Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Метилнитрозомочевины (МНУ) -индуцированных дегенерации сетчатки и регенерации в данио рерио: гистологические и функциональные характеристики

doi: 10.3791/51909 Published: October 20, 2014

Summary

Здесь мы показываем, количественное сетчатки де- и регенерации и ее влиянии на зрительные функции с использованием н-метил-N -nitrosourea в взрослых данио. Вслед за распространением во внутреннем ядерном слое снижения остроты зрения и снижение числа фоторецепторов. Полный морфологический и функциональный регенерации произошло через 30 дней после первоначального лечения.

Abstract

Дегенеративных заболеваний сетчатки, например пигментный ретинит, с результате счет повреждения фоторецепторов для большинства потери зрения в индустриальном мире. Животные модели ключевое значение для изучения таких заболеваний. В этой связи фоторецепторов конкретных токсин N-метил-N -nitrosourea (МНУ) широко используется в грызунов фармакологически индуцировать дегенерацию сетчатки. Ранее мы установили МНУ-индуцированной сетчатки модель дегенерации в данио, другой популярной моделью системы в визуальном исследовании.

Увлекательный разница млекопитающим является стойким нейрогенез во взрослом сетчатке рыбок данио и его регенерации после повреждения. Для количественной оценки этого наблюдения мы использовали измерения остроты зрения в взрослых данио. Таким образом, оптокинетическим рефлекс был использован, чтобы следовать функциональные изменения в не-анестезированных рыбы. Это была дополнена гистологии, а также иммуногистохимического stainiнг для апоптоза (TUNEL) и пролиферации (PCNA) соотнести развивающимся морфологические изменения.

Таким образом, апоптоз фоторецепторов происходит через три дня после обработки НММ, за которым следует заметному снижению клеток во внешнем ядерном слое (ОНЛ). После этого, пролиферация клеток во внутреннем ядерном слое (INL) и ONL наблюдается. В данном случае мы показали, что не только полное гистологическое, но и функциональный регенерации происходит в течение времени течение 30 дней. Теперь мы иллюстрируют способы количественно и следить за данио сетчатки де- и регенерации с помощью MNU в видео-формате.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Видение является наиболее существенным смысл для человека и его обесценения имеет высокую социально-экономические последствия. В развитых странах мира, дегенеративных заболеваний сетчатки являются ведущей причиной потери зрения и слепоты среди пожилых людей 1. Причиной большинства дегенеративных заболеваний сетчатки лишь частично понял и лечебная решения, чтобы восстановить утраченное зрение очень ограничены. Пигментный ретинит является типичным примером сетчатки дегенеративных заболеваний с первичным потери фоторецепторов 2-3. N-метил-N -nitrosourea (MNU) индуцирует дегенерацию сетчатки и поэтому широко используется в грызунов моделировать заболевания со смертью первичного фоторецепторов клеток 4. Это алкилирующий агент и приводит к доброкачественных и злокачественных опухолей, которые обычно появляются через несколько месяцев после заражения 5-7. Кроме того, это приводит к смерти клетки фоторецептора конкретных пределах краткосрочного периода наблюдения. Таким образом, потеря сетчатки слоя structuповторно и значительное истончение сетчатки наблюдалось в зависимости от концентрации. Сетчатки глиальных клеток активировались, но никаких изменений в пигментного эпителия сетчатки (ПЭС) не были найдены. Эндоплазматической сети (ER) связанные со стрессом апоптоз, кажется, основным каналом НММ действий в сетчатке 8.

