Introduction
이 방법의 목적은 쉽게 구애와 침략에서 독립적 인 초파리에서 간단한 사회적 행동의 새로운 측면을 정량화하는 것입니다.
사회적 상호 작용은 적절한 발전과 개인의 건강 사회에서뿐만 아니라 전체 사회 집단의 기능에 중요하다. 이러한 상호 작용의 높은 복잡도가 큰 샘플 크기 및 사회적 행동의 유전 적 신경 염기 여전히 제대로 이해되는 바와 같이 동작의 단순화를 허용하는 시스템을 필요로한다. 초파리는 유전자를 식별하는 데 사용될 수있는 강력한 유전 적 모델이고 사회적 상호 작용의 신경 기지. 사실, D. melanogaster의 복잡한 사회적 행동의 레퍼토리를 가지고 있으며, 사회화의 일부 직접 측정은 이미 1-7을 수행하고있다. 그러나, 이러한 노력의 대부분은 상대적으로 복잡한 aggres 사회적 행동에 집중되어왔다시브 상호 작용 3,6, 구애 3,8-12의 다양한 측면, 어떻게 사회적 경험은 학습, 또는 일주기 리듬 13-17 다른 행동에 영향을 미친다. 또한, 이들 분석법은 많은, 파리의 기의 복잡한 상호 작용 패턴을 분석하고 결과 데이터를 분석하는 풍부한 비디오 추적 및 컴퓨터 소프트웨어를 사용에 의존한다. 이러한 분석은 매우 중요하며, 이러한 그룹 7 플라이 플라이 상호 작용의 동적 중요한 새로운 통찰로 이어집니다. 한 가지 제한은, 그러나, 크게는 지역 사회에 이러한 분석의 어려움, 그리고 다른 사람의 인식의 기초가되는 메커니즘의 제한된 지식입니다. 즉, 다른 한 개인에 의해 인식으로 그 신호의 방출에 기초하여 여전히 저조한 18 이해된다.
D. : 반면에, 또한 간단한 동작, 개인이 스트레스를 파리에 의해 방출 신호에서 벗어나 사회적 회피, 전시 파리 MELAN스트레스 후각 또는 DSO (19) ogaster. 높은 처리량 분석에서,이 동작은 다른 파리, 또는 사회적 회피 (19)에 의해 방출 된 신호의 응력을 회피 정량화 할 수있다. 파리 T 미로 장치에 넣고 DSO 함유 바이알을 피하기 위해 선택 주어진다. 이 분석을 이용하여, CO 2 2 19 해부 하였다 CO에 응답하도록 필요한 신경 회로 DSO의 성분, 및 일부가 도시되었다.
여기에 제시된 사회적 회피 분석은 복잡한 행동 (20)를 해부 연구자의 세대를 활성화 모어 Benzer의 연구실에서 개발 된 간단한 행동 분석 개념적으로 유사하다. 사회적 회피 분석 경제적 사회적 행동의 더 광범위한 연구를 허용 T 미로 분석을 이용하여 수행 될 수있다. 예를 들어,이 분석을 사용하여 우리는 최근에 보여 자폐증에 대해 서로 다른 유전 적 위험 사회 B의 대조 효과를 가지고ehavior 분석. 21, 22 neurobeachin - - 자폐증에 대한 후보 유전자에 대한 돌연변이 존재하는 결함은 모두 사회적 공간에서 (다른 곳에서 23 설명), 사회적 회피 (24). 이상 도파민 시그널링은 또한 인간 25,26 자폐증의 병인에서 역할을하는 것으로 제안된다. neurobeachin 얻어진 결과와 대조적으로, 우리는 증가 또는 도파민 세포 초파리 소낭 모노 아민 전송기 (VMAT)의 수준을 감소함으로써 사회적 공간 직접 VMAT (27)의이 수준과 상관되었지만 사회적 회피 성능이 영향을받지 않는 것을 발견했다. neurobeachin 및 VMAT 얻은 대조 결과를 따라서 다양한 비 사교적 행동 양식 및 다른 사람에게 응답을 변조하는 다른 기본 신경 회로들을 식별 가능성을 강조한다.
