Summary
Een procedure om de capaciteit van een alcohol geassocieerde context milieustudie leiden tot de verlenging van alcohol-zoekend gedrag bij ratten beschreven.
Abstract
Milieu-contexten waarin drugs worden geconsumeerd kan leiden tot verlangen, een subjectieve Pavlov-geconditioneerde respons die drug-seeking gedrag en snelle terugval in abstinente drugsgebruikers kunnen vergemakkelijken. We hebben een procedure om de gedrags-en neurale processen die de invloed van context op alcohol-zoekend gedrag bij ratten bemiddelen studeren ontwikkeld. Na acclimatisatie aan de smaak en de farmacologische effecten van 15% ethanol in de kooi, mannelijke Long-Evans ratten ontvangt Pavlov discriminatie training (PDT) in conditioning kamers. In elk dagelijks (ma-vr) PDT sessie, 16 trials elk van twee verschillende 10 sec auditieve geconditioneerde stimuli optreden. Tijdens een stimulus, CS + 0,2 ml van 15% ethanol wordt gegeven in een fluïdumpoort voor oraal gebruik. De tweede stimulus, het CS-, wordt niet gekoppeld aan ethanol. Over sessies, vermeldingen in de vloeistof-poort tijdens de CS + toename, terwijl de toevoegingen tijdens het CS te stabiliseren op een lager niveau, dat aangeeft dat een PREDIctive associatie tussen de CS + en ethanol wordt verkregen. Bij PDT elke kamer is voorzien van een specifieke configuratie van visuele, olfactorische en tactiele contextuele stimuli. Na PDT wordt extinctie training uitgevoerd in dezelfde kamer die nu is voorzien van een andere configuratie van contextuele stimuli. De CS + en CS worden gepresenteerd als voorheen, maar ethanol wordt ingehouden, dat een geleidelijke daling in de haven inzendingen tijdens de CS + veroorzaakt. Bij test worden de ratten weer in de PDT context geplaatst en tezamen met de CS + en CS als voorheen, maar zonder ethanol. Deze manipulatie veroorzaakt een sterke en selectieve toename van het aantal inschrijvingen poort tijdens de alcohol voorspellende CS +, zonder verandering te reageren tijdens het CS. Dit effect, aangeduid als context geïnduceerde verlenging illustreert de sterke capaciteit contexten van alcohol consumptie-alcohol zoekgedrag in reactie op Pavlov alcohol signalen stimuleren.
Introduction
Resterende sober is een grote uitdaging voor personen die lijden aan alcoholmisbruik stoornissen. De onthouding is een tijd van kwetsbaarheid voor de gedrags-, psychologische en fysiologische effecten van prikkels uit de omgeving die routinematig gebruik van alcohol te begeleiden, dat kan, door middel van Pavlov-conditionering, raken in verband met dronkenschap 1,2. Blootstelling aan alcohol voorspellende signalen kunnen geconditioneerde responsen zoals alcohol verlangen, die alcohol op zoek naar gedrag dat terugval 3,4 vergemakkelijken kunnen bevorderen uitlokken.
De stereotiepe sequenties van gedrag dat leidt tot alcoholgebruik kan leiden tot bepaalde vormen van stimuli om routinematig direct voor de farmacologische effecten van alcoholgebruik worden ervaren. Bijvoorbeeld, het zicht, de geur en de smaak van alcohol zijn sensorische eigenschappen van alcohol die betrouwbaar voorafgaan intoxicatie. Naast dergelijke signalen, die worden aangeduid als "afzonderlijke" of "proximal 'signalen, milieu-contexten waarin geneesmiddelen regelmatig worden gebruikt, kunnen ook provoceren verlangen 5,6. Blootstelling aan fysieke locaties waar drugs zijn eerder gebruikt kan daarom een kritische trigger voor terugval 7.
Diermodellen zijn ontwikkeld om de neurale mechanismen die het effect van geneesmiddel geassocieerde contexten on drug-zoekend gedrag 8-13 mediëren bestuderen. De hier beschreven procedure maakt voor het onderzoek naar hoe contexten geassocieerd met alcoholgebruik alcohol-zoekend gedrag die wordt opgewekt door een discrete, alcohol voorspellende Pavlov-cue kan moduleren.
Pavlov training discriminatie wordt uitgevoerd in een specifieke milieu-context, waar ratten worden getraind om gedragsmatig onderscheid te maken tussen twee auditieve geconditioneerde stimuli, een CS +, dat is gekoppeld aan alcohol, en een CS-dat is het niet. Uitsterven sessies worden vervolgens uitgevoerd in een andere context, waarbij het reageren op het CS+ Neemt af als gevolg van alcohol wordt ingehouden. Vervolgens reexposure om de alcohol geassocieerd, Pavlov training context brengt een selectieve verhoging van de alcohol-zoekend gedrag uitgelokt door de CS +, met geen verandering in te spelen op de CS. Dit resultaat, dat we consequent zijn gerepliceerd 9,14-16, breidt bevindingen uit instrumentale conditionering procedures waarin drugs contexten zijn gevonden om de vernieuwing van operante respons, geassocieerd met de drug delivery 10,13 stimuleren.
Protocol
Alle procedures zijn goedgekeurd door de Animal Research Ethics Committee bij Concordia University en ben het eens met de aanbevelingen van de Canadese Raad over Animal Care.
1 Dieren
- Verkrijgen mannelijke Long-Evans ratten (220-240 g bij aankomst).
- Behouden ratten in een temperatuur (21 ° C) en luchtvochtigheid (44%) gecontroleerde dier zorginstelling, op een 12 uur licht-donker cyclus met lichten op om 7.00 uur.
- Pair-house ratten bij aankomst. Na 3 dagen, huis ratten individueel in plastic schoenendoos kooien met beta-chip beddengoed, een nylon bot, en gratis toegang tot de standaard rat chow en water. Gebruik kooi deksels die twee oogjes om de latere plaatsing van een tweede fles, naast de fles water. OPMERKING: Ratten kunnen individueel, zodra ze aankomen in het dier zorginstelling worden gehuisvest.
- Begin aan ratten dagelijks verwerken. OPMERKING: Als een gids, een week na de behandeling is meestal voldoende om ze te laten wennen aan het zijn picked up en behandeld door de experimentator.
2 Onderbroken Ethanol toegang in hun kooi
OPMERKING: Conduct intermitterende ethanol toegang in hun kooi om ervoor te zorgen dat ratten fysiologisch relevante hoeveelheden ethanol zal drinken voordat de gedragstraining fase van het experiment begint 17-19. Deze procedure tijdens de lichte fase, hoewel het op elk moment kan worden gestart tijdens het licht of donker-cyclus.
