Summary
هذا الفيلم يوضح كيفية الحصول على ديناميكا الدم النظامية والكبد في الفئران. رصد كامل يشمل اكتساب المعلمات الحيوية، النظامية ضغط الدم، الضغط الوريدي المركزي، معدل تدفق الشريان الكبدي المشترك، وضغط الوريد البابي وكذلك معدل تدفق المدخل في الفئران.
Abstract
استخدام نماذج الماوس في البحث التجريبي هو من أهمية كبيرة لدراسة علم وظائف الأعضاء الكبد والاضطرابات المرضية في جسم المريض. ولكن نظرا لصغر حجم الماوس، ونادرا ما وصفه التفاصيل الفنية لإجراء مراقبة أثناء العملية مناسبة لالماوس. لقد ذكرت سابقا إجراء الرصد للحصول على المعلمات الدورة الدموية للفئران. الآن، نحن تكييفها الإجراء للحصول على المعلمات الدورة الدموية الجهازية والكبد في الفئران، وهي من الأنواع عشرة أضعاف أصغر من الفئران. يوضح هذا الفيلم الأجهزة من الحيوانات وكذلك عملية الحصول على البيانات اللازمة لتقييم ديناميكا الدم النظامية والكبد في الفئران. سجلت المعلمات الحيوية، بما في ذلك درجة حرارة الجسم ومعدل التنفس ومعدل ضربات القلب في جميع أنحاء الإجراء بأكمله. تتكون المعلمات الدورة الدموية الجهازية من ضغط الشريان السباتي (CAP) والضغط الوريدي المركزي (CVP). وتشمل المعلمات نضح الكبدية ضد البابيعين الضغط (PVP)، ومعدل تدفق المدخل وكذلك معدل تدفق الشريان الكبدي المشترك (الجدول 1). الأجهزة والحصول على البيانات لتسجيل تم الانتهاء من القيم العادية في غضون 1.5 ساعة. بقيت المعلمات الدورة الدموية الجهازية والكبد ضمن نطاقات العادية أثناء هذا الإجراء.
هذا الإجراء هو تحدي ولكن ممكنا. نحن بالفعل بتطبيق هذا الإجراء لتقييم ديناميكا الدم في الكبد في الفئران العادية وكذلك أثناء استئصال الكبد الجزئي 70٪ في الفص الكبد وتحامل التجارب. يعني PVP بعد استئصال (ن = 20)، وكان 11.41 ± 2.94 CMH 2 O الذي كان أعلى بكثير (P <0.05) من قبل الاستئصال (6.87 ± 2.39 CMH 2 O). أشارت نتائج الفص الكبد تحامل التجربة أن هذا الإجراء مراقبة حساس ومناسب للكشف عن تغيرات صغيرة في الضغط البابي ومعدل التدفق المدخل. في الختام، هذا الإجراء هو موثوق بها في أيدي ذوي الخبرة جراح الصغير ولكن ينبغي أن يقتصر على إكسبeriments حيث تكون هناك حاجة على الاطلاق الفئران.
Introduction
وكان الهدف العام من هذا الفيديو لإظهار إجراء رصد في الوقت الحقيقي لاكتساب المعلمات الدورة الدموية الجهازية والكبد. الأساس المنطقي لتطوير هذا الإجراء هو قيمة كبيرة للتدخلات التجريبية في الفئران التي تتطلب الحصول على المعلمات الدورة الدموية الجهازية والكبد. يمكن تطبيق الإجراء للحيوانات ساذجة وأثناء أو بعد أمراض الكبد الصفراوي التدخل الجراحي تجريبي معين، مثل استئصال الكبد الجزئي، ربط الوريد البابي وزراعة الكبد.
الحصول على البيانات الدورة الدموية الكبدية في القوارض يتطلب إجراء الغازية المقترحة. نضح الكبدي لا يمكن الحصول عليها غير جراحية. ومع ذلك، هناك بدائل لشراء ضغط الدم النظامية. وقد استخدمت تقنيات الرصد مثل تقنية ذيل صفعة 8 للحصول على ضغط الدم في كل من الفئران والجرذان. تقنية ذيل صفعة يمكن تطبيقها في consciالحيوانات الأوس. عند قياس ضغط الدم، ويحتاج الحيوان إلى وضعها وثابتة في موقف غير مريح معين. في دليل الجهاز الذيل صفعة، ينص الصانع ان الفئران قد تصبح العصبي وشدد والتي قد يقلل من الدورة الدموية في الذيل. تحت هذا الظرف، وضغط الدم المحيطي المكتسبة في الذيل قد يكون أقل بكثير من ضغط الدم المركزي.