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Protocol
1. 장비 및 사내 만든 시약 (다른 사람을위한 재료의 목록을 참조하십시오)
- 플라이 작업을 수행 할 수있는 초파리 차가운 마취 장치를 준비합니다.
- 작은 플라스틱 상자 (10.2 cm, 폭 12.7 cm 길이), 피펫 팁 상자의 일반적으로 상단 커버 (3.8 cm 깊이 10.2 cm, 폭 12.7 cm 길이)을 충당하기 위해 다공성 폴리에틸렌 시트를 잘라.
- 짓 눌린 얼음 상자 채우기, 다공성 폴리에틸렌 시트 커버.
- T-미로 장치를 준비; 이전에 설명 된 세부 28-31 장치 적응.
- (32) 기술로 플라이 흡인기를 준비합니다.
- 및 테스트 튜브의 스트레스없이 파리를 대체하는 phototaxis 응답 장치를 준비합니다
- 29,33에 의해 설명 된 바와 같이, 역류 장치를 사용합니다.
참고 : 28에 의해 기술 된 바와 같이 T 미로 또한, 다른 목적을 위해 이용 될 수있다.
- 동음 확인ogeneous 조명 조건 : 흰색 벤치 커버로 덮여 벤치에 실험을 수행하고, 화이트 보드 앞에.
참고 :이 실험을 위해 사용 된 플라이 균주는 초파리는 야생 유형을 melanogaster의했다 : 광저우-S, 오레곤과 사마르 칸트는 우리의 실험실 주식 34에서 날아; 엘우드 파리는 롱 아일랜드, 뉴욕, 미국에, 헌팅턴의 엘우드 동네에서 2011 년 가을에 수집되었다.
2. 실험 전에 파리를 준비
실험을 수행하기 전에 1-2일 :
- 12 시간 빛 / 어둠주기에 25 ° C에서 표준 옥수수 가루 한천 - 당밀 효모 매체에 파리를 유지한다.
- 실험을 수행하는 1 ~ 2 일 전에 차가운 마취하에 응답자 파리를 수집
- 그들은 깔때기를 사용하여, 50 ㎖ 팔콘 튜브에 제기되고있다있는 병에서 파리를 전송합니다.
- 로, 얼음 수준에서 파리와 팔콘 튜브를 놓습니다절연 얼음 양동이.
- -4 C가 진정 ° 분쇄 얼음으로 냉각 마취 장치를 놓습니다.
- 파리 냉각 혼수를 입력 할 수 5 분을 기다립니다.
- 추위 마취 장치의 다공성 폴리에틸렌 시트에 파리를 전송합니다.
- 추위 마취 장치에 응답자의 파리를 수집합니다. RT에서, 실체 현미경, 여성 파리 3-7 일 이전 남성을 분리하고 (40)의 그룹이 파리를 유지한다.
- 실험을 수행하기 1-2 일 전에 이미 터 파리를 수집합니다.
- 부드럽게 광저우-S 혼합 성이 자신의 번호를 제어, 입 흡입기를 사용하여, 자신의 병에서 파리 수집합니다.
- 그들이 방출되는 바와 같이, 60 ~ 100의 그룹이 파리를 유지한다.
- 데이터 포인트는 필요에 따라 방출의 많은 샘플을 준비합니다.
- 추위 마취의 혼란 효과를 최소화하기 위해, 대응 및 이미 터의 수집 후 회복 중 적어도 밤 허용행동에 입 흡입기 모음.
- 적어도 일일 전에 실험, 신선한 공기로 대체 할 수있는 가방에 오래된 플라스틱 냄새가 공기 수 있도록, 테스트 튜브의 가방을 엽니 다.
실험을 수행하기 전에 2 시간 :
- 심지어 빛, 실험이 수행 된 실내 온도가 약 23 ~ 25 ° C에 있는지 확인하고, 상기 습도 30 %.
- 이 파리는 굶어되지 않도록 신선한 식품 유리 병에 대응하고 방출 과일 파리를 전송합니다.
- 초파리 실험이 수행 될에 벤치에 2 시간 동안 환경에 적응하자.
3. 사회 회피 실험 수행
- Zeitgeber 시간 ZT5 ZT9과 오후 사이에서 3-4 시간의 범위로, 하루 중 동시에 각 실험을 수행한다.
