Summary
Bilinen bir modeli olsa da, kobay şu anda deneysel hayvan bilimleri bir niş temsil eder ve sınırlı veri çoğu prosedürlerin yürütülmesi mevcuttur. Burada bilinçli ya da anestezi kobay ya vivo kan örnekleme teknikleri terminal olmayan dört farklı yaklaşımlar sunuyoruz.
Abstract
Kobaylar insanlara çeşitli biyolojik benzerliklere sahip ve deneysel hayvan modelleri 1-3 doğrulanır. Belirli metodoloji de çok az üzerinde Ancak, kobay kullanımı halen araştırma ve açıklayıcı veri, nispeten dar bir alanı temsil eder. Kobayların anatomik özellikleri, fare ve sıçanlara kıyasla,. Dolayısıyla örnekleme teknikleri modülasyonu, örneğin, türe özgü farklılıklar için yerleştirmek için, diğer kemirgen modellerinde farklı olmaktadır yeterli ve yüksek kalitede örnekleri elde etmek için gereklidir. In vivo çalışmalar hem uzun hem de kısa süreli sık sık örnekleme kan tekrarlanan gerektiren olarak tekniğinin seçimi de hayvanlarda stres ve rahatsızlığı azaltmak için düşünülmelidir ama aynı zamanda örneklem büyüklüğü ve ulaşılabilirlik gereksinimleri ile sağkalım yanı sıra uyum sağlamak için. Venöz kan örnekleri kobay gibi sitelerin bir dizi elde edilebilir., Safen ve şah damarınıvenler, hem avantajları ve dezavantajları içeren her tekniği 4,5. Burada, biz bilinçli veya anestezi kobay biri için dört farklı kan örnekleme teknikleri sunuyoruz. Prosedürler olmayan tüm terminal prosedürler, laboratuar hayvanlarında 6 kan toplanması için kurallar aşmamak numune hacimleri ve örneklerin sayısını temin vardır. Tüm tarif edilen yöntemler iyice test ve araştırma tesisi bünyesinde çalışmalar in vivo kan örneklemesi tekrarlanmıştır için uygulanmıştır.
Introduction
Kobay nedeniyle vitamin C, insan plasenta ile enzim ve lipoprotein profillerini yanı sıra ortak benzerlik metabolize benzer plazma lipoprotein bir besin kaynağı için bir gereklilik olarak, insanlarda biyolojik benzerlikler bir dizi değerli ve valide deneysel hayvan modelidir Prenatal gelişim 1-3,7,8. Bu kobay gibi non-alkolik yağlı karaciğer hastalığı, kardiyovasküler hastalıklar ve C vitamini eksikliğinin varsayılan etkileri değil, aynı zamanda örneğin bir etkisi olarak diyet ilişkili hastalıkların etkilerinin araştırılması için bir çekici ve uygun bir model yapar., Anne diyet müdahale gelişmekte üzerinde değinilir.
Tekrarlanan kan örnekleme çoğu zaman in vivo çalışmalar, hem uzun hem de kısa vadede gereklidir. Nedeniyle türe spesifik anatomik farklılıklara bağlı olarak örnekleme tekniği modülasyonunun diğer kemirgen modelleri ile karşılaştırıldığında, kobaylarda kan örneklerinin elde edilmesi için gerekli olan
Burada, biz bilinçli veya anestezi kobay biri için dört farklı kan örnekleme teknikleri sunuyoruz. Procedures olmayan tüm terminal prosedürler, laboratuar hayvanlarında 6 kan toplanması için kurallar aşmamak numune hacimleri ve örneklerin sayısını temin vardır. Bu stres minimumda tutulması gerektiğini hayvan refahı yanı sıra iyi bilim çıkarınadır. Sonuç olarak, sadece iyi eğitimli ve yetkin kişisel hayvan işlemleri yapmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Gösterilen işlemleri Gıda, Tarım ve Balıkçılık Bakanlığı bünyesinde Danimarka Hayvan Deneyleri Müfettişliği tarafından onaylanan protokollere göre gerçekleştirilmiştir.
Yanal safen veya Tarsal Ven 1. Kan Alınması
- Anestezi olmadan bu prosedürü ve bir araştırmacı, kobay ele biri olan ve bir örneği toplama yardım gerçekleştirin.
- Damarlar görünür olana kadar bir elektrikli tıraş makinesi ile arka bacak tarsal bölge tıraş. Alan ponksiyon ile müdahale kürk önlemek için yeterince büyük olduğundan emin olun.
- Bir ılık su banyosu içinde arka bacak yerleştirin ve yavaşça venler daha genişlemiş ve belirgin hale bacak ovmak.
- Temiz bir havlu ile silin ve bacak gazlı bez veya% 70 alkol ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubukla delinme siteyi dezenfekte.
