Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Methylnitrosourea (MNU) -inducerad Retinal Degeneration och Regeneration i Zebrafish: Histologisk och funktionella egenskaper

doi: 10.3791/51909 Published: October 20, 2014

Summary

Häri vi visar kvantifiering av retinal de- och förnyelse och dess inverkan på visuell funktion med N-metyl-N -nitrosourea i den vuxna zebrafisk. Förlust av synskärpa och minskad fotoreceptornummer följdes av proliferation i innerkärnskiktet. Komplett morfologisk och funktionell regeneration inträffade 30 dagar efter den första behandlingen.

Abstract

Retinal degenerativa sjukdomar, t.ex. retinitis pigmentosa, med resulterande fotoreceptorskador står för majoriteten av synförlust i den industriella världen. Djurmodeller är av avgörande betydelse för att studera dessa sjukdomar. I detta avseende fotoreceptorn specifika toxin N-metyl-N -nitrosourea (MNU) har använts i stor utsträckning gnagare att farmakologiskt framkalla retinal degeneration. Tidigare har vi etablerat en MNU-inducerad retinal degeneration modell i zebrafisk, en annan populär modellsystem inom visuell forskning.

En fascinerande skillnad för däggdjur är den ihållande neurogenes i den vuxna zebrafisk näthinnan och dess regeneration efter skador. För att kvantifiera denna observation som vi har anställt visuella mätningar skärpa i den vuxna zebrafisk. Därmed var optokinetic reflex brukade följa funktionella förändringar i icke-sövda fisk. Detta kompletterades med histologi och immunhistokemiska staining för apoptos (TUNEL) och spridning (PCNA) för att korrelera utvecklings morfologiska förändringar.

Sammanfattningsvis sker apoptos av fotoreceptorer tre dagar efter MNU behandling, vilket följs av en markant minskning av celler i det yttre kärnlagret (ENDA). Därefter proliferation av celler i det inre kärnskiktet (INL) och ENDA observerats. Häri visar vi att det inte bara ett komplett histologisk utan även en funktionell regenerering inträffar under ett tidsförlopp av 30 dagar. Nu visar de metoder för att kvantifiera och följa upp zebrafisk retinal de- och förnyelse genom att använda MNU i en video-format.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Vision är den viktigaste känslan för människan och dess nedskrivning har en hög socioekonomiska effekter. I den utvecklade världen, retinala degenerativa sjukdomar är den vanligaste orsaken till synnedsättning och blindhet hos äldre vuxna 1. Orsaken till de flesta degenerativa retinala sjukdomar är bara delvis förstådd och terapeutiska lösningar för att återta förlorad syn är mycket begränsade. Retinitis pigmentosa är ett typiskt exempel på en retinal degenerativ sjukdom med primär ljusmätare förlust 2-3. N-metyl N -nitrosourea (MNU) inducerar retinal degeneration och används därför i stor utsträckning hos gnagare att modellera sjukdomar med primär ljusmätare celldöd 4. Det är ett alkyleringsmedel och leder till benigna och maligna tumörer, som vanligtvis förekommer flera månader efter exponering 5-7. Dessutom orsakar det specifika ljusmätare celldöd inom en kort sikt observationsperiod. Därigenom förlusten av retinaskiktet structure och betydande retinal gallring observerades i ett koncentrationsberoende sätt. Retinal gliaceller aktiverades, men inga förändringar i näthinnans pigmentepitel (RPE) hittades. Endoplasmatiska retiklet (ER) stressrelaterad apoptos verkar vara den viktigaste vägen för MNU åtgärder på näthinnan 8.

