condition procedurer, hvor narkotika sammenhænge har vist sig at fremme fornyelse af operant responser associeret med drug delivery 10,13.
Protocol
Alle procedurer er godkendt af Animal Research etiske komité på Concordia University og er enig med henstillingerne fra den canadiske Rådet om Animal Care.
1. Dyr
- Opnå mandlige Lang-Evans rotter (220 - 240 g ved ankomst).
- Oprethold rotter i en temperatur (21 ° C) og fugtighed (44%) kontrolleret dyrs pleje facilitet, på en 12 timers lys-mørke-cyklus med lys på kl 7:00.
- Pair-house rotter ved ankomsten. Efter 3 dage, hus rotterne enkeltvis i plast Skotøjsæske bure med beta-chip sengetøj, nylon knogle, og fri adgang til standard rottefoder og vand. Brug bur låg, der har dobbelt øskner for at muliggøre den efterfølgende placering af en anden flaske, foruden vandflaske. BEMÆRK: Rotter kan være individuelt opstaldet, så snart de ankommer til dyrs pleje facilitet.
- Begynd at håndtere rotter dagligt. BEMÆRK: Som en guide, en uge håndtering er normalt tilstrækkeligt at akklimatisere dem til at være picked op og håndteres af forsøgslederen.
2. Intermitterende Ethanol Adgang i hjemburet
BEMÆRK: Conduct intermitterende ethanol adgang i hjemmet buret for at sikre, at rotterne vil drikke fysiologisk relevante mængder ethanol før adfærdsmæssige uddannelse fase af eksperimentet begynder 17-19. Indlede denne procedure under den lette fase, selv om det kunne blive indledt på et hvilket som helst tidspunkt i løbet af lys eller mørke cyklus.
- Forbered to flasker for hver rotte.
- Brug en 100 ml plast gradueret cylinder som ethanol flaske og en 473 ml standard vandflaske. Brug en forholdsvis lille kapacitet ethanol flaske, fyldt næsten til maksimal lydstyrke kapacitet, for at minimere tab af ethanol som følge af lækage og fordampning.
- Fyld en flaske med 15% ethanol, fremstillet ved fortynding af 95% ethanol i vand fra hanen. BEMÆRK: Andre ethanolkoncentrationer, såsom 10% eller 20%, kan anvendes i stedet for 15% ethanol.
- Fill den anden flaske med vand fra hanen.
- Sæt en gummiprop, med en sipper rør, der indeholder et kugleleje for at minimere lækage i hver flaske.
- Opsæt to kontrolgrupper bure, behandles på samme måde de hjem bure med den undtagelse, at de kontrolforanstaltninger bure ikke indeholder rotter eller sengetøj.
- Forbered ethanol og vand flasker til de kontrolforanstaltninger bure som specificeret i trin 2.1.1 - 2.1.4.
- Brug de foranstaltninger, der er opnået fra de kontrolforanstaltninger bure for at kontrollere for spild og / eller fordampning, der kan opstå i løbet af ethanol adgang møde (som beskrevet i trin 2.8.1 - 2.8.2).
- Alle ethanol og vandflasker vejes. Optag alle vægte.
- Alle rotterne afvejes. Optag alle vægte.
- Placer ethanol flasken og vand flaske på hvert hjem bur og styre bur på samme tid. Lad begge flasker på bure til 24 timer.
- Ved afslutningen af den 24 timers periode, fjernes begge flasker frabure på samme tid.
- Alle ethanol og vandflasker vejes. Optag alle vægte.
- For at bestemme, hvor meget ethanol og vand blev forbrugt i løbet af 24 timers perioden, trækkes vægten af hver flaske, når den blev fjernet fra hjemburet fra vægten af flasken, når den blev placeret på hjemburet 24 timer tidligere for hver rotte.
- Gør det samme for de to kontrolgrupper bure, og derefter beregne den gennemsnitlige mængde af spild for hver væske.
- Træk den gennemsnitlige mængde ethanol og vandspild, henholdsvis fra de tilsvarende ethanol og vandforbrug foranstaltninger for hver rotte.
- Brug disse spild kontrolleret forskel foranstaltninger til at beregne ethanol forbrug ig / kg, forbrug af vand og ethanol præference.
- For at beregne ethanol forbrug (g / kg), først konvertere vægt (g) ethanolopløsning forbrugt i volumen (ml), baseret på tætheden af den samlede opløsning (ethanol + vand komponenter), ifølgeformlen Volumen (ml) = Vægt (g) / Densitet (g / ml). BEMÆRK: opløsningens densitet vil variere som en funktion af ethanolkoncentration.
- Dernæst multipliceres mængden (ml) ethanol opløsning forbrugt af densitet (g / ml) ethanol skaleret til konkrete procentdel løsning, der bruges til opnåelse af vægt (g) ethanol forbruges.
- Opdel vægt (g) ethanol forbruges af rotte (kg) til opnåelse af g / kg foranstaltning ethanol forbrug.
- For at beregne ethanol præference, udtrykker ethanol indtagelse (ml) som en procentdel af den samlede væske (ethanol + vand, ml) indtag.
- Retur vandflasken kun tilbage til rottens hjem bur. For de næste 24 timer, skal du give rotterne adgang til vand, men ikke ethanol. I stedet for en ethanol flaske, placere en forhånds-vejet anden vandflaske på hjemmet bur.
- Ved afslutningen af den 24 timers periode, fjernes begge vandflasker fra bur på samme tid.
- Begge sæt vandflasker afvejes. Optag alle weights.
- Fratræk vægten af hver flaske, da det blev fjernet fra hjemmet bur fra vægten af flasken, da det blev anbragt på hjemmet bur 24 timer tidligere, trække ud den gennemsnitlige spild foranstaltning stammer fra kontrol bure som beskrevet i trin 2.8.1 - 2.8.2.