- Kobay dizginlemek ve hemen diz eklem t yukarıda nazik bir basınç uygularken aşağı arka bacak uzatmakO durağanlığı sağlar.
- 21 G iğne veya neşter kullanarak ven delinme. Kan örneğin toplayın., Bir koleksiyon veya kılcal tüp kullanarak. Yavaşça kan akışını yardım bacak manipüle.
- Numune alındıktan sonra, durağanlık bırakın. Kanama durana kadar ponksiyon hafif basınç ile gazlı bez veya pamuk parçası uygulayın.
- Hemostaz sağlamak için 5-10 dakika için kendi kafesine ve monitöre hayvan dönün.
Kulak damarından 2. Kan Alınması
- Bir arkadaşımızın yardımı ile tek başına ya da tercihen anestezi olmadan bu işlemi gerçekleştirin.
- Tül veya% 70 alkol ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubuk kullanarak kulağın dorsal yüzeyini dezenfekte edin.
- Durağanlığı sağlamak için kulak tabanına hafif bir basınç uygulayın.
- 21 G iğne veya neşter kullanarak ven delinme ve kan toplamak.
- , Staz bırakın örnek elde edildikten sonra, ge ile gazlı bez veya pamuk parçası uygulayınKanama kadar ponksiyon ntle basınç durdu.
- Hemostaz sağlamak için 5-10 dakika için kendi kafesine ve monitöre hayvan dönün.
Boyun Ven 3. Kan Alınması
- Bir ek araştırmacının yardımıyla kullanarak bu işlemi yürütmek; bir kobay işleme ve bir numune alınması.
- Bu prosedürün süresi boyunca uygun bir anestezi ile kobay Anesteziyoloji. Tiletamine bir karışımı (0.93 mg / kg), zolazepam (0.93 mg / kg), ksilazin (1.49 mg / kg) ve butorfanol (0.06 mg / kg) kullanılabilir.
- Sırtında anestezi kobay yerleştirin ve yavaşça kaudal ön ayaklarını geri çekin.
- Tıraş ve dezenfekte (örneğin,.,% 70 alkol), boynun ventral parçası.
- Coat pıhtılaşma riskini azaltmak amacıyla heparin veya EDTA örnekleme öncesinde biriyle şırınga.
- Iğne 1 ml şırınga ap monte (23 G veya) klavikulayı palpe ve 25 G eklemekk 1 cm omuz eklemi hizasında lateral. Hafif bir alçak basınç uygulanarak bir hafif bir yükseliş ve medial açıda şırınga tutun. Juguler ven oldukça yüzeysel bulunmaktadır olarak altta yatan yapılara zarar kaçının. Venin artan durağanlığı sağlamak için hafifçe geriye doğru kobay boyun eğin.
- Kan örneği elde edilir, ön bacaklar bırakın ve iğne çekilmeden önce stasisi iyileştirmeye. Ponksiyon hafif bir basınç uygulamak için gazlı bez veya pamuk kuru bir parça kullanın.
- Bir kurtarma kafesine hayvan dönün ve anestezi hemostaz ve iyileşme sağlamak için izlemek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bilinçli ya da anestezi kobay ya olmayan terminal in vivo kan örnekleme tekniklerine dört farklı yaklaşımlar sunulmuştur. Şekil 1 kobay ve olası delinme sitelerinde yanal Safen ve tarsal ven seyrini göstermektedir. Gine domuzu kulağın arka yüzeyinde görülebilir Kulak damarları sadece çok az bir miktarı, gerekli olduğunda Bu damarlar kan örneği almak için kullanılabilir, Şekil 2'de gösterilmiştir. Juguler kan numunesi almak için kobay konumu Şekil 3'te göstermeleridir. Juguler vene test alanı ponksiyon en üstteki ok ile işaret eden oklar ile gösterilmiştir.
Şekil 1. kobay yanal safen ve tarsal ven. Görüntü kursu ve göstermektedirkan yanal safen (üst ok) numune veya kobay tarsal ven (alt ok) patlak sitesi.
Şekil 2. Kulak damarları. Bu görüntü bir kobay kulağın dorsal yüzeyinde görünür kulak damarları (oklar) göstermektedir. Sadece çok küçük bir miktarı, gerekli olduğunda bu damarlar, kan örneği almak için kullanılabilir.
