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Biology

Metilnitrosourea (MNU) inducida por la Retina Degeneración y Regeneración en el pez cebra: características histológicas y funcionales

doi: 10.3791/51909 Published: October 20, 2014

Summary

Aquí demostramos cuantificación de de retina y la regeneración y su impacto en la función visual usando N-metil-N-nitrosourea en el pez cebra adulto. Pérdida de la agudeza visual y la disminución de los números de fotorreceptores fueron seguidos por la proliferación en la capa nuclear interna. Regeneración morfológica y funcional completa ocurrió 30 días después del tratamiento inicial.

Abstract

Enfermedades retinianas degenerativas, por ejemplo, la retinitis pigmentosa, con daño resultante cuenta fotorreceptor para la mayoría de pérdida de la visión en el mundo industrial. Los modelos animales son de importancia fundamental para estudiar este tipo de enfermedades. En este sentido la toxina-fotorreceptor específico N-metil-N-nitrosourea (MNU) ha sido ampliamente utilizado en roedores para inducir farmacológicamente degeneración de la retina. Anteriormente, hemos establecido un modelo de degeneración de la retina inducida por MNU en el pez cebra, otro modelo de sistema popular en la investigación visual.

A diferencia fascinante para los mamíferos es la neurogénesis persistente en la retina del pez cebra adulto y su regeneración después del daño. Para cuantificar esta observación hemos empleado mediciones de agudeza visual en el pez cebra adulto. De este modo, se utilizó el reflejo optocinético para seguir los cambios funcionales en los peces no anestesiado. Esto se complementó con la histología, así como staini inmunohistoquímicang para la apoptosis (TUNEL) y proliferación (PCNA) para correlacionar los cambios morfológicos en desarrollo.

En resumen, la apoptosis de los fotorreceptores se produce tres días después de tratamiento MNU, que es seguido por una reducción marcada de las células en la capa nuclear externa (ONL). A partir de entonces, se observa proliferación de células en la capa nuclear interna (INL) y ONL. Aquí, nos revelan que no sólo es un histológica completa sino también una regeneración funcional se produce durante un transcurso de tiempo de 30 días. Ahora nos ilustran los métodos para cuantificar y hacer un seguimiento de retina del pez cebra y la regeneración utilizando MNU en un video-formato.

Introduction

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Visión es el sentido más importante para el ser humano y su deterioro tiene un impacto socio-económico alto. En el mundo desarrollado, las enfermedades degenerativas de la retina son la principal causa de pérdida de visión y ceguera entre los adultos mayores 1. La causa de la mayoría de las enfermedades degenerativas de la retina está sólo parcialmente entendida y soluciones terapéuticas para recuperar la visión perdida son muy limitadas. La retinitis pigmentosa es un ejemplo típico de una enfermedad degenerativa de la retina con la pérdida de fotorreceptores primaria 2-3. N-metil-N-nitrosourea (MNU) induce la degeneración de la retina y por lo tanto es ampliamente utilizado en roedores para modelar enfermedades con la muerte de las células fotorreceptoras primaria 4. Es un agente alquilante y conduce a tumores benignos y malignos, los cuales suelen aparecer varios meses después de la exposición 5-7. Además, provoca la muerte de las células fotorreceptoras específica dentro de un período de observación a corto plazo. De este modo, la pérdida de la capa retiniana structure y el adelgazamiento de la retina significativa se observó de manera dependiente de la concentración. Células gliales de la retina se activan, pero no se encontraron cambios en el epitelio pigmentario de la retina (EPR). Retículo endoplasmático (ER) la apoptosis relacionada con el estrés parece ser la vía principal de la acción MNU en la retina 8.

Recientemente hemos introducido MNU como un modelo químico para inducir la degeneración de los fotorreceptores en el pez cebra 9. Entre otras razones, el pez cebra (Danio rerio) se ha convertido en importante en la investigación visual debido a las similitudes de su sistema visual a la de otros vertebrados 10. La retina externa contiene los fotorreceptores, que se pueden agrupar en cuatro tipos de conos diferentes con sensibilidades de los picos en el ultravioleta, a corto, medio y largo longitud de onda del espectro visible y una barra tipo fotorreceptor. En la capa nuclear interna (INL), los cuerpos celulares de las bipolares, amacrinas y interneuronas horizontales se encuentran, como well como el soma celular de las células gliales de Müller. En la capa plexiforme externa (OPL) se forman los contactos sinápticos entre fotorreceptores y la retina interna, mientras que la capa de células más cerca de la lente es la capa de células ganglionares (GC), que forman los componentes de los axones largos que comprenden el nervio óptico y el tracto óptico . Contactos sinápticos entre las células ganglionares y las células en la capa nuclear interna se forman en la capa plexiforme interna (IPL) 11. El RPE se encuentra fuera de la retina neurosensorial y rodea los segmentos externos de los fotorreceptores con microvellosidades apicales de largo 12. Por otra parte, el pez cebra es altamente regenerativo y capaz de regenerar el cerebro lesioned, retina, médula espinal, el corazón y otros tejidos 13. Cuando se produce daño en la retina, las células en la INL, que se cree que son las células de Müller, se activan y tienen el potencial de diferenciarse en diversos tipos de células de la retina. Además, también generan progenitores de varilla, que se encuentran en el ONL. Otro modource que suministra la retina del pez cebra adulto con nuevas células es la zona marginal ciliar. Esta fuente es necesaria para lograr una densidad constante de fotorreceptores de los bastones en el ojo de pez cebra en continuo crecimiento 14.

El modelo MNU se puede utilizar como un enfoque sencillo y reproducible degeneración / regeneración de tejido de la retina. Debido a ciertas similitudes de los procesos biológicos en el pez cebra y en los seres humanos esto podría abrir las puertas para identificar vías de muerte celular implicados y para detectar potenciales medicamentos neuroprotectores. Basado en un estudio previo de nuestro grupo, que ahora ilustran los métodos de este modelo de pez cebra inducido por MNU de de retina y la consiguiente regeneración incluyendo cambios funcionales con acuerdo vídeos laboratorio 9.

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Protocol

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Todos los experimentos se adhirieron a la Declaración para el uso de animales en Oftálmica y Visión de Investigación de la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología (ARVO).

1. Animales

  1. Mantener el pez cebra de tipo salvaje (Danio rerio) de la cepa AB (Oregon) con edades comprendidas entre 6 a 12 meses en condiciones normales en el agua con una temperatura de 26,5 ° C y un 14/10 horas de luz / oscuridad ciclo 15.
  2. Siga las instrucciones de cuidado de los animales de las instituciones involucradas para los experimentos con animales después de la aprobación por la Oficina Veterinaria Cantonal.

2. Tratamiento MNU

  1. Preparar agua que contiene 150 mg / L de sustancia seca de N-metil-N-nitrosourea (MNU). PRECAUCIÓN! MNU es tóxico; puede provocar cáncer, alteraciones genéticas hereditarias o daño al niño no nacido.
  2. Incubar pez cebra en el agua que contiene el MNU durante 60 min a temperatura ambiente.
  3. Enjuagar rápidamente con el pez cebraagua dulce y puso el pescado a un nuevo tanque de peces sin MNU. Mantener el pescado en condiciones estándar tanto como se desee para los experimentos.

3. Visual Acuity Medición

  1. Inicie el sistema optomotor, elija 'prueba' en el menú y configurar las opciones para "Simple escalera", "Agudeza (Freq)" y "Aleatorio / independiente" 16.
  2. Instale una botella de infusión llena con 500 ml de agua aproximadamente 1 m por encima del sistema optomotor.
  3. Coloque un pez cebra en la cámara de exploración y conectarlo a la botella de infusión. Coloque la cámara de examen en el sistema optomotor.
  4. Inicie la medición y observar el movimiento del ojo en tiempo real en la pantalla del ordenador. De esta manera, una respuesta positiva ("sí") se define como movimientos sacádicos consecutivos en la dirección correcta, mientras que una respuesta negativa ("no") representa los movimientos oculares aleatorios similares a los observados con la estaciónrejillas arias. Si los ojos de la exposición pez cebra tres o más respuestas optocinético posteriores (OKR), pulse "sí"; si no es así, pulse 'no'.
  5. Extraer la agudeza visual, que ha sido calculada por el software mediante la determinación del umbral de la frecuencia espacial del estímulo optocinético, en "Resultados" en el menú.