Мы недавно ввели MNU как химической модели индуцировать дегенерацию фоторецепторов у рыбок данио 9. Среди других причин, данио (Danio rerio) стало важным в визуальном исследовании из-за сходства его зрительной системы в том, что из других позвоночных 10. Внешняя сетчатка содержит фоторецепторы, которые могут быть сгруппированы в четырех различных типов колбочек с пиковыми чувствительности в ультрафиолетовой, короткого, среднего и длительного длины волны видимого спектра и одной штанги типа фоторецепторов. Во внутреннем ядерном слое (INL), клеточных тел биполярных, горизонтальных и амакринных интернейронов встречаются, как вэйл как клетки сомы Мюллера глиальные клетки. Во внешнем слое плексиформной (ССО) синаптические контакты между фоторецепторов и внутренней сетчатки образуются, в то время как клетки слоя ближайший к линзе является слое ганглиозных клеток (ГХ), какие компоненты образуют длинные аксоны, содержащие зрительный нерв и зрительный тракт . Синаптических контактов между ганглиозных клеток и клеток во внутреннем ядерном слое образуются во внутреннем слое плексиформной (IPL) 11. НПП лежит вне нейросенсорной сетчатки и окружает наружных сегментов фоторецепторов с длинной апикальной микроворсинок 12. Кроме того, данио очень регенеративная и в состоянии вырастить поврежденного мозга, сетчатки, спинной мозг, сердце и другие ткани 13. При возникновении повреждения сетчатки, клетки в INL, которые, как считается, Мюллер клетки, активизируются и есть потенциал, чтобы дифференцироваться в различных типов клеток сетчатки. Кроме того, они также порождают стержневые клетки-предшественники, которые расположены в ONL. Другой такurce, которая поставляет на сетчатку взрослых данио с новых клеток является мерцательная маргинальной зоны. Этот источник необходим, чтобы обеспечить постоянную плотность стержневых фоторецепторов в постоянно растущей данио глаза 14.

Эта модель НММ можно использовать в качестве простого и воспроизводимым подход дегенерации / регенерации для ткани сетчатки. Благодаря их сходству биологических процессов у рыбок данио и у людей это может открыть двери для идентификации вовлеченных пути клеточной гибели и экранировать потенциальных ноотропных препаратов. Основываясь на предыдущем исследовании от нашей группы, мы сейчас иллюстрируют способы этого МНУ-индуцированной данио модели сетчатки де- и последующей регенерации включая функциональные изменения с соответствии лабораторный видео 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Все эксперименты придерживался Заявление для использовании животных в офтальмологической и Vision Research Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии (ARVO).

1. Животные

  1. Поддержание дикого типа данио (Danio rerio) от АВ (Орегон) штамма в возрасте от 6-12 месяцев при стандартных условиях в воде с температурой 26,5 ° С и 14/10 ч цикле свет / темнота 15.
  2. Следуйте инструкциям по уходу животное из участвующих учреждений для экспериментов на животных после утверждения кантона ветеринарии.

2 МНУ Лечение

  1. Подготовка воды, содержащей 150 мг / л сухого вещества N-метил-N -nitrosourea (НММ). ВНИМАНИЕ! МНУ токсичен; может вызвать рак, наследственные генетические нарушения или вред нерожденному ребенку.
  2. Инкубируйте данио в воде, содержащей МНМ в течение 60 мин при комнатной температуре.
  3. Промыть данио быстро спресная вода и положить рыбу на новый аквариуме без НММ. Поддержание рыбу в стандартных условиях сколь угодно долго для экспериментов.

3 Измерение остроты зрения

  1. Запустите систему оптомоторных, выберите 'тестирование' из меню и установите параметры, которые "Простая лестница", "Острота (Freq)" и "Рандомизированное / Отдельная" 16.
  2. Установите инфузионную бутылку с 500 мл воды около 1 м над системой оптомоторной.
  3. Поместите один данио в экзаменационном камеры и подключить его к бутылке инфузии. Поместите экспертизы камеру в системе оптомоторной.
  4. Начните измерение и наблюдать за движением глаз в режиме реального времени на экране компьютера. Таким образом, положительный ответ («да») определяется как последовательных саккад в правильном направлении, в то время как отрицательного ответа ("нет") представляет случайные движения глаз, похожие на те, наблюдаемых с вокзалаичных решетки. Если глазах данио выставке три или более последующие оптокинетического ответы (ОКР), нажмите «Да»; если нет, нажмите "нет".
  5. Извлеките остроты зрения, которая была рассчитана с помощью программного обеспечения, определяя порог пространственной частоты оптокинетического стимула, в разделе "Результаты" в меню.

