Summary
הסרט הזה מדגים כיצד לרכוש פרמטרים המודינמיים מערכתיים וכבדים בעכברים. כל הניטור כולל רכישה של פרמטרים חיוניים, לחץ מערכתי בדם, לחץ ורידים מרכזיים, קצב זרימת עורק כבד נפוץ, ולחץ וריד שער, כמו גם את קצב זרימת הפורטל בעכברים.
Abstract
השימוש במודלים של עכברים במחקר ניסיוני יש חשיבות עצומה ללימוד פיזיולוגיה של כבד והפרעות pathophysiological. עם זאת, בשל גודלו הקטן של העכבר, פרטים טכניים של הליך הניטור תוך הניתוחי המתאים לעכבר תוארו לעתים רחוקות. בעבר שכבר דווח בנוהל מעקב כדי לקבל פרמטרים המודינמית לחולדות. עכשיו, אנחנו מותאמים ההליך לרכישת פרמטרים המודינמית מערכתיים וכבדים בעכברים, מינים פי עשר קטנים יותר מחולדות. סרט זה מדגים את המכשור של בעלי החיים, כמו גם את תהליך רכישת הנתונים הדרושים כדי להעריך פרמטרים המודינמיים מערכתיים וכבדים בעכברים. פרמטרים חיוניים, כולל טמפרטורת גוף, קצב נשימה וקצב לב נרשמו לאורך כל ההליך. פרמטרים המודינמית מערכתיים מורכבים של לחץ בעורק התרדמה (CAP) ולחץ מרכזי ורידים (CVP). פרמטרים זלוף כבדית כוללים פורטל vלחץ עין (PVP), קצב זרימת פורטל וכן את קצב הזרימה של העורק המשותף בכבד (טבלת 1). מכשור ורכישת נתונים כדי להקליט את הערכים נורמלים הושלמו בתוך 1.5 h. פרמטרים המודינמית מערכתיים וכבדים נשארו בטווח נורמלי במהלך הליך זה.
הליך זה הוא מאתגר אבל אפשרי. יש לנו כבר מיושם בהליך זה כדי להעריך פרמטרים המודינמיים בכבד בעכברים נורמלים, כמו גם במהלך 70% כריתה חלקית ובאונת כבד הידוק ניסויים. אומר PVP לאחר כריתה (n = 20), הייתה 11.41 ± 2.94 CMH 2 O שהיה גבוה באופן משמעותי (P <0.05) מאשר לפני הכריתה (6.87 ± 2.39 CMH 2 O). התוצאות של אונת כבד מהדקת ניסוי הצביעו על כך שנוהל מעקב זה הוא רגיש ומתאים לאיתור שינויים קטנים בלחץ פורטל וקצב זרימת פורטל. לסיכום, הליך זה הוא אמין בידיהם של מיקרו מנתח מנוסה אבל צריך להיות מוגבל לexperiments לאן עכברים נחוצים ביותר.
Introduction
המטרה הכללית של הווידאו הזה הייתה להדגים הליך ניטור בזמן אמת לרכישת פרמטרים המודינמית מערכתיים וכבדים. הרציונל לפיתוח הליך זה הוא גדול הערך שלה עבור התערבויות ניסיוניות בעכברים שדורשים קבלת פרמטרים המודינמית מערכתיים וכבדים. ההליך יכול להיות מיושם על בעלי חיים תמימים ובזמן או לאחר התערבות כירורגית ניסיונית hepato-מרה ניתנה, כגון כריתה חלקית, קשירת וריד שער והשתלה כבד.
רכישה של נתונים המודינמית כבד במכרסמים דורשת הליך פולשני המוצע. לא ניתן להשיג זלוף כבד הלא פולשני. עם זאת, יש חלופות לרכישת לחץ הדם המערכתי. טכניקות ניטור כגון טכניקת שרוול זנב 8 כבר נוצלו לרכישת לחץ הדם בשני חולדות ועכברים. טכניקת שרוול הזנב יכולה להיות מיושמת בconsciבעלי חיים מפוקפקים. כאשר מודדים את לחץ הדם, את החיה צריכה להיות ממוקמת וקבוע בתנוחה לא נוחה ספציפית. במדריך של מכשיר זנב השרוול, היצרן קובע כי עכברים עלולים להיות עצבניים והדגישו שעשויה להפחית את זרימת הדם בזנב. תחת נסיבות ש, לחץ דם ההיקפי שנרכשו בזנב עשוי להיות נמוך בהרבה מלחץ הדם המרכזי.