- Brug disse spild-kontrollerede forskel foranstaltninger for at beregne forbruget af vand.
- Begynd cyklen igen ved at tilbyde både ethanol og vandflasker til rotter, som beskrevet i trin 2.1 gennem 2.14.
- Gentag denne cyklus for flere (ca. 12) sessioner til at fremkalde høje og stabile niveauer af ethanol forbrug. Se figur 1 for repræsentative resultater ethanol forbrug (g / kg) i hjemburet.
- Skiftevis den rumlige position af ethanol og vand flaske på buret låget tværs sessioner at forhindre udviklingen af en præference side.
- Lav en frisk ethanol opløsning en gang om ugen for at sikre nøjagtig og stabil ethanolkoncentration tværssessioner. Minimere virkningerne af fordampning af ethanol over længere perioder ved hjælp af denne fremgangsmåde.
3. Apparatur
- Hus hver konditioneringskammeret inde i et ventileret, lyddæmpende aflukke.
- Konstruere hver konditioneringskammeret af en rustfri stål metalstang sal, en klar polykarbonat loft, klar polykarbonat bagvæg og hoveddør, og aluminium metalpanelet sidevæggene.
- Installer en fluidport centralt nær bunden af højre sidevæg af metal. Udstyre indgangen til fluidport med en infrarød fotocelle til at detektere poster i porten.
- Slut polyethylenrør fra bagsiden af fluidporten til en 20 ml sprøjte indeholdende ethanol under anvendelse af en stump spids nål. Placer sprøjten i en sprøjtepumpe placeret uden for lyddæmpende aflukke. For Pavlovs uddannelse diskrimination sessioner, indlæse ethanol i sprøjten før placere det ind i pumpen. Prime slangen By manuelt fremrykkende pumpen, og derefter tørre væk overskydende ethanol fra væsken havn.
- På venstre sidevæg, installere en hvid houselight centralt nær loftet af kammeret.
- Installer en klikkertræning (2 Hz cyklus) og en hvid støj generator med højtaler i øverste venstre hjørne af den venstre sidevæg.
- Udstyre hver konditioneringskammeret med en specifik konfiguration af visuelle, olfaktoriske og taktile stimuli til at skabe en karakteristisk sammenhæng.
- Brug to forskellige sammenhænge, der er udpeget kontekst 1 og kontekst 2. Konfigurer halvdelen af conditioning kamre som kontekst 1 og den anden halvdel som Context 2.
- Sådan opretter Context 1, indsættes sorte kartonfyldet over loftet og front og bagvægge af kammeret, spray citron lugt (10% v / v, lavet ved at fortynde citronolie i postevand) i en petriskål og placere den i midten af metalaffald bakke under gulvet af kammeret, og indsætte en klar polykarbonat gulv panel over metal nitterod sal. Linje spildbakken med absorberende papir håndklæde eller bænk liner.
- At skabe Kontekst 2, forlader loftet og forreste og bageste vægge af kammeret afdækket, så de er klar, spray mandel lugt (10% v / v, lavet ved at fortynde benzaldehyd i postevand) i en petriskål og placere det centralt i en metalaffald bakke under gulvet af kammeret, og indsætte en perforeret metal gulv panel over metalstangen gulvet. Linje spildbakken med absorberende papir håndklæde eller bænk liner.
4. Tilvænning
Vænne rotter til den adfærdsmæssige træning værelse og hver af de to kontekster inden conditioning kamre. Til denne fase af forsøget, må du ikke lægge ethanol i de 20 ml sprøjter.
- Vænne rotter til at blive transporteret fra dyret pleje facilitet til den adfærdsmæssige uddannelse rum i laboratoriet i to korte tilvænnings- sessioner.
- I den første session, indlæse rotterne jegn deres hjem bure ned på en vogn med hjul i dyrets pleje facilitet, og transportere dem til adfærdsmæssige uddannelse rum i laboratoriet. Belyse rummet lys, tænde fans i hvert lyddæmpende aflukke, forlade rummet, luk døren, og lad rotterne tilpasse sig dette nye miljø i 20 minutter, mens de resterende i deres bure på vognen. Ved afslutningen af denne 20 minutters periode, returnere rotter plejefaciliteten.
- I den anden session, bringe rotterne til den adfærdsmæssige uddannelse rum i laboratoriet. Som før, lad lys og kontormiljøet fans på i rummet. Bliv i rummet, med døren lukket for at minimere distraktioner, og håndtere og vejer hver rotte i adfærdsmæssige træning værelse. Optag vægtene, og derefter vende tilbage rotterne til dyret pleje facilitet.
- Vænne rotter til conditioning kamre i to korte tilvænnings- sessioner.
- Transport rotterne til den adfærdsmæssige kursuslokale, registrerer hver rotte vægt,og indlæse hver rotte i sin udpegede konditioneringskammeret.
- I den første tilvænning session sat op halvdelen af kamrene som kontekst 1 og resten som Context 2.
- I den anden tilvænning session sat op hvert kammer med den kontekst, der ikke blev anvendt i det foregående møde.
- Gennemføre tilvænnings- sessioner i en opvejet måde, således at halvdelen af rotterne først udsat for Context 1, efterfulgt af Context 2, og den anden halvdel er først udsat for Context 2, efterfulgt af Context 1. Ideelt set gennemføre både tilvænnings- sessioner i samme dag, selv om de kunne opdeles i to dage, hvis det er nødvendigt.
- For tilvænnings- sessioner, skal du bruge et computerprogram til at belyse houselight 1 min efter er udstedt programmet. Optag det samlede antal væskeport posteringer i løbet af en 20 min session. I slutningen af sessionen, programmere houselight at slukke. Ikke udgør nogen ethanol eller stikord under tilvænnings- sessioner.