- Bereid twee flessen voor elke rat.
- Gebruik een 100 ml plastic maatcilinder als de ethanol fles en een 473 ml standaard plastic waterfles. Met een betrekkelijk kleine capaciteit ethanol fles gevuld bijna maximale volumecapaciteit, verlies van ethanol minimaliseren door lekkage en verdamping.
- Vul een fles met 15% ethanol, gemaakt door verdunning van 95% ethanol in leidingwater. OPMERKING: Other ethanol concentraties zoals 10% of 20%, worden gebruikt in plaats van 15% ethanol.
- Fill de tweede fles met kraanwater.
- Plaats een rubberen stop, met een sipper buis die een kogellager om lekkage te minimaliseren, in elke fles bevat.
- Zet twee control kooien, identiek behandeld om de kooien met de uitzondering dat de controle kooien niet ratten of bedding bevatten.
- Bereid ethanol en water flessen voor de controle kooien zoals gespecificeerd in stappen 2.1.1 - 2.1.4.
- Met de resultaten van de controle kooien te controleren voor morsen en / of verdamping die optreden in de loop van de toegang ethanol zitting (zoals beschreven in stap 2.8.1 - 2.8.2) maatregelen.
- Weeg alle ethanol en water flessen. Noteer alle gewichten.
- Weeg alle ratten. Noteer alle gewichten.
- Plaats de ethanol fles en de fles water op elke kooi en controle kooi tegelijkertijd. Laat beide flessen op de kooien voor 24 uur.
- Aan het einde van de periode van 24 uur, verwijder beide flessen uit dekooien tegelijkertijd.
- Weeg alle ethanol en water flessen. Noteer alle gewichten.
- Om te bepalen hoeveel ethanol en water gedurende de 24 uur periode was verbruikt, afgetrokken van het gewicht van elke fles toen het werd verwijderd uit de kooi het gewicht van de fles bij het in de kooi 24 uur eerder voor elke rat werd geplaatst.
- Doe hetzelfde voor de twee controle kooien, en bereken dan het gemiddelde bedrag van morsen voor elke vloeistof.
- Trek de gemiddelde hoeveelheid respectievelijk ethanol en water morsen uit de overeenkomstige ethanol en waterverbruik maatregelen voor elke rat.
- Gebruik deze morsen gecontroleerde verschil maatregelen ethanol consumptie in g / kg, verbruik van water en ethanol de voorkeur berekenen.
- Om ethanol consumptie (g / kg), eerst omzetten gewicht (g) ethanol is verbruikt in volume (ml) op basis van de dichtheid van de totale oplossing (ethanol + water componenten) te berekenen volgensde formule Volume (ml) = Gewicht (g) / Dichtheid (g / ml). OPMERKING: De dichtheid van de oplossing varieert als een functie van ethanolconcentratie.
- Vervolgens wordt de hoeveelheid (ml) ethanol oplossing verbruikt door de dichtheid (g / ml) van ethanol geschaald voor het specifieke percentage oplossing gebruikt, om het gewicht (g) van verbruikte ethanol verkregen.
- Verdeel het gewicht (g) ethanol verbruikt door de rat gewicht (kg) aan de g / kg maat ethanol verbruik te bereiken.
- Om ethanol voorkeur berekenen, uiten ethanol inname (ml) als percentage van de totale vloeistof (ethanol + water, ml) intake.
- Zet de fles water alleen terug naar de rat kooi. Voor de komende 24 uur, geven de ratten toegang tot water, maar niet ethanol. In plaats van een ethanol fles, plaats een vooraf gewogen tweede fles water op de kooi.
- Aan het einde van de periode van 24 uur, verwijder beide flessen water uit de kooi tegelijk.
- Weeg beide sets van waterflessen. Noteer alle weiGHTS.
- Trek het gewicht van elke fles toen het werd verwijderd uit de kooi van het gewicht van de fles toen het werd geplaatst op de kooi 24 uur eerder, af te trekken uit de verkregen controle kooien, zoals beschreven in de stappen 2.8.1 gemiddelde morsen maatregel - 2.8.2.
- Gebruik deze-morsen gecontroleerde verschil maatregelen om het verbruik van water te berekenen.
- Begint de cyclus opnieuw door zowel ethanol en water flessen ratten, zoals beschreven in de stappen 2.1 tot 2.14.
- Herhaal deze cyclus meerdere (ongeveer 12) sessies hoge en stabiele niveaus van ethanol consumptie induceren. Zie Figuur 1 voor representatieve resultaten ethanol consumptie (g / kg) in de kooi.
- Wissel de ruimtelijke positie van de ethanol en water fles op de kooi deksel over heeft tot de ontwikkeling van een secundaire voorkeur voorkomen.
- Maak een frisse ethanol oplossing een keer per week om nauwkeurige en stabiele ethanol concentratie over verzekerensessies. Het effect van verdamping van ethanol gedurende langere perioden deze aanpak minimaliseren.
3 Inrichting
- Huis elke conditioning kamer in een geventileerde, geluidremmende hokje.
- Construct elk conditioning kamer van een roestvrij stalen metalen staaf vloer, een heldere polycarbonaat plafond, polycarbonaat achterwand en de voordeur, en aluminium metalen paneel zijwanden.
- Installeer een fluïdumpoort centraal nabij de basis van de rechter zijwand metaal. Rust de ingang van de vloeistof-poort met een infrarood fotocel om data op te sporen in de poort.
- Sluit polyethyleen slang van de achterkant van de fluïdumpoort een 20 ml spuit met ethanol met een stompe getipt naald. Plaats de spuit in een spuit pomp buiten de geluidremmende kast gelegen. Voor Pavlov training discriminatie sessies, laadt ethanol in de spuit voordat u ze in de pomp. Prime de buis by handmatig het bevorderen van de pomp, en veeg overtollige ethanol uit de buurt van de vloeistof-poort.
- Aan de linker zijwand, installeer dan een witte houselight centraal in de buurt van het plafond van de kamer.
- Installeer een clicker (2 Hz-cyclus) en een witte ruis generator met luidspreker in de linker bovenhoek van de linker zijwand.
- Outfit elke conditioning kamer met een specifieke configuratie van visuele, olfactorische en tactiele stimuli om een onderscheidend context te creëren.
- Gebruik twee verschillende contexten, aangewezen Context 1 en Context 2 Configureer de helft van de conditionering kamers als Context 1 en de andere helft als Context 2.