- 타격 패드 T-미로를 놓고 t 그래서 나사 클립을 조그는 엘리베이터 안정적이다.
- 신선한 테스트 유리 병에 응답자의 파리를 전송합니다. T-미로의 상단 부분에 응답자의 파리를 포함하는이 병을 스냅.
- T-미로 장치를 경사와 초파리가 엘리베이터에 빠지지 않도록 두근 두근 매트를 누릅니다.
- 파리는 T-미로의 상단과 하단 부분 사이 있도록 아래로 엘리베이터의 상단 부분을 이동하지만, 선택 포인트 이상의 엘리베이터를 유지하기 위해주의 - 탈출 파리를 방지하기 위해.
- DSO (이전에 파리에 의해 점유 된 DSO없는 튜브를 생성하는 제 5 절 참조) 병을 얻습니다.
- 응답자 파리는이 새로운 환경에 적응하는 동안, 테스트 유리 병에 터 파리를 배치합니다.
- 초파리 탈출하지 않도록 유리 병을 닫습니다면의 조각을 놓습니다.
- 15 초 동안 소용돌이를 5 초 동안 소용돌이에서 유리 병을 제거 : 기계적으로 다음과 같이 미니 소용돌이에이 병을 선동. 55 초 총 3 번 반복합니다.
- 렘식품 유리 병에 전송하여 - - 신선한 유리 병에서 이미 터 파리를 비켜 빠르게 T-미로 장치의 두 측면 중 하나에이 DSO 채워진 유리 병을 배치합니다.
- 각각의 새로운 실행에 DSO 채워진 유리 병에 대한 배치의 측면을 교대한다.
- T-미로의 반대편에 신선한 테스트 유리 병을 놓습니다.
- 초파리는 신선한 테스트 유리 병 및 DSO 테스트 유리 병 사이에 선택할 수 있도록 완전히 엘리베이터를 가지고, 그리고 타이머를 시작합니다.
- 다른 설명이없는 파리, 1 분 동안 신선한 유리 병 및 DSO 유리 병 사이에서 선택할 수 있습니다.
- 1 분 후, 신선한 유리 병, DSO 유리 병, 엘리베이터에 갇혀 사람들의 파리를 분리하기 위해 엘리베이터를 이동합니다.
- 각각의 유리 병에 파리의 수를 계산하고 엘리베이터에.
- 각각의 유전자형 / 조건에 대해이 작업을 반복합니다.
4. 사회 회피 데이터 분석
- 각 genot 각 유리 병에 과일 파리의 수를 계산YPE 및 스프레드 시트에 데이터를 전송.
- 스프레드 시트 프로그램을 사용하여, 파리의 총 개수로 나누어 다음 DSO없는 유리 병에 파리 번호에서 DSO 바이알 파리의 수를 감산하고, 각 유전자형에 대한 성능 지수 (PI)를 계산한다.
- 결과의 통계적인 분석을위한 분석 소프트웨어를 이용하여 PI들 '비교 수단.
- 이상적으로, 각 실험 2-3 내부 반복, 3 독립적 인 반복을 준비, 다른 병으로, 다른 일을 수행 또는 (30) 십자가.
- 데이터가 정규 분포를 따르는 것처럼, 가우스 분포의 통계 시험을 사용한다.
- 하나의 효과를 테스트 할 때 (즉, 밀도 - 그림 2), 컨트롤에 각각의 결과를 비교하기 위해 (열을 기준으로 열) 다중 비교에 대한 시험 후, 또는 간단한 t-test로, 일원 분산 분석을 사용합니다.
- 그룹의 실험이 수행 될 때, 조건 및 성별 (빈 유리 병을 모두 테스트 강조D 않은 스트레스 파리; 성별 효과 - 그림 1), 양방향 ANOVA를 사용하여.
5. 이전에 강세 파리 점령 튜브를 생성 - 대신 3.5-3.6의 수행
- 대조군으로 강조되지 않은 파리에 의해 점유 된 유리 병을 준비하는 phototaxis을 사용합니다.
- 반대 위치에 신선한 빈 유리 병으로, 테스트 유리 병에 파리를 전송하고, 역류 장치에 끼워 넣습니다.