- Rengør udstyr (f.eks, gulv paneler, spildbakker, petriskåle). Se trin 5.7 for yderligere detaljer.
5. Pavlov Diskrimination Training (PDT)
Tog rotter adfærdsmæssigt diskriminere mellem en auditiv cue, der er parret med ethanol og en anden auditiv cue, der ikke er. Til denne fase af forsøget, fylde 20 ml sprøjter med 15% ethanol.
- Udstyre hver konditioneringskammeret med en specifik konfiguration af visuelle, olfaktoriske og taktile stimuli for at skabe en markant sammenhæng, som beskrevet i trin 3.3.2 og 3.3.3
- Tildel halvdelen af rotterne til Kontekst 1 og den anden halvdel til Kontekst 2 i en kontravægtstruck måde, der er baseret på ethanol forbrug og præferencer gennemsnittet for de sidste 2 sessioner af ethanol adgang procedure hjem bur. Der henvises til context bruges under PDT som Context A. BEMÆRK: Hver rotte bør kun oplever én sammenhæng i denne fase af uddannelsen.
- Sørg for, at det olfaktoriske stimulus er den sidste kontekstuelle incitament til at blive tilføjet til hver konditioneringskammeret. Luk dørene til kammeret og lyddæmpende sengebås at indeholde olfaktoriske stimulus og minimere comingling forskellige lugte.
- Bring rotterne i den adfærdsmæssige kursuslokale, registrerer hver rotte vægt, og indlæse hver rotte i sin udpegede konditioneringskammeret.
- Indled edb-program, der styrer den følgende sekvens af hændelser under hver PDT session.
- På er udstedt 5 min efter programmet, belyse houselight.
- Præsenter hvid støj stimulus og klikkeren stimulus 16 gange hver. En af disse auditive stimuli være CS + og den anden til at være CS, i en opvejet måde på tværs af begge sammenhænge.
- Gør hver CS + og CS retssag last 10 sek.
- Lever 0,2 ml ethanol i fluidporten løbet af de sidste 6 sek af CS +. Må ikke levere nogen ethanol under CS.
- Gør hver PDT session sidste 58 minutter i gennemsnit. Præsenter CS + og CS-hver på en variabel tid 67 sek tidsplan.
- Optag fluid poster port i løbet af 10 sek CS-interval (10 sek under CS pakning) på 10 sek pre-CS-interval (10 sek umiddelbart før CS indtræden), og 10 sek efter CS-interval (10 sek straks efter CS offset) for både CS + og CS præsentationer, samt alt væskeport poster for hele sessionen. Også registrere varigheden af hver port indtastning i disse intervaller.
- I slutningen af sessionen, vend houselight fra.
- Fjern rotter fra kamrene, returnere dem til deres bure, og transportere dem tilbage til dyret pleje facilitet.
- Kontroller væskeporte at sikre, at rotter fortærede de 3,2 ml ethanol leveret i hver PDT session.
- Skyl ethanol ud af polyethylenrør med en 60 ml sprøjte indeholdende en lille mængde vand. Derefter passere 60 ml luft gennem slangen ved hjælp af en anden, tomme sprøjte, for at sikre det er tørt.
- Rengør udstyr. Til daglig rengøring, vask gulvpladerne, affald bakker og petriskåle. En gang om ugen, rense hele konditioneringskammeret. Brug ikke parfumeret rengøringsmidler for at undgå at indføre uønsket lugt i det eksperimentelle apparatur.
- Fortsæt PDT sessioner dagligt indtil rotter viser stabil diskrimination i deres port indrejse svar på CS + vs CS. BEMÆRK: Port posteringer i svar til CS +, bør stige over sessioner, mens port posteringer som reaktion på CS bør forblive lav. Det nøjagtige antal af PDT sessioner nødvendige for at opnå diskrimineret betinget reagerer kan variere, men, som en guide, har planer om at cirka 20 sessioner.
6. Extinction
- Udstyre hver konditionering chamber med visuelle, olfaktoriske og taktile stimuli for at skabe en kontekst, der er forskellig fra den ene rotterne oplevede under PDT sessioner. For eksempel, hvis Context 1 blev anvendt i PDT, konfigurere kammeret som Context 2 til slukning sessioner. Se sammenhæng anvendes under udslettelse som Context B.
- Udføre extinction sessioner identisk med PDT sessioner, men leverer ikke nogen ethanol under CS +.
- Brug samme edb-program, der blev brugt under PDT til at præsentere CS + og CS.
- For at opretholde konsistens på tværs faser af eksperimentet, indlæse en tom sprøjte i sprøjtepumpen, og lad pumpen tændt. Sørg for, at polyethylenslange ikke indeholder ethanol næstsidste sessioner.
- Fortsæt extinction sessioner dagligt indtil rotter viser ikke længere forskelsbehandlede reagerer mellem CS + og CS. BEMÆRK: Port posteringer i svar til CS +, bør gradvist falde tværs udryddelse sessioner, indtil der ikke er Forskelnce mellem port posteringer i svar til CS + og poster i havneområder foretaget som reaktion på CS. Det nøjagtige antal af udryddelse sessioner er nødvendige for at slukke aircondition reagere kan variere, men som en guide, planen på cirka 8 sessioner.
- Rengør udstyr ved slutningen af hver session, som beskrevet i trin 5.7.
7. Kontekst-induceret udskiftningstest
- Udstyre hver konditioneringskammeret med de visuelle, olfaktoriske og taktile stimuli til at skabe den sammenhæng, der blev oplevet under PDT sessioner. For eksempel, hvis en given rotte oplevet Context 1 i PDT sessioner, konfigurere sit kammer som Context 1 i testen session. Der henvises til sammenhæng anvendes under fornyelse testen som Context A.