Vi har nyligen infört MNU som en kemisk modell för att framkalla fotoreceptor degeneration i zebrafisk 9. Bland andra skäl har zebrafisk (Danio rerio) blivit viktiga i visuell forskning på grund av likheterna i sin visuella systemet till det av andra ryggradsdjur 10. Den yttre näthinnan innehåller fotoreceptorer, som kan delas in i fyra olika typerna av tappar med topp känslighet i ultraviolett, kort, medellång och lång våglängd i det synliga spektrat och ett spö ljusmätare typ. I det inre nukleära lagret (INL), är cellkroppar av bipolära, horisontella och amakrina intern hittade, som well som cell soma av Muller gliaceller. I det yttre plexiformskiktet (OPL) de synaptiska kontakter mellan fotoreceptorerna och den inre näthinnan bildas, under det att cellskiktet närmast linsen är gangliecell skiktet (GC), vilka komponenter bildar långa axoner innefattande synnerven och optiken vägarna . Synaptiska kontakter mellan ganglionceller och cellerna i det inre kärnskiktet är bildade i det inre plexiformskiktet (IPL) 11. RPE ligger utanför neuro näthinnan och omger ljusmätare yttre segment med långa apikala mikrovilli 12. Vidare är zebrafisk starkt regenerativa och kunna regrow skadade hjärnan, näthinnan, ryggmärg, hjärta och andra vävnader 13. När retinal skador uppstår, celler i INL, som tros vara Müller-celler, aktiveras och har potential att differentieras till olika retinala celltyper. Dessutom de genererar också stav stamceller, vilka är belägna i ONL. En annan såurce som försörjer näthinnan av vuxna zebrafisk med nya celler är den ciliära marginalzonen. Denna källa behövs för att uppnå en konstant täthet av spö fotoreceptorer i den ständigt växande zebrafisk ögat 14.

Den MNU-modellen kan användas som en enkel och reproducerbar degeneration / regenere strategi för näthinnevävnad. På grund av vissa likheter med biologiska processer i zebrafisk och hos människor detta kan öppna dörrarna för att identifiera inblandade celldöd vägar och screena potentiella nervskyddande läkemedel. Baserat på en tidigare studie från vår grupp, vi nu belyser metoderna i denna MNU-inducerad zebrafisk modell av retinal de- och därav förnyelse inklusive funktionella förändringar med enligt laboratorie videos 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alla experiment följs på meddelandet om användningen av djur i ögon och Vision Research i Föreningen för forskning i Vision och Oftalmologi (ARVO).

1. Djur

  1. Bibehåll vildtyp zebrafisk (Danio rerio) i AB (Oregon) stam som är mellan 6-12 månader under standardförhållanden i vatten med en temperatur på 26,5 ° C och en 14/10 timmar ljus / mörker-cykel 15.
  2. Följ riktlinjerna för djur omsorg för de berörda institutionerna för djurförsök efter godkännande av kantonala veterinärfrågor.

2. MNU Behandling

  1. Förbered vatten innehållande 150 mg / l torr substans av N-metyl-N -nitrosourea (MNU). VARNING! MNU är giftigt; kan ge cancer, ärftliga genetiska skador eller skada det ofödda barnet.
  2. Inkubera zebrafisk i vatten innehållande den MNU för 60 min vid rumstemperatur.
  3. Skölj zebrafisk snabbt medfärskvatten och sätta fisken till ett nytt akvarium utan MNU. Bibehåll fisk under standardbetingelser så länge som önskas för experimenten.

3 synskärpan Mätning

  1. Starta optomotor systemet, välj "test" i menyn och ange alternativen på "Simple Staircase", "Acuity (Freq)" och "Randomized / separat" 16.
  2. Installera en infusionsflaska fylld med 500 ml vatten ca 1 m ovanför optomotor systemet.
  3. Placera en zebrafisk i undersökningskammaren och anslut den till infusionsflaskan. Placera undersökning kammaren i optomotor systemet.
  4. Starta mätningen och observera ögonrörelse i realtid på datorskärmen. Därigenom är ett positivt svar ("ja") direkt efter varandra saccades i rätt riktning, medan ett negativt svar ("nej") representerar slumpmässiga ögonrörelser som liknar de som observerats med stationdära gitter. Om ögonen på den zebrafisk uppvisar tre eller flera efterföljande optokinetic svar (OKR) trycker "ja"; Om inte, tryck "nej".
  5. Extrahera synskärpa, vilken har beräknats av programvaran genom att bestämma tröskelvärdet för den rumsliga frekvensen för den optokinetic stimulans, under "Resultat" i menyn.