تم تنفيذ الإجراء الرصد الكامل مع شاشة متعددة القنوات متكامل باستخدام سلسلة من أجهزة الاستشعار للحصول على البيانات. تم الحصول على ضغط الدم عن طريق إدخال قسطرة في الإناء منهما بعد تشريح دقيق والتعرض المجهرية تحت المجهر. تم قياس معدل التدفق عن طريق وضع مسبار تدفق أسرع من الصوت حول كل سفينة.
أبلغنا بالفعل إجراء مراقبة أثناء العملية مماثلة للفئران مما أدى إلى سلسلة شاملة من البيانات الدورة الدموية الفسيولوجية مماثلة لسينغلوذكرت البيانات الإلكترونية من المجموعات الأخرى 7. لذا اعتبرنا هذا الإجراء لتمثل أساسا جيدا لتكييفه مع الماوس، وهي من الأنواع 10 أضعاف أصغر من الفئران. الفرق الرئيسي إلى إجراء الفئران هو استخدام القسطرة ميلار للحصول على بيانات ضغط الدم بدلا من نظام القسطرة القائم على السائل. تم الحصول على بيانات التدفق أيضا مع تحقيقات تدفق أسرع من الصوت، فقط تلك أصغر بكثير من الأوعية الفئران المقابلة.
نظرا لصغر حجم الحيوان، والأجهزة من الفئران يمثل تحديا من الناحية التقنية، ولكن ممكنا. بمجرد الانتهاء من الأجهزة، والحصول على البيانات وتحليل البيانات الحياة الأساسي هو بسيط، منذ إعداد ملف محدد مسبقا يمكن استخدامها. ملف الإعداد لابد من تعريف مرة واحدة في بداية سلسلة من التجارب، ويمكن تخزينها واستخدامها لجميع التجارب اللاحقة.
حتى الآن طبقنا هذا الإجراء لتقييم آثار الدورة الدموية الكبدية الحادة في التجارب. قمنا بقياس CAP وPVP قبل ومباشرة بعد استئصال الكبد الجزئي 70٪ (PH) وتحامل / تجارب تحامل دي. نحن فرضت الرباط أمراض الكبد الاثني عشر من الفص الأيمن يمثل 20٪ من الكبد تليها كتلة بواسطة وجيزة (5MIN) لقط من الوسيط والفص الجانبي الأيسر يمثل تماما 90٪ من كتلة الكبد. بدأ دي لقط مع الافراج عن المشبك من الفص الأيمن تليها تحرير الوسيط والفص الجانبي الأيسر. كان الوقت القصوى لقط أقل من 10 دقيقة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
كان السكن وجميع الإجراءات التي نفذت وفقا للتشريعات رعاية الحيوان الألمانية.
1. مجسات معايرة (اتبع تعليمات المصنع لمعايرة أجهزة الاستشعار)
1.1) ميلار القسطرة المعايرة. قبل نقع طرف القسطرة في الماء المعقم أو محلول ملحي لمدة 30 دقيقة قبل موازنة (التصفير) والمعايرة.
- ربط أجهزة الاستشعار ميلر لقناة millar1 من مكبر للصوت الجسر وإدراج غيض استشعار ميلر في عمود الماء.
- تعيين قيمة عمود الماء إلى 0 CMH 2 O. في إطار البرنامج تحليل البيانات، واختيار جسر تضخيم والصفر عليه. يمكن تعيين قيمة خط الأساس 0 CMH 2 O.
- تعيين قيمة عمود الماء إلى 20 CMH 2 O. تشغيل تحليل البيانات إطار البرنامج التقدم، ووقف. اختيار "الوحدات" في إطار من جسر تضخيم، تعيين خط الأساس من 0 و 20 CMH 2 O وفقا لذلك. ضبط "وحدة" لشركة بيت إدارة المال <الفرعية> 2 O.
- معايرة millar2 لقياس CAP بنفس الطريقة (تعيين اثنين خط الأساس 90 و 110 CMH 2 O).
1.2) معايرة التحقيق تدفق الدم
- وضع التحقيق في الماء منزوع الأيونات. تواصل التحقيق مع تدفق أسرع من الصوت نظام التحقيق.
- في إطار البرنامج تحليل البيانات، واختيار الإدخال تضخيم إلى الصفر التحقيق التدفق. ضبط وحدة.