- Gennemføre den kontekst-inducerede udskiftningstest identisk med PDT sessioner, men leverer ikke nogen ethanol under fornyelse testen. Præsenter
CS + og CS som før under PDT sessioner, men tilbageholde ethanolen.- Brug den samme computer PROGRAM, der blev brugt under PDT at præsentere CS + og CS.
- For at opretholde ensartethed på tværs af faser, indlæse en tom sprøjte i sprøjtepumpen, og lad pumpen tændt. Sørg for, at polyethylenslange ikke indeholder ethanol, før testen session.
- Overhold kontekst-induceret fornyelse af Pavlov-condition alkohol-søger adfærd. BEMÆRK: Denne fornyelse virkning vil være tydeligt ved en selektiv stigning i antallet af havnenes posteringer i svar til CS +, med ingen ændring i havn indgang adfærd som reaktion på CS-forhold til CS + og CS besvarer spørgsmålene i grønbogen observeret ved slutningen af udslettelse uddannelse.
- Rengør udstyr ved afslutningen af sessionen, som beskrevet i trin 5.7.
Representative Results
Intermitterende ethanol adgang i hjemmet bur: Ethanol forbrug (g / kg) og ethanol præference stigning på tværs af sessioner af intermitterende ethanol adgang i hjemmet bur, typisk nå et stabilt niveau inden for 8-12 sessioner (figur 1). I den i figur 1 viste datasæt, stabil ethanolforbrug gennemsnit på tværs af de to sidste sessioner hjembur ethanol adgang varierede fra 1,33 til 6,44 g / kg til de enkelte rotter. Hjemburet ethanolforbrug fase af forsøget kan stoppes, når g / kg forbrug er toppet, og rotter holdes ved denne stabile niveau af drikkevand for en række sessioner.
For at analysere data fra denne fase, foretage særskilt gentagne forholdsregler variansanalyse (ANOVA) på tværs af inden for individet faktor session for ethanol forbrug (g / kg) og ethanol præference.
Skematisk af kontekst-induceret fornyelse procedure: Hver fase afeksperimentelle procedure (PDT, udslettelse, fornyelse test) er illustreret i figur 2. Se figuren billedtekst for yderligere detaljer.
Reaktion foranstaltninger og dataanalyse: I alle adfærdsmæssige faser beskrevet nedenfor, havne indrejse reaktioner foretaget under CS + og CS normaliseres med henvisning til at pre-CS baseline port indrejse svar. At skabe de normaliserede CS foranstaltninger, trække antallet af havnens posteringer i før-CS baseline interval (10 sekunder umiddelbart før CS debut) fra antallet af havnens posteringer i løbet af præsentationer af CS + og CS. Den normaliserede CS + og normaliserede CS- foranstaltninger tjener som indikatorer for adfærd fremkaldte specifikt ved CS præsentationer, hævet over baseline-niveau.
Gennemføre særskilte gentagne forholdsregler ANOVA med gentagne inden for individet faktorer session og CS type (CS + vs CS) til PDT og slukning faser. Til sammenligninger på tværs af fase (PDT, udslettelse, fornyal-test), bruge data gennemsnit på tværs af de to sidste møder i PDT og udslettelse, og den ene session fornyelse testdata I gentagne foranstaltninger ANOVA. For at følge op på betydelige vigtigste virkninger og interaktioner, brug post hoc t-test for uafhængige eller parrede prøver, der er korrigeret for multiple sammenligninger. Kriterium for signifikans er sat til α = 0,05.
PDT: Port indrejse reaktioner på CS + stigning tværs PDT sessioner, mens port indrejse reaktioner på CS forblive lav og stabil, samlet. Bemærk, at indgangsporten reaktioner på CS, vil stige svagt i de tidlige sessioner PDT uddannelse; Men port posteringer som reaktion på CS stabilisere sig på et meget lavere niveau end dem, der foretages i forbindelse med CS +. Vellykket diskrimination fremgår af en statistisk signifikant stigning i poster port under CS + i forhold til CS (Figur 3). Dette resultat indikerer, Pavlov-condition alkohol-søger adfærd har væreda oprettet for at CS +, men ikke CS.
Extinction: Port indrejse reaktioner på CS + falde gradvist over ekstinktionsenheder sessioner. Port indrejse reaktioner på CS forblive lav og stabil på tværs af udryddelse sessioner. Ideelt set diskrimineret reagere er afskaffet ved udgangen af udryddelse uddannelse, som det fremgår af manglen på en statistisk signifikant forskel mellem poster port til CS + og CS. Imidlertid er det ikke ualmindeligt, at en vis grad af diskrimineret reagere forbliver, selv ved afslutningen af udryddelse uddannelse. I dette tilfælde er det vigtigt at kontrollere, at indgangsporten reaktioner på CS + i slutningen af udryddelse uddannelse er statistisk lavere end havnens indrejse svar på CS + i starten af udryddelse, såvel som ved udgangen af PDT (Figur 3) . Dette mønster af resultater indikerer, at Pavlov-condition alkohol-søger adfærd er blevet væsentligt slukket.
Kontekst-induceret fornyelse test: Portentry reaktioner på CS + stigning i sammenhæng-inducerede fornyelse test i forhold til CS + port poster observeret i slutningen af udryddelse uddannelse. Denne stigning er selektiv til CS +, som poster port til CS forbliver uændrede. Desuden port indgange til CS + er statistisk forhøjet i forhold til indgange port til CS i forbindelse med-inducerede fornyelse test (Figur 4). Statistisk bekræftelse af sammenligninger af CS + port poster mellem udryddelse og test, samt sammenligninger af CS + og CS port poster inden for test, indikerer en selektiv fornyelse af Pavlov-condition alkohol-søger adfærd fremkaldt af alkohol forbundet sammenhæng på prøve.