- 직접 15 W 형광 차가운 백색 빛의 앞에 말단 유리 병에 수평으로 장치를 마련하고, 검은 천으로 커버.
- 파리 부드럽게 신선한 유리 병으로 이동하자. 이 작업은 몇 분 정도 걸릴 수 있습니다. 파리의 대부분이 말단 유리 병에 빛을 향해 걷고되면, 1 분 타이머를 시작합니다.
- 부드럽게, 빛의 위치를 온, 검은 천으로 제거 검은 천으로 복구하고, 파리 테스트 유리 병을 떠날 수 있습니다.
- 그 때, 나는3.2-3.5에서와 같이 선택 실험을 nitiate. 3.6 및 3.7를 건너 뜁니다.
- 다른 측면에서 테스트 바이알을 비웠다 파리를 분리하는 장치의 슬라이더를 이동.
- 바로 선택 실험, 3.7에서와 T-미로에서 물러 테스트 유리 병을 사용합니다.
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Representative Results
사회적 회피 분석은 다른 플라이에서 방출 응력 신호를 인식 초파리 melanogaster의 능력 (DSO)을 정량화하고, 따라서 사회적 상호 작용의 일 양상을 평가 강력한 시험이다. 분석은 일반적으로 두 가지 옵션 사이에서 선택과 파리를 제시 T-미로로 알려진 다양한 행동 분석에 사용 된 장치를 사용하여 수행됩니다 - 왼쪽 또는 오른쪽으로 19,28-31. 이 경우, 파리 DSO를 방지하는 계산 효율 및 성능 지수 (PI)를 비교함으로써 정량화 하였다. (100)의 PI 모든 파리는 DSO를 피할 수 있음을 나타냅니다 동안 제로의 PI는 50 대 50의 분포 또는 전혀 회피를 나타냅니다. 그리고 -100의 PI는 모든 파리는 DSO 유리 병 안에 갔다 나타냅니다.
파리는 기계적으로 교반 파리에 의해 방출 DSO를 포함하는 유리 병이 나타나고, 하나의 신선한 (DSO-무료) 유리 병된다. 대표 결과는 여기에 제시된하고 힘을 강조이 분석의 시간뿐만 아니라, 최적의 결과를 얻기에 필요한 몇 가지 공지 된 조건.
DSO의 회피 성에만있는 것이 아니라 파리가 강조되고있는에 따라 달라집니다. 응답자 파리의 섹스는 DSO 자신의 회피 (그림 1)에 영향을주지 않습니다. 이 경우 기계적으로 (그림 1) 교반 - 파리가 유리 병의 회피를 유도 할 수있는 테스트 유리 병을 점령하는 그러나,이 충분하지, 파리 강조되어 있어야합니다. 파리 입력과 phototaxis를 사용하여 스트레스없이 유리 병을 종료 한 경우에는 파리 테스트 유리 병을 점유하지 않거나했다면, 응답자 이전 19보고 된 어떠한 환경 설정을 유도하지 않습니다.
도 1은 공지 된 결과를 재생하더라도, 또한 서브 - 최적의 조건으로 얻어진 데이터의 종류의 예이다. 단지 2~5 내부 반복하고, 독립적 인 실험으로, 오차 막대는 범위를 나타낸다. 그러나, 중요한 다를 있습니다이전 19보고 이전에 강조 파리와 비 강조 파리 또는 빈에 의해 점유 된 유리 병 사이 줬어. 이러한 맥락에서, 파리는 여전히 회피 강한 PI를 표시. 이 분석의 견고성을 강조. 또한, 두 신선한 유리 병 사이의 선택에 대한 PI는 (여성의 P <0.05, 풀링 섹스 P <0.01를 들어, 0에서 다른) 부정적이다. 이는 작은 샘플 크기로 T-미로, 또는 바이어스의 한면에 대한 선호를 나타낸다. 이 제한은 제시된 후속 실험에서 수행하여 시험 화합물 바이알 내부 복제물에 T-미로 상에 배치 된 측면을 번갈아 반대 될 수있다.