4. Histologi

  1. Euthanize zebrafisk av en överdos av etyl 3-aminobensoat-metansulfonat (200-300 mg / L) och enucleate ögonen.
  2. Fäst hela ögon i 4% paraformaldehyd (PFA) i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) vid 4 ° C under 12 h och därefter dehydrera proverna i en graderad alkoholserie.
  3. Bädda proven i paraffin, skär 5 um sektioner genom papillen (ONH) och montera dem på ett objektglas.
  4. Färga deparaffized paraffinsektioner med hemalum i 4 minuter och doppa glasen två gånger i destillerat vatten följt av 0,2% saltsyra acid och 0,8% ammoniak. Fläck sektionerna med eosin för 3 min efter utvecklingen av hemalum färgning i kranvatten under minst 10 min (H & E).
  5. Bädda in de dehydratiserade glasen i monteringsmedium och observera glasen under ljusmikroskop.

5. Immunohistokemi

  1. Terminal deoxinukleotidyltransferas dUTP nick end märkning (TUNEL)
    1. Inkubera avparaffinerades sektioner med 20 | ig / ml proteinas K vid rumstemperatur under 15 min. Tvätta sektionerna tre gånger med Tris-buffrad saltlösning (TBS) under 5 min vardera.
    2. Inkubera sektioner med 50 | il TUNEL reaktionsblandning (10% märkning lösning och 90% enzymlösning) i en fuktkammare vid 37 ° C under 60 min. Tvätta tre gånger med TBS under 5 minuter vardera.
    3. Montera bilderna med monteringsmedium innehållande DAPI och observera glider under fluorescensmikroskop.
  2. Prolifererande cellnukleär antigen (PCNA) färgning
    1. Koka avparaffinerades sektionerna i antigenåtervinning buffert (Tris-EDTA + 0,05% Tween 20, pH 9,0) under 3 min och tvättas tre gånger med TBS under 5 minuter vardera. Blockera med 100 pl blockeringslösning (TBS + 10% get normalt serum + 1% bovint serumalbumin, pH 7,6) vid rumstemperatur under 1 tim.
    2. Fläcken med anti-PCNA-primära antikroppar i en 1: 200 spädning i en fuktig kammare vid 4 ° C över natten. Tvätta tre gånger med TBS + Tween 20 under 5 min vardera.
    3. Mål detekteringen med de lämpliga sekundära antikroppar i en 1: 500 spädning vid rumstemperatur under 1 tim.
    4. Montera bilderna med monteringsmedium innehållande DAPI och observera glider under fluorescensmikroskop.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Synskärpa:

Den experimentella uppställningen [spatial frekvens: 0.042 cirklar / examen (c / d); kontrast: 100%; avdriftshastigheten: 20 grader / sekund (d / src); motljus luminans: 152 cd / m 2] i denna studie möjlig OKR bedömning av vuxna zebrafisk. Den genomsnittliga längden på VA mätning var ca 5-10 minuter för varje zebrafisk, vilket tolereras förfarandet också. Synskärpa innan MNU exponeringen var 0.577 ± 0.014 cykler / grad (c / d). Figur 1 visar synskärpa kursen efter tillämpning av 150 mg / L MNU. Från och med dag 1, visade mätningarna en markant minskning av synskärpa, når minimivärden vid dag 3 Med början från dag 8, sker en ökning av synskärpan, som visar en fullständig återhämtning av synskärpan 30 dagar efter MNU exponering. För statistisk analys en envägs ANOVA följt av Bonferronis multipla jämförelsetest har applicerats. Därigenom skillnaderna i synskärpa betwesv baslinjen och mätningar efter behandling var signifikant för dag 1, 3, 5 och 8 (p <0,001, var), men inte för dagarna 15 och 30.

Histologisk bedömning av retinal degeneration:

H & E-färgning användes för att kvantifiera morfologiska förändringar i ena ögat av zebrafisk per tidpunkt (n = 3) vid baslinjen samt 3, 8, 15 och 30 dagar efter behandling (Figur 2). Histologi utfördes såsom beskrivits av Tappeiner et al. 9. Därigenom har näthinnedegeneration inbegripet störningar av INL och kaviteten bildandet av ONL observeras med början vid dag 3. Antalet celler i gangliecell skiktet (GC), varvid det inre kärnskiktet (INL) och antalet av stången (RN) och kon (CN) fotoreceptorer bestämdes manuellt 250 um från centrum av den ONH på båda sidor av sektionen ögat (storleken av det räknade område avser en retinal sektion av 100 ^ m längd). Den degeneration följdes under 30dagar efter behandling med maximalt stången ENDA förluster hittade på dag 8 Därigenom antalet spö fotoreceptorer (RN) minskade till 82% på dag 3, 71% på dag 8 och 77% på dag 15 och 30 i det ursprungliga antalet . Vidare ansamling av cellkluster funnit, främst i INL.