Jugular damar kan örneği almak için guinea domuzunun Şekil 3. Konumu. Bu kobay konumunu ve jugular damar kan alma için Delinen bölgeyi göstermektedir. Oklar önerilen ponksiyon doğru üst okun şahdamarından seyrini göstermektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Fareler ve sıçanlar ile karşılaştırıldığında, kobay doğası gereği korku ve sakince yaklaştı ve stresi azaltmak için doğru ele alınması gerekir. Görünümünde bir hayvan refahı açısından, dikkatle hareket doğal bir önceliktir; Bununla birlikte, bu da,. toplanan veriler örneğin anksiyete ile ilişkili etkilerin riskini azaltmak kortikosteroid artmış kan glikoz düzeyleri ve 12 olacaktır. Aynı şekilde, günlük kullanım normal prosedürler için hayvanları alıştırarak ve daha da stresi azaltmak için hizmet edebilir. Belirli bir kan örnekleme tekniği uygulamalı uzmanlık ilk deneyimli bir operatöre gözlemleyerek ve yetkinlik elde edilinceye kadar bundan gözetiminde tekniği yapılarak elde edilmelidir. Seçilen tekniği ideal hem minimum stres ve rahatsızlık azaltmak gerekir ama aynı zamanda örneklem büyüklüğü ve ulaşılabilirlik gereksinimleri ile sağkalım yanı sıra uyum sağlamak için. Tüm sunulan kan örnekleme yöntemleri aseptik teknikler olmalıdırenfeksiyon riskini en aza indirmek ve kirlenmemiş örneklerin toplanmasını sağlamak için kullanılır.
Kan örneği almak için gösterilen yaklaşım, hayvanın yaşam süresi bu numune hacmi sağlanır ve frekans yönergelerine göre elde edilir ve kısa ve uzun süreli çalışmalar 6 hem de tekrar tekrar örnek almayı sağlamak uygulanabilir. İş bu 3R '(redüksiyon) ile uyumlu olarak varyans ve dahil edilen hayvan sayısını azaltmak, zaman içinde hayvanların tutarlı izleme 13,14 sağlar. Burada sunulan teknikleri bir deney başlamadan önce düşünülmelidir elde numune hacmi (1-2 ml kadar bir kaç ul) farklı aralıkları var. Un-anestezi kobay olarak şahdamarından kan toplama işlemleri 12 tarif edilmiş olsa bile, biz güçlü mümkün olduğunca stres ve rahatsızlığı azaltmak için anestezi kullanılmasını öneririz. Bunu yaparken, anestezi seçimi dikkatli olmalıy kobay uyuşturan ve anestezik önemli farklılıklar etkinliğini yanı sıra bağlı solunum depresyonu 15,16 doğru bir yüksek hassasiyet gösterilecek derece zor olduğunu belirterek, ele. Kobaylarda boyun damarı görebilir veya aşikar numune alma zorlukları arttırabilir durağanlık / venöz genleşme herhangi bir azalma ne olduğu, bu nedenle genel anestezi karışımlarında vasoconstricting maddeler önlemek için önerilir. . Ayrıca, istenen veri toplama örneğin engel olabilecek belirli anestezi eden ajanların bilinen etkileri, aşağıdaki α 2 kardiovasküler etkiler ve / veya yüksek kan glukoz seviyesi - kemirgenlerde agonist etki 16,17 değerlendirilmelidir. Ayrıca kobayların ancak entübasyon gibi bir seçenek olabilir gibi izofluran gibi inhalasyon anestezi kullanımı çok zor bir görev bakımı bu complic olabilir baş / boyun pozisyonu ile inhalasyon-maske ile paraziti önlemek için alınması gerekirgereksiz prosedür yedi. Genelleştirilmiş anestezi örneğin., Inhalasyon yoluyla da büyük bir örnek hacmi sağlayabilir kalp delinerek için gereklidir. Ancak, kardiyak ponksiyon bir terminal işlemi ve tekrar tekrar örnek almayı nedenle geçerli değildir ve daha fazla tarif edilmeyecektir.
Böyle kanama, morarma, tromboz, enfeksiyon ve skarlaşmaya gibi potansiyel yan etkileri bir damarın delinmesiyle takip oluşabilir. Deneyimlerimize göre, kobay, mevcut metin içinde tarif edildiği gibi işlem yapılır koşuluyla, diğer kemirgen modelleri ile karşılaştırıldığında bu tür istenmeyen komplikasyon riski sergilemez. Jugular damar dış yüzeyi görsel hale gibi, bu iğne geri önce durağanlığı rahatlatmak ve peri-venöz kanama ve morarma riskini en aza indirmek için, yeterli bir hemostaz sağlamak için çok önemlidir. Olumsuz etkilerin durumunda, tedavi her zaman sorumlu veteriner hekimliğinde istenmelidirnarian. Iyi hayvan refahı ve bilim nedenlerden dolayı, ciddi düşünceler örnek hacmi ve sıklığı ve örnekleme tekniği seçimi kombine etkisi verilmelidir. Tüm açıklanan kan örnekleme teknikleri iyice test ve araştırma tesisi bünyesinde çalışmalar in vivo kan örneklemesi tekrarlanmıştır için uygulanmıştır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok. Tüm prosedürler Avrupa Sözleşmesi ETS 123 Kurulu Kararı gereğince Danimarka'nın Hayvan Deneyleri Yasası, tarafından kabul edildi.