- Context 1 maken, plaatst zwarte kartonnen panelen op het plafond en de voor-en achterwanden van de kamer, nevel citroen geur (10% v / v, gemaakt door verdunning van citroenolie in leidingwater) in een petrischaal en plaats deze in het midden van een lade metalen afval onder de vloer van de kamer, en plaats een heldere polycarbonaat vloerpaneel over de metalen rod vloer. Lijn de afvalbak met absorberend keukenpapier of bench liner.
- Context 2 maken, laat het plafond en de voor-en achterwanden van de kamer blootgelegd, zodat ze duidelijk zijn, spuiten amandel geur (10% v / v, gemaakt door verdunning van benzaldehyde in leidingwater) in een petrischaal en plaats het centraal in een lade metalen afval onder de vloer van de kamer, en steek een geperforeerd metalen bodemplaat over de metalen staaf vloer. Lijn de afvalbak met absorberend keukenpapier of bench liner.
4 Gewenning
Wennen ratten aan de gedragstraining kamer en elk van de twee contexten binnen conditioning kamers. Bij deze fase van het experiment geen ethanol laden in de 20 ml spuiten.
- Wennen ratten geleidelijk van de dierlijke zorg faciliteit wordt getransporteerd naar de gedragstraining kamer in het laboratorium in twee korte gewenning sessies.
- In de eerste sessie, laadt de ratten in hun kooien op een verrijdbare kar in het dier zorginstelling, en te transporteren naar de gedragstraining kamer in het laboratorium. Verlichten de kamer lichten, zet de fans in elk geluiddempende kast, verlaat de kamer, sluit de deur en laat de ratten aan te passen aan deze nieuwe omgeving voor 20 min, terwijl die nog in hun eigen kooien op de kar. Aan het einde van deze 20 min periode terug de ratten voor de dierlijke zorg faciliteit.
- In de tweede sessie, brengen de ratten aan de gedragstraining kamer in het laboratorium. Als voorheen, laat de lichten en kast fans op in de kamer. Blijven in de kamer, met de deur dicht om afleiding te minimaliseren, en te hanteren en wegen elke rat in de gedrags-trainingsruimte. Noteer de gewichten, en dan terug de ratten om het dier zorginstelling.
- Wennen ratten aan de conditionering kamers in twee korte gewenning sessies.
- Vervoer de ratten aan de gedrags-trainingsruimte, op te nemen gewicht elke rat,en laadt elke rat in zijn aangewezen conditioning kamer.
- In de eerste gewenningssessie opgezet helft van de kamers als Context 1 en de rest als Context 2.
- In de tweede gewenningssessie opgezet elke kamer met de context die niet gebruikt werd in de vorige sessie.
- Voer gewenning sessies een vorkheftruck wijze, zodanig dat de helft van de ratten eerst blootgesteld aan Context 1, gevolgd door Context 2, en de andere helft wordt eerst blootgesteld aan Context 2, gevolgd door Context 1 Idealiter voeren zowel gewenning sessies in de Dezelfde dag, hoewel ze kunnen worden verdeeld over twee dagen indien nodig.
- Voor gewenning sessies, gebruik maken van een computer programma om de houselight 1 min branden nadat het programma is afgegeven. Noteer het totale aantal fluïdumpoort ingevoerd heeft gedurende 20 min sessie. Aan het einde van de sessie, programmeert de houselight om uit te schakelen. Gebruik geen ethanol of signalen niet aanwezig tijdens de gewenning sessies.
- Het reinigen van de apparatuur (bijvoorbeeld, vloerpanelen, afval bakken, petrischaaltjes). Zie stap 5.7 voor verdere details.
5. Pavlov Discriminatie Training (PDT)
Trein ratten gedragsmatig onderscheid tussen een auditieve cue die is gekoppeld met ethanol en een tweede auditieve cue dat is het niet. Bij deze fase van het experiment vul 20 ml spuiten met 15% ethanol.
- Outfit elke conditioning kamer met een specifieke configuratie van visuele, olfactorische en tactiele stimuli om een onderscheidende context te creëren, zoals beschreven in de stappen 3.3.2 en 3.3.3
- Wijs de helft van de ratten te Context 1 en de andere helft naar Context 2 in een Counterbalanced manier, op basis van ethanol consumptie en voorkeur gemiddeld over de laatste 2 sessies van de kooi toegang ethanol procedure. Raadpleeg de context gebruikt tijdens PDT als Context A. OPMERKING: Elke rat moet alleen ervaren de ene context in deze fase van de opleiding.
- Zorg ervoor dat de olfactorische stimulus is de laatste contextuele stimulans worden toegevoegd aan elke conditionering kamer. Sluit de deuren van de kamer en de geluidremmende kast op olfactorische prikkel bevatten en het minimaliseren van de mingling van verschillende geuren.
- Breng de ratten in de gedrags-trainingsruimte, op te nemen gewicht van iedere rat, en laadt elke rat in zijn aangewezen conditioning kamer.
- Start het computerprogramma dat de volgende reeks gebeurtenissen tijdens elke sessie PDT regelt.
- Op 5 min nadat het programma is afgegeven, verlichten de houselight.
- Presenteer de witte ruis stimulus en de clicker stimulus 16 keer per stuk. Aanwijzen van een van deze auditieve stimuli te zijn van de CS + en de andere als de CS, in een vorkheftruck mode over beide contexten.
- Maak elke CS + en CS-proef last 10 sec.
- Leveren 0,2 ml ethanol in de vloeistof-poort tijdens de laatste 6 seconden van de CS +. Gebruik geen ethanol niet leveren tijdens het CS.
- Maak elke PDT sessie laatste 58 min op het gemiddelde. Presenteer de CS + en de CS-elk op een variabele tijd 67 sec schema.
- Fluïdum entries Record poort gedurende de 10 seconden CS interval (de 10 seconden tijdens presentatie CS), de 10 sec pre-CS interval (de 10 seconden onmiddellijk vóór CS onset), en 10 sec na CS interval (de 10 seconden onmiddellijk volgende CS offset) voor zowel CS + en CS-presentaties, alsmede totaal aantal invoeren fluïdum poort voor de gehele sessie. Ook opnemen de duur van elke poort toegang tijdens deze intervallen.
- Aan het einde van de sessie, schakelt de houselight uitgeschakeld.
- Verwijder ratten uit de kamers, ze terug naar hun kooien, en vervoer ze naar het dier zorginstelling.
- Controleer de vloeistof poorten om ervoor te zorgen dat ratten verbruikt de 3.2 ml ethanol geleverd in elke PDT ssessieschijven.