DSO에 대한 응답에서 성별 효과의 부족에도 불구하고, 대응 가능한 혼란 효과를 방지하기 위해 성별로 구분 하였다. 예를 들면, 후각 (36) 시그널링에 관여하는 유전자에 영향을주는 것과 같은 특정 성 효과를 가질 수있는 돌연변이의 경우. 다음 representati 결과 남성 응답자 및 혼합 성 방출에 초점을했습니다.
DSO의 회피 테스트 응답자 파리의 수에 독립적이다.
이전 실험 (19)는 대부분의 파리는 신선한 DSO없는 유리 병을 선호하는 것을 나타내는, 40 캔톤-S 높은 PI를 보였다 사회적 회피, 테스트에 파리의 표준을 사용하고 있습니다. 도 2에 도시 된 바와 같이 응답자 PI에 그룹 크기의 효과를 시험하기 위해, 10-80 파리의 범위는 정량 하였다. 두 개의 독립적 인 실험 및 시험 당 3 개의 내부 복제물 최소 하였다. 제어부 (마흔 리스폰 파리)의 성능 지수에 리스폰 파리 상이한 수의 각각의 PI를 비교할 때 t 검정은 유의 한 차이를 보이지 않았다. 따라서, 리스폰 파리의 수가 DSO 회피 PI 및 돌연변이 변이체가 작은 수의 사용 가능한 경우에도 시험 될 수 회피에 미치는 효과에 영향을 미치지 않는다.
ENT "> 이미 터의 높은 수는 DSO의 높은 회피에 리드를 날아갑니다.에미 파리의 수가 DSO 및 회피 영향 정도를 결정하기 위해 다음과 같은 스트레스 파리의 양의 효과를 시험 하였다. 과거의 실험 (19),이 프로토콜에서 70 캔톤-S 파리의 표준을 사용하고 있습니다. 우리는 지금 (160) 터 파리 (그림 3)에 10를 시험했다. 80 개 이상의 방사체와 회피의 증가는 없지만 회피의 성능은 이미 터의 수에 직접 관련된다. 10이 파리를 강조와 함께 흥미롭게도, 상당한 회피 여전히 검출되었다. 또한, 이것은 시간에 몇 파리의 발광 기능을 테스트 할 수있다.
유전 적 배경은 DSO 회피 성능에 영향을줍니다.
초파리 melanogaster의 유전 연구를위한 강력한 모델 생물이다. 따라서,이 분석은 discr하는데 사용될 수 있는지 여부를 결정하는 것이 중요하다고다른 유전 적 배경을 iminate. 네 가지 야생 유형의 응답은 광저우-S에 의해 방출 DSO 자신의 회피 (그림 4)에 대하여 (광저우-S, 오레곤-R, 사마르 칸트와 엘우드)을 측정 하였다. 광저우-S와 엘우드 오레곤과 사마르 칸트 (P <0.05)에 비해 더 높은 PI 있습니다. 이러한 결과는 DSO의 회피를 기초 유전 성분이 있다는 것을 증명하고,이 분석이 유전 적 영향의 연구를 수행 할 수있는 능력을 가지고있다.
선택의 시간의 길이는 성능에 영향을 미칩니다.
도 1, 2, 3 및 4에 제시된 대표 데이터 집합은 또한 그들이 피 바이알 결정에 대응하는 소정의 시간 기간의 효과를 예시한다. 광저우-S 응답자가 선호하는 유리 병을 선택하는 45 초 30를 부여 할 때, 일반적으로 PI = 55 (그림 2, 각각 PI 남성 주위 공연에 도달= 57 ± 2; 52 ± 11). 60 초 주어 졌을 때, 그 성능은 그림 4 (PI를 = 77 ± 6.5)와 같이, 높은 수준이다.