נוהל המעקב המלא בוצע עם צג מרובה ערוצים משולב באמצעות שורה של חיישנים לרכישת נתונים. לחץ הדם היה מתקבל על ידי הכנסת קטטר לתוך הכלי המתאים לאחר נתיחה זהירה מייקרו וחשיפה מתחת למיקרוסקופ. קצב הזרימה שנמדד על ידי הצבת זרימת בדיקה transonic מסביב לכל כלי.
אנחנו כבר דיווחו נוהל מעקב במהלך ניתוח דומה לחולדות וכתוצאה מסדרה מקיפה של הנתונים המודינמית פיסיולוגיים דומים לSinglנתוני דואר דיווחו מקבוצות אחרות 7. לכן אנחנו נחשבים בהליך זה כדי לייצג את בסיס טוב להתאמת לעכבר, מינים פי 10 קטנים יותר מהחולדה. ההבדל העיקרי להליך העכברוש הוא השימוש בצנתרי מילר לרכישת נתונים בלחץ דם ולא מערכת צנתר מבוסס נוזל. נתוני זרימה גם נרכשו עם בדיקות זרימת transonic, רק אלה קטנים בהרבה לכלי עכברוש המקבילים.
בשל גודלו הקטן של בעלי החיים, מכשור של עכברים הוא מאתגר מבחינה טכנית, אבל אפשרי. ברגע המכשור יושלם, רכישת נתונים וניתוח נתונים חיים העיקרי הוא פשוטה, שכן קובץ הגדרה מוגדר מראש יכול לשמש. קובץ ההגדרה יש להגדיר פעם אחת בתחילת סדרה של ניסויים וניתן לאחסן ולהשתמש בהם לכל הניסויים הבאים.
עד עכשיו אנחנו מוחלים בהליך זה כדי להעריך את ההשפעות המודינמית כבד בניסויים חריפים. מדדנו CAP וPVP לפני ומייד לאחר 70% כריתה חלקית (PH) ובהידוק / ניסויים מהדק-de. אנחנו הידקתי את רצועת hepato-התריסריון של האונה הימנית המייצגת 20% מהכבד המוני ואחרי הידוק קצר (5min) של החציון ואונה לרוחב שמאל מייצג לחלוטין 90% מהמסה הכבד. De-ההידוק התחיל עם שחרור המהדק מהאונה הימנית ואחריו לשחרר את החציון ואונה לרוחב עזבה. זמן הידוק מקסימאלי היה מתחת 10 דקות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
שיכון וכל ההליכים שבוצעו היו בהתאם לבעלי החיים הגרמנים רווחה חקיקה.
1 חיישני כיול (מלאו אחר הוראות של היצרן עבור חיישני כיול)
1.1) כיול צנתר מילר. טרום להשרות את קצה הצנתר במים או תמיסת מלח סטרילית ל30 דקות לפני לאזן (איפוס) וכיול.
- חבר את חיישן מילר לערוץ millar1 של מגבר גשר והכנס את קצה חיישן מילר לעמודת מים.
- הגדר את ערך העמודה מים ל0 CMH 2 O. בחלון תוכנה לניתוח נתונים, לבחור גשר להגביר ולאפס אותו. ניתן להגדיר 0 CMH O 2 הערך הבסיסי.
- הגדר את ערך העמודה מים ל20 CMH 2 O. הפעל חלון תוכנת התקדמות ניתוח נתונים, ולהפסיק. בחר "יחידות" בחלון של גשר להגביר, להגדיר את נקודת ההתחלה של 0 ו20 CMH 2 O בהתאם. התאם את "היחידה" לCMH <תת> 2 O.
- כייל את millar2 למדידת CAP באותה הדרך (להגדיר שורת שתי בסיס 90 ו110 CMH 2 O).
1.2) כיול זרימת דם בדיקה
- שים את הבדיקה למים ללא יונים. חבר את הבדיקה עם מערכת זרימת הבדיקה transonic.
- בחלון תוכנה לניתוח נתונים, לבחור קלט להגביר לאפס את זרימת הבדיקה. התאם את היחידות.