- اضغط على الزر لقناة "اختبار" لجمع إشارة: إذا كانت إشارة ديها 3-4 القضبان، فهذا يعني إشارة جيدة. في حال حصلت على إشارة جيدة، ويمكن أن يستمر هذا الإجراء.
- اضغط على الزر ل"الصفر قناة" وقناة النطاق لمعرفة ما إذا كان قد تم معايرة قيمة أم لا.
- اضغط على الزر ل"اجراء قناة" لقياس احق.
2. إعداد الماوس لإجراء جراحة
- ضع الماوس في غرفة الاستقراء وتخدير الفأر مع 2٪ الأيزوفلورين و0.3 مل / دقيقة الأوكسجين. العملية لا يمكن أن يؤديها إذا كان إصبع القدم قرصة الانسحاب المنعكس من الفأرة غائب.
- حلق الفراء من المناطق الجراحية، والتي تشمل الرقبة اليسرى والبطن.
- ضع الماوس على الطاولة العملية واصلاحها باستخدام الأشرطة. استخدام مرهم الطبيب البيطري على العينين لمنع جفاف خلال فترة التشغيل.
- وضع وسادة تحت الرقبة الشاش التعرض الأمثل للمجال تشغيل الرقبة.
- تطهير مجال التشغيل ووضع الشاش المعقم لتغطية الفأرة وترك المجال مفتوحا الجراحية فقط.
3. معلمات الحيوية القياس
- إدراج الإبر تحت الجلد ECG في الكفوف من الماوس.
- وضع أجهزة الاستشعار في الجهاز التنفسي تحت الجزء الخلفي من الماوس.
- وضع مسبار درجة الحرارة في المستقيم من الفأرة.
- درجة حرارة قياسية، تخطيط القلب ومعدل التنفس من الفأرة في برامج تحليل البيانات.
4. الرقبة عملية لSمراقبة القلب والأوعية الدموية ystemic
4.1) تشريح السفن
- التعرف على خط الوسط من الرقبة، ونقطة وسطى من الترقوة، زاوية الفك السفلي.
- إجراء شق طولي 2CM من زاوية الفك السفلي إلى النقطة الوسطى من الترقوة وهو 0.5CM إلى الجانب الأيسر من خط الوسط.
- تشريح الغدة تحت الفك السفلي، اقلبها وتغطية ذلك مع الشاش غارقة المالحة.
- تحديد الوريد الوداجي، تشريح ووضع ثلاثة خيوط الحرير 6-0 تحت الوريد لربط وتثبيت لاحق.
- تحديد عضلة القصية الترقوية الخشائية، تفصلها عن البطن متفوقة من بطن اللامية الكتفية والخلفي للعضلة ذات البطنين، وتسحبه مع ضام التعرض السهل للشريان السباتي.
- تشريح الشريان السباتي ووضع ثلاثة خيوط الحرير 6-0 تحت الشريان لربط وتثبيت لاحق.
4.2) قياس تدفق الدم الشريان السباتي
- وضع TRANSONICتحقيق حول الشريان السباتي، ويبقيه مستقرة، وتحسين الاتصال باستخدام الموجات فوق الصوتية هلام أو المالحة.
- سجل سرعة تدفق الدم من الشريان السباتي كما هو مبين على الشاشة الصغيرة من الجهاز أسرع من الصوت باستخدام برمجيات تحليل البيانات
- إزالة التحقيق بعد الانتهاء من قياس
4.3) قياس ضغط الشريان السباتي (CAP)
- Ligate نهاية القاصية من الشريان السباتي وكبح نهايته القريبة.
- 2 تحديد مكان الغرز حول الشريان السباتي. 10-0 استخدام البرولين للخياطة البقاء.
- إجراء شق صغير في الجدار الأمامي للسفينة.
- ادخال القسطرة ميلار واصلاحها مع الغرز وضعت مسبقا.
- تسجيل CAP في برنامج تحليل البيانات.
4.4) حبل الوريد قياس تدفق الدم
- رفع حبل الوريد ووضع مسبار تدفق أسرع من الصوت لقياس معدل التدفق.
- تسجيل معدل التدفق في برامج تحليل البيانات.
4.5) قياس الضغط الوريدي المركزي (CVP)
- المشبك نهاية القريبة من حبل الوريد وligate نهاية البعيدة.
- قطع شق صغير باستخدام microscissors على الجدار الأمامي للسفينة.
- ادخال القسطرة مملوءة بسائل واصلاحها مع خطوط خياطة صاحب المركز قبل.