4 гистологии

  1. Усыпить данио передозировкой этил 3-аминобензоата метансульфоната (200-300 мг / л) и enucleate глаза.
  2. Закрепить целые глаза в 4% параформальдегида (PFA) в фосфатном буферном солевом растворе (PBS) при 4 ° С в течение 12 ч и затем обезвоживают образцов в серии градуированных спирта.
  3. Вставить образцы в парафин, сократить 5 мкм разделы через зрительного нерва (ДЗН) и смонтировать их на стеклах.
  4. Пятно deparaffized разделы парафиновые с hemalum в течение 4 мин и окунуть слайды два раза в дистиллированной воде с последующим 0,2% соляной ациD и 0,8% аммиака. Пятно секции с эозином в течение 3 мин после развития окрашивания hemalum в водопроводной воде в течение не менее 10 мин (H & E).
  5. Вставить обезвоженные слайды в монтаже среды и наблюдать слайды под световым микроскопом.

5 Иммуногистохимия

  1. Терминал дезоксинуклеотидилтрансферазы дУТФ ник конец маркировка (TUNEL)
    1. Инкубируйте парафина секции с 20 мкг / мл протеиназы К при комнатной температуре в течение 15 мин. Промыть срезов три раза Трис-солевом буферном растворе (TBS) в течение 5 мин каждый.
    2. Инкубируйте секции с 50 мкл реакционной смеси TUNEL (10% раствор маркировки и 90% раствора фермента) во влажной камере при 37 ° С в течение 60 мин. Промыть три раза TBS в течение 5 мин каждый.
    3. Установите слайды с монтажной среды, содержащей DAPI и наблюдать слайды под флуоресцентным микроскопом.
  2. Пролиферирующие сотовый ядерного антигена окрашивание (PCNA)
    1. Кипение парафина секции в поисковой антигена буфера (Трис-ЭДТА + 0,05% Tween 20, рН 9,0) в течение 3 мин и мыть три раза TBS в течение 5 мин каждый. Блок 100 мкл блокирующего раствора (TBS + 10% козья сыворотка нормально + 1% бычьего сывороточного альбумина, pH 7,6) при комнатной температуре в течение 1 часа.
    2. Пятно с анти-PCNA первичными антителами в разведении 1: 200 в увлажненной камере при 4 ° С в течение ночи. Промыть три раза TBS + Твин 20 в течение 5 мин каждый.
    3. Завершение обнаружения с соответствующими вторичными антителами в разведении 1: 500 при комнатной температуре в течение 1 часа.
    4. Установите слайды с монтажной среды, содержащей DAPI и наблюдать слайды под флуоресцентным микроскопом.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Острота зрения:

Экспериментальная установка [пространственная частота: 0,042 круги / степень (C / D); контрастируют: 100%; Скорость дрейфа: 20 градусов / секунду (г / SRC); подсветка яркость: 152 кд / м 2] данного исследования позволили ОКР оценку взрослых данио. Средняя продолжительность измерения В.А. было около 5 - 10 минут для каждого рыбок данио, которые терпимо процедуру хорошо. Острота зрения до воздействия НММ была 0,577 ± 0,014 циклов / степень (C / D). Рисунок 1 показывает остроту зрения курс после применения 150 мг / л НММ. Начиная с 1 день, измерения показали заметное снижение остроты зрения, достигая минимальных значений на 3-й день, начиная с 8 дня, повышение остроты зрения происходит, показывая полное восстановление остроты зрения 30 дней после воздействия НММ. Для статистического анализа с односторонним ANOVA с последующим многократным сравнительного теста Бонферрони была применена. Таким образом, различия в остроты зрения betweан базового и измерений после лечения был значимым для 1, 3, 5, и 8 (р <0,001, каждый), но не в течение нескольких дней 15 и 30.

Гистологическое оценка дегенерации сетчатки:

H & E окрашивание используют для количественного морфологические изменения в одном глазу данио на момент времени (п = 3) в начале исследования, а также 3, 8, 15, и 30 дней после лечения (рисунок 2). Гистологический проводили, как описано Tappeiner и соавт. 9. Таким образом, дегенерация сетчатки в том числе нарушению INL и полости формирования ONL наблюдалось, начиная с 3-й день из клеток в слое ганглиозных клеток (GC) число, внутренний ядерный слой (INL) и число стержня (RN) и конус (CN) фоторецепторов были определены вручную 250 мкм от центра ДЗН на обеих сторонах секции глаз (размер рассчитывали относится к области сетчатки секции 100 мкм длины). Вслед за дегенерацию 30дней после обработки с максимумом потери стержня ин найденной на 8 день, таким образом, количество стержневых фоторецепторов (RN), снизилась до 82% на 3-й день, 71% на 8-й день и 77% на 15 дней и 30 от первоначального количества . Кроме того, накопление клеток кластеров было обнаружено, главным образом, в INL.