- לחץ על הכפתור כדי "ערוץ מבחן" כדי לאסוף את האות: אם יש לו את האות 3-4 בארים, זה אומר האות היא טובה. במקרה אות טובה נרכשה, ניתן להמשיך את ההליך.
- לחץ על הכפתור "אפס ערוץ" וערוץ קנה מידה כדי לראות אם הערך כבר מכויל או לא.
- לחץ על הכפתור כדי "ערוץ מידה" למדידה מאוחר יותר.
2 הכן את העכבר להליך הכירורגי
- מניחים את העכבר בתא אינדוקציה ולהרדים את העכבר עם 2% isoflurane ו0.3 מ"ל / חמצן דקות. הפעולה יכולה להתבצע אם רפלקס נסיגת הבוהן הקמצוץ של העכבר הוא נעדר.
- לגלח את הפרווה של אזורים כירורגית, הכוללים את הצוואר והבטן השמאלי.
- מניחים את העכבר על שולחן הניתוח ולתקן אותה באמצעות קלטות. השתמש במשחת וטרינר על עיניים כדי למנוע יובש בתקופת המבצע.
- הנח כרית גזה מתחת לצוואר לחשיפה אופטימלית של שדה הפעולה של צוואר.
- לחטא את שדה פעולה ואת מקום gauzes מעוקר כדי לכסות את העכבר רק עוזב את שדה הניתוח פתוח.
מדידת .3 פרמטרים ויטל
- הכנס את מחטי א.ק.ג. מתחת לעור לתוך כפות של עכבר.
- מניחים את חיישן הנשימה מתחת לחלק האחורי של העכבר.
- הנח את הבדיקה הטמפרטורה לתוך פי הטבעת של העכבר.
- רשומה טמפרטורה, א.ק.ג. וקצב נשימה של העכבר בתוכנת ניתוח נתונים.
.4 צוואר מבצע לSניטור לב וכלי דם ystemic
4.1) לנתיחה כלי
- זהה את הקו האמצעי של הצוואר, הנקודה של עצם הבריח אמצע, את הזווית של לסת תחתונה.
- לעשות חתך אורכי 2 סנטימטר מהזווית של לסת תחתונה עד לנקודת האמצע של עצם הבריח שהוא 0.5 ס"מ לצד השמאלי של קו האמצע.
- לנתח את בלוטת submandibular, הפוך אותו ולכסות אותו עם גזה ספוגה מלוחה.
- זהה את וריד הצוואר, לנתח אותו ולמקם את שלושה 6-0 תפרי משי תחת הווריד לקשירה וקיבוע מאוחר יותר.
- זהה את שריר sternocleidomastoid, להפריד אותו מהבטן מעולה של בטן omohyoid והאחורית של שריר digastric, ולמשוך אותו עם מפשק לחשיפה קלה של עורק התרדמה.
- לנתח את העורק הראשי ולמקם את שלושה 6-0 תפרי משי תחת העורק לקשירה וקיבוע מאוחר יותר.
4.2) זרימת דם בעורק תרדמת מדידה
- הנח את transonicלחקור סביב העורק הראשי, לשמור אותו יציב, ולייעל את הקשר באמצעות ג'ל אולטרסאונד או מלוח.
- רשומה זרימת דם מהירות של עורק התרדמה כפי שמצוין על המסך הקטן של מכשיר transonic באמצעות תוכנת ניתוח נתונים
- הסר את הבדיקה לאחר סיום המדידה
4.3) מדידת לחץ בעורק תרדמה (CAP)
- ולקשור את הקצה הדיסטלי של עורק התרדמה ומהדק קצה הפרוקסימלי שלה.
- מניחים 2 תפרי קיבוע סביב העורק הראשי. השתמש 10-0 prolene לתפר השהייה.
- לעשות חתך קטן בקיר הקדמי של כלי השיט.
- הכנס קטטר מילר ולתקן את זה עם תפרים-הוצב מראש.
- רשום את CAP בתוכנת ניתוח נתונים.
4.4) זרימת דם מדידת וריד הצוואר
- הרם את וריד הצוואר ומניח את זרימת הבדיקה transonic כדי למדוד את קצב הזרימה.
- רשום את קצב הזרימה בתוכנת ניתוח נתונים.
4.5) מדידת לחץ ורידים מרכזי (CVP)
- הצמד את הקצה הפרוקסימלי של וריד הצוואר ולקשור את הקצה הדיסטלי.
- חותך חתך קטן באמצעות microscissors על הקיר הקדמי של כלי השיט.
- הכנס את הקטטר מלא הנוזל ולתקן אותה עם קווי תפר-הוצב מראש.
- רשום את CVP בתוכנת ניתוח נתונים.
.5 בטן מבצע לרכישת פרמטרים המודינמיים כבדית
5.1) זיהוי כלי
- לעשות חתך רוחבי בבטן.
- Eventerate המעיים בצד השמאל ולכסות עם גזה רטובה.
- זהה את נחות וריד נבוב, וריד השער, עורק כבד הנפוץ ועורק כבד התקין.
- זרוק כמה מלח חם בבטן ועל פני השטח של המעיים כל 5 דקות במשך כל נוהל המעקב.
5.2 מדידה) של זרימת דם פורטל
- לנתח את וריד השער.
- מניחים 6-0 משי תחת וריד השער כדי להקל על הסרת הכלי בעת ביצוע זרימת הבדיקה.
- הנח את זרימת הבדיקה transonic סביב וריד השער ולמדוד את זרימת דם שיעורה.
- רשום את קצב הזרימה של וריד שער הדם.
5.3 מדידה) של זרימת עורק כבד נפוצה
- לנתח את העורק הכבד הנפוץ בזהירות.
- הנח תפר אחד 6-0 משי סביב הספינה כדי להקל על ההרמה של כלי השיט.
- הנח את זרימת הבדיקה סביב העורק.
- למדוד את זרימת הדם שלה ולרכוש את הנתונים.
5.4) מדידת לחץ וריד שער (PVP)
- בחר סניף אחד של וריד mesenteric עם מעט תופעות סניפים, אשר מנקז ישר לתוך וריד השער.
- ולקשור את הקצה הדיסטלי של וריד mesenteric נבחר. ודא כי קשירה קרובה לצינור המעיים. ולקשור סניפים הקטנים שלה
- מניחים 2 fixing תפרים באמצעות 6-0 prolene סביב הווריד. הנקודה של הליך זה המפתח היא להימנע ממגע בעורק mesenteric כאשר ligating הווריד.
- הצמד את הקצה הפרוקסימלי של וריד השער.
- מניחים 2 תפרי שהייה באמצעות 10-0 prolene. דימום כמה יתרחש מאז תפר השהייה צריך לחדור את דופן כלי הדם של וריד mesenteric בסדר.
- לעשות חתך קטן בווריד באמצעות microscissor באלכסון בזווית של 45 מעלות.
- הכנס קטטר מילר דרך וריד mesenteric לוריד הפורטל ולתקן אותה
- רשום את לחץ וריד שער. בסופו של ההליך, להקריב את העכברים על ידי exsanguination תחת הרדמה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
פרמטרים חיוניים של העכברים כגון קצב נשימה וקצב לב הם ללא ספק הרבה יותר גבוהים מאשר בחולדה. אומר לחץ דם מערכתי ולחץ וריד הצוואר דומה לערכי חולדה ואפילו דומים לנתונים האנושיים.
נתונים המודינמית בדיה הם ללא ספק שונים. השגנו ערכים נורמלים מ8 עכברים. זרימת דם פורטל בעכברים נורמלים נעה בין 1.6-2.3 מ"ל / דקה. לזרום בעורק הכבד הנפוץ נע 0.10-.35 מ"ל / דקה. לחץ וריד שער בבעלי חיים נורמלים היה במגוון הרחב 4.4-11.2 CMH 2 O עם ערך ממוצע של 8.09 ± 2.47 CMH 2 O (טבלת 1). מגוון רחב זה עלול להוביל להבדלים קטנים אך לא משמעותיים כאשר משווים את הערך הממוצע של קבוצות קטנות של בעלי חיים נורמלים.
מכיוון שאנו נצפו הבדלים בין פרט ניכרים במיוחד בלחץ הפורטל, בדקנו אם הבדלי התוך פרט קטנים ניתן היו לזהות עם טק זוnique. הערכנו בהליך זה בשתי הגדרות ניסוי שונות: הידוק אונת כריתה וכבד / ביטול הידוק חלקי. לחץ פורטל לפני ומייד לאחר 70% כריתה חלקית (n = 20) באותו בעל חיים (איור 1) גדל בשיעור של פי 2 מ6.87 ± 2.39 ו11.41 ± 2.94 CMH 2 O (P = <0.001). תוצאות אלו היו בטווח דומה כפי שנצפו במינים אחרים 5,12 וגם בבני האדם 7.
לחץ נורמלי וריד שער ולחץ פורטל לפני הכריתה נרכשו משתי קבוצות שונות (אחד מקבוצת פרמטרים ניטור רגילה, אחרים מקבוצת PH 70%). בשל מגוון הרחב של לחץ פורטל בעכברים נורמלים (4 עד 11 CMH 2 O), הערכים הממוצעים של קבוצות קטנות של בעלי חיים עשויים להיות שונים במקצת, כפי שנצפו בניסוי שלנו (8.09 ± 2.47 CMH 2 O לעומת 6.87 ± 2.39 CMH 2 O). עם זאת, כאשר מנתחים את הנתונים, מצאנו כי לא היה statisהבדל tically משמעותי בין שתי קבוצות אלה (P = 0.237).
ההידוק / הניסוי מהדק-de תוכנן על מנת להוכיח כי ההליך הוא רגיש מספיק כדי להרים את שינויים קטנים עוד יותר בלחץ הפורטל. הידוק של האונה הימנית המייצגת 20% מהמסה הכבד הביא לגידול של כ 17%. הידוק נוסף של החציון ואונה לרוחב השאירה גרמו לגידול של לפחות 2-3 קפלים בהשוואה ללחץ הפורטל מתחיל. לחץ פורטל חזר בהדרגה ללחץ מתחיל, כאשר משחררים את המהדק מהאונה הימנית וכתוצאה מכך ההידוק של 70% מהכבד. הלחץ חזר לרמת ההתחלה בעת הסרת המהדק מוריד השער השמאלי אספקת החציון ואונה לרוחב שמאלה (איור 2 וטבלה 2). המפה של קבוצת פעולת הדמה נשארה יציבה בתוך 1H לאחר פתיחת הבטן. המפה של עכברים בקבוצת הביקורת, שהושגה בנקודת הזמן שניתן להשוותכמו בניסוי ההידוק, לא היה הבדל משמעותי בהשוואה למפה של קבוצת הניסוי. התוצאות של שני הניסויים עולות כי שינויי התוך פרט אפילו קטנים של פחות מ 20% ניתן היו לזהות בהליך זה.
סיבוכים אופייניים כמו דימום וגודש חמורים עלולים להתרחש במהלך ההליך. מאז אובדן דם חמור עלול לגרום לירידה משמעותית של MAP כמו גם PVP, התוצאות של עכברים עם סיבוך זה צריך לחסל. כדי להימנע מגודש ופקקת ורידים בעת ביצוע ניסוי הידוק אונת כבד, אנו ממליצים הזרקת הפרין במינון קטן (500 U / קילוגרם) תוך אופרטיבי לפני ההידוק. עורק כבד נפוץ יכול לעבור עווית כלי חולפת עם טיפול כגון הרמת הכלי והצבת הבדיקה. זה עלול לגרום לאיסכמיה קצרה חולפת של הכבד. באופן כללי, העווית עשויה לפתור באופן ספונטני בתוך דקות. עווית של כלי דם קצר בCHA לא מתחזה בעיה רציניתלחיים של בעלי החיים, אבל עלולים להפריע לתוצאות ניסוי, כאשר התמקדות בפגיעת reperfusion איסכמיה בכבד.
לסיכום, הליך זה הוא מאתגר אבל אפשרי. זה דורש קצת אימון גם למייקרו מנתחים מנוסים. בשל השוואת שונות בין הפרט הגבוהה של נתוני לחץ שהושגו בבעלי חיים שונים לפני ואחרי התערבות לא עשויים להוביל לתוצאות חד משמעיות. לכן אנו ממליצים בהליך זה כדי ללמוד רגולציה לטווח קצרה של פרמטרים המודינמיים בכבד בניסויים חריפים על ידי רכישה את הנתונים לפני ואחרי ההתערבות באותה החיה.
| פרמטרים | נתונים של שהושגו | פרמטרים שדווחו | |
| פרמטרים חיוניים | קצב לב (n = 8) | 418 ± 55 BPM | 389 (353-566) BPM 1 |
| 162 ± 11 BPM | 254 ± 28 BPM 2 | ||
| טמפרטורה (n = 8) | 33.56 ± 0.54 ° C | 36.1-36.6 ° C 11 | |
| לחץ דם מערכתי (CAP) (n = 8) | 130.54 ± 20.47 CMH 2 O (= 96.02 ± 15.06 מ"מ כספית) | 94 ± 15 מ"מ כספית 9 | |
| לחץ מרכזי ורידים (CVP) (n = 2) | 8.90 ± 3.25 CMH 2 O | 5.9 ± 2.0 CMH 2 O 11 | |
| פרמטרים המודינמיים כבדית | זרימת וריד שער (n = 6) | 2.03 ± 0.24 מ"ל / דקה | 3.0 (2.5-3.1) מ"ל / דקה 1 |
| 3.3 מ"ל / דקה 1 | |||
| זרימת עורק כבד נפוצה (n = 6) | 0.20 ± 0.09 מ"ל / דקה | לא Fou nd | |
| PVP (n = 8) | 8.09 ± 2.47 CMH 2 O (= 5.95 ± 1.82mmHg) | 5.3 ± 1.4 סנטימטר מלוח 3 | |
| 8.7 ± 2.1 מ"מ כספית 4 | |||
| 4mmHg 6 | |||
טבלת 1 פרמטרים רגיל מערכתיים וכבדים המודינמית של עכברים שנרכשו באמצעות הליך ניטור זה CAP:. לחץ עורק ראשי; MAP: מתכוון לחץ דם; CVP: לחץ ורידים מרכזי; PVP: לחץ וריד שער.
איור 1. PVP לפני ואחרי PH 70%. לחץ פורטל וריד לפני ואחרי 70% כריתה חלקית (n = 20) היו 6.87 ± 2.39 ו11.41 ± 2.94 CMH 2 O."Target =" www.jove.com/files/ftp_upload/51955/51955fig1highres.jpg _blank "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
| פרמטרים (cmH2O) | לאחר laparotomy | לאחר הידוק 20% מכבד (RL) | לאחר הידוק 90% מכבד (RL + ML + LLL) | לאחר הידוק 70% מכבד (ML + LLL) | בסוף (לשחרר את כל מהדק) |
| PVP - קבוצת exp הידוק (n = 10) | 9.59 ± 4.00 | 10.45 ± 3.89 | 25.78 ± 8.99 | 16.91 ± 9.86 | 11.14 ± 4.48 |
| ממוצע CAP - קבוצת exp ההידוק (n = 10) | 121.50 ± 18.67 | 95.89 ± 32.76 | 74.41 ± 35.35 | 93.88 ± 42.96 | 89.44 ± 44.20 |
| ממוצע CAP - שאם קבוצה (n = 3) | 123.33 ± 12.42 | 121.0 ± 5.57 | 124.00 ± 8.66 | 127.33 ± 7.23 | 123.00 ± 8.89 |
. לוח 2: תגובה המודינמית לאחר ההידוק וdeclamping של אונה של כבד שונה (n = 10) RL: אונה ימנית, ML: אונת חציון (כוללים אונת חציון תקין ואונת חציון שמאלית), LLL: עזבה אונה לרוחב.
איור 2 תגובה המודינמית לאחר ההידוק וdeclamping של אונה של כבד שונה (ID בעלי חיים: CHI-108) א. PVP מייד אחרי החדרת צנתר מילר היה 8.8 CMH 2 O. PVP לאחר הידוק 20% אונת כבד היה 10.8 CMH 2 OBPVP עלה ל 17.5 CMH 2 O לאחר הידוק 90% אונת כבד. ג PVP ירד ל 10.3 CMH 2 O כאשר משחרר את המהדק של האונה הימנית. D.PVP חזר ל8.7 CMH 2 אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ניטור של פרמטרים המודינמיים בכבד הוא כלי מחקר חשוב בHepatology וניתוח כיס המרה. רכישה של נתונים המודינמית כבד מסייעת לאפיין את ההשפעה של נהלי כיס המרה על מערכת הדם. רכישה של נתונים המודינמית כבד נחוץ גם כדי לחקור את ההשפעה של תרופות המשפיעות לחץ פורטל וזרימת פורטל, למשל, בהתאם לצורך במחקרי הערכת תרופות vasoactive.
למרות גדליו הקטנים, את הפרמטרים החיוניים, מערכתיים ופרמטרים המודינמיים בכבד יכולים להיות במעקב בעכברים. השלבים הקריטיים בפרוטוקול היו כדלקמן: ראשית, חשוב למקם את החיה על כרית חימום במהלך ההליך כולו כדי להימנע מהיפותרמיה שעלולה להוביל לבעיות בתפקוד מחזור הדם. שנית, חשוב להיות מאוד זהיר כאשר לנתח כלי השיט של עכבר, מאז קיר הכלי של עכבר הוא מאוד שביר ודק. נראה הטוב ביותר כדי לתקן את קיר הכלי על ידי גרירה כמה רקמת שומן על המשטח אלקטרוני במקום לתפוס את קיר הכלי עצמו. שלישי, הוא חיוני, כדי למנוע קשירה מקרית של עורק mesenteric שלא לפגוע באספקת הדם בעת ביצוע תפרי הקיבוע סביב וריד mesenteric.
עם זאת, יש לו את טכניקת החונכות פולשנית כמה מגבלות. הראשון הוא הפולשנות שלה בעצמה. טכניקת מעקב זה היא שיטה פולשנית, שדורשת התערבות כירורגית. לכן נוהל המעקב עצמו עשוי לגרום לתופעות לוואי לבעלי החיים. מכאן, אנחנו רק בשימוש בהליך זה כדי לרכוש פרמטרים המודינמית בבעלי חיים נורמלים ובניסויים חריפים, אך לא בניסויי הישרדות. בשלב הבא, אנחנו רוצים להעריך את הטכניקה הזו בניסויי הישרדות. המגבלה השנייה של הליך זה היא שזה דורש ניסיון מייקר משמעותי. ניטור המודינמי בעכברים צריכה להתבצע רק על ידי microsurgeons הוכשר במיוחד. הנקוב הקשה ביותרt של נוהל מעקב זה הוא החדרת קטטר מילר בוריד mesenteric הקטן, מאז וריד זה הוא מאוד שביר. בידיים שלנו, על 10 פעולות הכשרה היו נחוצות עבור מיקרוסקופי מנוסה לפני בחינה טכנית מאסטרינג הליך זה. ניסיון הוגדר בכך שבצע בהצלחה יותר מ -50 השקה כלי דם (עורק ראשי, וריד הצוואר) בחולדות או עכברים. המגבלה השלישית היא שלחץ הפורטל שהושג עם שיטה זו עשויה להיות מתחת לטווח הפיזיולוגי לבעלי חיים נורמלים. קשירת וריד mesenteric והחדרת צנתר עשויה להפחית את הנפח הכולל של דם מתנקז לתוך וריד השער על ידי משוער 10%. עם זאת, טווח פיסיולוגי זה לא ניתן לרכוש באמצעות ההתקנים זמינים כיום. בדומה לכך, ההשפעה של הרדמה את עצמו על PVP לא ניתן לשלול 13. עם זאת, מאחר וכל בעלי החיים כפופים לאותו התערבות, השגיאה הפוטנציאלית תהיה טעות שיטתית. לכן, דפרשנות אתא צריך להיעשות בזהירות תוך התמקדות בשינויים יחסי בבעלי חיים ולא בהכרח על הבדלים מוחלטים בין בעלי החיים.
עם זאת, יש חלופות קטנות לניטור המודינמי פולשנית במכרסמים. ניטור לא פולשני מוגבל לרכישה של לחץ הדם המערכתי. לחץ פורטל או זרימת פורטל לא ניתן לקבוע הלא פולשני בעכברים. ניטור telemetric מוגבל גם לרכישה של לחץ הדם המערכתי. אין דיווחים נמצאו בדבר רכישת telemetric של פרמטרים המודינמית אחרים.
יש צורך בהליך מעקב זה מלא במהלך ניתוח להבנת תהליכים פיסיולוגיים כבד כגון רגולציה של זלוף כבד, התחדשות כבד וניתוח כיס המרה באופן מקיף. היכולת לפקח ולאסוף נתונים של חיות מעבדה intraoperatively בזמן אמת ובכך מייצגת התקדמות משמעותית במחקר של di הכבדsease ויתר לחץ דם פורטל.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
Acknowledgments
מחקר זה נתמך על ידי Ministery הגרמני הפדרלי לחינוך ולמחקר (BMBF) במימון "כבד רשת וירטואלית". אני רוצה להודות לפרנק שוברט ורנה גומפרט ממרכז התקשורת של Jena חולים האוניברסיטאי על עזרתם בהפקת הווידאו ויצירת האנימציה ואיזבל Jank להקלטת אודיו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PowerLab 16/30 | ADInstruments | PL3516 | |
| Quad Bridge Amp | ADInstruments | FE224 | Bridge amplifier |
| Animal Bio Amp | ADInstruments | FE136 | |
| Needle Electrodes for FE136 (3 pk) | ADInstruments | MLA1213 | |
| Perivascular Flowmeter Module | Transonic | TS420 | |
| Flowprobe MA0.5PSB/MA1PSB | Transonic | MA0.5PSB/MA1PSB | |
| SPR-1000 Mouse Pressure Catheter | Millar instruments | 841-0001 | |
| fluid filled catheter | Terumo | SR+DU2619PX | 26G, 0.64×19mm |
| micro scissors | F·S·L | No. 14058-09 | |
| micro serrefine | F·S·L | No.18055-05 | |
| Micro clamps applicator | F·S·L | No. 18057-14 | |
| Straight micro forceps | F·S·L | No. 00632-11 | |
| Curved micro forceps | F·S·L | No. 00649-11 | |
| needle-holder | F·S·L | No. 12061-01 | |
| 6-0 silk | ethicon | ||
| 6-0 prolene | ethicon | ||
| 7-0 prolene | ethicon | ||
| 10-0 prolene | ethicon | ||
| Tail cut-off device | Kent Scientific | www.kentscientific.com | |
| LabChart7 | ADInstruments | data analysis software |
References
- Albuszies, G., et al. Effect of increased cardiac output on hepatic and intestinal microcirculatory blood flow, oxygenation, and metabolism in hyperdynamic murine septic shock. Crit Care Med. 33 (10), 2332-2338 (2005).
- Bernhard, W., et al. Phosphatidylcholine molecular species in lung surfactant: composition in relation to respiratory rate and lung development. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25 (6), 725-731 (2001).
- Cheever, A. W., Warren, K. S. Portal vein ligation in mice: portal hypertension, collateral circulation, and blood flow. 18, 405-407 (1963).
- Costa, G., Aguiar, B. G., Coelho, P. M., Cunha-Melo, J. R. On the increase of portal pressure during the acute and chronic phases of murine schistosomiasis mansoni and its reversibility after treatment with oxamniquine. Acta Trop. 89 (1), 13-16 (2003).
- Cui, S., Shibamoto, T., Zhang, W., Takano, H., Kurata, Y. Venous resistance increases during rat anaphylactic shock. Shock. 29 (6), 733-739 (2008).
- Geerts, A. M., et al. Comparison of three research models of portal hypertension in mice: macroscopic, histological and portal pressure evaluation. Int. J. Exp. Pathol. 89 (4), 251-263 (2008).
- Huang, H., Deng, M., Jin, H., Dirsch, O., Dahmen, U. Intraoperative vital and haemodynamic monitoring using an integrated multiple-channel monitor in rats. Lab Anim. 44 (3), 254-263 (2010).
- Krege, J. H., Hodgin, J. B., Hagaman, J. R., Smithies, O. A noninvasive computerized tail-cuff system for measuring blood pressure in mice. Hypertension. 25 (5), 1111-1115 (1995).
- Kuga, N., et al. Rapid and local autoregulation of cerebrovascular blood flow: a deep-brain imaging study in the mouse. J. Physiol.. 587 (Pt 4), 745-752 (2009).
- Muraki, T., Strain Kato, R. difference in the effects of morphine on the rectal temperature and respiratory rate in male mice. Psychopharmacology (Berl). 89 (1), 60-64 (1986).
- Nielsen, J. M., et al. Left ventricular volume measurement in mice by conductance catheter: evaluation and optimization of calibration. Am. J. Physiol Heart Circ. Physiol. 293 (1), H534-H540 (2007).
- Sakamoto, M., et al. Improvement of portal hypertension and hepatic blood flow in cirrhotic rats by oestrogen. Eur. J. Clin. Invest. 35 (3), 220-225 (2005).
- Reverter, E., et al. Impact of deep sedation on the accuracy of hepatic and portal venous pressure measurements in patients with cirrhosis. Liver Int. 34 (1), 16-25 (2014).