Kvantifiering av apoptos:

TUNEL-färgning utfördes enligt tillverkarens (In situ Cell Death Detection Kit; Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Schweiz). Den observerade näthinnedegeneration efter MNU behandlingen orsakades av apoptos. Detta avslöjades av positiv TUNEL färgning i olika cellskikt i den sensoriska näthinnan. För kvantifiering, var antalet TUNEL-positiva celler bestämdes manuellt två retinala områden av 450 um längd vardera, med början i periferin av näthinnan. Därigenom var majoriteten av TUNEL-positiva celler hittades i ONL vid dag 3. Emellertid var döende celler också ses i INL vid denna tidpunkt (Figur 3). Inga relevanta TUNEL-positiva celler kunde detekteras före behandling.

Kvantifiering av celltillväxt:

För att bedöma proliferation efter celldöd, var näthinnor färgades för prolifererande cellkärnantigen (PCNA) såsom beskrivits av Tappeiner et al. 9. För kvantifiering, var antalet PCNA-positiva celler bestämdes manuellt enligt beskrivningen ovan. Celldöd följdes av inducerad proliferation ses som PCNA-positiva celler (Figur 4). Därmed var högst prolifererande celler mäts i INL dag 5. Dessutom celler i ENDA (främst stavar) visade positiv färgning för PCNA till slutet av studien (dag 30). Få PCNA-positiva celler i ciliära marginella zonen kunde detekteras före och vid alla tidpunkter efter behandling.

d / 51909 / 51909fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Figur 1:. Synskärpa Mätning av synskärpan hos vuxna zebrafisk efter tillämpningen av 150 mg / L MNU. Signifikant minskning av synskärpan med ett minimum på dag 3 efter behandling följdes av fullständig återhämtning, med början på dag 5, fram till dag 30 (medelvärde ± SD, n = 3).

Figur 2
Figur 2: Histologi Exempel på H & E färgade histologiska sektioner av zebrafisk näthinnan vid baslinjen (A) och 3 (B), 8 (C), 15 (D), och 30 (E) dagar efter MNU behandling.. CN, kon kärnor; RN, stav kärnor; INL, inre nukleära lagret; GC, ganglioncellskikt. Pilarna markerar cellkluster i INL. Skala bar är lika med 50 pm.


Figur 3:. TUNEL-positiva celler TUNEL-positiva celler (röda) i zebrafisk näthinnan på dag 3 efter MNU behandling. Cellerna främst i ENDA men var också i INL. Panel A visar den kontroll, medan panel B visar bilderna efter MNU behandling. Skala stapel anger 50 pm.

Figur 4
Figur 4:. PCNA-positiva celler PCNA-positiva celler (röda) i zebrafisk näthinnan på dag 5 efter MNU behandling jämfört med kontrollprovet. Panel A visar den kontroll, medan panel B visar bilderna efter MNU behandling. Skala stapel anger 100 pm.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tidigare har vår grupp överfört MNU modell av fotoreceptor degeneration från gnagare i zebrafisk systemet 9. De efterföljande händelserna beskrevs och uppföljning i upp till 30 dagar. Under denna period skedde helt retinal morfologiska degeneration och regeneration efter den första behandlingen. Först avslöjar histologi en reducerad spö kroppar från dag 3 på med ett minimum på dag 8 motsvarande sätt identifierar Tunel färgning apoptos av spö fotoreceptorer 3 dagar efter MNU behandling. Regenerering startar i INL på dag 3, med ett maximum på dag 5. I ENDA, celler som förökar kan observeras fram till slutet av observationsperioden med ett maximum vid dag 5. Detta står i kontrast till INL där ingen ökad spridning observerades efter dag 15. ciliär marginalzonen är den enda platsen av näthinnan där vissa PCNA-positiva celler hittades i det obehandlade retina. Detta indikerar ett område med ständigt retinal neurogenes rakt igenomhout livstid 14. Identifieringen av celltyper som är involverade i förnyelse av farmakologiskt skadade fotoreceptorer i zebrafisk var inte i fokus för detta manuskript. Men i tidigare publikationer processen har spårats till regenererande celler i INL som har föreslagits vara Müller celler 9,17,18.