- Spoel de ethanol uit de polyethyleen buis met een 60 ml spuit met een kleine hoeveelheid water. Vervolgens passeren 60 ml lucht door de slang met behulp van een tweede, lege spuit, om ervoor te zorgen dat het droog is.
- Het reinigen van de apparatuur. Voor de dagelijkse schoonmaak, wassen van de vloerpanelen, afval bakken, en petrischaaltjes. Een keer per week, het reinigen van de hele conditionering kamer. Heeft geurende schoonmaakmiddelen niet gebruiken om te voorkomen dat er ongewenste geuren in de experimentele apparatuur.
- Doorgaan PDT sessies dagelijks tot ratten blijkt stabiel discriminatie in hun haven binnenkomst reacties op de CS + vs CS. OPMERKING: Port aantekeningen in reactie op de CS + moet toenemen met de sessies, terwijl de haven aantekeningen in reactie op de CS-laag moet blijven. Het exacte aantal PDT sessies nodig zijn voor het bereiken van gediscrimineerde geconditioneerde reactie kan variëren, maar, als een gids, een plan op ongeveer 20 sessies.
6 Extinction
- Outfit elke conditioning chamber met een visuele, olfactorische en tactiele stimuli om een context die verschilt van de ene de ratten ervaren tijdens PDT sessies is te creëren. Bijvoorbeeld, als Context 1 werd gebruikt in PDT, configureert u de kamer als Context 2 voor uitsterven sessies. Verwijzen naar de context gebruikt tijdens uitsterven als Context B.
- Gedrag uitsterven sessies identiek aan PDT sessies, maar geen ethanol niet leveren tijdens de CS +.
- Gebruik maken van dezelfde computer programma dat werd gebruikt tijdens PDT voor de CS + en CS-presenteren.
- Om consistentie in fasen van het experiment te houden, laad een lege injectiespuit in de injectiepomp, en laat de pomp ingeschakeld. Zorg ervoor dat de polyethyleen buis niet ethanol bevatten voor uitsterven sessies.
- Doorgaan uitsterven sessies dagelijks tot ratten niet meer tonen gediscrimineerd reageert tussen de CS + en CS. OPMERKING: Port aantekeningen in reactie op de CS + moet geleidelijk afnemen over uitsterven sessies, totdat er geen difference tussen poort aantekeningen in reactie op de CS + en de haven aantekeningen in reactie op de CS. Het exacte aantal uitsterven sessies nodig om te blussen geconditioneerde reactie kan variëren, maar als een gids, een plan op ongeveer 8 sessies.
- Reinig de apparatuur aan het einde van elke sessie, zoals beschreven in stap 5.7.
7 Context-geïnduceerde Vernieuwing Test
- Rust elke conditioning kamer met de visuele, olfactorische en tactiele stimuli om de context die tijdens PDT sessies werd ervaren creëren. Als bijvoorbeeld een bepaald rat ervaren Context 1 in PDT sessies configureren zijn geplaatst zoals Context 1 in de testsessie. Zie de context tijdens de verlenging test Context A.
- Het gedrag van de-context geïnduceerde vernieuwing testen identiek aan PDT sessies, maar geen ethanol niet leveren tijdens de vernieuwing test. Presenteer het
CS + en CS-als voorheen tijdens PDT sessies, maar houden de ethanol.- Gebruik maken van dezelfde computer program dat werd gebruikt tijdens PDT voor de CS + en CS-presenteren.
- Om consistentie in fases te behouden, laadt u een lege injectiespuit in de injectiepomp, en laat de pomp ingeschakeld. Zorg ervoor dat de polyethyleen buis niet ethanol bevatten voor de testsessie.
- Observeer-context geïnduceerde vernieuwing van Pavlov-geconditioneerde alcohol-zoekende gedrag. Opmerking: Deze verlenging effect zal duidelijk zijn door een selectieve toename van het aantal haven aantekeningen in reactie op het CS +, zonder verandering in poortingang gedrag in reactie op het CS opzichte van CS + en CS reageren, waarvan op dat einde van uitsterven training.
- Reinig de apparatuur aan het eind van de sessie, zoals beschreven in stap 5.7.
Representative Results
Intermitterende ethanol toegang in de kooi: Ethanol consumptie (g / kg) en ethanol voorkeur toename tussen sessies van intermitterende ethanol toegang in de kooi, typisch bereiken stabiele niveaus binnen 8 - 12 zittingen (figuur 1). In de dataset figuur 1, stabiele ethanolgebruik gemiddeld over de laatste twee sessies van kooi ethanol toegang varieerde 1,33-6,44 g / kg voor individuele ratten. De kooi ethanolgebruik fase van het experiment kan worden gestopt zodra het g / kg verbruik heeft stilgestaan en ratten worden gehandhaafd op deze stabiele niveau van drinken voor een aantal sessies.
Om gegevens uit deze fase te analyseren, uitvoeren aparte herhaalde maatregelen variantie analyse (ANOVA) over de binnen-subject factor sessie voor ethanol verbruik (g / kg) en ethanol voorkeur.
Schema van-context geïnduceerde vernieuwing procedure: Iedere fase van deexperimentele procedure (PDT, uitsterven, vernieuwing test) wordt geïllustreerd in figuur 2. Zie de afbeelding bijschrift voor verdere details.
Bestrijdingsmaatregelen en data-analyse: In alle gedrags-fasen hieronder beschreven, haventoegang reacties die tijdens de CS + en CS zijn genormaliseerd met betrekking tot basislijn haventoegang reacties-CS pre. Om de genormaliseerde CS maatregelen te creëren, af te trekken van het aantal haven aantekeningen tijdens de pre-CS basislijn interval (de 10 sec onmiddellijk voorafgaand aan het CS begin) van het aantal haven aantekeningen tijdens de presentatie van de CS + en CS. De genormaliseerde CS + en CS-genormaliseerde maatregelen dienen als indicatoren van gedrag specifiek uitgelokt door CS presentaties, boven de uitgangswaarde verhoogd.
Gedrag aparte herhaalde metingen ANOVA met herhaalde intra-individuele factoren van de zitting en CS-type (CS + versus CS) voor de PDT en uitsterven fasen. Voor vergelijkingen tussen fase (PDT, uitsterven, vernieuwenal-test), het gemiddelde gebruik van gegevens over de laatste twee sessies van PDT en uitsterven en de ene sessie van vernieuwing testgegevens in herhaalde metingen ANOVA. Om de follow-up op significante hoofdeffecten en interacties, gebruik post hoc t-toetsen voor onafhankelijke of gepaarde monsters die zijn gecorrigeerd voor meerdere vergelijkingen. Criterium voor significantie wordt vastgesteld op α = 0.05.
