Introduction
Humant immunsviktvirus type 1 (HIV-1) oppføring, mediert av de trimere proanthocyanidiner viral kappeglykoproteiner (konv) er det første trinnet av den smittsomme syklus. Som den eneste synlige viralt antigen presentert på overflaten av virioner, utløser Env trimer nøytraliserende og nonneutralizing antistoffer. Som sådan representerer den en interessant kandidat for vaksine immunogen design. Men vaksinasjonsforsøk med konvolutt i løselig eller rekombinante former fremkalte responser med bare minimal effekt mot mest primære HIV-1-isolater 1-3. Likevel, delvis effekt observert i RV144 vaksineforsøk fire fornyet interesse for HIV-1 konvolutt som en immunogen kandidat. Dette ble bekreftet av en fersk undersøkelse som beskriver at vaksine fremkalte anti-konv antistoffer var tilstrekkelig til å generere en viss grad av beskyttelse mot SIV og HIV utfordrer fem.
Etter å ha blitt syntetisert i endoplasmatiske retikulum, ENV glycoprotei forløperen, gp160, gjennomgår en rekke post-translasjonelle modifikasjoner som er kritiske for sin evne til drivstoff virale fusjonsprosessen. ENV forløper må kaste riktig og advokatfullmektig i trimers før de hugges til sine ekstra-cytoplasmatiske GP120 og transmembrane gp41 subenheter 6-10, med ikke-kovalente interaksjoner opprettholde den gp120-gp41 liaison. Den infiserte cellen maskiner er også ansvarlig for tungt glykosylere konvolutt, som består av ca 50% av den totale massen 11,12. Den resulterende kompleks struktur tillater konvolutt å være konformasjonelt fleksibel 13,14, samtidig som det gir en metastability som er tenkt å tillate konvolutt å tilpasse seg og skjule visse svært immunogene epitoper som ellers ville bli utsatt 15-19, fremhever viktigheten av å bedre forstå de ulike konformasjoner samplet av de innfødte konvolutt trimer.
Hittil har flere teknikker blitt utviklet og brukt til å studere konvolutt conformational lmanges. Men, de varierer i sine begrensninger, blir ofte begrenset til bestemte konv sammenhenger. For eksempel, overflate-plasmonresonans eller Immunoutfellingsunder analyser ved hjelp conformation spesifikke monoklonale antistoffer (mAbs), avhengig enten av monomere oppløselige eller oppløseliggjorte Env-molekyler som er kjent for å være immunogenetically forskjellig fra deres trimere proanthocyanidiner 20,21. Nyere studier tyder også på at cleavage påvirker konv conformations resulterer i eksponeringen av epitoper hovedsakelig anerkjent av nonneutralizing antistoffer 14,22,23.
Her beskriver vi i detalj en fremgangsmåte som tillater rask og enkel bestemmelse av konformasjon av cellulært uttrykt Env-trimerer 18,24-26. Etter transient transfeksjon av Env i en human cellelinje vedheftende binding av env-spesifikke antistoffer blir detektert ved hjelp av en enkel kjemiluminescens reaksjon. Denne teknikken kan også brukes til å karakterisere conformational preferanse for konformasjon-DEPENdent antistoffer. Således gir denne analysen en robust og meget fleksibelt påvisningsmetode.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Dag 1 - Cell Culture
- Plate 2 x 10 4 humant osteosarkom (HOS) celler per brønn i en ugjennomsiktig, 96-brønners celle-kulturplaten egnet for luminescens lesing. Bruk Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS) og 100 U / ml penicillin-streptomycin. Inkuber til neste dag ved 37 ° C, 5% CO 2.
2. Dag 2 - polyetylenimin (PEI) Transfeksjon
- Forbered transfeksjon blanding i henhold til etterfølgende trinn. Juster reagenser og DNA-mengdene i henhold til det antall brønner som skal transfekteres med det samme Env.
- Rør A: Tilsett 10 ng Tat-kodende plasmid (eksempel PTAT-III-27) og 150 ng Env-kodende plasmid til 5 mL DMEM supplert med 25 mM HEPES.
- Tat-koding plasmid er bare nødvendig når du bruker Tat-avhengige konvolutt-koder plasmider som pSVIII.