I den aktuella studien har vi även utvärderat funktionella förändringar i MNU-inducerad zebrafisk modell. För att kvantifiera synfunktion i vuxen fisk, har utvärderingen av OKR varit anställd, en av flera tekniker för att tillförlitligt mäta synskärpan (VA) hos smådjur 19. Därigenom OKR, baserad på en medfödd beteende, behöver inte tidigare tidskrävande träning av djuren 20. Såsom OKR kan upprepade gånger framkallas oberoende av djurens samarbete, och de stora ögonen kan lätt iakttas, är bedömningen av OKR en idealisk metod för att följa synskärpa During degeneration och regeneration i zebrafisk. OKR mätningar i denna studie visade en minskande synskärpa till dag 3, följt av en fullständig återställning av den visuella funktionen på dag 30 Detta är i enlighet med de histologiska de- och regenerativa förändringar efter MNU program som visar högst apoptos vid dag 3.

En fördel med modellen är dess enkelhet som MNU är snabb att förbereda och kan direkt upp i vattentanken i zebrafisk. Behandling av zebrafisk med MNU utförs i en timme. Antalet fiskar som kan behandlas i massor begränsas bara av storleken på akvariet. Sammantaget ger detta enkla induktion av näthinnan degeneration i ett stort antal zebrafisk utan behov av manipulation av enskilda fiskar. Därför är mindre invasiv än andra modeller av näthinnan degeneration som använder intravitreala eller kirurgiskt inducerade tekniker 21-23 denna modell och det kan därmed uppvisa en bättre reproducerbarhet.

I allmänhet är denna zebrafisk MNU modell ett mångsidigt verktyg för att inducera fotoreceptorspecifika degenerering och för att visualisera följande regenerering inte bara morfologiskt, utan också funktionellt. Därför är vi övertygade om att modellen hjälper till att bättre förstå degeneration och regeneration processen i den sensoriska näthinnan i allmänhet och öppnar möjligheten att jämföra resultatet med det däggdjurssystem.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetic acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland A6283
Ammonia Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 294993 0.80%
Bovine serum albumine (BSA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 05470
Dako Pen Dako, Glostrup, Danmark S2002
DAPI mounting medium Vector Labs, Burlingame, CA, USA H-1200
Eosin Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 45260
Ethanol Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 2860 100%, 96%, 70%
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland ED
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland E10521 Tricaine
Eukitt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 3989
Goat anti-rabbit Alexa 594 Life Technologies, Zug, Switzerland  A11012
Goat normal serum Dako, Glostrup, Danmark X0907
Hydrochloric acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 320331 0.20%
In situ Cell Death Detection Kit Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Switzerland 11684795910 TUNEL Kit
Mayer's hemalum solution Merck, Darmstadt, Germany 109249
Methylnitrosourea (MNU) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland N4766 Toxic
OptoMotry CerebralMechanics, Lethbridge, AB, Canada n.a.
Paraformaldehyde (PFA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P6148
Phosphate buffered saline (PBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5368
Proteinase K Dako, Glostrup, Danmark S3004
Rabbit anti-PCNA  Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA sc-33756
Superfrost Plus glass slides Gehard Menzel GmbH, Braunschweig, Germany 10149870
Tris buffered saline (TBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5912
Trizma base Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland T1503
Tween 20 Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P1379
Xylene Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 534056
Zebrafish (Danio rerio) AB (Oregon) strain University of Fribourg, Dept. of Biology n.a. Own fish facility