PDT: Port toegang reacties op de CS + verhoging over PDT sessies, terwijl haventoegang reacties op de CS blijft laag en stabiel, in het algemeen. Merk op dat de haventoegang reacties op de CS kan in het begin van de sessies van PDT training licht toenemen; echter poort aantekeningen in reactie op de CS stabiliseren op een veel lager niveau dan die in reactie op de CS +. Succesvolle discriminatie blijkt uit een statistisch significante stijging in de haven gegaan tijdens de CS + vergeleken met de CS (figuur 3). Dit resultaat geeft aan dat Pavlov-geconditioneerd alcohol-seeking gedrag heeft zijnen is opgericht om de CS +, maar niet de CS.
Extinction: Port toegang reacties op de CS + geleidelijk afnemen tegenover uitsterven sessies. Haventoegang reacties op de CS blijft laag en stabiel tegenover uitsterven sessies. Idealiter gediscrimineerd reageren wordt afgeschaft door het einde van uitsterven opleiding, zoals blijkt uit het ontbreken van een statistisch significant verschil tussen de haven inzendingen voor de CS + en CS. Het is echter niet ongewoon voor een zekere mate van discriminatie reageren blijven, zelfs na afloop van uitsterven training. In dit geval is het belangrijk dat haventoegang reacties op de CS + verifiëren eind extinctie training statistisch lager dan haventoegang reacties op de CS + begin uitsterven, en aan het einde van PDT (figuur 3) . Dit patroon van resultaten geeft aan dat Pavlov-geconditioneerd alcohol-seeking gedrag aanzienlijk is gedoofd.
Context-geïnduceerde vernieuwing testen: Portbinnenkomst reacties op de CS + verhoging van de context geïnduceerde verlenging proef opzichte CS + port data van eind van uitsterven training. Deze stijging is selectief voor de CS +, als items poort naar het CS ongewijzigd. Bovendien poort gegevens bij CS + statistisch verhoogde in vergelijking met ingangen poort CS-in-context geïnduceerde verlenging proef (figuur 4). Statistische bevestiging van vergelijkingen van CS + data poort tussen uitsterven en testen, evenals vergelijkingen van CS + en CS-inzendingen haven binnen test, geeft een selectieve vernieuwing van Pavlov-airconditioning-alcohol zoekend gedrag veroorzaakt door de alcohol geassocieerd context bij test.
Figuur 1 Escalatie van ethanol consumptie en voorkeur opgewekt door intermitterende ethanol toegang in hun kooi. Mean &# 177; SEM (A) ethanol verbruik (g / kg) en (B) ethanol voorkeur over 12 sessies van intermitterende ethanol toegang in hun kooi. Beide maatregelen doorgaans stijgen tussen sessies en daarna stabiliseren. Stabiele ethanol verbruik gemiddeld over de laatste twee sessies van de kooi ethanol toegang varieerde 1,33-6,44 g / kg voor individuele ratten. Deze gegevens werden verkregen met gebruikmaking van mannelijke Long-Evans ratten drinken 15% (v / v) ethanol.
. Figuur 2 een schematische weergave van de experimentele procedure De procedure bestaat uit drie fasen: Pavlov training discriminatie (PDT), uitsterven, en de context-geïnduceerde vernieuwing test. Tijdens elke sessie PDT, ratten ontvangt 16 proeven van een auditieve geconditioneerde stimulus (CS +) dat de levering van ethanol en 16 proeven van signaleneen tweede auditieve stimulus (CS) die niet is geassocieerd met ethanol levering. PDT sessies vinden plaats in Context A, bestaande uit een specifieke configuratie van visuele, olfactorische en tactiele stimuli. Tijdens uitsterven sessies, die worden uitgevoerd in Context B, bestaande uit een ander set van visuele, olfactorische en tactiele stimuli, de CS + en CS worden gepresenteerd, maar ethanol wordt ingehouden. Voor de context-geïnduceerde vernieuwing test worden ratten terug naar Context A, en de CS + en CS worden gepresenteerd zonder ethanol. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Figuur 3 Verwerving en uitsterven van gediscrimineerd Pavlov-geconditioneerd reageren voor ethanol. Gemiddelde ± SEM genormaliseerde poort inzendingen made tijdens de CS + en CS-over PDT (sessies 1-18) in Context A en uitsterven (sessies 19-26) in Context B. Deze gegevens werden verkregen met behulp van mannelijke Long-Evans ratten getraind met 10% (v / v) ethanol als de ongeconditioneerde stimulus (US), dat werd gepresenteerd in samenwerking met de CS + tijdens PDT. * P <0,05, CS + en CS. Afbeelding oorspronkelijk gepubliceerd in Chaudhri, Sahuque, en Janak (2008). Gebruikt met toestemming van Elsevier.
Figuur 4-Context geïnduceerde vernieuwing van Pavlov-geconditioneerd reageren voor ethanol. Gemiddelde ± SEM genormaliseerde poort aantekeningen tijdens de CS + en CS in PDT sessies in Context A, uitsterven sessies in Context B, en vernieuwing testen in Context A. De gegevens zijn gemiddeld over de laatste twee sessies voor PDT en uitsterven; verlenging test is een enkele sessie. Dezegegevens werden verkregen met gebruikmaking van mannelijke Long-Evans ratten getraind met 10% (v / v) ethanol als de ongeconditioneerde stimulus (US) die werd gepresenteerd in samenwerking met de CS + tijdens PDT. * P <0,05; ** P <0,001, CS + en CS. #p <0,05, CS + PDT versus CS + uitsterven. ^ P <0,05, CS + uitsterven versus CS + test. Afbeelding oorspronkelijk gepubliceerd in Chaudhri, Sahuque, en Janak (2008). Gebruikt met toestemming van Elsevier.
Discussion
De resultaten van deze procedure blijkt dat discrete prikkels uit de omgeving die routinematig begeleiden alcohol levering de capaciteit om aan alcohol zoekgedrag rijden kan verwerven. Ze tonen ook aan dat contextuele stimuli geassocieerd met voorafgaande beschikbaarheid of afwezigheid van alcohol kan begeleiden geconditioneerd gedragsmatige reacties op discrete alcohol-voorspellende cues.