4. Histología

  1. La eutanasia el pez cebra por una sobredosis de acetato de metanosulfonato de 3-aminobenzoato de etilo (200-300 mg / L) y enucleación de los ojos.
  2. Fije el conjunto de ojos en el 4% de paraformaldehído (PFA) en tampón fosfato salino (PBS) a 4 ° C durante 12 horas y luego deshidratar las muestras en una serie gradual de alcohol.
  3. Insertar las muestras en parafina, se cortaron secciones de 5 micras a través de la cabeza del nervio óptico (ONH) y montarlos en un portaobjetos de vidrio.
  4. Teñir las secciones de parafina deparaffized con hemalum durante 4 minutos y sumergir los portaobjetos dos veces en agua destilada seguido de aci clorhídrico 0,2%d y 0,8% de amoníaco. Teñir las secciones con eosina durante 3 minutos después del desarrollo de la tinción hemalum en agua corriente durante al menos 10 min (H & E).
  5. Insertar las diapositivas deshidratados en medio de montaje y observar las diapositivas bajo el microscopio óptico.

5. inmunohistoquímica

  1. Desoxinucleotidil transferasa terminal dUTP nick fin de etiquetado (TUNEL)
    1. Incubar las secciones desparafinadas con 20 mg / ml de proteinasa K a temperatura ambiente durante 15 min. Lávese las secciones tres veces con Tris salino (TBS) tamponada durante 5 minutos cada uno.
    2. Incubar las secciones con 50 l mezcla de reacción TUNEL (solución de etiquetado 10% y solución de enzima 90%) en una cámara humidificada a 37 ° C durante 60 min. Lavar tres veces con TBS durante 5 minutos cada uno.
    3. Monte los portaobjetos con medio que contiene DAPI montaje y observar las diapositivas bajo el microscopio de fluorescencia.
  2. La proliferación celular antígeno nuclear (PCNA) tinción
    1. Hervir los cortes desparafinados en tampón de recuperación de antígeno (Tris-EDTA + 0,05% de Tween 20, pH 9,0) durante 3 min y se lava tres veces con TBS durante 5 min cada uno. Bloquear con 100 l solución de bloqueo (TBS + 10% de suero normal de cabra + 1% de albúmina de suero bovino, pH 7,6) a temperatura ambiente durante 1 hr.
    2. Teñir con anti-PCNA anticuerpos primarios en una dilución 1: 200 en una cámara húmeda a 4 ° C durante la noche. Lavar tres veces con TBS + Tween 20 durante 5 minutos cada uno.
    3. Terminar la detección con los anticuerpos secundarios apropiados, en una dilución de 1: 500 a temperatura ambiente durante 1 hr.
    4. Monte los portaobjetos con medio que contiene DAPI montaje y observar las diapositivas bajo el microscopio de fluorescencia.

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Representative Results

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Agudeza visual:

El montaje experimental [frecuencia espacial: 0.042 círculos / grado (c / d); Contraste: 100%; velocidad de deriva: 20 grados / segundo (d / src); volver luminancia luz: 152 cd / m 2] de este estudio permitió evaluar OKR de adultos de pez cebra. La duración media de la medición VA fue de unos 5 a 10 minutos para cada pez cebra, que toleró bien el procedimiento. La agudeza visual antes de la exposición MNU fue 0.577 ± 0.014 ciclos / grado (c / d). Figura 1 muestra el curso de la agudeza visual después de la aplicación de 150 mg / L MNU. A partir de 1 día, las mediciones revelaron una marcada disminución de la agudeza visual, alcanzando valores mínimos en día 3. A partir de 8 días, un aumento de la agudeza visual se produce, mostrando una recuperación completa de la agudeza visual 30 días después de la exposición MNU. Para el análisis estadístico se aplicó un ANOVA de una vía seguida de la prueba de comparación múltiple de Bonferroni. De este modo, las diferencias en la agudeza visual between la línea de base y mediciones después del tratamiento fue significativa para los días 1, 3, 5, y 8 (p <0,001, cada uno), pero no para los días 15 y 30.