DSO 그림 1. 회피 섹스에만있는 것이 아니라 파리가 강조되고있는에 따라 달라집니다. 막대 그래프는 유리 병 교반 파리 (DSO) 왼쪽 스트레스 냄새 방지의 PI의 평균 ± 범위를 나타냅니다. 남성 (빨간색)과 여성 (오렌지)을 함께 (갈색) 테스트하고 실험 후 측정 하였다. 파리는 상관없이 섹스 (양방향 ANOVA)의 유사 수행. 그러나 그들은 단지, P <0.05, Tukey의 다중 비교 포스트를 입력하고 phototaxis에 의해 병을 종료하는 강조되지 않은 파리 파리 이전에 강조했다있는 DSO 채워진 유리 병 (기계적으로 교반), 그리고 유리 병을 (회피 시험), 또는 신선한 유리 병 (P <0.001, Tukey의 다중 비교 시험 후). 에또한,이, 신선한 유리 병 및 비 강조 파리 조건 사이에 통계적으로 유의 한 차이가 없었다 편견에도 불구하고 신선한 유리 병 실험 - N = 2-5 (N = 3 신선한 40 혼합 성이 45 초 선택 시간, 각각 파리와 복제 유리 병, N = 2) 스트레스를 파리와 유리 병 비 스트레스 파일과 유리 병, N = 5.
DSO 그림 2. 회피 시험 파리의 수와 무관하다. 대표 데이터는 T-미로 캔톤-S 리스폰 파리의 수가 DSO 사회적 회피에 영향을 미치지 않는다는 점을 보여준다. 응답자 파리는 신선한 유리 병 및 DSO를 포함하는 유리 병 사이에서 결정하는 30 초를 부여했다 (N = 재판 당 2-6 내부 회 반복, 1-2 임상 시험, 조건 당 5 데이터 포인트의 최소, 막대 그래프는 평균 ± SEM 대표)
그림 4. 선택 시간과 초파리의 유전 적 배경은 DSO. 광저우-S와 엘우드 유전자형에 대한 응답에 영향을 미칠 오레곤 사마보다 DSO의 강력한 회피를 표시rkand (광저우-S에 비해 P <0.05 *, t 검정). 응답자 파리는 1 분을 받았다. 신선한 유리 병 및 DSO를 포함하는 유리 병 사이에 결정 (N = 재판 당 4-5 내부 회 반복, 2 독립적 인 시험은, 막대 그래프는 평균 ± SEM 대표)
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Discussion
이 프로토콜은 사회적 회피 분석에 대한 자세한 절차를 설명합니다. 광저우-S는 이전에 기계적으로되어 강조했다 날아간 유리 병을 방지하며, 응답자의 성별과 수는 사회적 회피 성능 것이 영향을주지 않습니다. 그러나 응답자의 유전 적 배경이 큰 영향을 미친다.
성공적으로이 실험을 수행하기위한 몇 가지 중요한 단계를 다음과 같습니다 : 1) 항상 실험 전에 파리 2 시간을 전송하고 자신의 환경을 방해하지 않도록주의; 2) 일 주기성 리듬과 운동 및 활동 레벨에 따라서 가능한 편차에 링크 성능의 변화를 감소시키기 위해 이상적 Zeitgeber의 ZT5 (시간 광의 개시 후의 시간)과 ZT9 사이에, 하루 중 항상 동시에 실험을 수행; 실험을 수행 할 때 3)의 온도 및 습도 조건을주의; 30 % 이상 23 ~ 25 ° C와 습도 주위 온도가 최고; 4) D 확실하지 수 있도록isturb 파리 결정 시간 동안 T-미로 장치는; 5) 적어도 24 시간을 사용하기 전에 신선한 유리 병을 방영해야합니다; 6) 실험 중에 항상 T 미로의 일측에 우선하지 않도록 T 미로 시험 장치에서 바이알의 위치를 변경하는 것이 중요하다. 추가 시험이 확인을 수행 할 필요가 있지만, 그것을 경험적 DSO는 5 분 미만에 "스트레스"바이알 탈출 보인다. 반면에, 초파리 스트레스 후에 최대 1 시간까지 DSO를 방출 할 수있는 것으로 보인다.
프로토콜에서 고려되어야 몇 가지 고려 사항이 있습니다. 비행 사회적 회피 세 사이의 상관 관계는 현재 알 수 없습니다. 따라서, 노화와 관련된 행동 변화가 37 세 이전에 표시되지 않는 한, 25 ℃에서 두 개 이하 주령 파리로 실험을 수행 할 것을 권장한다. 메이트 파리는 (보관 혼합 성)는 실험 등을 위해 수집됩니다DSO 방출이 파리의 결합 상태에 의해 영향을 어떻게 알 수 없습니다. DSO 회피 행동 출력 성별에 의해 영향을받지 않지만, 뇌 기본 회로 성적 동종 이형 할 수 있으며, 이는 남성과 여성 파리를 혼합하지 않는 것이 바람직하다. 마지막으로, 이미 터의 수의 감소는 아마도 출사 총 DSO 감소 연결된 회피 감소에 리드를 날아간다. 그러나 충분히 DSO는 강력하고 재현 회피로 이어지는, 여전히 10 파리에 존재한다.
광저우-S는 파리 60 초에서 30 초에 응답자 파리의 의사 결정 시간의 감소, 또한 PI의 감소를 초래한다. 이 광저우-S보다 성능이 날아간 상태 또는 돌연변이에 대한 차별하는 도구로 사용할 수 있습니다. 따라서, 현재 상태로, 사회적 회피 분석은 유전자의 효과 DSO 회피에 환경을 테스트 할 행동 패러다임으로서 사용될 수있다. 기술을 마스터 한 후, 미래의 단계를 취할 수 있습니다DSO 방지하고 최적의 작업을 사회적 회피 분석을 얻기 위해 사용되어야 터 파리의 정확한 수를위한 이상적인 의사 결정 시간을 포함합니다.
응답자는 가난한 운동이있는 경우 테스트 돌연변이 체에서 발생하는 것이 한계가 발생할 수 있습니다. 실험적 불량한 운동에 대항 할 수있다 이러한 뮤턴트 이상 선택 시간을 결정하는 단계. 유사하게, CO (2)의 검출을 방해하는 감각 결함으로 날아간 - DSO의 주성분, 또는 DSO의 다른 미지의 성분이 분석에서 시험 될 수 없을 것이다.
이 응답의 정량화를 허용 다른 분석은 없습니다. 이 CO 2 DSO (19)의 구성 요소 인 것으로 도시되었지만, 다른 개인 스트레스를 방지하기위한 방법을 선택에 관련된 다른 신호 성분뿐만 아니라, 신경 전달 물질은 아직 결정되지 않았다. 유사하게,기구를 구동하는 flies는 DSO를 알 수없는 방출합니다. 상기 분석은 현재 돌연변이, 또는 환경 치료의 사회적 행동 전체적인 프로파일을 결정하기위한 추가 벤치 탑 진단 분석법으로 사용될 수있다. 예를 들어, 하나의 비교하고 스트레스 파리 사회적 회피하기 위하여, 사회적 공간, 즉, 가장 가까운 이웃의 거리 (23)의 정량화를 대비. 그러한 특성은 다른 개인의 존재에 응답하고, 가까이 올 또는 그들을 피하기 위해 결정을 필요로한다. 이러한 뇌 회로와 관련된 신경 전달 물질을 해부 매우 간단하면서도 강력한 방법입니다. 이러한 행동 패러다임은 엄청난 전위가 스크리닝 목적을 위해 사용되어야한다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Stereo Zoom Microscope | Nikon | SMZ-645 | Any other standard scope for fly handling would work |
| Small paint brushes | for pushing flies | ||
| Porous Polyethylene, 12" x 12" Sheet | Flystuff - Genesee | 46-100 | http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 Porous Plastic sheet for the cold anesthesia box |
| Mini-Alarm Timer/Stopwatch | |||
| Sharpie pens | |||
| Adhesive Tape | |||
| Mini vortex | Fisher | 14-955-151 | http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail For mechanical agitation of the flies - any vortex would work. |
| Corning Life Sciences DL No.:352017, Falcon test tube; round bottom; disposable; no closure, 14 ml; 17 x 100 mm | Fisher | 14-959-8 | http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalogId=29104&productId=2771811&distype=0&highlightProductsItemsFlag=Y&fromSearch=1&searchType=PROD&hasPromo=0 These snap in place in the in-house made T-maze and counter-current apparatus (see text) |
| cotton balls | to close the vials after the experiment. | ||
| trifold board and white bench cover | to provide a white background, and a homogeneous light. | ||
| white bench cover | |||
| pounding pad | any mouse pad works. | ||
| large black cloth | to cover the counter-current apparatus in phototaxis response. | ||
| cool-white light | Home Depot | 1000516563 | http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 any similar linear light with fluorescent light bulb cool-white at 13-15 W would work |
References
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