- Tube B: Legg 450 ng PEI (fra en 1pg / mL løsning) til 5 ul DMEM.
- Legg innholdet av røret B til røret A. Bland grundig ved å virvle i 10 sekunder og inkuberes transfeksjon blanding i 10 min ved romtemperatur (22 ° C).
- Tilsett 10 pl av den transfeksjon blanding per brønn av 96-brønns plate. Inkuber i 48 timer ved 37 ° C, 5% CO2.
3. Dag 4 - ELISA
- Utføre alle eksperimenter ved romtemperatur for å minimalisere mulig endocytose av Env / antistoff-komplekser.
- Forbered 250 ml vaskebuffer per plate blir brukt samtidig. Vaskebuffer er 1x Tris-bufret saltvann (TBS) pH 7,5 (50 mM Tris-Cl, pH 7,5, 150 mM NaCl), supplert med 1 mM MgCl2 og 1,8 mM CaCl 2.
- Forbered 125 ml blokkering buffer per plate ved å legge til 1% nonfat tørr melk og 5 mM Tris pH 8,0 til vaskebuffer.
- Fjern cellekultur media og transfeksjon mix (supernatant) fra 96-brønns plate.
- Tilsett 100 μ; L av blokkering buffer per brønn og inkuber 20 min ved RT.
- Fjern supernatant og tilsett 50 pl antistoff (eller serum) per brønn, fortynnet til passende konsentrasjoner i Blocking Buffer. Vanligvis bruker en konsentrasjon på 1 pg / ml. Inkuber i 1 time ved RT.
- Vask 3x med 100 mL blokkering buffer og deretter gjenta vaskeprosessen 3x med 100 mL vaskebuffer.
- Fjern supernatant, tilsett 100 mL blokkering buffer, og inkuber 5 min ved RT.
- Fjern supernatanten og tilsett 50 mL av sekundært antistoff, utvannet 1/3000 i blokkering buffer. Varier optimal antistoff fortynning i henhold til produsentens forskjeller. Inkuber i 40 min ved RT.
- Vask 3x med 100 mL blokkering buffer og deretter gjenta vaskeprosessen 3x med 100 mL vaskebuffer.
4. Data Acquisition
- Fjern supernatant fra platen og tilsett 30 mL 1x forbedret chemiluminescence (ECL) substrat per brønn.
- Erverve chemiluminescence signal for 1 sek / brønn på en egnet plate-leseren i henhold til produsentens instruksjoner. Lesing tid kan variere avhengig av hardware forskjeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved å bruke den generelle fremgangsmåten som er beskrevet ovenfor, er tilpasset protokollen for å bestemme virkningen av oppløselig CD4 (sCD4) og coexpressed cellulær CD4 på eksponering av CD4i epitoper på enten vill-type (wt) eller mutert Env, som beskrevet tidligere 18,24, 25,28. Figur 1 viser skjematisk den generelle prosedyre og eksponering av CD4i epitoper etter behandling med sCD4 eller ved coexpression av cellulær CD4 18. I figur 2 har vi brukt sCD4 å indusere konv konformasjonsendringer som utsetter CD4i mAbs 17b og 48d epitoper som overlapper den coreceptor bindingsstedet 24,29, mens den ytre-domenet erkjenner mAb 2G12 ikke påvirkes av denne behandlingen som forventet 18,24.
Virkningen av punktmutasjoner i konvolutt konformasjon kan også vurderes ved hjelp av denne analysen, som presenteres i figur 3. Her har vi brukt enten laget en konvolutt mutant H66A, kjent for å ha en nedgangd tilbøyelighet til spontant smake på CD4-bundet konformasjon 18,24,30,31 eller en mutant (S375W) som predisponerer konvolutt til CD4-bundet tilstand 32 og innhentet konkordant resultater (figur 3A). I de tilfeller hvor ulike Env expressors benyttes, er det ofte nødvendig å normalisere de rå data uttrykt som relative lysenheter (RLU) i henhold til uttrykket nivåer. I dette tilfelle brukte vi PGT121, en mAb gjenkjenner en del av Env glykan skjold 33-35, som den normaliserende antistoff (figur 3B).