Evaluación histológica de la degeneración de la retina:

Tinción H & E se utilizó para cuantificar los cambios morfológicos en un ojo del pez cebra por punto de tiempo (n = 3) al inicio del estudio, así como 3, 8, 15, y 30 días después del tratamiento (Figura 2). La histología se realizó como se describe por Tappeiner et al. 9. De este modo, se observó degeneración de la retina incluyendo la interrupción de la INL y la cavidad formación de la ONL a partir de día 3. El número de células en la capa de células ganglionares (GC), la capa nuclear interna (INL) y el número de la varilla (RN) y cono (CN) fotorreceptores se determinaron manualmente 250 m desde el centro de la CNO en ambos lados de la sección de ojo (tamaño de la zona contado refiere a una sección de la retina de 100 m de longitud). La degeneración se siguió durante 30días después del tratamiento con el máximo de pérdida de varilla ONL encontrado en día 8. De este modo, el número de fotorreceptores de los bastones (RN) se redujo hasta el 82% en el día 3, 71% el día 8 y 77% en los días 15 y 30 del número original . Además, se encontró acumulación de grupos de células, principalmente en la INL.

La cuantificación de la apoptosis:

La tinción de TUNEL se realizó de acuerdo con el fabricante (In situ Cell Death Kit de detección; Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Suiza). La degeneración de la retina observado después del tratamiento MNU fue causada por apoptosis. Esto fue revelado por tinción TUNEL positivo en diferentes capas de células en la retina sensorial. Para la cuantificación, el número de células TUNEL positivas se determinó manualmente en dos áreas de la retina de 450 m de longitud cada uno, a partir de la periferia de la retina. De este modo, la mayoría de las células TUNEL positivas se encontró en la ONL en día 3. Sin embargo, también se observaron las células que mueren en el INL en ese punto de tiempo (Figura 3). No hay células TUNEL-positivas relevantes fueron detectables antes del tratamiento.

La cuantificación de la proliferación celular:

Para evaluar la proliferación después de la muerte celular, las retinas se tiñeron para antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) como se describe por Tappeiner et al. 9. Para la cuantificación, el número de células PCNA positivas se determinó manualmente como se describe anteriormente. La muerte celular fue seguida por la proliferación inducida visto como células PCNA positivas (Figura 4). De este modo, se midió el máximo de células que proliferan en el INL en día 5. Adicionalmente, las células en el ONL (principalmente varillas) mostraron tinción positiva para PCNA hasta el final del estudio (día 30). Pocas células PCNA-positivas en la zona marginal ciliar fueron detectables antes y en todos los puntos de tiempo después del tratamiento.

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Figura 1:. Agudeza visual Medición de la agudeza visual en adultos de pez cebra después de la aplicación de 150 mg / L MNU. Disminución significativa de la agudeza visual con un mínimo en el día 3 post-tratamiento fue seguido de una recuperación total, comenzando en el día 5, hasta el día 30 (media ± DE, n = 3).

Figura 2
Figura 2: Histología Ejemplos de H & E manchadas secciones histológicas de la retina de pez cebra en la línea base (A) y 3 (B), 8 (C), 15 (D), y 30 (E) días después del tratamiento MNU.. NC, núcleos de cono; RN, núcleos de varilla; INL, capa nuclear interna; GC, capa de células ganglionares. Las flechas marcan las agrupaciones de células en la INL. La barra de escala es igual a 50 micras.


Células células TUNEL-positivas TUNEL-positivos (rojo) en la retina del pez cebra en el día 3 después del tratamiento MNU: Figura 3.. Las células se encuentran principalmente en la ONL, pero también se encontraron en el INL. Panel A representa el control, mientras que el panel B muestra las imágenes después del tratamiento MNU. La barra de escala indica 50 micras.

Figura 4
Figura 4:. Células PCNA-positivas células PCNA-positivas (rojo) en la retina del pez cebra en el día 5 después del tratamiento MNU comparación con la muestra de control. Panel A representa el control, mientras que el panel B muestra las imágenes después del tratamiento MNU. La barra de escala indica 100 micras.

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Discussion

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Anteriormente, nuestro grupo ha transferido el modelo MNU de degeneración de los fotorreceptores de los roedores en el sistema de pez cebra 9. Los acontecimientos que siguieron fueron descritos y seguidos durante un máximo de 30 días. En este período de tiempo completa degeneración de la retina y la regeneración morfológica se produjeron después del tratamiento inicial. En primer lugar, la histología revela un recuento celular reducido de varilla de 3 días con un mínimo en día 8. Correspondientemente, la tinción de TUNEL identifica la apoptosis de fotorreceptores de los bastones 3 días después del tratamiento MNU. La regeneración se inicia en el INL en el día 3, con un máximo a día 5. En la ONL, las células proliferantes pueden ser observados hasta el final del período de observación, con un máximo en el día 5. Esto está en contraste con la INL donde ningún aumento de la proliferación se observó después de 15 días la zona marginal ciliar es la única ubicación de la retina donde se encontraron algunas células PCNA positivas en la retina no tratado. Esto indica una zona con throug neurogénesis constantemente retinavida Hout 14. La identificación de los tipos de células que participan en la regeneración de los fotorreceptores dañados farmacológicamente en el pez cebra no estaba en el foco de este manuscrito. Sin embargo, en publicaciones anteriores del proceso se ha remontado a las células regeneradoras de la INL que se han sugerido para ser células de Müller 9.17.18.