- تسجيل CVP في برامج تحليل البيانات.
5. عملية في البطن لاكتساب كبدي ديناميكا الدم
5.1) هوية السفينة
- إجراء شق عرضية على البطن.
- Eventerate الأمعاء إلى الجانب الأيسر، وتغطي مع الشاش الرطب.
- التعرف على الوريد الأجوف السفلي، الوريد البابي والشريان الكبدي المشترك والشريان الكبدي السليم.
- التخلي عن بعض المالحة الدافئة في البطن وعلى سطح الأمعاء كل 5 دقائق أثناء إجراء الرصد كله.
5.2) قياس تدفق الدم البابي
- تشريح الوريد البابي.
- وضع 6-0 الحرير تحت الوريد البابي لتسهيل رفع السفينة عند وضع مسبار التدفق.
- وضع المسبار تدفق أسرع من الصوت حول الوريد البابي وقياس معدل تدفق الدم فيها.
- تسجيل معدل تدفق الدم من الوريد البابي.
5.3) قياس المشترك تدفق الشريان الكبدي
- تشريح الشريان الكبدي المشترك بحذر.
- مكان واحد 6-0 خياطة الحرير حول السفينة لتسهيل رفع السفينة.
- وضع التحقيق حول تدفق الشريان.
- قياس تدفق الدم والحصول على البيانات.
5.4) قياس ضغط الوريد البابي (PVP)
- اختيار فرع واحد من الوريد المساريقي مع عدد قليل من فروع جانبية، والتي تستنزف مباشرة في الوريد البابي.
- Ligate النهاية البعيدة من الوريد المساريقي المحدد. تأكد من أن ربط قريب من أنبوب الأمعاء. Ligate فروعها الصغيرة
- وضع 2 وixing باستخدام الغرز 6-0 البرولين حول الوريد. النقطة الرئيسية من هذا الإجراء هو تجنب لمس الشريان المساريقي عندما ligating الوريد.
- المشبك نهاية القريبة من الوريد البابي.
- 2 وضع الغرز إقامة باستخدام 10-0 البرولين. سوف يحدث بعض النزيف منذ خياطة إقامة يجب تخترق جدار الأوعية الدموية من الوريد المساريقي يرام.
- إجراء شق صغير في الوريد باستخدام microscissor بشكل غير مباشر في زاوية 45 درجة.
- ادخال القسطرة ميلار عن طريق الوريد المساريقي في الوريد البابي وإصلاحه
- تسجيل ضغط الوريد البابي. في نهاية هذا الإجراء، التضحية الفئران عن طريق استنزاف تحت التخدير.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
المعلمات الحيوية للفئران مثل معدل التنفس ومعدل ضربات القلب ومن الواضح أن أعلى بكثير مما كان عليه في الفئران. يعني النظامية ضغط الدم وضغط الوريد الوداجي مماثلة لقيم الفئران وحتى مماثل للبيانات الإنسان.
بيانات الدورة الدموية الكبدية مختلفة اضح. حصلنا على القيم العادية من 8 الفئران. تراوحت تدفق الدم البابي في الفئران العادية بين 1،6-2،3 مل / دقيقة. التدفق في الشريان الكبدي المشترك تراوحت 0،10-0،35 مل / دقيقة. كان ضغط الوريد البابي في الحيوانات الطبيعية في مجموعة واسعة 4،4 حتي 11،2 CMH 2 O مع قيمة متوسط 8.09 ± 2.47 CMH 2 O (الجدول 1). هذه مجموعة واسعة قد تؤدي إلى اختلافات صغيرة ولكنها لم تكن ذات دلالة عند مقارنة القيمة المتوسطة من مجموعات صغيرة من حيوانات طبيعية.
منذ لاحظنا الفروق الفردية بين كبيرة وخصوصا في الضغط البابي، نحن اختبار ما إذا كان يمكن أن يتم الكشف عن الفروق الفردية داخل صغيرة مع هذه التكنولوجيايت ضمن. قمنا بتقييم هذا الإجراء في اثنين من إعدادات التجريبية المختلفة: جزئي استئصال الكبد والكبد الفص لقط / دي لقط. الضغط البابي قبل ومباشرة بعد استئصال الكبد الجزئي 70٪ (ن = 20) في نفس الحيوان (الشكل 1) بنسبة 2 أضعاف من 6.87 ± 2.39 و 11.41 ± 2.94 CMH 2 O (P = <0.001). وكانت هذه النتائج في مجموعة مماثلة كما لوحظ في الأنواع الأخرى 5،12، وكذلك في البشر 7.