Som vi nylig beskrevet 18, samspillet mellom konvolutt og CD4 i samme celle fører til ENV konformasjonsendringer som utsetter CD4i epitoper. I figur 4, kotransfekteres vi økende mengder av et CD4 expressor sammen med Env i cellebasert ELISA-analysen, og erholdt økende signaler for CD4i Mabs A32 og C11 18,36-38, som gjenkjenner diskontinuerlige epitoper i det indre område av GP120, mens konvolutt anerkjennelse av conformational uavhengig 2G12 antistoff ikke ble påvirket (figur 4A). For å kontrollere effektiviteten for transfeksjon mellom betingelser, ble rå data normalisert til 2G12 (figur 4B). Økte signaler innhentet for A32 og C11 antistoffer avhengig env-CD4 interaksjon som indikert av fravær av A32 og C11 module når konvolutt ble kotransfekteres med en CD4 mutant (F43H) med redusert evne til å samhandle med konvolutt 39.
Figur 1. Skjematisk fremstilling av anti-Env cellebasert ELISA. (A) Generell ordning av den prosedyre som HOS cellene er transfektert til å uttrykke trimeric Env på celleoverflaten. Env konformasjon kan deretter prøves ved hjelp av ulike antistoffer gjenkjenne spesifikkekonformasjoner (for eksempel CD4i mAbs). Signaler som detekteres av kjemiluminescens etter farging med HRP-konjugert anti-menneskelig mAbs. sCD4 (B) eller coexpression av cellulær CD4 (C) kan brukes for å indusere Env konformasjonsendringer som fører til eksponering av CD4i epitoper.
Figur 2. sCD4 induserer konv konformasjonsendringer fører til eksponering av CD4i epitoper. Samspill sCD4 med HIV-1 CO-JRFL ΔCT konvolutt forbedrer anerkjennelse av antistoffer rettet mot CD4i epitoper (17b, 48d), men ikke av gp120 ytre-domene erkjenner antistoff 2G12. Et plasmid som koder for HIV-1 CO-JRFLΔCT Env ble transfektert i hver brønn, og 48 timer senere ble cellene vasket og inkubert i nærvær eller fravær av 4 pg / ml sCD4 i 30 min ved RT før fortsinuing med standard protokoll (Dag 4 - ELISA). Env konformasjon ble deretter analysert ved inkubering med 0,25 ug / ml 2G12, 1 ug / ml 17b eller 48d anti-Env mAbs i 1 time ved RT. Signaler ble detektert ved kjemiluminescens etter inkubasjon med et HRP-konjugert anti-humant antistoff i 45 min ved RT. Vist er de gjennomsnittlige RLU-verdier ± SD av seks replikater med signal hentet fra brønner transfektert med en irrelevant plasmid (ingen konvolutt) trekkes fra. Dataene er representative av resultatene oppnådd i tre uavhengige eksperimenter, med betydning testet av to-veis ANOVA (ns, ikke signifikant; ****, p <0,0001).
Figur 3. Modulation av konvolutt konformasjon. HIV-1 YU2 ΔCT lag en konvolutt mutant (H66A) avtar CD4i 17b anerkjennelse mens S375W variant utstillingss økte 17b signal og er tilstrekkelig til å gjenopprette fenotypen av laget 1 mutant. (A) RLU-verdiene av de signaler som oppnås ved hjelp av anti-Env PGT121 og 17b mAbs. (B) PGT121-normalisert signaler om CD4i mAb 17b etter behandling med eller uten sCD4. Vist er gjennomsnittsverdiene ± SD av triplicates med signal hentet fra brønner transfektert med en irrelevant plasmid (ingen konvolutt) trekkes fra. Dataene er representative for resultatene oppnådd i tre uavhengige eksperimenter, med betydningen testet ved to-veis ANOVA (** p <0,01, *** p <0,001; **** p <0,0001).
Figur 4. Coexpression av mobilnettet CD4 forbedrer anerkjennelse av CD4i antistoffer. Et CD4-koding plasmid ble kotransfekteres med HIV1 YU2 ΔCT konvolutt for å favorisereCD4-bundet konformasjon 18. (A) RLU-verdiene av de signaler som oppnås ved hjelp av anti-Env 2G12, A32 eller C11 mAbs og anti-CD4-mAb OkT4. (B) 2G12-normaliserte signaler om CD4i Mabs A32 og C11. Vist er gjennomsnittsverdiene ± SD av triplicates med signal hentet fra brønner transfektert med en irrelevant plasmid (ingen konvolutt) trekkes fra. Dataene er representative for resultatene oppnådd i tre uavhengige eksperimenter. Grey bar indikerer i fravær av CD4, mens den økende blå strek viser en trinnvis økning i mengden av CD4 expressor blir transfektert (1,7 ng, 3,5 ng, og 7 ng) og rød strek viser transfeksjon av en CD4 mutant (F43H , 7 ng) med redusert kapasitet til å samhandle med gp120.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne analysen er optimalisert for å detektere interaksjonen av spesifikke mAbs med HIV-1 trimeric Env uttrykt på celleoverflaten. Når protokollen har blitt etablert, kan den brukes ved middels til høye hastigheter med lave totale materialkostnader og små mengder av antistoffer. Siden denne analysen er transfeksjon basert, kan det lett bli tilpasset for coexpression av cellulære proteiner som CD4 for å studere deres virkninger på konvolutt konformasjon.
Men transfeksjon base av denne protokollen innebærer også at det er en av de viktigste fallgruvene. Først og fremst, antigener for å bli studert med denne teknikken er nødvendig for å være tilgjengelig i en uavhengig ekspresjonsvektor. Som sådan, ville Env gener fra forskjellige kliniske kilder eller proviral konstruksjoner trenger å bli subklonet inn i pattedyr-ekspresjonsvektorer. Selv om full-lengde proviral konstruksjoner kan også brukes i denne teknikken (se Veillette et al. 18), innebærer dette også active viruspartikler produksjon og dermed krever arbeid i passende biocontainment fasiliteter.
Videre er Suksessen med denne teknikken intimt forbundet med transfeksjon effektivitet. Lave signaler som oppnås er ofte på grunn av dårlig ekspresjon av transfekterte antigener. Typiske kilder problemer er plasmid-DNA-kvalitet, transfeksjon reagenser. og celler levedyktighet. Om nødvendig, kan optimalisering av transfeksjon forhold også utføres ved hjelp av andre teknikker, slik som strømningscytometri eller western blotting. Av notatet, er det også viktig å være klar over at uttrykket av noen konv konstruksjoner kan være suboptimal, og kan derfor påvirke teknikken utfall.
Her har vi fokusert på sondering HIV-1 konvolutt konformasjon brukte tidligere beskrevet CD4i mAbs. Denne innstillingen gjør det mulig for et bredt spekter av analyser som sondering effekten av konv punktmutasjoner eller conformational konsekvensene av coexpressed proteiner. Videre har den teknikk som er beskrevet hanre kan også brukes med godt karakterisert Env mutanter med forskjellig konformasjonsendring tilbøyelighet for å undersøke spesifisiteten av forskjellige mAbs for forskjellige Env konformasjoner. Dette gir en enkel og rask karakterisering av nylig isolerte mAbs mens ikke krever høyt spesialisert utstyr eller kompetanse.
Selv om vi bare brukte denne metoden mot konvolutt fra ulike HIV-1-subtypene og andre nære forhold linjene (HIV-2, SIV / Mac) 18, tror vi denne analysen kan være tilrettelagt for ytterligere overflateantigener, for eksempel de fra andre virusfamilier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Vi takker Dr. James Robinson for hans generøse gaven av A32, 17b, 48d, og C11 mAbs. PGT 121 ble innhentet gjennom NIH AIDS Reagens Program, Division of AIDS, NIAID, NIH (Cat # 12343). Dette arbeidet ble støttet av en Canada Foundation for Innovation Program Leader # 29866, av en CIHR drifts # 257792, av en FRQS Etablering av Young Scientist gi # 24639 til AF og ved en CRCHUM kontinuum stipend samt av en CIHR katalysator stipend # 126630 til AF og MR. AF er mottaker av en FRSQ Chercheur Boursier Junior 1 fellesskap # 24639. MV ble støttet av en CIHR Doktorgrads Award # 291485.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HOS cells | ATCC | CRL-1543 | |
| White Opaque Tissue Culture Plate, 96-well, Flat Bottom | BD | 353296 | |
| Polyethylenimine, linear, 25,000 MW | Polysciences | 23966 | Prepared in 1 mg/ml solution |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Invitrogen | 11995 | |
| Goat Anti-human IgG, Peroxidase Conjugated | Pierce | 31413 | |
| Enhanced Chemiluminescence Substrate | PerkinElmer | NEL105001EA | |
| TriStar LB 941, Plate Reader | Berthold Technologies |
References
- Bures, R., et al. Immunization with recombinant canarypox vectors expressing membrane-anchored glycoprotein 120 followed by glycoprotein 160 boosting fails to generate antibodies that neutralize R5 primary isolates of human immunodeficiency virus type 1. AIDS Res. Human Retroviruses. 16, 2019-2035 (2000).
- Koff, W. C. HIV vaccine development: challenges and opportunities towards solving the HIV vaccine-neutralizing antibody problem. Vaccine. 30, 4310-4315 (2012).
- Mascola, J. R., et al. Immunization with envelope subunit vaccine products elicits neutralizing antibodies against laboratory-adapted but not primary isolates of human immunodeficiency virus type 1. The National Institute of Allergy and Infectious Diseases AIDS Vaccine Evaluation. 173, 340-348 (1996).
- Rerks-Ngarm, S., et al. Vaccination with ALVAC and AIDSVAX to prevent HIV-1 infection in Thailand. N. Engl. J. Med. 361, 2209-2220 (2009).
- Roederer, M., et al. Immunological and virological mechanisms of vaccine-mediated protection against SIV and HIV. Nature. 505, 502-508 (2014).
- Fennie, C., Lasky, L. A. Model for intracellular folding of the human immunodeficiency virus type 1 gp120. J. Virol. 63, 639-646 (1989).
- Willey, R. L., Bonifacino, J. S., Potts, B. J., Martin, M. A., Klausner, R. D. Biosynthesis cleavage, and degradation of the human immunodeficiency virus 1 envelope glycoprotein gp160. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85, 9580-9584 (1988).
- Bosch, V., Pawlita, M. Mutational analysis of the human immunodeficiency virus type 1 env gene product proteolytic cleavage site. J. Virol. 64, 2337-2344 (1990).
- Hallenberger, S., et al. Inhibition of furin-mediated cleavage activation of HIV-1 glycoprotein gp160. Nature. 360, 358-361 (1038).
- Li, Y., Luo, L., Thomas, D. Y., Kang, C. Y. The HIV-1 Env protein signal sequence retards its cleavage and down-regulates the glycoprotein folding. Virology. 272, 417-428 (2000).
- Leonard, C. K., et al. Assignment of intrachain disulfide bonds and characterization of potential glycosylation sites of the type 1 recombinant human immunodeficiency virus envelope glycoprotein (gp120) expressed in Chinese hamster ovary cells. J. Biol. Chem. 265, 10373-10382 (1990).
- Wang, W., et al. A systematic study of the N-glycosylation sites of HIV-1 envelope protein on infectivity and antibody-mediated neutralization. Retrovirology. 10 (14), (2013).
- Helseth, E., Olshevsky, U., Furman, C., Sodroski, J. Human immunodeficiency virus type 1 gp120 envelope glycoprotein regions important for association with the gp41 transmembrane glycoprotein. J. Virol. 65, 2119-2123 (1991).
- Haim, H., Salas, I., Sodroski, J. Proteolytic processing of the human immunodeficiency virus envelope glycoprotein precursor decreases conformational flexibility. J. Virol. 87, 1884-1889 (2013).
- Chen, L., et al. Structural basis of immune evasion at the site of CD4 attachment on HIV-1 gp120. Science. 326, 1123-1127 (2009).
- Kwong, P. D., et al. HIV-1 evades antibody-mediated neutralization through conformational masking of receptor-binding sites. Nature. 420, 678-682 (2002).
- Sakai, K., Takiguchi, M. Toward an effective AIDS vaccine development. Eur. J. Immunol. 43, 3087-3089 (2013).
- Veillette, M., et al. Interaction with Cellular CD4 Exposes HIV-1 Envelope Epitopes Targeted by Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity. J. Virol. 88, 2633-2644 (2014).
- Wibmer, C. K., et al. Viral escape from HIV-1 neutralizing antibodies drives increased plasma neutralization breadth through sequential recognition of multiple epitopes and immunotypes. PLoS Pathogens. 9 (e1003738), (2013).
- Kovacs, J. M., et al. HIV-1 envelope trimer elicits more potent neutralizing antibody responses than monomeric gp120. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 12111-12116 (2012).
- Yuan, W., Bazick, J., Sodroski, J. Characterization of the multiple conformational States of free monomeric and trimeric human immunodeficiency virus envelope glycoproteins after fixation by cross-linker. J. Virol. 80, 6725-6737 (2006).
- Guttman, M., Lee, K. K. A functional interaction between gp41 and gp120 is observed for monomeric but not oligomeric, uncleaved HIV-1 Env gp140. J. Virol. 87, 11462-11475 (2013).
- Ringe, R. P., et al. Cleavage strongly influences whether soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers adopt a native-like conformation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 18256-18261 (2013).
- Desormeaux, A., et al. The highly conserved layer-3 component of the HIV-1 gp120 inner domain is critical for CD4-required conformational transitions. J. Virol. 87, 2549-2562 (2013).
- Haim, H., et al. Soluble CD4 and CD4-mimetic compounds inhibit HIV-1 infection by induction of a short-lived activated state. PLoS Pathogens. 5 (e1000360), (2009).
- Haim, H., et al. Contribution of intrinsic reactivity of the HIV-1 envelope glycoproteins to CD4-independent infection and global inhibitor sensitivity. PLoS Pathogens. 7 (e1002101), (2011).
- Thali, M., et al. Effects of changes in gp120-CD4 binding affinity on human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein function and soluble CD4 sensitivity. J. Virol. 65, 5007-5012 (1991).
- Medjahed, H., Pacheco, B., Desormeaux, A., Sodroski, J., Finzi, A. The HIV-1 gp120 major variable regions modulate cold inactivation. J. Virol. 87, 4103-4111 (2013).
- Thali, M., et al. Characterization of conserved human immunodeficiency virus type 1 gp120 neutralization epitopes exposed upon gp120-CD4 binding. J. Virol. 67, 3978-3988 (1993).
- Finzi, A., et al. Topological layers in the HIV-1 gp120 inner domain regulate gp41 interaction and CD4-triggered conformational transitions. Mol. Cell. 37, 656-667 (2010).
- Kassa, A., et al. Transitions to and from the CD4-bound conformation are modulated by a single-residue change in the human immunodeficiency virus type 1 gp120 inner domain. J. Virol. 83, 8364-8378 (2009).
- Xiang, S. H., et al. Mutagenic stabilization and/or disruption of a CD4-bound state reveals distinct conformations of the human immunodeficiency virus type 1 gp120 envelope glycoprotein. J. Virol. 76, 9888-9899 (2002).
- Mouquet, H., et al. Complex-type N-glycan recognition by potent broadly neutralizing HIV antibodies. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 3268-3277 (2012).
- Julien, J. P., et al. Broadly neutralizing antibody PGT121 allosterically modulates CD4 binding via recognition of the HIV-1 gp120 V3 base and multiple surrounding glycans. PLoS Pathogens. 9 (e1003342), (2013).
- Walker, L. M., et al. Broad neutralization coverage of HIV by multiple highly potent antibodies. Nature. 477, 466-470 (2011).
- Moore, J. P., Willey, R. L., Lewis, G. K., Robinson, J., Sodroski, J. Immunological evidence for interactions between the first, second, and fifth conserved domains of the gp120 surface glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1. J. Virol. 68, 6836-6847 (1994).
- Robinson, J. E., Yoshiyama, H., Holton, D., Elliott, S., Ho, D. D. Distinct antigenic sites on HIV gp120 identified by a panel of human monoclonal antibodies. J. Cell. Biochem. Suppl. 16E (Q449), (1992).
- Bonsignori, M., et al. Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity-Mediating Antibodies from an HIV-1 Vaccine Efficacy Trial Target Multiple Epitopes and Preferentially Use the VH1 Gene Family. J. Virol. 86, 11521-11532 (2012).
- Brand, D., Srinivasan, K., Sodroski, J. Determinants of human immunodeficiency virus type 1 entry in the CDR2 loop of the CD4 glycoprotein. J. Virol. 69, 166-171 (1995).