Kritische stappen in het protocol
Contexten in de huidige taak op te nemen prikkels die van buiten de rat zijn. Echter, de interoceptive toestand van de rat bij-test ook een 'context' die van invloed kunnen de vernieuwing 20 vormen. Het is daarom belangrijk om ratten te wennen aan de procedures, kan plaatsvinden voordat de vernieuwing testen en veranderen hun interoceptief staat, zoals intracraniële microinfusions of systemische injecties. Bovendien, gewenning aan microinfusions of systemische injecties moeten voorafgaand aan zowel uitsterven en PDT s worden uitgevoerdessions, dergelijke procedures moet worden voorkomen geassocieerd met een bepaalde fase van het experiment.
Temporele parameters, zoals CS duur, CS-Amerikaanse interval en interval tussen (ITI), zijn reeds lang bekend om invloed geconditioneerd reageren in een verscheidenheid van conditionering paradigma's 21-26. Evenzo kan temporele parameters van de observatie van de vernieuwing effect in onze procedure beïnvloeden. Elke set van andere dan de in het protocol vermelde parameters moeten experimenteel worden gevalideerd in pilots alvorens tot hen in dienst in grotere onderzoeken.
Modificaties en het oplossen van problemen
Eerder onderzoek heeft aangetoond dat de hoeveelheid ethanol die ratten consumeren in de kooi kan variëren als functie van de zijde van die ratten worden aangeschaft 17,27. Leverancier is dus een belangrijke overweging voor deze fase van de studie. Ook moet de keuze van stam rat medezorgvuldig nsidered, want er zijn tal van meldingen van stam verschillen in ethanol verbruik 28-31.
Eerder werk in een aversieve conditionering paradigma heeft aangetoond dat de ontwikkelingsleeftijd van ratten beïnvloedt de waarneming van de vernieuwing van een Pavlov geconditioneerde angstreactie 32. Het ontbreken van een renewal in zeer jonge ratten (jonger dan postnatale dag 20) is voorgesteld als gevolg van verminderde codering van contextuele informatie 33. De ontwikkelingsleeftijd van ratten wordt in de onderhavige procedure dient rekening te worden gehouden.
Vernieuwing van Pavlov geconditioneerde alcohol-seeking gedrag is waargenomen bij 10% 9,16, 15% 14, of 20% 15 ethanol oplossingen werden gebruikt tijdens de kooi ethanol toegang en PDT fasen van het experiment. Onderzoekers kunnen een van deze concentraties van ethanol te gebruiken voor de vaststelling van deze procedure in hun laboratoies.
Tijdens de overname van Pavlov training discriminatie is het belangrijk om vloeistofpoorten controleren na elke sessie om ervoor te zorgen dat alle ethanol die werd afgeleverd is verbruikt. Het verlaten ratten in de conditionering kamers nog 10 - 15 min na elke sessie echter al in PDT worden gedaan consumptie van ethanol die niet werd verbruikt tijdens de sessie stimuleren. Het aantal ratten verlaten verbruikte ethanol in de havens moeten afnemen naarmate PDT vordert. Als tegen het einde van PDT ratten zijn ofwel (a) het niet nuttigen van alle ethanol en / of (b) die niet op de CS + dan deze onderwerpen moet worden geschrapt uit de studie. De meeste ratten betrouwbaar meer reageren op de CS + dan de CS. Echter, sommige ratten reageren op een hoog niveau aan beide signalen, waardoor niet zichtbaar bewijs van discriminatie. Ratten die show hoog te reageren op zowel de CS + en CS tijdens PDT worden niet geschrapt uit het onderzoek. Onze ervaring is dat deze onderwerpen tonen opmerkelijke discriminatietijdens de eerste sessie extinctie bij afwezigheid van ethanol, wat suggereert dat de hoge reactie op het CS tijdens PDT worden door de aanwezigheid van ethanol in de vloeistofpoort. Deze onderwerpen ook de neiging om robuuste verlenging effecten gebleken.
Beperkingen van de procedure
Omdat de verlenging wordt uitgevoerd in afwezigheid van ethanol, geconditioneerde poort data opgewekt door de CS + geleidelijk afnemen in de testsessie. Daarom is het totale bedrag van het gedrag wordt gegenereerd op test, waartegen experimenteel geïnduceerde veranderingen kunnen worden beoordeeld, is vrij laag. Omdat in deze taak reageren meestal hoger bij aanvang tegen het einde van de testsessie, is het belangrijk om het effect van experimentele manipulaties op geconditioneerde reageren op een trial-by-proef te onderzoeken.
Vermeldingen in de vloeistof reservoir vormen de belangrijkste afhankelijke maatregel in deze taak. Er kan echter een verkeerde poort ingang regi zijnfeerd als een dier dicht genoeg om de vloeistof houder op de infraroodstraal over de opening van de vloeistofpoort met snorharen breken. Terwijl occasionele, foutieve reacties zijn duidelijk als een dramatische toename van de totale haven invoeringen opzichte gedrag aan van voorafgaande sessies. Video-opnamen van de dieren zou de opsporing van mogelijke foutieve reacties te vergemakkelijken, en zorgen voor een meer verfijnde analyse van het gedrag vertoond wordt door de ratten gedurende training en testen.
Betekenis van de techniek met betrekking tot de bestaande / alternatieve methoden
Context-geïnduceerde vernieuwing van drug-zoekend gedrag is grotendeels onderzocht met behulp van een instrumentele conditionering taak waarin de primaire afhankelijke variabele is een operante respons, zoals een hefboom drukt 8,34 of neus porren 12. In de huidige procedure, de drug die reactie is 'geconditioneerd aanpak' van de vloeistof-poort die wordt opgewekt door de presentaties vande CS +. Dit antwoord is waarschijnlijk verworven door Pavlov leren, dat is het leerproces dat de vorming van associaties tussen prikkels uit de omgeving en de farmacologische effecten van drugs van misbruik bij de mens bemiddelt.
Toekomstige toepassingen
Deze taak kan worden gebruikt in combinatie met neurofarmacologie, optogenetics en neurochemistry naar de neurale mechanismen die betrokken zijn bij-context geïnduceerde vernieuwing van Pavlov-airconditioning-alcohol zoekgedrag 16 bestuderen. Daarnaast kunnen gedrags-en neurale mechanismen die de acquisitie en extinctie van Pavlov-geconditioneerde alcohol-seeking gedrag te reguleren worden onderzocht. Ten slotte kan deze taak worden gebruikt om manipulaties van uitsterven die vernieuwing zou kunnen voorkomen, een belangrijke richting voor translationeel onderzoek gericht op het verminderen van de gevolgen van drugsgebruik geassocieerd milieu-contexten op reactiviteit van drugs voorspellende signalen na cue exposure-therapie in menselijke addi verkennencts.