Количественная оценка апоптоза:

Окрашивание TUNEL проводили в соответствии с изготовителем (на месте гибели клеток обнаружения Kit; Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Швейцария). Наблюдаемое дегенерация сетчатки после лечения НММ была вызвана апоптоза. Это было выявлено положительной TUNEL окрашивания в разных слоев клеток в сенсорной сетчатки. Для количественной оценки, количество TUNEL-положительных клеток было определено вручную в двух областях сетчатки длиной 450 мкм каждый, начиная с периферии сетчатки. Таким образом, большинство TUNEL-положительных клеток было обнаружено в ONL на 3 день Тем не менее, умирающие клетки были также видно на INL на тот момент времени (Рисунок 3). Нет соответствующих TUNEL-позитивные клетки не были обнаружены до лечения.

Количественная оценка клеточной пролиферации:

Для оценки пролиферации после гибели клетки, сетчатка окрашивали для ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA), как описано Tappeiner и соавт. 9. Для количественной оценки, количество PCNA-положительных клеток было определено вручную, как описано выше. Гибель клеток с последующим индуцированной пролиферации рассматривается как PCNA-положительных клеток (рисунок 4). Таким образом, максимальная пролиферирующих клеток измеряли в INL на 5 день Дополнительно, клетки в основном ONL (стержней) не показали положительное окрашивание на PCNA до конца исследования (30 день). Несколько PCNA-положительных клеток в цилиарной краевой зоны были обнаружены прежде, и на всех временных точках после лечения.

д / 51909 / 51909fig1highres.jpg "ширина =" 500 "/>
Рисунок 1:. Острота зрения Измерение остроты зрения в взрослых данио после применения 150 мг / л НММ. Значительное снижение остроты зрения с минимумом в 3 день после лечения последовало полного выздоровления, начиная от 5-й день, до 30 дня (не имею в виду ± SD, п = 3).

Рисунок 2
На рисунке 2: Гистологический Примеры H & E окрашенных гистологических срезах данио сетчатки в начале исследования (а) и 3 (В), 8 (С), 15 (D), и 30 (е) дней после обработки НММ.. CN, конус ядра; Р-н, стержневые ядра; INL, внутренний ядерный слой; GC, ганглий слой клеток. Стрелками клеточные кластеры в INL. Шкала бар составляет 50 мкм.


Рисунок 3:. TUNEL-позитивных клеток TUNEL-позитивных клеток (красные) в сетчатке рыбок данио на 3-й день после лечения НММ. Клетки в основном расположены в ONL но также были найдены в INL. Панель изображает контроль, в то время как панель B показывает изображения после обработки НММ. Шкала бар показывает 50 мкм.

Рисунок 4
Рисунок 4:. PCNA-положительных клеток PCNA-положительных клеток (красные) в данио сетчатки на 5-й день после обработки НММ по сравнению с контрольным образцом. Панель изображает контроль, в то время как панель B показывает изображения после обработки НММ. Шкала бар показывает 100 мкм.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ранее наша группа передала мну модель дегенерации фоторецептора от грызунов в данио системы 9. Последующие события были описаны и последовал на срок до 30 дней. В этот период времени полный сетчатки морфологическая дегенерация и регенерация произошедших после первоначального лечения. Во-первых, гистология показывает снижается клеток стержень считать от дня 3 на с минимумом в день 8 Соответственно, окрашивание TUNEL идентифицирует апоптоз стержневых фоторецепторов 3 дня после лечения НММ. Регенерация начинается в INL на 3-й день, с максимумом на 5 день В ONL, пролиферирующие клетки не могут наблюдаться до конца периода наблюдения с максимумом на 5 день это в отличие от INL где нет повышенной пролиферации наблюдалось после 15 день мерцательная маргинальной зоны единственное место сетчатки, где некоторые позитивные клетки PCNA были найдены в необработанном сетчатки. Это указывает на область с постоянно сетчатки нейрогенез через вмия жизни 14. Идентификация типов клеток, участвующих в регенерации фармакологически поврежденных фоторецепторов у рыбок данио не был в центре внимания этой рукописи. Тем не менее, в предыдущих публикациях процесс был проложен в регенерирующих клеток в INL, которые были предложены, чтобы быть Müller клетки 9,17,18.