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Haddad, S., Chen, C. A., Santangelo, S. L., Seddon, J. M. The genetics of age-related macular degeneration: a review of progress to date. Surv. Ophthalmol. 51, (4), 316-363 (2006).
  2. Bhatti, M. T. Retinitis pigmentosa, pigmentary retinopathies, and neurologic diseases. Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 6, (5), 403-413 (2006).
  3. Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. Retinitis pigmentosa. Lancet. 368, 1795-1809 (2006).
  4. Tsubura, A., Yoshizawa, K., Kuwata, M., Uehara, N. Animal models for retinitis pigmentosa induced by MNU; disease progression, mechanisms and therapeutic trials. Histol. Histopathol. 25, 233-248 (2010).
  5. Machida, K., Urano, K., Yoshimura, M., Tsutsumi, H., Nomura,, Usui, T. Carcinogenic comparative study on rasH2 mice produced by two breeding facilities. J. Toxicol. Sci. 33, 493-501 (2008).
  6. Morton, D., et al. N-Methyl-N-Nitrosourea (MNU): A positive control chemical for p53+/- mouse carcinogenicity studies. Toxicol. Pathol. 36, 926-931 (2008).
  7. Terracini, B., Testa, M. C. Carcinogenicity of a single administration of N-nitrosomethylurea: a comparison between newborn and 5-week-old mice and rats. 24, 588-598 (1970).
  8. Zulliger, R., Lecaudé, S., Eigeldinger-Berthou, S., Wolf-Schnurrbusch, U. E. K., Enzmann, V. Caspase-3-independent photoreceptor degeneration by N-methyl-N-nitrosourea (MNU) induces morphological and functional changes in the mouse retina. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 249, 859-869 (2011).
  9. Tappeiner, C., et al. Characteristics of rod regeneration in a novel zebrafish retinal degeneration model using N-methyl-N-nitrosourea (MNU). PLOS One. 12, (2013).
  10. Bilotta, J., Saszik, S. The zebrafish as a model visual system. Int. J. Dev. Neurosci. 19, 621-629 (2001).
  11. Fleisch, C., Neuhauss, S. Visual Behavior in Zebrafish. Zebrafish. 3, 191-201 (2006).
  12. Hodel, C., Neuhauss, S. C. F., Biehmaier, O. Time course and development of light adaptation processes in the outer zebrafish retina. InterScience. 288, 653-662 (2006).
  13. Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends Genet. 29, (11), 611-620 (2013).
  14. Brockerhoff, S. E., Fadool, J. M. Genetics of photoreceptor degeneration and regeneration in zebrafish. Cell Mol. Life Sci. 68, 651-659 (2011).
  15. Brand, M., Granato, M., Nüsslein-Volhard, C. Keeping and raising zebrafish. Zebrafish: A Practical Approach. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. IRL Press. 7-38 (2002).
  16. Tappeiner, C., Gerber, S., Enzmann, V., Balmer, J., Jazwinska, A., Tschopp, M. Visual acuity and contrast sensitivity of adult zebrafish. Front. Zool. 9, (1), 10 (2012).
  17. Bailey, T. J., Fossum, S. L., Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Hyde, D. R. The inhibitor of phagocytosis, O-phospho-L-serine, suppresses Müller glia proliferation and cone cell regeneration in the light-damaged zebrafish retina. Exp. Eye Res. 91, 601-612 (2010).
  18. Nelson, C. M., Hyde, D. R. Müller glia as a source of neuronal progenitor cells to regenerate the damaged zebrafish retina. Adv. Exp. Med. Biol. 723, 425-430 (2012).
  19. Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system. Invest. Ophthalmol Vis. Sci. 45, (12), 4611-4616 (2004).
  20. Beck, J. C., Gilland, E., Tank, D. W., Baker, R. Quantifying the ontogeny of optokinetic and vestibulo-ocular behaviors in zebrafish, medaka, and goldfish. J. Neurophysiol. 92, (6), 3546-3561 (2004).
  21. Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Burket, C. T., Hyde, D. R. Regeneration of Inner Retinal Neurons after Intravitreal Injection of Ouabain in. Zebrafish. J. Neurosci. 27, 1712-1724 (2007).
  22. Sherpa, T., et al. Ganglion cell regeneration following whole-retina destruction in zebrafish. Dev. Neurobiol. 68, 166-181 (2008).
  23. Yurco, P., Cameron, D. A. Responses of Müller glia to retinal injury in adult zebrafish. Vision Res. 45, 991-1002 (2005).
Methylnitrosourea (MNU) -inducerad Retinal Degeneration och Regeneration i Zebrafish: Histologisk och funktionella egenskaper
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).More

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter