Introduction
סוג נגיף כשל חיסוני אנושי 1 כניסה (-1 HIV), בתיווכו של גליקופרוטאינים trimeric הנגיפיים המעטפה (מעטפה) הוא הצעד הראשון של המחזור המדבק. להיות אנטיגן רק נחשף הנגיפי מוצג על פני השטח של virions, trimer מעטפה מעורר נטרול ונוגדנים nonneutralizing. ככזה, הוא מייצג מועמד מעניין לעיצוב immunogen החיסון. עם זאת, ניסויי חיסון עם מעטפה בצורות מסיסה או רקומביננטי עוררו תגובות עם יעילות מינימאלית בלבד מול רוב HIV-1 העיקרי מבודד 1-3. עם זאת, יעילות חלקית נצפתה בעניין ניסוי בחיסון RV144 4 המחודש בנגיף HIV-1 מעטפה כמועמד immunogen. זה אושר על ידי מחקר שנערך לאחרונה מתאר כי נוגדנים נגד מעטפה-הושר חיסון היו מספיק כדי ליצור מידה מסוימת של הגנה מפני SIV ו HIV מאתגר 5.
לאחר שמסונתז בreticulum endoplasmic, glycoprote מעטפהבמבשר, gp160, עובר לאחר translational שינויים שונים שהם קריטיים ליכולתה כדי לתדלק את תהליך היתוך ויראלי. מבשר מעטפה חייב לקפל כראוי ושותף בtrimers לפני שהבקיע ליחידות משנת gp120 וgp41 הטרנסממברני במיוחד cytoplasmic 6-10, עם אינטראקציות noncovalent שמירה על קשר gp120-gp41. מכונות התא נגועות היא גם אחראיות לglycosylating כבדות מעטפה, הכולל כ -50% מהמסה הכוללת שלה 11,12. המבנה המורכב וכתוצאה מכך מאפשר מעטפה להיות conformationally גמישה 13,14, תוך מתן-חלקית, כי הוא חשב על מנת לאפשר מעטפה להסתגל ולהסתיר אפיטופים חיסוניים מאוד מסוימים שאחרת היה חשוף 15-19, המדגיש את החשיבות כדי להבין טוב יותר את התצורות השונות נדגמו על ידי trimer מעטפה הילידים.
נכון להיום, כמה טכניקות פותחו ומשמשות בהצלחה ללמוד ch קונפורמציה מעטפהAnges. עם זאת, הם משתנים במגבלות שלהם, שלעתים קרובות מוגבלים להקשרי מעטפה ספציפיים. לדוגמא, תהודת plasmon פני השטח או מבחני immunoprecipitation באמצעות נוגדנים חד שבטיים ספציפיים קונפורמציה (בז), להסתמך גם על מולקולות מסיסה או solubilized monomeric מעטפה אשר ידוע להיות שונה immunogenetically מצורות trimeric 20,21. מחקרים שנעשה לאחרונה מראים גם כי מחשוף משפיע תצורות מעטפה וכתוצאה מכך החשיפה של אפיטופים מוכרים בעיקר על ידי nonneutralizing נוגדנים 14,22,23.
כאן אנו מתארים בפירוט שיטה המאפשרת לקביעה מהירה וקלה של קונפורמציה של trimers מעטפה הביעה cellularly 18,24-26. בעקבות transfection החולף של מעטפה בשורת תאים חסיד אנושית המחייב של נוגדני מעטפה ספציפיים מזוהה באמצעות תגובת chemiluminescence פשוטה. גם טכניקה זו יכולה לשמש כדי לאפיין את העדפת קונפורמציה של קונפורמציה-depenנוגדני שקע. לפיכך, assay זה מספק שיטה לגילוי חזקה וגמישה מאוד.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1 יום 1 - תרבית תאים
- הצלחת 2 x 10 4 אוסטאוסרקומה אנושית (HOS) תאים לכל גם בצלחת אטומה, 96 גם תרבית התאים מתאימה לקריאת הארה. השתמש בנשר בינוני השתנה Dulbecco (DMEM) בתוספת סרום 10% שור עוברי (FBS) ו100 U / פניצילין, סטרפטומיצין מ"ל. דגירה עד למחרת ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2.
Transfection Polyethylenimine (PEI) - 2 יום 2
- הכן תערובת transfection פי השלבים הבאים. התאם ריאגנטים וכמויות DNA על פי מספר הבארות שיש transfected עם אותו מעטפה.
- Tube: הוסף 10 פלסמיד ng תאת הקידוד (כגון pTat-III 27) ו150 ng פלסמיד מעטפה הקידוד לDMEM 5 μl בתוספת 25 HEPES מ"מ.
- פלסמיד תאת הקידוד נדרש רק בעת השימוש בפלסמידים מעטפה קידוד תאת תלויה כגון pSVIII.
- צינור B: הוסף 450 ng PEI (מ1מיקרוגרם פתרון / μl) עד 5 μl DMEM.
- הוסף תוכן של צינור ב 'לצינור א מערבבים היטב על ידי vortexing עבור 10 שניות ודגירת תערובת transfection 10 דקות בטמפרטורת חדר (22 מעלות צלזיוס).
- הוסף 10 μl של תמהיל transfection לכל טוב של 96 גם הצלחת. דגירה של 48 שעות על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2.
3 יום 4 - ELISA
- לבצע את כל הניסויים בטמפרטורת חדר כדי למזער אנדוציטוזה האפשרית של מתחמים / נוגדני מעטפה.
- הכן 250 מ"ל של הצפת כביסה לכל צלחת בשימוש באותו הזמן. חיץ כביסה הוא שנאגר מלוח טריס 1x pH (TBS) 7.5 (50 מ"מ טריס-Cl, pH 7.5; 150 mM NaCl), בתוספת 1 מ"מ MgCl 2 ו1.8 מ"מ CaCl 2.
- הכן 125 מ"ל חיץ חסימה לכל צלחת על ידי הוספת חלב יבש ללא שומן 1% ו5 מ"מ טריס pH 8.0 לכביסת הצפת.
- הסר תקשורת תרבית תאים ובתמהיל transfection (supernatant) מצלחת 96 היטב.
- הוסף 100 μ; L של חיץ חסימה לכל טוב ודגירת 20 דקות ב RT.
- הסר supernatant ולהוסיף 50 μl של נוגדן (או סרום) לכל טוב, בדילול מלא לריכוז מתאים בחסימת המאגר. בדרך כלל, להשתמש בריכוז של 1 מיקרוגרם / מ"ל. דגירה שעה 1 בRT.
- 3x לשטוף עם 100 μl חיץ חסימה ולאחר מכן לחזור 3x תהליך כביסה עם כביסה 100 μl הצפת.
- הסר supernatant, להוסיף 100 μl חיץ חסימה, ודגירה 5 דקות ב RT.
- הסר supernatant ולהוסיף 50 μl של נוגדנים משני, בדילול 1 / 3,000 בחסימת המאגר. להשתנות דילול נוגדן אופטימלי בהתאם להבדלי יצרן. דגירה 40 דקות ב RT.
- 3x לשטוף עם 100 μl חיץ חסימה ולאחר מכן לחזור 3x תהליך כביסה עם כביסה 100 μl הצפת.
.4 Data Acquisition
- הסר supernatant מהצלחת ולהוסיף 30 μl 1x chemiluminescence המשופרות מצע (ECL) לכל טוב.
- לרכוש כימיהאות iluminescence לשניית 1 / גם בצלחת קורא מתאים בהתאם להוראות יצרן. זמן קריאה עשויה להיות שונה בהתאם להבדלי חומרה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
שימוש בנוהל הכללי שתואר לעיל, אנו מותאמים הפרוטוקול לassay ההשפעה של CD4 המסיס (sCD4) וCD4 הסלולרי coexpressed על החשיפה של אפיטופים CD4i משני wild-type (WT) או מעטפה שעברו מוטציה, כפי שתואר לעיל 18,24, 25,28. איור 1 סכמטי מייצג את ההליך באופן כללי וחשיפה של אפיטופים CD4i בעקבות הטיפול בsCD4 או על ידי coexpression של CD4 הסלולרי 18. באיור 2, שנהגנו sCD4 לגרום שינויי קונפורמציה מעטפה החושפים 17b CD4i מהבז ו48d אפיטופים שחופפים את אתר קישור coreceptor 24,29, ואילו החיצוני-תחום הכרת מב 2G12 אינו מושפע מטיפול זה כצפוי 18,24.
ההשפעה של מוטציות נקודה בקונפורמציה מעטפה גם ניתן להעריך באמצעות assay זה, כפי שהוצג באיור 3. כאן אנו משמשים גם H66A שכבת 1 מעטפה המוטציה, שידוע שיש ירידהנטיית ד לדגום באופן ספונטני קונפורמציה בכריכת CD4 18,24,30,31 או מוטציה (S375W) אשר גוזרת את גורל מעטפה למדינה הנכנס CD4 32 והשיגה תוצאות concordant (איור 3 א). במקרים בהם expressors מעטפה שונה משמשים, לעתים קרובות יש צורך לנרמל את הנתונים הגולמיים הביעו כיחידות ביחס אור (RLU) על פי רמות ביטוי. במקרה זה, השתמשנו PGT121, חלק מב הכרה של מגן סוכרי מעטפה 33-35, כנוגדן הנרמול (איור 3 ב).
כפי שתארנו באחרונה את 18, אינטראקציה של מעטפה וCD4 באותו התא מובילה לenv שינויי קונפורמציה שחושפים אפיטופים CD4i. באיור 4, אנו cotransfected הגדלת כמויות של expressor CD4 יחד עם מעטפה בassay ELISA מבוסס התאים והשגנו הגדלת אותות לA32 CD4i מהבז וC11 18,36-38, אשר מכיר אפיטופים רציפים בתחום הפנימי של gp120, ואילו מעטפה הכרה על ידי נוגדן 2G12 קונפורמציה העצמאית לא הושפעה (איור 4 א). על מנת לשלוט על יעילות transfection בין תנאים, הנתונים גולמיים היה מנורמל ל2G12 (איור 4). אותות מוגברים מתקבלים עבור A32 והנוגדנים C11 היו תלויים באינטראקצית מעטפה-CD4 כפי שצוינו על ידי היעדר A32 ואפנון C11 כאשר מעטפה הייתה cotransfected עם מוטציה מסוג CD4 (F43H) עם ירידה ביכולת אינטראקציה עם מעטפה 39.
איור 1 ייצוג סכמטי של תכנית ELISA מבוסס תאים אנטי מעטפה. () הכללית של ההליך שבו תאי HOS הם transfected להביע מעטפה trimeric על פני התא. קונפורמציה מעטפה אז ניתן לדגום באמצעות נוגדנים שונים הכרה ספציפיתתצורות (כגון CD4i בז). אותות מזוהים על ידי chemiluminescence לאחר צביעה עם בז אנטי אנושי HRP-מצומדות. sCD4 (B) או coexpression של סלולארי מסוג CD4 (C) ניתן להשתמש כדי לגרום לשינויי קונפורמציה מעטפה שיובילו לחשיפה של אפיטופים CD4i.
sCD4 .2 איור גורם לשינויי קונפורמציה מעטפה מובילות לחשיפה של אפיטופים CD4i. אינטראקציה של sCD4 עם HIV-1 CO-JRFL ΔCT מעטפה משפרת הכרה על ידי נוגדני מיקוד אפיטופים CD4i (17b, 48d), אך לא על ידי הנוגדן חיצוני-תחום הכרת gp120 2G12. פלסמיד קידוד HIV-1 CO-JRFLΔCT מעטפה היה transfected בכל טוב ו48 שעות מאוחר יותר התאים נשטפו וטופחו בנוכחות או עדר של 4 מיקרוגרם / מ"ל sCD4 ל30 דקות ב RT לפני המשךinuing עם הפרוטוקול הסטנדרטי (יום 4 - ELISA). קונפורמציה מעטפה הייתה אז נחקר על ידי דוגרים עם 0.25 מיקרוגרם / 2G12 מ"ל, 1 מיקרוגרם / מ"ל 17b או 48d אנטי מעטפה מבז לשעה 1 בRT. אותות התגלו על ידי chemiluminescence לאחר הדגרה עם נוגדן אנטי אנושי HRP-מצומדות ל45 דקות ב RT. מוצגים הם ערכי RLU ממוצע ± סטיית תקן של שש חזרות עם אות המתקבל מבארות transfected עם פלסמיד לא רלוונטי (לא מעטפה) נגרעה. הנתונים הוא נציג של תוצאות שהתקבלו בשלושה ניסויים בלתי תלויים, עם המשמעות נבדקה על ידי דו כיוונית ANOVA (ns, לא משמעותי; ****, p <0.0001).
איור 3 אפנון של קונפורמציה מעטפה. HIV-1 המוטציה YU2 ΔCT שכבת 1 מעטפה (H66A) מפחיתה הכרת 17b CD4i ואילו תערוכת גרסת S375Wים עלה 17b אות ודי בכך כדי לשחזר את הפנוטיפ של המוטציה שכבת 1. () ערכי RLU של האותות המתקבלים באמצעות אנטי מעטפה PGT121 ו17b מבז. (ב) אותות PGT121-המנורמל של 17b CD4i מב בעקבות טיפול עם או בלי sCD4. מוצגים הם הערכים הממוצעים ± סטיית התקן של triplicates עם אות המתקבל מבארות transfected עם פלסמיד לא רלוונטי (לא מעטפה) נגרעה. הנתונים הוא נציג של תוצאות שהתקבלו בשלושה ניסויים בלתי תלויים, עם המשמעות נבדקה על ידי דו כיוונית ANOVA (**, p <0.01; ***, p <0.001; ****, p <0.0001).
Coexpression איור 4 של CD4 הסלולרי משפר את ההכרה על ידי נוגדני CD4i. פלסמיד CD4-הקידוד היה cotransfected עם HIV1 YU2 ΔCT מעטפה כדי להעדיףקונפורמציה בכריכת CD4 18. (א) ערכי RLU של האותות המתקבלים באמצעות אנטי מעטפה 2G12, A32 או C11 מבז ואנטי CD4 OkT4 מב. (ב) אותות 2G12-מנורמלים של A32 מהבז CD4i וC11. מוצגים הם הערכים הממוצעים ± סטיית התקן של triplicates עם אות המתקבל מבארות transfected עם פלסמיד לא רלוונטי (לא מעטפה) נגרעה. הנתונים הוא נציג של תוצאות שהתקבלו בשלושה ניסויים בלתי תלויים. בר גריי מציין בהעדר CD4, ואילו הפס הכחול הגדלת מצביע על עליה צעד חכם בסך של CD4 expressor שtransfected (1.7 ng, 3.5 ng, ו7 ng) ובר אדום מציין transfection של מוטציה מסוג CD4 (F43H , 7 ng) עם קיבולת ירדה ל אינטראקציה עם gp120.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
assay זה הוא מותאם כדי לזהות את האינטראקציה של בז ספציפי עם HIV-1 מעטפה trimeric הביעה על פני התא. ברגע שהפרוטוקול כבר נקבע, ניתן להשתמש בו במדיום לתפוקה גבוהה עם עלויות נמוכות הכוללות חומר וכמויות קטנות של נוגדנים. מאז assay זה הוא מבוסס transfection, זה יכול בקלות להיות מותאם לcoexpression של חלבונים תאיים כגון CD4 כדי ללמוד את ההשפעות שלהם במבנה גוף מעטפה.
עם זאת, בסיס transfection של פרוטוקול זה גם מרמז שזה אחד החסרונות החשובים ביותר שלה. ראשית, אנטיגנים להיחקר עם טכניקה זו נדרשת להיות זמינה בוקטור ביטוי עצמאי. ככזה, גני מעטפה ממקורות רפואיים שונים או בונה proviral היו צריכים להיות subcloned לתוך וקטורי ביטוי של יונקים. בעוד מבני proviral באורך מלא יכולים לשמש גם בטכניקה זו (ראה אל Veillette et. 18), זה גם מרמז מעשהייצור חלקיקים נגיפיים ive וכן הוא מחייב עבודה במתקני biocontainment המתאימים.
יתר על כן, הצלחה של טכניקה זו קשורה קשר הדוק עם יעילות transfection. אותות נמוך המתקבלים הם לעתים קרובות עקב ביטוי עניים של אנטיגנים transfected. מקורות אופייניים של בעיות הם באיכות פלסמיד דנ"א, ריאגנטים transfection. ותאי כדאיות. במידת צורך, אופטימיזציה של תנאי transfection יכולה גם להתבצע תוך שימוש בטכניקות אחרות, כגון cytometry זרימה או מערבי סופג. ראוי לציין, שזה גם חשוב להיות מודע לכך שהביטוי של כמה מבני מעטפה יכול להיות הכי מוצלח ולכן יכול להשפיע על התוצאה של הטכניקה.
כאן אנו מתמקדים בחיטוט HIV-1 קונפורמציה מעטפה באמצעות בז CD4i שתואר קודם לכן. הגדרה זו מאפשרת למגוון רחב של ניתוח כגון חיטוט ההשפעה של מוטציות נקודת מעטפה או השלכות קונפורמציה של חלבוני coexpressed. יתר על כן, הטכניקה מתוארת הואמחדש יכול לשמש גם עם מוטציות מעטפה מאופיינות היטב עם נטיית קונפורמציה שונה כדי לחקור את הספציפיות של בז שונה עבור תצורות מעטפה שונות. זה מאפשר אפיון קל ומהיר של בז מבודד חדש ואילו לא דורשים ציוד מיוחד-מאוד או ידע.
למרות שאנחנו רק השתמשנו בשיטה זו נגד מעטפה מHIV-1-קבוצות שונות ושושלות אחרות קרוב משפחה (HIV-2, SIV / Mac) 18, אנו מאמינים assay זה יכול להיות מותאם לאנטיגנים משטח נוספים, כגון אלה ממשפחות וירוס אחרות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים שום ניגוד עניינים.
Acknowledgments
אנו מודים לד"ר ג'יימס רובינסון למתנתו הנדיבה של A32, 17b, 48d, וC11 מהבז. PGT 121 הושג באמצעות התכנית מגיב NIH האיידס, החטיבה של איידס, NIAID, NIH (חתול # 12343). עבודה זו נתמכה על ידי קרן קנדה לחדשנות תכנית המנהיג # 29,866, על ידי ההפעלה CIHR # 257,792, על ידי הקמת FRQS של מדען צעיר להעניק # 24,639 לAF ועל ידי מענק רצף CRCHUM כמו גם על ידי מענק # זרז CIHR 126,630 לAF וMR. AF הוא הנמען של # 24,639 אחוות 1 FRSQ Chercheur Boursier Junior. MV נתמכה על ידי # CIHR דוקטורט פרס מחקר 291,485.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HOS cells | ATCC | CRL-1543 | |
| White Opaque Tissue Culture Plate, 96-well, Flat Bottom | BD | 353296 | |
| Polyethylenimine, linear, 25,000 MW | Polysciences | 23966 | Prepared in 1 mg/ml solution |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Invitrogen | 11995 | |
| Goat Anti-human IgG, Peroxidase Conjugated | Pierce | 31413 | |
| Enhanced Chemiluminescence Substrate | PerkinElmer | NEL105001EA | |
| TriStar LB 941, Plate Reader | Berthold Technologies |
References
- Bures, R., et al. Immunization with recombinant canarypox vectors expressing membrane-anchored glycoprotein 120 followed by glycoprotein 160 boosting fails to generate antibodies that neutralize R5 primary isolates of human immunodeficiency virus type 1. AIDS Res. Human Retroviruses. 16, 2019-2035 (2000).
- Koff, W. C. HIV vaccine development: challenges and opportunities towards solving the HIV vaccine-neutralizing antibody problem. Vaccine. 30, 4310-4315 (2012).
- Mascola, J. R., et al. Immunization with envelope subunit vaccine products elicits neutralizing antibodies against laboratory-adapted but not primary isolates of human immunodeficiency virus type 1. The National Institute of Allergy and Infectious Diseases AIDS Vaccine Evaluation. 173, 340-348 (1996).
- Rerks-Ngarm, S., et al. Vaccination with ALVAC and AIDSVAX to prevent HIV-1 infection in Thailand. N. Engl. J. Med. 361, 2209-2220 (2009).
- Roederer, M., et al. Immunological and virological mechanisms of vaccine-mediated protection against SIV and HIV. Nature. 505, 502-508 (2014).
- Fennie, C., Lasky, L. A. Model for intracellular folding of the human immunodeficiency virus type 1 gp120. J. Virol. 63, 639-646 (1989).
- Willey, R. L., Bonifacino, J. S., Potts, B. J., Martin, M. A., Klausner, R. D. Biosynthesis cleavage, and degradation of the human immunodeficiency virus 1 envelope glycoprotein gp160. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85, 9580-9584 (1988).
- Bosch, V., Pawlita, M. Mutational analysis of the human immunodeficiency virus type 1 env gene product proteolytic cleavage site. J. Virol. 64, 2337-2344 (1990).
- Hallenberger, S., et al. Inhibition of furin-mediated cleavage activation of HIV-1 glycoprotein gp160. Nature. 360, 358-361 (1038).
- Li, Y., Luo, L., Thomas, D. Y., Kang, C. Y. The HIV-1 Env protein signal sequence retards its cleavage and down-regulates the glycoprotein folding. Virology. 272, 417-428 (2000).
- Leonard, C. K., et al. Assignment of intrachain disulfide bonds and characterization of potential glycosylation sites of the type 1 recombinant human immunodeficiency virus envelope glycoprotein (gp120) expressed in Chinese hamster ovary cells. J. Biol. Chem. 265, 10373-10382 (1990).
- Wang, W., et al. A systematic study of the N-glycosylation sites of HIV-1 envelope protein on infectivity and antibody-mediated neutralization. Retrovirology. 10 (14), (2013).
- Helseth, E., Olshevsky, U., Furman, C., Sodroski, J. Human immunodeficiency virus type 1 gp120 envelope glycoprotein regions important for association with the gp41 transmembrane glycoprotein. J. Virol. 65, 2119-2123 (1991).
- Haim, H., Salas, I., Sodroski, J. Proteolytic processing of the human immunodeficiency virus envelope glycoprotein precursor decreases conformational flexibility. J. Virol. 87, 1884-1889 (2013).
- Chen, L., et al. Structural basis of immune evasion at the site of CD4 attachment on HIV-1 gp120. Science. 326, 1123-1127 (2009).
- Kwong, P. D., et al. HIV-1 evades antibody-mediated neutralization through conformational masking of receptor-binding sites. Nature. 420, 678-682 (2002).
- Sakai, K., Takiguchi, M. Toward an effective AIDS vaccine development. Eur. J. Immunol. 43, 3087-3089 (2013).
- Veillette, M., et al. Interaction with Cellular CD4 Exposes HIV-1 Envelope Epitopes Targeted by Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity. J. Virol. 88, 2633-2644 (2014).
- Wibmer, C. K., et al. Viral escape from HIV-1 neutralizing antibodies drives increased plasma neutralization breadth through sequential recognition of multiple epitopes and immunotypes. PLoS Pathogens. 9 (e1003738), (2013).
- Kovacs, J. M., et al. HIV-1 envelope trimer elicits more potent neutralizing antibody responses than monomeric gp120. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 12111-12116 (2012).
- Yuan, W., Bazick, J., Sodroski, J. Characterization of the multiple conformational States of free monomeric and trimeric human immunodeficiency virus envelope glycoproteins after fixation by cross-linker. J. Virol. 80, 6725-6737 (2006).
- Guttman, M., Lee, K. K. A functional interaction between gp41 and gp120 is observed for monomeric but not oligomeric, uncleaved HIV-1 Env gp140. J. Virol. 87, 11462-11475 (2013).
- Ringe, R. P., et al. Cleavage strongly influences whether soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers adopt a native-like conformation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 18256-18261 (2013).
- Desormeaux, A., et al. The highly conserved layer-3 component of the HIV-1 gp120 inner domain is critical for CD4-required conformational transitions. J. Virol. 87, 2549-2562 (2013).
- Haim, H., et al. Soluble CD4 and CD4-mimetic compounds inhibit HIV-1 infection by induction of a short-lived activated state. PLoS Pathogens. 5 (e1000360), (2009).
- Haim, H., et al. Contribution of intrinsic reactivity of the HIV-1 envelope glycoproteins to CD4-independent infection and global inhibitor sensitivity. PLoS Pathogens. 7 (e1002101), (2011).
- Thali, M., et al. Effects of changes in gp120-CD4 binding affinity on human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein function and soluble CD4 sensitivity. J. Virol. 65, 5007-5012 (1991).
- Medjahed, H., Pacheco, B., Desormeaux, A., Sodroski, J., Finzi, A. The HIV-1 gp120 major variable regions modulate cold inactivation. J. Virol. 87, 4103-4111 (2013).
- Thali, M., et al. Characterization of conserved human immunodeficiency virus type 1 gp120 neutralization epitopes exposed upon gp120-CD4 binding. J. Virol. 67, 3978-3988 (1993).
- Finzi, A., et al. Topological layers in the HIV-1 gp120 inner domain regulate gp41 interaction and CD4-triggered conformational transitions. Mol. Cell. 37, 656-667 (2010).
- Kassa, A., et al. Transitions to and from the CD4-bound conformation are modulated by a single-residue change in the human immunodeficiency virus type 1 gp120 inner domain. J. Virol. 83, 8364-8378 (2009).
- Xiang, S. H., et al. Mutagenic stabilization and/or disruption of a CD4-bound state reveals distinct conformations of the human immunodeficiency virus type 1 gp120 envelope glycoprotein. J. Virol. 76, 9888-9899 (2002).
- Mouquet, H., et al. Complex-type N-glycan recognition by potent broadly neutralizing HIV antibodies. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 3268-3277 (2012).
- Julien, J. P., et al. Broadly neutralizing antibody PGT121 allosterically modulates CD4 binding via recognition of the HIV-1 gp120 V3 base and multiple surrounding glycans. PLoS Pathogens. 9 (e1003342), (2013).
- Walker, L. M., et al. Broad neutralization coverage of HIV by multiple highly potent antibodies. Nature. 477, 466-470 (2011).
- Moore, J. P., Willey, R. L., Lewis, G. K., Robinson, J., Sodroski, J. Immunological evidence for interactions between the first, second, and fifth conserved domains of the gp120 surface glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1. J. Virol. 68, 6836-6847 (1994).
- Robinson, J. E., Yoshiyama, H., Holton, D., Elliott, S., Ho, D. D. Distinct antigenic sites on HIV gp120 identified by a panel of human monoclonal antibodies. J. Cell. Biochem. Suppl. 16E (Q449), (1992).
- Bonsignori, M., et al. Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity-Mediating Antibodies from an HIV-1 Vaccine Efficacy Trial Target Multiple Epitopes and Preferentially Use the VH1 Gene Family. J. Virol. 86, 11521-11532 (2012).
- Brand, D., Srinivasan, K., Sodroski, J. Determinants of human immunodeficiency virus type 1 entry in the CDR2 loop of the CD4 glycoprotein. J. Virol. 69, 166-171 (1995).