В настоящем исследовании мы также оценили функциональные изменения в МНУ-индуцированной модели данио. Для количественной оценки зрительной функции у взрослых рыб, был принят на работу оценка ОКР, один из нескольких методов для достоверной оценки остроты зрения (VA) мелких животных 19. Таким образом, ОКР, на основе врожденного поведения, не требует предварительной трудоемкой подготовки животных 20. Кроме того, как ОКР может быть неоднократно вызывали независимо сотрудничества животных, а большие глаза легко можно наблюдать, оценка ОКР является идеальным методом следовать остроту зрения Durinг дегенерация и регенерация у рыбок данио. Измерения ОКР в настоящем исследовании выявлено убывающую остроту зрения до дня 3, а затем полное восстановление зрительной функции на день 30 Это в соответствии с гистологических DE- и регенеративных изменений после применения НММ, который показывает максимум апоптоза в день 3.

Преимущество этой модели является ее простота, как НММ быстро подготовить и может быть непосредственно растворяют в баке для воды на данио. Лечение данио с НММ выполняется в течение одного часа. Что можно лечить массово количество рыбы ограничивается только размером аквариума. В целом, это позволяет простой индукцией дегенерации сетчатки в большом количестве данио без необходимости манипуляции отдельных рыб. Таким образом, эта модель является менее инвазивным, чем другие модели сетчатки дегенерации, которые используют интравитреальных или хирургические индуцированных методы 21-23, и это может тем самым демонстрируют лучшую воспроизводимость.

В общем, это данио модель МНУ является универсальным инструментом, чтобы побудить фоторецепторов конкретных дегенерации и визуализировать следующую регенерацию не только морфологически, но и функционально. Поэтому, мы уверены, что модель помогает лучше понять дегенерацию и процесс регенерации в сенсорной сетчатки в целом и открывает возможность сравнить его результаты с системой млекопитающих.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetic acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland A6283
Ammonia Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 294993 0.80%
Bovine serum albumine (BSA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 05470
Dako Pen Dako, Glostrup, Danmark S2002
DAPI mounting medium Vector Labs, Burlingame, CA, USA H-1200
Eosin Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 45260
Ethanol Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 2860 100%, 96%, 70%
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland ED
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland E10521 Tricaine
Eukitt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 3989
Goat anti-rabbit Alexa 594 Life Technologies, Zug, Switzerland  A11012
Goat normal serum Dako, Glostrup, Danmark X0907
Hydrochloric acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 320331 0.20%
In situ Cell Death Detection Kit Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Switzerland 11684795910 TUNEL Kit
Mayer's hemalum solution Merck, Darmstadt, Germany 109249
Methylnitrosourea (MNU) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland N4766 Toxic
OptoMotry CerebralMechanics, Lethbridge, AB, Canada n.a.
Paraformaldehyde (PFA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P6148
Phosphate buffered saline (PBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5368
Proteinase K Dako, Glostrup, Danmark S3004
Rabbit anti-PCNA  Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA sc-33756
Superfrost Plus glass slides Gehard Menzel GmbH, Braunschweig, Germany 10149870
Tris buffered saline (TBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5912
Trizma base Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland T1503
Tween 20 Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P1379
Xylene Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 534056
Zebrafish (Danio rerio) AB (Oregon) strain University of Fribourg, Dept. of Biology n.a. Own fish facility