En el presente estudio, también hemos evaluado los cambios funcionales en el modelo de pez cebra inducido por MNU. Para cuantificar la función visual en los peces adultos, se ha empleado la evaluación del OKR, una de varias técnicas para medir de forma fiable la agudeza visual (AV) de pequeños animales 19. De este modo, la okr, basado en un comportamiento innato, no necesita la formación consume mucho tiempo antes de los animales 20. Además, como el OKR puede ser obtenido en varias ocasiones de forma independiente de la cooperación de los animales, y los ojos grandes se puede observar fácilmente, la evaluación de la OKR es un método ideal para seguir la agudeza visual during degeneración y regeneración en el pez cebra. Okr mediciones en el presente estudio revelaron una disminución de la agudeza visual hasta 3 días, seguido por una restauración completa de la función visual en día 30. Esto está de acuerdo con los cambios histológicos de- y regenerativas después de la aplicación MNU que muestra un máximo de apoptosis en día 3.

Una ventaja de este modelo es su simplicidad como MNU es rápido de preparar y puede ser disuelto directamente en el tanque de agua de la pez cebra. Tratamiento de pez cebra con MNU se lleva a cabo en una hora. El número de peces que se puede tratar en masa sólo está limitado por el tamaño del tanque de peces. En general, esto permite inducción simple de la degeneración de retina en un gran número de pez cebra sin la necesidad de la manipulación individual de los peces. Por lo tanto, este modelo es menos invasivo que otros modelos de la degeneración de retina que utilizan intravítreas o quirúrgicos técnicas inducidas 21-23 y de ese modo puede exhibir una mejor reproducibilidad.

En general, este modelo MNU pez cebra es una herramienta versátil para inducir la degeneración de los fotorreceptores-específico y para visualizar la siguiente regeneración no sólo morfológicamente, sino también funcionalmente. Por lo tanto, estamos seguros de que el modelo ayuda a comprender mejor el proceso de degeneración y regeneración de la retina sensorial en general y se abre la posibilidad de comparar sus resultados con el sistema de mamíferos.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetic acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland A6283
Ammonia Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 294993 0.80%
Bovine serum albumine (BSA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 05470
Dako Pen Dako, Glostrup, Danmark S2002
DAPI mounting medium Vector Labs, Burlingame, CA, USA H-1200
Eosin Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 45260
Ethanol Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 2860 100%, 96%, 70%
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland ED
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland E10521 Tricaine
Eukitt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 3989
Goat anti-rabbit Alexa 594 Life Technologies, Zug, Switzerland  A11012
Goat normal serum Dako, Glostrup, Danmark X0907
Hydrochloric acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 320331 0.20%
In situ Cell Death Detection Kit Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Switzerland 11684795910 TUNEL Kit
Mayer's hemalum solution Merck, Darmstadt, Germany 109249
Methylnitrosourea (MNU) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland N4766 Toxic
OptoMotry CerebralMechanics, Lethbridge, AB, Canada n.a.
Paraformaldehyde (PFA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P6148
Phosphate buffered saline (PBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5368
Proteinase K Dako, Glostrup, Danmark S3004
Rabbit anti-PCNA  Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA sc-33756
Superfrost Plus glass slides Gehard Menzel GmbH, Braunschweig, Germany 10149870
Tris buffered saline (TBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5912
Trizma base Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland T1503
Tween 20 Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P1379
Xylene Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 534056
Zebrafish (Danio rerio) AB (Oregon) strain University of Fribourg, Dept. of Biology n.a. Own fish facility