تم الحصول عليها الطبيعي ضغط الوريد البابي والضغط البابي قبل الاستئصال من مجموعتين مختلفتين (واحد من مجموعة المعلمات المراقبة العادية، والآخر 70٪ من مجموعة PH). يرجع ذلك إلى مجموعة واسعة من الضغط البابي في الفئران العادية (من 4 إلى 11 CMH 2 O)، قد يكون متوسط قيم مجموعات صغيرة من حيوانات مختلفة قليلا، كما لوحظ في تجربتنا (8.09 ± 2.47 CMH 2 O مقابل 6.87 ± 2.39 CMH 2 O). ومع ذلك، عند تحليل البيانات، وجدنا أنه لا يوجد statistically اختلاف كبير بين هاتين المجموعتين (P = 0.237).
تم تصميم /-لقط لقط دي التجربة لإثبات أن هذا الإجراء هو حساسة بما يكفي لالتقاط التغيرات أصغر في الضغط البوابة. أدى لقط من الفص الأيمن يمثل 20٪ من كتلة الكبد في أي بزيادة قدرها حوالي 17٪. مزيد من تحامل من الوسيط والفص الجانبي الأيسر تسبب بزيادة قدرها على الأقل 2-3 أضعاف مقارنة مع ضغط بوابة الانطلاق. عاد الضغط البابي تدريجيا إلى ضغط البدء، عندما الافراج عن المشبك من الفص الأيمن مما أدى إلى لقط من 70٪ من الكبد. عاد الضغط إلى مستوى الانطلاق عند إزالة المشبك من الوريد البابي الأيسر توريد الوسيط والفص الجانبي الأيسر (الشكل 2 والجدول 2). ظلت MAP المجموعة عملية صورية ثابتة ضمن 1H بعد فتح البطن. خريطة الفئران في المجموعة الضابطة، التي تم الحصول عليها عند نقطة زمنية متماثلةكما هو الحال في التجربة لقط، كان لا يوجد فرق كبير مقارنة مع خطة عمل البحر المتوسط من المجموعة التجريبية. كشفت نتائج كل التجارب أن التغييرات الصغيرة حتى داخل الفرد أقل من 20٪ يمكن أن يتم الكشف عن هذا الإجراء.
المضاعفات نموذجية مثل نزيف حاد واحتقان قد تحدث أثناء العملية. منذ فقدان الدم الشديد قد يسبب انخفاضا كبيرا خطة عمل البحر المتوسط وكذلك حماية الأصناف النباتية، ينبغي القضاء على الفئران مع نتائج هذا التعقيد. لتجنب الازدحام وتخثر وريدي عند تنفيذ التجربة الكبد الفص لقط، نقترح حقن الهيبارين جرعة صغيرة (500 U / كجم) داخل الجراحة قبل التثبيت. الشريان الكبدي شائع يمكن الخضوع لتشنج سفينة عابرة على التعامل مع مثل رفع السفينة، ووضع التحقيق. قد يؤدي ذلك إلى حدوث نقص تروية عابرة وجيزة من الكبد. بشكل عام، يمكن للتشنج تزول عفويا في غضون دقائق. وتشنج الأوعية الدموية قصيرة في CHA لا يطرح مشكلة خطيرةلحياة الحيوان، ولكن قد تتداخل مع النتائج التجريبية، وعندما تركز على إصابة الكبد نقص التروية ضخه.
في الختام، هذا الإجراء هو تحدي ولكن ممكنا. فإنه يتطلب بعض التدريب حتى عن ذوي الخبرة الجراحين الدقيقة. بسبب المقارنة تقلب بين الفردية العالية للبيانات التي تم الحصول عليها ضغط في الحيوانات المختلفة قبل وبعد التدخل قد لا يؤدي إلى نتائج حاسمة. لذا نوصي هذا الإجراء لدراسة التنظيم على المدى القصير من ديناميكا الدم في الكبد الحادة التجارب من خلال الحصول على البيانات قبل وبعد تدخل ضمن نفس الحيوان.
| المعلمات | حصلت على البيانات الخاصة | وذكرت المعلمات | |
| المعلمات الحيوية | معدل ضربات القلب (ن = 8) | 418 ± 55 BPM | 389 (353-566) BPM 1 |
| 162 ± 11 BPM | 254 ± 2 BPM 28 | ||
| درجة الحرارة (ن = 8) | 33.56 ± 0.54 ° C | 36،1-36،6 ° C 11 | |
| ضغط الدم النظامية (CAP) (ن = 8) | 130.54 ± 20.47 CMH 2 O (= 96.02 ± 15.06 ملم زئبقي) | 94 ± 15 مم زئبقي 9 | |
| الضغط الوريدي المركزي (CVP) (ن = 2) | 8.90 ± 3.25 CMH 2 O | 5.9 ± 2.0 CMH 2 O 11 | |
| ديناميكا الدم الكبدية | تدفق الوريد البابي (ن = 6) | 2.03 ± 0.24 مل / دقيقة | 3.0 (2،5-3،1) مل / دقيقة 1 |
| 3.3 مل / دقيقة 1 | |||
| المشترك تدفق الشريان الكبدي (ن = 6) | 0.20 ± 0.09 مل / دقيقة | لا FOU الثانية | |
| PVP (ن = 8) | 8.09 ± 2.47 CMH 2 O (= 5.95 ± 1.82mmHg) | 5.3 ± 1.4 سم 3 المالحة | |
| 8.7 ± 2.1 ملم زئبقي 4 | |||
| 4mmHg 6 | |||
الجدول 1. المعلمات الدورة الدموية الجهازية والكبد من الفئران العادية المكتسبة باستخدام هذا الإجراء مراقبة CAP: ضغط الشريان السباتي. MAP: يعني الضغط الشرياني. CVP: الضغط الوريدي المركزي؛ PVP: ضغط الوريد البابي.
الشكل 1. PVP قبل وبعد 70٪ PH. البوابة ضغط الوريد قبل وبعد استئصال الكبد الجزئي 70٪ (ن = 20) كانت 6.87 ± 2.39 و 11.41 ± 2.94 CMH 2 O.www.jove.com/files/ftp_upload/51955/51955fig1highres.jpg "الهدف =" _ على بياض "> اضغط هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
| المعلمات (cmH2O) | بعد فتح البطن | بعد تحامل 20٪ من الكبد (RL) | بعد تحامل 90٪ من الكبد (RL ML + + LLL) | بعد تحامل 70٪ من الكبد (ML + LLL) | في نهاية (إطلاق سراح جميع المشابك) |
| PVP - تحامل مجموعة إكسب (ن = 10) | 9.59 ± 4.00 | 10.45 ± 3.89 | 25.78 ± 8.99 | 16.91 ± 9.86 | 11.14 ± 4.48 |
| متوسط CAP - مجموعة لقط إكسب (ن = 10) | 121.50 ± 18.67 | 95.89 ± 32.76 | 74.41 ± 35.35 | 93.88 ± 42.96 | 89.44 ± 44.20 |
| متوسط CAP - الشام مجموعة (ن = 3) | 123.33 ± 12.42 | 121.0 ± 5.57 | 124.00 ± 8.66 | 127.33 ± 7.23 | 123.00 ± 8.89 |
الجدول 2. استجابة الدورة الدموية بعد لقط وإزالة الملقاط من فصوص الكبد المختلفة (ن = 10) RL: الفص الأيمن، ML: الفص الوسطي (بما في ذلك متوسط الفص الأيمن والفص الأيسر وسيطة)، LLL: غادر الفص الجانبي.
الرقم 2. استجابة الدورة الدموية بعد لقط وإزالة الملقاط من فصوص الكبد المختلفة (ID الحيوان: CHI-108) A.. PVP الحق بعد إدخال القسطرة ميلار كان 8.8 CMH 2 O. PVP بعد تحامل 20٪ فص كبد كان 10.8 ارتفع CMH 2 OBPVP إلى 17.5 CMH 2 O بعد تحامل 90٪ فص الكبد. انخفضت C. PVP إلى 10.3 CMH 2 O عندما الافراج عن المشبك من الفص الأيمن. ذهب D.PVP إلى 8.7 CMH 2 الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
رصد ديناميكا الدم الكبد هو أداة بحثية هامة في الكبد والجراحة الكبدية الصفراوية. الحصول على البيانات الدورة الدموية الكبدية يساعد على توصيف تأثير الإجراءات الكبدية الصفراوية على الدورة الدموية. هناك حاجة إلى الحصول على بيانات الدورة الدموية الكبدية أيضا لدراسة تأثير الأدوية التي تؤثر الضغط البابي وتدفق البوابة، على سبيل المثال، حسب الحاجة في دراسات تقييم العقاقير فعال في الأوعية.
على الرغم من صغر حجمها، والمعلمات الحيوية، النظامية وديناميكا الدم الكبدية يمكن رصدها في الفئران. كانت الخطوات الحاسمة ضمن البروتوكول على النحو التالي: أولا، من المهم وضع الحيوان على وسادة الاحترار خلال الإجراء بأكمله لتجنب انخفاض حرارة الجسم مما قد يؤدي إلى ضعف الدورة الدموية. ثانيا، لا بد من توخي الحذر جدا عند تشريح الأوعية على فأرة الحاسوب، منذ جدار الوعاء الدموي من الماوس هش جدا ورقيقة. يبدو أفضل لإصلاح جدار الوعاء الدموي عن طريق الاستيلاء على بعض الأنسجة الدهنية على السطح البريد بدلا من الاستيلاء على جدار الوعاء نفسه. ثالثا، من المهم جدا لتجنب ربط الشريان المساريقي عرضي لعدم عرقلة إمدادات الشرايين عند وضع الغرز حول تحديد الوريد المساريقي.
ومع ذلك، فإن تقنية التوجيه الغازية لديها بعض القيود. أول واحد هو الغزو بنفسها. هذه التقنية هي طريقة الرصد الغازية، الأمر الذي يتطلب التدخل الجراحي. وبالتالي فإن الإجراء مراقبة نفسها قد تتسبب في آثار جانبية للحيوانات. ومن هنا، استخدمنا فقط هذا الإجراء للحصول على المعلمات الدورة الدموية في الحيوانات العادية والحادة في التجارب، ولكن ليس في التجارب البقاء. في الخطوة التالية، ونحن نريد لتقييم هذه التقنية في التجارب البقاء. والقيد الثاني من هذا الإجراء هو أنه يتطلب خبرة كبيرة المجهرية. يجب فقط أن يتم تنفيذ مراقبة الدورة الدموية في الفئران عن طريق microsurgeons مدربين على وجه التحديد. قدم المساواة أصعبر من هذا الإجراء الرصد هو إدخال القسطرة ميلار في الوريد المساريقي صغيرة، لأن هذا المنوال لا يزال هشا للغاية. في أيدينا، هناك حاجة لحوالي 10 عمليات التدريب لmicrosurgeon ذوي الخبرة قبل التمكن من الناحية الفنية هذا الإجراء. وقد عرفت تجربة بعد أن أجريت بنجاح أكثر من 50 مفاغرة الأوعية الدموية (الشريان السباتي، الوريد الوداجي) في الجرذان أو الفئران. القيد الثالث هو أن الضغط البوابة التي تم الحصول عليها مع هذا الأسلوب قد يكون تحت نطاق الفسيولوجية للحيوان العادي. المساريقي ربط الوريد وإدخال القسطرة قد يقلل من الحجم الكلي للاستنزاف الدم في الوريد البابي بنسبة تقدر ب 10٪. ومع ذلك، هذا النطاق الفسيولوجية لا يمكن الحصول عليها باستخدام الأجهزة المتوفرة حاليا. وبالمثل، فإن تأثير التخدير نفسها على PVP لا يمكن استبعاد 13. ومع ذلك، منذ تخضع جميع الحيوانات إلى نفس التدخل، فإن الخطأ المحتمل أن يكون خطأ منهجي. وبالتالي، دينبغي أن يتم تفسير آتا بحذر تركز على التغيرات النسبية داخل حيوان وليس بالضرورة على الاختلافات المطلقة بين الحيوانات.
ومع ذلك، هناك بدائل قليلة لرصد الدورة الدموية الغازية في القوارض. مراقبة غير الغازية يقتصر على الاستحواذ على ضغط الدم النظامية. الضغط البابي أو تدفق المدخل لا يمكن تحديد غير جراحية في الفئران. مراقبة القياس عن بعد ويقتصر أيضا إلى الاستحواذ على ضغط الدم النظامية. لا توجد تقارير بشأن حيازة القياس عن بعد من المعلمات الدورة الدموية الأخرى.
هناك حاجة إلى هذا الإجراء مراقبة أثناء العملية الكاملة لفهم العمليات الفسيولوجية الكبدية مثل تنظيم التروية الكبد، وتجديد الكبد والجراحة الكبدية الصفراوية شامل. القدرة على رصد وجمع البيانات من حيوانات المختبر intraoperatively في الوقت الحقيقي مما يمثل تقدما كبيرا في دراسة دي الكبدsease وارتفاع ضغط الدم البابي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.
Acknowledgments
وأيد هذا البحث من قبل Ministery الألمانية الاتحادية للتعليم والبحوث (BMBF) تمول "الشبكة الافتراضية الكبد". أود أن أشكر فرانك شوبرت ورينيه غومبيرت من مركز إعلام مستشفى جامعة يينا لمساعدتهم في إنتاج الفيديو وخلق الرسوم المتحركة وإيزابيل جنك لتسجيل الصوت.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PowerLab 16/30 | ADInstruments | PL3516 | |
| Quad Bridge Amp | ADInstruments | FE224 | Bridge amplifier |
| Animal Bio Amp | ADInstruments | FE136 | |
| Needle Electrodes for FE136 (3 pk) | ADInstruments | MLA1213 | |
| Perivascular Flowmeter Module | Transonic | TS420 | |
| Flowprobe MA0.5PSB/MA1PSB | Transonic | MA0.5PSB/MA1PSB | |
| SPR-1000 Mouse Pressure Catheter | Millar instruments | 841-0001 | |
| fluid filled catheter | Terumo | SR+DU2619PX | 26G, 0.64×19mm |
| micro scissors | F·S·L | No. 14058-09 | |
| micro serrefine | F·S·L | No.18055-05 | |
| Micro clamps applicator | F·S·L | No. 18057-14 | |
| Straight micro forceps | F·S·L | No. 00632-11 | |
| Curved micro forceps | F·S·L | No. 00649-11 | |
| needle-holder | F·S·L | No. 12061-01 | |
| 6-0 silk | ethicon | ||
| 6-0 prolene | ethicon | ||
| 7-0 prolene | ethicon | ||
| 10-0 prolene | ethicon | ||
| Tail cut-off device | Kent Scientific | www.kentscientific.com | |
| LabChart7 | ADInstruments | data analysis software |
References
- Albuszies, G., et al. Effect of increased cardiac output on hepatic and intestinal microcirculatory blood flow, oxygenation, and metabolism in hyperdynamic murine septic shock. Crit Care Med. 33 (10), 2332-2338 (2005).
- Bernhard, W., et al. Phosphatidylcholine molecular species in lung surfactant: composition in relation to respiratory rate and lung development. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25 (6), 725-731 (2001).
- Cheever, A. W., Warren, K. S. Portal vein ligation in mice: portal hypertension, collateral circulation, and blood flow. 18, 405-407 (1963).
- Costa, G., Aguiar, B. G., Coelho, P. M., Cunha-Melo, J. R. On the increase of portal pressure during the acute and chronic phases of murine schistosomiasis mansoni and its reversibility after treatment with oxamniquine. Acta Trop. 89 (1), 13-16 (2003).
- Cui, S., Shibamoto, T., Zhang, W., Takano, H., Kurata, Y. Venous resistance increases during rat anaphylactic shock. Shock. 29 (6), 733-739 (2008).
- Geerts, A. M., et al. Comparison of three research models of portal hypertension in mice: macroscopic, histological and portal pressure evaluation. Int. J. Exp. Pathol. 89 (4), 251-263 (2008).
- Huang, H., Deng, M., Jin, H., Dirsch, O., Dahmen, U. Intraoperative vital and haemodynamic monitoring using an integrated multiple-channel monitor in rats. Lab Anim. 44 (3), 254-263 (2010).
- Krege, J. H., Hodgin, J. B., Hagaman, J. R., Smithies, O. A noninvasive computerized tail-cuff system for measuring blood pressure in mice. Hypertension. 25 (5), 1111-1115 (1995).
- Kuga, N., et al. Rapid and local autoregulation of cerebrovascular blood flow: a deep-brain imaging study in the mouse. J. Physiol.. 587 (Pt 4), 745-752 (2009).
- Muraki, T., Strain Kato, R. difference in the effects of morphine on the rectal temperature and respiratory rate in male mice. Psychopharmacology (Berl). 89 (1), 60-64 (1986).
- Nielsen, J. M., et al. Left ventricular volume measurement in mice by conductance catheter: evaluation and optimization of calibration. Am. J. Physiol Heart Circ. Physiol. 293 (1), H534-H540 (2007).
- Sakamoto, M., et al. Improvement of portal hypertension and hepatic blood flow in cirrhotic rats by oestrogen. Eur. J. Clin. Invest. 35 (3), 220-225 (2005).
- Reverter, E., et al. Impact of deep sedation on the accuracy of hepatic and portal venous pressure measurements in patients with cirrhosis. Liver Int. 34 (1), 16-25 (2014).