Figur 1. Optrapning af ethanol forbrug og præferencer induceret af intermitterende ethanol adgang i hjemmet bur. Betyder &# 177; SEM (A) ethanol forbrug (g / kg) og (B) ethanol præference på 12 sessioner af intermitterende ethanol adgang i hjemmet bur. Begge foranstaltninger øger typisk tværs sessioner og derefter stabilisere sig. Stabil ethanol forbrug i gennemsnit på tværs af de to sidste møder i hjemmet bur ethanol adgang varierede fra 1,33 til 6,44 g / kg for individuelle rotter. Disse data blev opnået ved anvendelse af mandlige Long-Evans rotter drikker 15% (v / v) ethanol.
. Figur 2. En skematisk af den eksperimentelle Proceduren består af tre faser: pavlovsk uddannelse forskelsbehandling (PDT), udslettelse, og kontekst-induceret fornyelse test. Under hver PDT-session, rotter modtager 16 forsøg med en auditiv betinget stimulus (CS +), som signalerer levering af ethanol og 16 forsøg meden anden auditiv stimulus (CS), der ikke er forbundet med ethanol levering. PDT sessioner finder sted i kontekst A, der består af en specifik konfiguration af visuelle, olfaktoriske og taktile stimuli. Under extinction sessioner, der er gennemført i kontekst B, der består af et andet sæt af visuelle, olfaktoriske og taktile stimuli, er CS + og CS fremlagt men ethanol tilbageholdes. For den kontekst-inducerede fornyelse test rotterne tilbage til Context A og CS + og CS præsenteres uden ethanol. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Køb og udslettelse af forskelsbehandlede Pavlovs-condition svare i ethanol. Mean ± SEM firmaer normaliseret port made under CS + og CS tværs PDT (sessioner 1 - 18) i Context A og slukning (sessioner 19-26) i Context B. Disse data blev opnået ved hjælp af mandlige Lang Evans rotter trænet med 10% (v / v) ethanol som ubetinget stimulus (US), som blev præsenteret i forbindelse med CS + under PDT. * P <0,05, CS + og CS. Figur oprindeligt udgivet i Chaudhri, Sahuque & Janak (2008). Brugt med tilladelse fra Elsevier.
Figur 4. Kontekst-induceret fornyelse af Pavlovs-condition svare i ethanol. Mean ± SEM normaliseret port indtastninger foretaget i løbet af CS + og CS i PDT sessioner i Context A, ophævelses sessioner i kontekst B og fornyelse test i Context A. Data er i gennemsnit over de sidste to sessioner for PDT og udslettelse; fornyelse testen er en enkelt session. Dissedata blev opnået ved hjælp af mandlige Lang Evans rotter trænet med 10% (v / v) ethanol som ubetinget stimulus (US), som blev præsenteret i forbindelse med CS + under PDT. * P <0,05; ** P <0,001, CS + kontra CS. #p <0,05, CS + PDT versus CS + udryddelse. ^ P <0,05, CS + udslettelse kontra CS + test. Figur oprindeligt udgivet i Chaudhri, Sahuque & Janak (2008). Brugt med tilladelse fra Elsevier.
Discussion
Resultater fra denne procedure viser, at stimuli diskrete miljø, som rutinemæssigt ledsager alkohol levering kan opnå den nødvendige kapacitet til at køre alkohol-søger adfærd. De viser også, at kontekstuelle stimuli forbundet med den kendte tilgængelighed eller fravær af alkohol kan vejlede betinget adfærdsmæssige reaktioner på diskrete alkohol-prædiktiv signaler.
Kritiske trin i protokollen
Sammenhænge i den foreliggende opgave at optage stimuli, der er eksterne i rotten. Imidlertid kan interoceptiv tilstand af rotte på testen også udgøre en »sammenhæng«, som kan påvirke fornyelse 20. Det er derfor vigtigt at vænne rotter til de procedurer, der kan opstå før fornyelsen test og ændre deres interoceptiv tilstand, ligesom intrakranielle microinfusions eller systemiske injektioner. Desuden bør tilvænning til microinfusions eller systemiske injektioner skal foretages før både udslettelse og PDT sessions, for at forhindre sådanne procedurer fra at blive forbundet med en bestemt fase af forsøget.
Temporal parametre, såsom CS varighed, CS-USA interval og intertrial interval (ITI), har længe været kendt for at påvirke konditioneret reagere i en række conditioning paradigmer 21-26. Tilsvarende kan tidsmæssige parametre har indflydelse på observation af fornyelsen effekt i vores procedure. Et sæt af andre end de i protokollen parametre bør eksperimentelt valideret i pilotundersøgelser, før du fortsætter at ansætte dem i større undersøgelser.
Ændringer og fejlfinding
Tidligere forskning har vist, at mængden af ethanol, at rotter spiser i hjemmet bur kan variere som en funktion af leverandøren, hvorfra rotter købes 17,27. Leverandøren er derfor en vigtig overvejelse for denne fase af undersøgelsen. Tilsvarende bør valget af rottestammen considered omhyggeligt, da der er mange rapporter om stammeforskelle i ethanolforbrug 28-31.
Forudgående arbejde i et afskrækningsmiddel condition paradigme har vist, at den udviklingsmæssige alder rotter påvirker observation af fornyelse af en pavlovsk konditioneret frygt reaktion 32. Manglen på en fornyelse effekt hos meget unge rotter (yngre end postnatal dag 20) er blevet foreslået at skyldes forringet kodning af kontekstuel information 33. Den udviklingsmæssige alder af rotter, der skal anvendes i den foreliggende procedure, bør derfor tages i betragtning.
Fornyelse af Pavlov betingede alkohol-søger adfærd er observeret, når 10% 9,16, 15% 14 eller 20% 15 ethanolopløsninger blev brugt under hjembur ethanol adgang og PDT faser af forsøget. Forskere kan bruge nogen af disse koncentrationer af ethanol med henblik på oprettelse af denne procedure i deres LABORATORerne.
Under købet af Pavlov uddannelse diskrimination er det vigtigt at tjekke væskeporte efter hver session for at sikre, at al ethanol, der blev leveret er indtaget. Forlader rotter i de conditioning kamre i yderligere 10 - 15 minutter efter hver session kan ske tidligt i PDT at fremme forbruget af et ethanol, der ikke blev forbrugt under sessionen. Antallet af rotter forlader uforbrugt ethanol i havnene forventes at falde som PDT skrider frem. Hvis der ved udgangen af PDT rotter er enten (a) ikke indtager al ethanol og / eller (b), ikke reagerer på den CS + så disse emner bør udgå fra undersøgelsen. De fleste rotter pålideligt reagere mere til CS + end CS. Dog kan nogle rotter reagerer på et højt niveau for begge signaler, hvilket ikke viser tegn på forskelsbehandling. Rotter, der viser høje reagerer på både CS + og CS under PDT er ikke faldet fra undersøgelsen. Det er vores erfaring, disse emner viser bemærkelsesværdig diskriminationunder den første ekstinktionsseance i fravær af ethanol, hvilket tyder på, at deres høje reagere på CS under PDT drives ved tilstedeværelsen af ethanol i fluidporten. Disse emner har også en tendens til at vise robuste fornyelse effekter.
Begrænsninger i proceduren
Fordi fornyelsen testen udføres i fravær af ethanol, aircondition port poster fremkaldt af CS + gradvist aftage over test session. Derfor er den samlede adfærd genereres på test, mod hvilken kan vurderes eksperimentelt inducerede ændringer, er forholdsvis lav. Fordi der i denne opgave at reagere tendens til at være højere i starten versus testens afslutning sessionen, er det vigtigt at undersøge virkningerne af eksperimentelle manipulationer på konditioneret svare på en trial-by-forsøgsbasis.
Angivelser i væsken beholder være det vigtigste afhængig foranstaltning i denne opgave. Dog kan en fejlagtig port indgang være registrerede hvis et dyr er tæt nok til væsken beholderen til at bryde den infrarøde stråle på tværs af åbningen af fluidporten med sine whiskers. Mens uregelmæssige fejlagtige svar er indlysende som en dramatisk stigning i den samlede havn poster i forhold til emnet adfærd på tidligere sessioner. Videooptagelser dyrene vil lette påvisning af mulige fejlagtige svar, og giver mulighed for en mere raffineret analyse af den adfærd, der udvises af rotterne hele træning og test.
Betydningen af teknik med hensyn til eksisterende / alternative metoder
Kontekst-induceret fornyelse af narkotika-søger adfærd i høj grad studeret ved hjælp af en instrumental condition opgave, som den primære afhængige variabel er en operant svar, såsom en løftestang presse 8,34 eller næsen poke 12. I den foreliggende procedure, narkotika-søger svar er "betinget tilgang" til væsken port, der fremkaldes af præsentationer afCS +. Dette svar sandsynligvis erhvervet gennem pavlovsk læring, som er den læringsproces, der medierer dannelsen af associationer mellem miljømæssige stimuli og de farmakologiske virkninger af misbrugsstoffer hos mennesker.
Fremtidige applikationer
Denne opgave kan anvendes i kombination med Neuropharmacology, optogenetics og neurokemi at studere de neurale mekanismer, der er involveret i kontekst-induceret fornyelse af Pavlov-condition alkohol-søger adfærd 16. Hertil kommer, kan adfærdsmæssige og neurale mekanismer, der regulerer erhvervelsen og udslettelse af Pavlov-condition alkohol-søger adfærd blive undersøgt. Endelig kan denne opgave bruges til at udforske manipulationer af udslettelse, der kan forhindre fornyelse, en vigtig retning for translationel forskning med henblik på at mindske virkningerne af narkotika forbundet miljømæssige sammenhænge på reaktivitet til narkotika forudsigende tidskoder efter cue eksponering terapi i menneskelig supplects.
Disclosures
Alle eksperimentelle procedurer blev godkendt af Concordia University Animal Research Ethics Committee og er i overensstemmelse med retningslinjerne fra den canadiske Rådet om Animal Care. Blev Den åbne adgang offentliggørelsen af denne artikel muliggjort af sponsorering fra Med Associates Inc.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Heavy-duty utility cart | Rubbermaid | #4520-88 | Used to transport rats in their home cage from the colony room to the behavior room or other facilities |
| Rats, Long-Evans | Harlan | Rats weighed 220-240 g on arrival | |
| Ohaus scale | Fisher | #S402421 | For weighing rats; tare the bottom of a plastic container first, then put the rat in it to weigh it |
| Beta-chips, aspen | Harlan | #7090A | Bedding for home cage |
| Nylabone | Bio-Serv | #K3580 | Enrichment provided in the home cage |
| Autoclavable rodent chow | Agribrands, Charles River | #5075 | For feeding rats |
| Wire bar cage lid | Ancare | #R20SS2B | Custom made with two slots for bottles |
| Cage bottom | Ancare | #R20PC | To house rats |
| Stoppers | Ancare | #8.5 | Rubber stoppers to occlude opening in water bottles & graduated cylinders; goes with ball point sipper tubes |
| Ball point tubes, 1.5" length | Ancare | #TD-99 | Inserted in stoppers, enables rats to drink from water bottles and graduated cylinders |
| Water bottles | Ancare | #FSPC8HT | 473 ml (16 oz) capacity, needs to be occluded with stopper |
| Graduated cylinders, 100 ml | Fisher | #0300741 | To contain ethanol during alcohol exposure in the home cage; spouted end needs to be cut off to enable occlusion with stoppers |
| Mettler scale | Mettler Toledo | #MS6001S | For weighing water bottles and ethanol cylinders |
| Polyethylene tubing, 1/32" inner diameter, 1/32" wall thickness, 3/32" outside diameter | Fisher | #14-169-1A | To connect 20 ml ethanol syringe to fluid port |
| Needle, 18 g, 1.5" length | Fisher | #B305199 | To connect polyethylene tubing to ethanol syringes; needs to be filed |
| Syringes, 20 ml, Luer-Lok non-sterile | Fisher | #1482316J | To contain ethanol on the fluid pumps; needs to be connected to the polyethylene tubing by a 18 G 1 1/2 needle |
| Syringes, 60 ml, Luer-Lok non-sterile | Fisher | #14-820-11 | To flush polyethylene tubing after PDT sessions |
| Single speed syringe pump, 3.33 rpm | Med Associates Inc. | #ENV-018MD | To hold 20 ml ethanol syringes and deliver ethanol |
| Fluid port | Med Associates Inc. | #ENV-254-CB | To enable ethanol delivery during PDT sessions; connected to ethanol syringes with polyethylene tubing |
| Port entry infrared detector | Med Associates Inc. | #ENV-215M | Fixed on both sides of fluid port; need 2 per fluid port |
| Houselight, 28 V, 100 mA | Med Associates Inc. | #ENV-135M | Provides general lighting in conditioning chamber |
| Clicker module | Med Associates Inc. | #ENV-225SM | Auditory stimulus for conditioning chamber |
| White noise generator with speaker | Med Associates Inc. | #PHM-100 | Auditory stimulus for conditioning chamber |
| Bar floor | Med Associates Inc. | #ENV-009A-GF | To go with modular test chamber |
| Bench coat, absorbent | VWR | #89126-790 | Absorbent paper to put in metal tray, needs to be cut to fit the metal tray |
| Polycarbonate sheet, 1/8" thick, 12-5/8" x 10" | Johnston Plastics | #30102515 | To make smooth transparent floor insert used for context 1. Needs to be cut in 11.5" x 12.25" pieces |
| Aluminium sheet perforated, 0.063" thick, 48" x 96", 0.250" holes x 0.375" centers | Anica Steel | To make perforated floor insert used for context 2. Needs to be cut in 11.5" x 12.25" pieces | |
| Black cardboard, 0.053" thick, 28" x 44" | Omer DeSerres | #P1909 | To construct panels covering the ceiling, door and back wall of the conditioning chamber in context 1. Needs to be cut to size. Each chamber needs three panels measuring approximately 11.5" x 13.25". The panels can be joined by the narrower side using duct tape. |
| All-purpose strength duct tape, 1.88" x 45 yd. | Duck Tape | Adhesive material to connect the black cardboard panels used to cover the back wall, ceiling and door in context 1. | |
| Modular test chamber | Med Associates Inc. | #ENV-009A | Conditioning chamber |
| Sound attenuating cubicles | Med Associates Inc. | #ENV-200R3AM | Comes with installed 28 V DC fan (#ENV-025F) |
| Petri dish | Fisher | #08748B | Bottom only, to contain the sprayed solution that provides the odor stimulus; needs to be centered in the metal tray in conditioning chambers |
| PCI interface package | Med Associates Inc. | #DIG-700P2-R2 | Connects tabletop interface cabinet to computer; includes 1 interface card, 1 Decode card, 1 ribbon cable and 1 28 V DC power cable |
| Large tabletop cabinet and power supply | Med Associates Inc. | #SG-6510D | Used to contain the 12 cards included in the SmartCrtrl 8 Input, 16 Output package |
| SmartCtrl 8 Input, 16 Output package | Med Associates Inc. | #DIG-716P2 | Used to connect and control the devices in the conditioning chamber. The package includes all the cables, the interface module and the connection panel. |
| Med PC IV software | Med Associates Inc. | #SOF-735 | Software to run programs. Needs to be installed on the computer. |
| Monitor LG, 19" LCD | Concordia computer store | #W1942TQ-BF | Computer monitor; to go with computer running Med PC IV |
| HP Z200 tower workstation | Concordia computer store | #BZ788US#ABA | Computer on which Med PC IV is run |
| Benzaldehyde, ≥99% | Les produits chimiques OMEGA Chemical Company Inc. | #B37-50 | Dilute in tap water for almond context odor |
| Lemon oil, cold pressed, California | Sigma Aldrich | #W262528-1KG-K | Dilute in tap water for lemon context odor |
| Ethyl alcohol, 95% | Commercial Alcohols | Dilute in tap water to desired concentration |
References
- Field, M., Duka, T. Cues paired with a low dose of alcohol acquire conditioned incentive properties in social drinkers. Psychopharmacology (Berl). 159, 325-334 (2002).
- Litt, M. D., Cooney, N. L., Morse, P. Reactivity to alcohol-related stimuli in the laboratory and in the field: predictors of craving in treated alcoholics). Addiction. 95, 889-900 (2000).
- Pomerleau, O. F., Fertig, J., Baker, L., Cooney, N. Reactivity to alcohol cues in alcoholics and non-alcoholics: implications for a stimulus control analysis of drinking. Addict Behav. 8, 1-10 (1983).
- Sinha, R. New findings on biological factors predicting addiction relapse vulnerability. Curr Psychiatry Rep. 13, 398-405 (2011).
- Conklin, C. A. Environments as cues to smoke: implications for human extinction-based research and treatment. Exp Clin Psychopharmacol. 14, 12-19 (2006).
- Conklin, C. A., Robin, N., Perkins, K. A., Salkeld, R. P., McClernon, F. J. Proximal versus distal cues to smoke: the effects of environments on smokers' cue-reactivity. Exp Clin Psychopharmacol. 16, 207-214 (2008).