Disclosures
Alle experimentele procedures werden goedgekeurd door de Concordia University Animal Research Ethics Committee en zijn in overeenstemming met de richtlijnen van de Canadese Raad over Animal Care. De open access publiceren van dit artikel werd mede mogelijk gemaakt door sponsoring van Med Associates Inc
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Heavy-duty utility cart | Rubbermaid | #4520-88 | Used to transport rats in their home cage from the colony room to the behavior room or other facilities |
| Rats, Long-Evans | Harlan | Rats weighed 220-240 g on arrival | |
| Ohaus scale | Fisher | #S402421 | For weighing rats; tare the bottom of a plastic container first, then put the rat in it to weigh it |
| Beta-chips, aspen | Harlan | #7090A | Bedding for home cage |
| Nylabone | Bio-Serv | #K3580 | Enrichment provided in the home cage |
| Autoclavable rodent chow | Agribrands, Charles River | #5075 | For feeding rats |
| Wire bar cage lid | Ancare | #R20SS2B | Custom made with two slots for bottles |
| Cage bottom | Ancare | #R20PC | To house rats |
| Stoppers | Ancare | #8.5 | Rubber stoppers to occlude opening in water bottles & graduated cylinders; goes with ball point sipper tubes |
| Ball point tubes, 1.5" length | Ancare | #TD-99 | Inserted in stoppers, enables rats to drink from water bottles and graduated cylinders |
| Water bottles | Ancare | #FSPC8HT | 473 ml (16 oz) capacity, needs to be occluded with stopper |
| Graduated cylinders, 100 ml | Fisher | #0300741 | To contain ethanol during alcohol exposure in the home cage; spouted end needs to be cut off to enable occlusion with stoppers |
| Mettler scale | Mettler Toledo | #MS6001S | For weighing water bottles and ethanol cylinders |
| Polyethylene tubing, 1/32" inner diameter, 1/32" wall thickness, 3/32" outside diameter | Fisher | #14-169-1A | To connect 20 ml ethanol syringe to fluid port |
| Needle, 18 g, 1.5" length | Fisher | #B305199 | To connect polyethylene tubing to ethanol syringes; needs to be filed |
| Syringes, 20 ml, Luer-Lok non-sterile | Fisher | #1482316J | To contain ethanol on the fluid pumps; needs to be connected to the polyethylene tubing by a 18 G 1 1/2 needle |
| Syringes, 60 ml, Luer-Lok non-sterile | Fisher | #14-820-11 | To flush polyethylene tubing after PDT sessions |
| Single speed syringe pump, 3.33 rpm | Med Associates Inc. | #ENV-018MD | To hold 20 ml ethanol syringes and deliver ethanol |
| Fluid port | Med Associates Inc. | #ENV-254-CB | To enable ethanol delivery during PDT sessions; connected to ethanol syringes with polyethylene tubing |
| Port entry infrared detector | Med Associates Inc. | #ENV-215M | Fixed on both sides of fluid port; need 2 per fluid port |
| Houselight, 28 V, 100 mA | Med Associates Inc. | #ENV-135M | Provides general lighting in conditioning chamber |
| Clicker module | Med Associates Inc. | #ENV-225SM | Auditory stimulus for conditioning chamber |
| White noise generator with speaker | Med Associates Inc. | #PHM-100 | Auditory stimulus for conditioning chamber |
| Bar floor | Med Associates Inc. | #ENV-009A-GF | To go with modular test chamber |
| Bench coat, absorbent | VWR | #89126-790 | Absorbent paper to put in metal tray, needs to be cut to fit the metal tray |
| Polycarbonate sheet, 1/8" thick, 12-5/8" x 10" | Johnston Plastics | #30102515 | To make smooth transparent floor insert used for context 1. Needs to be cut in 11.5" x 12.25" pieces |
| Aluminium sheet perforated, 0.063" thick, 48" x 96", 0.250" holes x 0.375" centers | Anica Steel | To make perforated floor insert used for context 2. Needs to be cut in 11.5" x 12.25" pieces | |
| Black cardboard, 0.053" thick, 28" x 44" | Omer DeSerres | #P1909 | To construct panels covering the ceiling, door and back wall of the conditioning chamber in context 1. Needs to be cut to size. Each chamber needs three panels measuring approximately 11.5" x 13.25". The panels can be joined by the narrower side using duct tape. |
| All-purpose strength duct tape, 1.88" x 45 yd. | Duck Tape | Adhesive material to connect the black cardboard panels used to cover the back wall, ceiling and door in context 1. | |
| Modular test chamber | Med Associates Inc. | #ENV-009A | Conditioning chamber |
| Sound attenuating cubicles | Med Associates Inc. | #ENV-200R3AM | Comes with installed 28 V DC fan (#ENV-025F) |
| Petri dish | Fisher | #08748B | Bottom only, to contain the sprayed solution that provides the odor stimulus; needs to be centered in the metal tray in conditioning chambers |
| PCI interface package | Med Associates Inc. | #DIG-700P2-R2 | Connects tabletop interface cabinet to computer; includes 1 interface card, 1 Decode card, 1 ribbon cable and 1 28 V DC power cable |
| Large tabletop cabinet and power supply | Med Associates Inc. | #SG-6510D | Used to contain the 12 cards included in the SmartCrtrl 8 Input, 16 Output package |
| SmartCtrl 8 Input, 16 Output package | Med Associates Inc. | #DIG-716P2 | Used to connect and control the devices in the conditioning chamber. The package includes all the cables, the interface module and the connection panel. |
| Med PC IV software | Med Associates Inc. | #SOF-735 | Software to run programs. Needs to be installed on the computer. |
| Monitor LG, 19" LCD | Concordia computer store | #W1942TQ-BF | Computer monitor; to go with computer running Med PC IV |
| HP Z200 tower workstation | Concordia computer store | #BZ788US#ABA | Computer on which Med PC IV is run |
| Benzaldehyde, ≥99% | Les produits chimiques OMEGA Chemical Company Inc. | #B37-50 | Dilute in tap water for almond context odor |
| Lemon oil, cold pressed, California | Sigma Aldrich | #W262528-1KG-K | Dilute in tap water for lemon context odor |
| Ethyl alcohol, 95% | Commercial Alcohols | Dilute in tap water to desired concentration |
References
- Field, M., Duka, T. Cues paired with a low dose of alcohol acquire conditioned incentive properties in social drinkers. Psychopharmacology (Berl). 159, 325-334 (2002).
- Litt, M. D., Cooney, N. L., Morse, P. Reactivity to alcohol-related stimuli in the laboratory and in the field: predictors of craving in treated alcoholics). Addiction. 95, 889-900 (2000).