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References

  1. Haddad, S., Chen, C. A., Santangelo, S. L., Seddon, J. M. The genetics of age-related macular degeneration: a review of progress to date. Surv. Ophthalmol. 51, (4), 316-363 (2006).
  2. Bhatti, M. T. Retinitis pigmentosa, pigmentary retinopathies, and neurologic diseases. Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 6, (5), 403-413 (2006).
  3. Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. Retinitis pigmentosa. Lancet. 368, 1795-1809 (2006).
  4. Tsubura, A., Yoshizawa, K., Kuwata, M., Uehara, N. Animal models for retinitis pigmentosa induced by MNU; disease progression, mechanisms and therapeutic trials. Histol. Histopathol. 25, 233-248 (2010).
  5. Machida, K., Urano, K., Yoshimura, M., Tsutsumi, H., Nomura,, Usui, T. Carcinogenic comparative study on rasH2 mice produced by two breeding facilities. J. Toxicol. Sci. 33, 493-501 (2008).
  6. Morton, D., et al. N-Methyl-N-Nitrosourea (MNU): A positive control chemical for p53+/- mouse carcinogenicity studies. Toxicol. Pathol. 36, 926-931 (2008).
  7. Terracini, B., Testa, M. C. Carcinogenicity of a single administration of N-nitrosomethylurea: a comparison between newborn and 5-week-old mice and rats. 24, 588-598 (1970).
  8. Zulliger, R., Lecaudé, S., Eigeldinger-Berthou, S., Wolf-Schnurrbusch, U. E. K., Enzmann, V. Caspase-3-independent photoreceptor degeneration by N-methyl-N-nitrosourea (MNU) induces morphological and functional changes in the mouse retina. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 249, 859-869 (2011).
  9. Tappeiner, C., et al. Characteristics of rod regeneration in a novel zebrafish retinal degeneration model using N-methyl-N-nitrosourea (MNU). PLOS One. 12, (2013).
  10. Bilotta, J., Saszik, S. The zebrafish as a model visual system. Int. J. Dev. Neurosci. 19, 621-629 (2001).
  11. Fleisch, C., Neuhauss, S. Visual Behavior in Zebrafish. Zebrafish. 3, 191-201 (2006).
  12. Hodel, C., Neuhauss, S. C. F., Biehmaier, O. Time course and development of light adaptation processes in the outer zebrafish retina. InterScience. 288, 653-662 (2006).
  13. Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends Genet. 29, (11), 611-620 (2013).
  14. Brockerhoff, S. E., Fadool, J. M. Genetics of photoreceptor degeneration and regeneration in zebrafish. Cell Mol. Life Sci. 68, 651-659 (2011).
  15. Brand, M., Granato, M., Nüsslein-Volhard, C. Keeping and raising zebrafish. Zebrafish: A Practical Approach. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. IRL Press. 7-38 (2002).
  16. Tappeiner, C., Gerber, S., Enzmann, V., Balmer, J., Jazwinska, A., Tschopp, M. Visual acuity and contrast sensitivity of adult zebrafish. Front. Zool. 9, (1), 10 (2012).
  17. Bailey, T. J., Fossum, S. L., Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Hyde, D. R. The inhibitor of phagocytosis, O-phospho-L-serine, suppresses Müller glia proliferation and cone cell regeneration in the light-damaged zebrafish retina. Exp. Eye Res. 91, 601-612 (2010).
  18. Nelson, C. M., Hyde, D. R. Müller glia as a source of neuronal progenitor cells to regenerate the damaged zebrafish retina. Adv. Exp. Med. Biol. 723, 425-430 (2012).
  19. Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system. Invest. Ophthalmol Vis. Sci. 45, (12), 4611-4616 (2004).
  20. Beck, J. C., Gilland, E., Tank, D. W., Baker, R. Quantifying the ontogeny of optokinetic and vestibulo-ocular behaviors in zebrafish, medaka, and goldfish. J. Neurophysiol. 92, (6), 3546-3561 (2004).
  21. Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Burket, C. T., Hyde, D. R. Regeneration of Inner Retinal Neurons after Intravitreal Injection of Ouabain in. Zebrafish. J. Neurosci. 27, 1712-1724 (2007).
  22. Sherpa, T., et al. Ganglion cell regeneration following whole-retina destruction in zebrafish. Dev. Neurobiol. 68, 166-181 (2008).
  23. Yurco, P., Cameron, D. A. Responses of Müller glia to retinal injury in adult zebrafish. Vision Res. 45, 991-1002 (2005).
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Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).More

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).

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