- Janak, P. H., Chaudhri, N. The potent effect of environmental context on relapse to alcohol-seeking after extinction. Open Addict J. 3, 76-87 (2010).
- Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Cone, J. J., Janak, P. H. Reinstated ethanol-seeking in rats is modulated by environmental context and requires the nucleus accumbens core. Eur J Neurosci. 28, 2288-2298 (2008).
- Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Janak, P. H. Context-induced relapse of conditioned behavioral responding to ethanol cues in rats. Biol Psychiatry. 64, 203-210 (2008).
- Crombag, H. S., Shaham, Y. Renewal of drug seeking by contextual cues after prolonged extinction in rats. Behav Neurosci. 116, 169-173 (2002).
- Fuchs, R. A., Eaddy, J. L., Su, Z. I., Bell, G. H. Interactions of the basolateral amygdala with the dorsal hippocampus and dorsomedial prefrontal cortex regulate drug context-induced reinstatement of cocaine-seeking in rats. Eur J Neurosci. 26, 487-498 (2007).
- Marchant, N. J., Hamlin, A. S., McNally, G. P. Lateral hypothalamus is required for context-induced reinstatement of extinguished reward seeking. J Neurosci. 29, 1331-1342 (2009).
- Zironi, I., Burattini, C., Aicardi, G., Janak, P. H. Context is a trigger for relapse to alcohol. Behav Brain Res. 167, 150-155 (2006).
- Sciascia, J. M., Mendoza, J., Chaudhri, N. Blocking dopamine D1-like receptors attenuates context-induced renewal of Pavlovian-conditioned alcohol-seeking in rats. Alcohol Clin Exp Res. 38, 418-427 (2014).
- Chaudhri, N., Woods, C. A., Sahuque, L. L., Gill, T. M., Janak, P. H. Unilateral inactivation of the basolateral amygdala attenuates context-induced renewal of Pavlovian-conditioned alcohol-seeking. Eur J Neurosci. 38, 2751-2761 (2013).
- Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Schairer, W. W., Janak, P. H. Separable roles of the nucleus accumbens core and shell in context- and cue-induced alcohol-seeking. Neuropsychopharmacology. 35, 783-791 (2010).
- Sparks, L. M., Sciascia, J. M., Ayorech, Z., Chaudhri, N. Vendor differences in alcohol consumption and the contribution of dopamine receptors to Pavlovian-conditioned alcohol-seeking in Long-Evans rats. Psychopharmacology (Berl). 231, 753-764 (2014).
- Simms, J. A., et al. Intermittent access to 20% ethanol induces high ethanol consumption in Long-Evans and Wistar rats. Alcohol Clin Exp Res. 32, 1816-1823 (2008).
- Wise, R. A. Voluntary ethanol intake in rats following exposure to ethanol on various schedules. Psychopharmacologia. 29, 203-210 (1973).
- Bouton, M. E., Westbrook, R. F., Corcoran, K. A., Maren, S. Contextual and temporal modulation of extinction: behavioral and biological mechanisms. Biol Psychiatry. 60, 352-360 (2006).
- Pavlov, I. Conditioned reflexes: an investigation of the physiological activity of the cerebral cortex. , Oxford University Press. Oxford, England. (1927).
- Gibbon, J., Baldock, M. D., Locurto, C., Gold, L., Terrace, H. S. Trial and intertrial durations in autoshaping. J Exp Psychol Anim Behav Process. 3, 264-284 (1977).
- Holland, P. C. CS-US interval as a determinant of the form of Pavlovian appetitive conditioned responses. J Exp Psychol Anim Behav Process. 6, 155-174 (1980).
- Stein, L., Sidman, M., Brady, J. V. Some effects of two temporal variables on conditioned suppression. J Exp Anal Behav. 1, 153-162 (1958).
- Coleman, D. A., Hemmes, N. S., Brown, B. L. Relative durations of conditioned stimulus and intertrial interval in conditioned suppression. J Exp Anal Behav. 46, 51-66 (1986).
- Schwarz-Stevens, K. S., Cunningham, C. L. Pavlovian conditioning of heart rate and body temperature with morphine: effects of CS duration. Behav Neurosci. 107, 1039-1048 (1993).
- Palm, S., Roman, E., Nylander, I. Differences in voluntary ethanol consumption in Wistar rats from five different suppliers. Alcohol. 45, 607-614 (2011).
- Gauvin, D. V., Moore, K. R., Holloway, F. A. Do rat strain differences in ethanol consumption reflect differences in ethanol sensitivity or the preparedness to learn. Alcohol. 10, 37-43 (1993).
- Goodwin, F. L., Amit, Z. Relative taste thresholds for ethanol, saccharin, and quinine solutions in three strains of rats nonselected for ethanol: a comparative study. Exp Clin Psychopharmacol. 8, 216-224 (2000).
- Goodwin, F. L., Bergeron, N., Amit, Z. Differences in the consumption of ethanol and flavored solutions in three strains of rats. Pharmacol Biochem Behav. 65, 357-362 (2000).
- Wilson, A. W., Neill, J. C., Costall, B. Strain differences in ethanol preference and reinforced behaviour: a comparison of two-bottle choice and operant self-administration paradigms. Behav Pharmacol. 8, 37-46 (1997).
- Yap, C. S., Richardson, R. Extinction in the developing rat: an examination of renewal effects. Dev Psychobiol. 49, 565-575 (2007).
- Carew, M. B., Rudy, J. W. Multiple functions of context during conditioning: a developmental analysis. Dev Psychobiol. 24, 191-209 (1991).
- Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Janak, P. H. Ethanol seeking triggered by environmental context is attenuated by blocking dopamine D1 receptors in the nucleus accumbens core and shell in rats. Psychopharmacology (Berl). 207, 303-314 (2009).