- Pomerleau, O. F., Fertig, J., Baker, L., Cooney, N. Reactivity to alcohol cues in alcoholics and non-alcoholics: implications for a stimulus control analysis of drinking. Addict Behav. 8, 1-10 (1983).
- Sinha, R. New findings on biological factors predicting addiction relapse vulnerability. Curr Psychiatry Rep. 13, 398-405 (2011).
- Conklin, C. A. Environments as cues to smoke: implications for human extinction-based research and treatment. Exp Clin Psychopharmacol. 14, 12-19 (2006).
- Conklin, C. A., Robin, N., Perkins, K. A., Salkeld, R. P., McClernon, F. J. Proximal versus distal cues to smoke: the effects of environments on smokers' cue-reactivity. Exp Clin Psychopharmacol. 16, 207-214 (2008).
- Janak, P. H., Chaudhri, N. The potent effect of environmental context on relapse to alcohol-seeking after extinction. Open Addict J. 3, 76-87 (2010).
- Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Cone, J. J., Janak, P. H. Reinstated ethanol-seeking in rats is modulated by environmental context and requires the nucleus accumbens core. Eur J Neurosci. 28, 2288-2298 (2008).
- Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Janak, P. H. Context-induced relapse of conditioned behavioral responding to ethanol cues in rats. Biol Psychiatry. 64, 203-210 (2008).
- Crombag, H. S., Shaham, Y. Renewal of drug seeking by contextual cues after prolonged extinction in rats. Behav Neurosci. 116, 169-173 (2002).
- Fuchs, R. A., Eaddy, J. L., Su, Z. I., Bell, G. H. Interactions of the basolateral amygdala with the dorsal hippocampus and dorsomedial prefrontal cortex regulate drug context-induced reinstatement of cocaine-seeking in rats. Eur J Neurosci. 26, 487-498 (2007).
- Marchant, N. J., Hamlin, A. S., McNally, G. P. Lateral hypothalamus is required for context-induced reinstatement of extinguished reward seeking. J Neurosci. 29, 1331-1342 (2009).
- Zironi, I., Burattini, C., Aicardi, G., Janak, P. H. Context is a trigger for relapse to alcohol. Behav Brain Res. 167, 150-155 (2006).
- Sciascia, J. M., Mendoza, J., Chaudhri, N. Blocking dopamine D1-like receptors attenuates context-induced renewal of Pavlovian-conditioned alcohol-seeking in rats. Alcohol Clin Exp Res. 38, 418-427 (2014).
- Chaudhri, N., Woods, C. A., Sahuque, L. L., Gill, T. M., Janak, P. H. Unilateral inactivation of the basolateral amygdala attenuates context-induced renewal of Pavlovian-conditioned alcohol-seeking. Eur J Neurosci. 38, 2751-2761 (2013).
- Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Schairer, W. W., Janak, P. H. Separable roles of the nucleus accumbens core and shell in context- and cue-induced alcohol-seeking. Neuropsychopharmacology. 35, 783-791 (2010).
- Sparks, L. M., Sciascia, J. M., Ayorech, Z., Chaudhri, N. Vendor differences in alcohol consumption and the contribution of dopamine receptors to Pavlovian-conditioned alcohol-seeking in Long-Evans rats. Psychopharmacology (Berl). 231, 753-764 (2014).
- Simms, J. A., et al. Intermittent access to 20% ethanol induces high ethanol consumption in Long-Evans and Wistar rats. Alcohol Clin Exp Res. 32, 1816-1823 (2008).
- Wise, R. A. Voluntary ethanol intake in rats following exposure to ethanol on various schedules. Psychopharmacologia. 29, 203-210 (1973).
- Bouton, M. E., Westbrook, R. F., Corcoran, K. A., Maren, S. Contextual and temporal modulation of extinction: behavioral and biological mechanisms. Biol Psychiatry. 60, 352-360 (2006).
- Pavlov, I. Conditioned reflexes: an investigation of the physiological activity of the cerebral cortex. , Oxford University Press. Oxford, England. (1927).
- Gibbon, J., Baldock, M. D., Locurto, C., Gold, L., Terrace, H. S. Trial and intertrial durations in autoshaping. J Exp Psychol Anim Behav Process. 3, 264-284 (1977).
- Holland, P. C. CS-US interval as a determinant of the form of Pavlovian appetitive conditioned responses. J Exp Psychol Anim Behav Process. 6, 155-174 (1980).
- Stein, L., Sidman, M., Brady, J. V. Some effects of two temporal variables on conditioned suppression. J Exp Anal Behav. 1, 153-162 (1958).
- Coleman, D. A., Hemmes, N. S., Brown, B. L. Relative durations of conditioned stimulus and intertrial interval in conditioned suppression. J Exp Anal Behav. 46, 51-66 (1986).
- Schwarz-Stevens, K. S., Cunningham, C. L. Pavlovian conditioning of heart rate and body temperature with morphine: effects of CS duration. Behav Neurosci. 107, 1039-1048 (1993).
- Palm, S., Roman, E., Nylander, I. Differences in voluntary ethanol consumption in Wistar rats from five different suppliers. Alcohol. 45, 607-614 (2011).
- Gauvin, D. V., Moore, K. R., Holloway, F. A. Do rat strain differences in ethanol consumption reflect differences in ethanol sensitivity or the preparedness to learn. Alcohol. 10, 37-43 (1993).
- Goodwin, F. L., Amit, Z. Relative taste thresholds for ethanol, saccharin, and quinine solutions in three strains of rats nonselected for ethanol: a comparative study. Exp Clin Psychopharmacol. 8, 216-224 (2000).
- Goodwin, F. L., Bergeron, N., Amit, Z. Differences in the consumption of ethanol and flavored solutions in three strains of rats. Pharmacol Biochem Behav. 65, 357-362 (2000).
- Wilson, A. W., Neill, J. C., Costall, B. Strain differences in ethanol preference and reinforced behaviour: a comparison of two-bottle choice and operant self-administration paradigms. Behav Pharmacol. 8, 37-46 (1997).
- Yap, C. S., Richardson, R. Extinction in the developing rat: an examination of renewal effects. Dev Psychobiol. 49, 565-575 (2007).
- Carew, M. B., Rudy, J. W. Multiple functions of context during conditioning: a developmental analysis. Dev Psychobiol. 24, 191-209 (1991).
- Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Janak, P. H. Ethanol seeking triggered by environmental context is attenuated by blocking dopamine D1 receptors in the nucleus accumbens core and shell in rats. Psychopharmacology (Berl). 207, 303-314 (2009).