Acknowledgments
Biz Annie B. Kristensen, Elisabeth V. Andersen, Belinda B. Bringtoft ve Deneysel Tıp, Frederiksberg Kampüsü, Sağlık ve Tıp Bilimleri Fakültesi, Kopenhag, Danimarka Üniversitesi Bölümü'nde hayvan bakıcıları maharetli yardım kabul. Jacob Lønholdt prosedürleri filme yaptığı mükemmel teknik yardım için teşekkür etti. Bu çalışma, in vivo Farmakoloji ve Kopenhag Üniversitesi LIFEPHARM Merkezi tarafından kısmen desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Electric shaver | Wella (Contura), Denmark | 273207 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Syringes | B.Braun-Omnifix-F, Germany | 9161406V | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Needles | BD Microlance, Spain | 301156 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Microvette collection tube | Sarstedt, D-51588Nümbrecht, Germany | 201,288,100 | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
| Accu-Check analyzer | Roche A/S Diagnostics, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Heparin 5000 IE/ml | LEO Pharma, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Zoletil 50, Chemvet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Anesthesia | Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Denmark | Alternative product may be used. Multiple suppliers | |
| Neutral eye ointment | Alternative product may be used. Multiple suppliers | ||
| Gauze or a cotton swab | Alternative product may be used. Multiple suppliers | ||
| Disinfectant (70% alcohol) | Alternative product may be used. Multiple suppliers |
References
- DeOgburn, R., et al. Effects of increased dietary cholesterol with carbohydrate restriction on hepatic lipid metabolism in Guinea pigs. Comp.Med. 62 (2), 109-115 (2012).
- Fernandez, M., Volek, J. S. Guinea pigs a suitable animal model to study lipoprotein metabolism, atherosclerosis and inflammation. Nutr Metab (Lond). 3 (17), (2006).
- Frikke-Schmidt, H., Tveden-Nyborg, P., Birck, M. M., Lykkesfeldt, J. High dietary fat and cholesterol exacerbates chronic vitamin C deficiency in guinea pigs. Br J Nutr. 105 (1), 54-61 (2011).
- Hem, A., Smith, A. J., Solberg, P. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Lab Anim. 32 (4), 364-368 (1998).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Guillen, J. FELASA guidelines and recommendations. J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 311-321 (2012).
- Ye, P., Cheah, I. K., Halliwell, B. High fat diets and pathology in the guinea pig Atherosclerosis or liver damage. Biochim Biophys Acta. 1832 (2), 355-364 (2013).
- Tveden-Nyborg, P., et al. Maternal vitamin C deficiency during pregnancy persistently impairs hippocampal neurogenesis in offspring of guinea pigs. PLoS One. 7 (10), 12-18391 (2012).
- Schjoldager, J. G., Tveden-Nyborg, P., Lykkesfeldt, J. Prolonged maternal vitamin C deficiency overrides preferential fetal ascorbate transport but does not influence perinatal survival in guinea pigs. Br J Nutr. 110 (9), 1573-1579 (2013).
- Greulich, S., et al. Secretory products of guinea pig epicardial fat induce insulin resistance and impair primary adult rat cardiomyocyte function. J Cell Mol Med. 15 (11), 2399-2410 (2011).
- Swifka, J., Weiss, J., Addicks, K., Eckel, J., Rosen, P. Epicardial fat from guinea pig a model to study the paracrine network of interactions between epicardial fat and myocardium. Cardiovasc Drugs Ther. 22 (2), 107-114 (2008).
- Pilny, A. A. Clinical hematology of rodent species. Vet.Clin North Am Exot Anim Pract. 11 (3), 523-vii (2008).
- Franco, N. H., Olsson, I. A. Scientists and the 3Rs: attitudes to animal use in biomedical research and the effect of mandatory training in laboratory animal science. Lab Anim. 48 (1), 50-60 (2014).
- Van, L. J., et al. eAssessing the application of the 3Rs a survey among animal welfare officers in The Netherlands. Lab Anim. 47 (3), 210-219 (2013).
- Sloan, R. C., et al. High doses of ketamine-xylazine anesthesia reduce cardiac ischemia-reperfusion injury in guinea pigs. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (3), 349-354 (2011).
- Jacobson, C. A. A novel anaesthetic regimen for surgical procedures in guinea pigs. Lab Anim. 35 (3), 271-276 (2001).
- Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. Acute hyperglycemia induced by ketamine xylazine anesthesia in rats mechanisms and implications for preclinical models. Exp Biol Med(Maywood). 230 (10), 777-784 (2005).