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Haddad, S., Chen, C. A., Santangelo, S. L., Seddon, J. M. The genetics of age-related macular degeneration: a review of progress to date. Surv. Ophthalmol. 51, (4), 316-363 (2006).
  2. Bhatti, M. T. Retinitis pigmentosa, pigmentary retinopathies, and neurologic diseases. Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 6, (5), 403-413 (2006).
  3. Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. Retinitis pigmentosa. Lancet. 368, 1795-1809 (2006).
  4. Tsubura, A., Yoshizawa, K., Kuwata, M., Uehara, N. Animal models for retinitis pigmentosa induced by MNU; disease progression, mechanisms and therapeutic trials. Histol. Histopathol. 25, 233-248 (2010).
  5. Machida, K., Urano, K., Yoshimura, M., Tsutsumi, H., Nomura,, Usui, T. Carcinogenic comparative study on rasH2 mice produced by two breeding facilities. J. Toxicol. Sci. 33, 493-501 (2008).
  6. Morton, D., et al. N-Methyl-N-Nitrosourea (MNU): A positive control chemical for p53+/- mouse carcinogenicity studies. Toxicol. Pathol. 36, 926-931 (2008).
  7. Terracini, B., Testa, M. C. Carcinogenicity of a single administration of N-nitrosomethylurea: a comparison between newborn and 5-week-old mice and rats. 24, 588-598 (1970).
  8. Zulliger, R., Lecaudé, S., Eigeldinger-Berthou, S., Wolf-Schnurrbusch, U. E. K., Enzmann, V. Caspase-3-independent photoreceptor degeneration by N-methyl-N-nitrosourea (MNU) induces morphological and functional changes in the mouse retina. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 249, 859-869 (2011).
  9. Tappeiner, C., et al. Characteristics of rod regeneration in a novel zebrafish retinal degeneration model using N-methyl-N-nitrosourea (MNU). PLOS One. 12, (2013).
  10. Bilotta, J., Saszik, S. The zebrafish as a model visual system. Int. J. Dev. Neurosci. 19, 621-629 (2001).
  11. Fleisch, C., Neuhauss, S. Visual Behavior in Zebrafish. Zebrafish. 3, 191-201 (2006).
  12. Hodel, C., Neuhauss, S. C. F., Biehmaier, O. Time course and development of light adaptation processes in the outer zebrafish retina. InterScience. 288, 653-662 (2006).
  13. Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends Genet. 29, (11), 611-620 (2013).
  14. Brockerhoff, S. E., Fadool, J. M. Genetics of photoreceptor degeneration and regeneration in zebrafish. Cell Mol. Life Sci. 68, 651-659 (2011).
  15. Brand, M., Granato, M., Nüsslein-Volhard, C. Keeping and raising zebrafish. Zebrafish: A Practical Approach. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. IRL Press. 7-38 (2002).
  16. Tappeiner, C., Gerber, S., Enzmann, V., Balmer, J., Jazwinska, A., Tschopp, M. Visual acuity and contrast sensitivity of adult zebrafish. Front. Zool. 9, (1), 10 (2012).
  17. Bailey, T. J., Fossum, S. L., Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Hyde, D. R. The inhibitor of phagocytosis, O-phospho-L-serine, suppresses Müller glia proliferation and cone cell regeneration in the light-damaged zebrafish retina. Exp. Eye Res. 91, 601-612 (2010).
  18. Nelson, C. M., Hyde, D. R. Müller glia as a source of neuronal progenitor cells to regenerate the damaged zebrafish retina. Adv. Exp. Med. Biol. 723, 425-430 (2012).
  19. Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system. Invest. Ophthalmol Vis. Sci. 45, (12), 4611-4616 (2004).
  20. Beck, J. C., Gilland, E., Tank, D. W., Baker, R. Quantifying the ontogeny of optokinetic and vestibulo-ocular behaviors in zebrafish, medaka, and goldfish. J. Neurophysiol. 92, (6), 3546-3561 (2004).
  21. Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Burket, C. T., Hyde, D. R. Regeneration of Inner Retinal Neurons after Intravitreal Injection of Ouabain in. Zebrafish. J. Neurosci. 27, 1712-1724 (2007).
  22. Sherpa, T., et al. Ganglion cell regeneration following whole-retina destruction in zebrafish. Dev. Neurobiol. 68, 166-181 (2008).
  23. Yurco, P., Cameron, D. A. Responses of Müller glia to retinal injury in adult zebrafish. Vision Res. 45, 991-1002 (2005).
Метилнитрозомочевины (МНУ) -индуцированных дегенерации сетчатки и регенерации в данио рерио: гистологические и функциональные характеристики
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).More

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter