Summary
बाल रोग के पशु मॉडल जल्दी शुरू होने और आक्रामक रोग प्रगति अनुभव कर सकते हैं. चिकित्सकीय युवा माउस मॉडल के लिए प्रासंगिक चिकित्सा वितरण तकनीकी रूप से कठिन हो सकता है. इस प्रोटोकॉल जीवन के पहले दो प्रसव के बाद दिन के भीतर नवजात चूहों के लिए एक गैर-आक्रामक नसों में इंजेक्शन विधि का वर्णन है.
Abstract
नसों में इंजेक्शन चिकित्सा देने के लिए एक चिकित्सकीय लागू ढंग है. वयस्क कृन्तकों और बड़े जानवरों के लिए, नसों में इंजेक्शन तकनीकी रूप से संभव है और दिनचर्या हैं. हालांकि, कुछ माउस मॉडल संभावित उपचारों के प्रशासन के लिए मुश्किल बना देता है कि एक तेजी से प्रगति के साथ रोग के प्रारंभिक शुरुआत हो सकती है. लौकिक (या चेहरे) नस सिर्फ चूहों में कान कली को पूर्वकाल और एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग सिर के दोनों तरफ जन्म के बाद स्पष्ट रूप से पहले दो दिनों के लिए दिख रहा है है. इस विंडो के दौरान, लौकिक नस 50 μl अप करने के लिए संस्करणों के साथ इंजेक्शन जा सकता है. इंजेक्शन सुरक्षित और अच्छी तरह से पिल्ले और बांधों दोनों द्वारा सहन किया है. एक ठेठ इंजेक्शन प्रक्रिया पिल्ला घर पिंजरे में लौट रहा है, जिसके बाद 1-2 मिनट के भीतर पूरा हो गया है. तीसरा प्रसव के बाद दिन तक नस कल्पना करना मुश्किल है और इंजेक्शन प्रक्रिया तकनीकी रूप से अविश्वसनीय हो जाता है. इस तकनीक एडिनो से जुड़े वायरस (एएवी) vect की डिलीवरी के लिए इस्तेमाल किया गया हैबदले में चुना वायरल सीरोटाइप के आधार पर पशु के जीवन के लिए लगभग शरीर चौड़ा, स्थिर transgene अभिव्यक्ति प्रदान कर सकते हैं, जो अन्य रैंकों,.
Introduction
बाल रोग का murine मॉडल में केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) को चिकित्सा विज्ञान की डिलिवरी एक चुनौती बनी हुई है. मॉडल नवजात शिशु रोग राज्यों सीधे सीएनएस के भीतर उपयुक्त संरचनाओं में डालने के लिए मुश्किल हो सकता है इसलिए ख़राब और विकासात्मक अपरिपक्व, और कर रहे हैं कि चूहों. चिकित्सीय एजेंटों की intravascular इंजेक्शन सीएनएस 1-5 और 3,5-9 रेटिना सहित पूरे शरीर को कोशिकाओं, दवाओं, या वायरल वैक्टर वितरित करने के लिए एक गैर इनवेसिव, अच्छी तरह सहन विधि है. पिछले प्रकाशनों एक विच्छेदन खुर्दबीन 11,12 के बिना, एक transilluminator 10,11 का उपयोग अस्थायी चेहरे नस इंजेक्शन का वर्णन, या दो व्यक्तियों की आवश्यकता होती है 10 इंजेक्षन. एक ही व्यक्ति पिल्ले इंजेक्षन कर सकते हैं, और प्रकाश स्रोत अस्थायी नस, पिल्ला छू एक निश्चित सतह पर सर्जिकल टेप के लिए की जरूरत है या एक पिल्ला के लगाव को नष्ट नहीं है देखने के लिए क्योंकि इस प्रोटोकॉल में वर्णित इंजेक्शन तकनीक फायदेमंद हैएक transilluminator 11 के रूप में इस तरह के. चूहों में एडिनो जुड़े वायरल वेक्टर सीरोटाइप 9 (AAV9) की डिलिवरी मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी (चित्रा 1) भर में न्यूरॉन्स और astrocytes में मजबूत अभिव्यक्ति पैदा करता है. सतही अस्थायी चेहरे की नस में वायरल वैक्टर intravascular वितरण मज़बूती से बाल neuromuscular विकार रीढ़ की हड्डी में पेशी शोष (SMA) के 2,4,13,14 के इलाज के लिए नवजात चूहों में विभिन्न अध्ययनों में इस्तेमाल किया और अंततः इलाज चूहों की उम्र बढ़ा दी गई है.
नवजात चूहों के intravascular इंजेक्शन भी प्रभावी ढंग से परिधीय तंत्रिका तंत्र और परिधीय अंगों (चित्रा 2) लक्ष्य. एएवी के इंजेक्शन के बाद, पृष्ठीय रूट ganglia, जिगर, दिल, कंकाल की मांसपेशी, फेफड़े और पेट के myenteric जाल के पारगमन 1,3,6,7,15 देखा गया है. सीएनएस और परिधि के व्यापक पारगमन की वैश्विक अभिव्यक्ति की आवश्यकता के रोगों के लिए इंजेक्शन आदर्श की इस पद्धति में आता हैऐसे Gaucher रोग 16 और अन्य लाइसोसोमल भंडारण रोगों 17,18, बैटन रोग और संबंधित न्यूरोनल ceroid lipofuscinoses, 19 और Bardet-Biedl सिंड्रोम, बचपन 20 में होने वाली लक्षणों की शुरुआत के साथ एक आनुवंशिक multisystem विकार के रूप में एक transgene,. नवजात चूहों में intravascular इंजेक्शन भी मॉडलिंग प्रणाली चौड़ा बाल रोगों के एक उपन्यास विधि के रूप में माना जाना चाहिए. इस तकनीक को बड़े पशु मॉडल 5,21 करने के लिए अनुवाद किया गया है और intravascular इंजेक्शन पहले से ही चिकित्सा विज्ञान पहुंचाने की एक चिकित्सकीय स्वीकार्य पद्धति के रूप में मौजूद है.
मौजूदा प्रोटोकॉल प्रसव के बाद दिन 2. इंजेक्शन से नहीं बाद में सतही अस्थायी चेहरे नस के माध्यम से नवजात चूहों के लिए एजेंट पहुंचाने का एक सरल, कुशल विधि का वर्णन एक एकल द्वारा पूरा किया जा सकता है, व्यक्तिगत अभ्यास किया है और अच्छी तरह से पिल्ले और बांधों दोनों द्वारा सहन किया है. पिल्ले न्यूनतम संकट का अनुभव है और जल्दी से ठीक हो. Importantly, सफल इंजेक्शन प्रशासित एजेंट के वैश्विक वितरण में परिणाम होगा. इस प्रोटोकॉल वायरल वैक्टर, नवजात चूहों को दवा एजेंटों या कोशिकाओं के वितरण के लिए उपयुक्त है.
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Protocol
प्रोटोकॉल में सूचीबद्ध सभी प्रक्रियाओं ओहियो राज्य विश्वविद्यालय के पशु का प्रयोग करें और केयर समिति (IACUC) के लिए संस्थान अनुमोदित किया गया है.
कार्यक्षेत्र की 1. तैयारी
- कूड़े, एक विदारक माइक्रोस्कोप, एक 90 डिग्री पर इंजेक्शन (एक प्रकाश स्रोत का उपयोग करने के लिए एक कोण पर तैनात किया जा सकता है कि एक प्रकाश स्रोत से बांध अलग करने के लिए, एक खाली पिंजरे माउस पिल्ले anesthetize को गीला बर्फ इकट्ठा इंजेक्शन साइट के लिए कोण नस), इंजेक्शन के लिए पशु स्थान के लिए एक साफ सतह, कपास swabs, 3/8 "30 जी सुई (पशु के प्रति एक) और 1% इवांस नीले रंग के साथ 3/10 सीसी इंसुलिन सिरिंज (obscures प्रशिक्षण के लिए फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस)) समाधान के साथ बनाया है.
- पिल्ले जोड़ तोड़ जबकि एक अलग पिंजरे में बांध निकालें.
2. इंजेक्शन प्रक्रिया
- पशु anesthetize को 30-60 सेकंड के लिए गीला बर्फ पर सीधे एक भी पिल्ला रखें. टी मत छोड़ोकारण निलय फिब्रिलेशन, ऊतक हाइपोक्सिया और चयापचय अम्लरक्तता सहित हाइपोथर्मिया से संबंधित जटिलताओं के जोखिम को भी लंबे समय बर्फ पर वह जानवर.
नोट: हमारी अनुभव 30-60 सेकंड इंजेक्शन के लिए अनुमति देने के लिए पिल्ला आंदोलनों धीमा करने के लिए पर्याप्त है कि है. गहरी संज्ञाहरण की आवश्यकता है, इस तरह 1-2 isoflurane% के रूप में inhalants उपयुक्त हो सकता है. - पशु बर्फ पर है, वहीं इवांस नीले रंग के 30 μl के साथ सिरिंज लोड.
- पशु पूरी तरह anesthetized है, जब, अभी भी साँस ले, जबकि बर्फ पर आंदोलन की कमी से इसकी पुष्टि की खुर्दबीन के नीचे यह चाल है. दाएं हाथ के इंजेक्शन के लिए, सही करने के लिए पशु के थूथन सामना करते हैं. कान कली सूचकांक और मध्यम उंगलियों (चित्रा 1) के बीच इतना है कि कान कली को थूथन और छोड़ दिया मध्यम उंगली दुम पर छोड़ दिया तर्जनी रखें.
- सिर्फ त्वचा चालाकी है जब चलता है कि एक सतही केशिका के लिए कान कली के लिए पूर्वकाल की जांच. यह केशिका हालांकि, लक्ष्य नहीं हैपहचान अस्थायी नस पहचान के लिए महत्वपूर्ण है. अगला, चाहे त्वचा की स्थिति के अचल रहता है कि केशिका को नीचा एक अंधेरा, छायादार नस खोजें. लौकिक नस, छायादार प्रकट होता पृष्ठीय को उदर चलाता है, और गले का नस (चित्रा 1) में फ़ीड.
- सुई उठाव के साथ लौकिक नस दर्ज करें. सही ढंग से डाला है, यह सुई उठाव त्वचा के माध्यम से रक्त से भरना देखने के लिए संभव है. फिर धीरे धीरे सवार दबाना और नोट चेहरे की ओर नीचे की नस की blanching.
- सुई injectant की backflow को रोकने के लिए एक अतिरिक्त 10-15 सेकंड के लिए नस के भीतर रहने दें.
3. बाद इंजेक्शन
- एक उचित इंजेक्शन के बाद, पिल्ला लगभग तुरंत नीले बारी चाहिए. सुई निकालें और रक्त के थक्के जब तक इंजेक्शन साइट के लिए एक कपास झाड़ू लागू करने के लिए कोमल बल का उपयोग करें.
- संकट के संकेत के लिए पिल्ला मॉनिटर. पिल्ला 2-3 मिनट की वसूली और rewarm करने की अनुमति दें, आरपिल्ला पिंजरे में लौटने से पहले, होश में ईमानदार और चलती है जब ecognize. कप अन्वेषक के दस्ताने हाथ में पिल्ले यदि आवश्यक हो तो वसूली में सहायता करने के लिए उपयुक्त गर्मी प्रदान करने के लिए. वैकल्पिक रूप से, इंजेक्शन पिल्ला वार्मिंग की सुविधा के लिए घर पिंजरे के तहत एक हीटिंग पैड जगह है. आम तौर पर एक इवांस नीले डाई इंजेक्शन के बाद, पिल्ले euthanize. परीक्षा सामग्री इंजेक्शन जब डाई शामिल न करें.
- घर वापस पिंजरे में पिल्ला प्लेस और पिल्ला बांध से reacceptance सुनिश्चित करने के लिए बिस्तर और / या nestlet साथ लेपित है सुनिश्चित करते हैं.
- बाँझपन बनाए रखने के लिए प्रत्येक पिल्ला के लिए एक नई सिरिंज और कपास झाड़ू का प्रयोग करें.
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Representative Results
एक उचित इंजेक्शन के दौरान नस क्षण भर स्पष्ट, या सफेद बारी चाहिए. डाई इंजेक्शन तो पूरे पिल्ला सेकंड के भीतर नीले बारी चाहिए. एक अनुचित इंजेक्शन हुआ है, तो अक्सर इंजेक्शन साइट से बाहर रिसाव हो सकता सिर या गर्दन और injectant में एक केंद्रित चमड़े के नीचे सांस में है. अनुचित इंजेक्शन भी गले के चारों ओर चोट की उपस्थिति में हो सकता है. (इंजेक्शन पूरी तरह से नस में वितरित नहीं किया गया था यानी) आम तौर पर कोई बीमार दुष्प्रभाव अनुभव और ठीक से इंजेक्शन चूहों के रूप में नियमित तौर पर इलाज का जवाब चमड़े के नीचे इंजेक्शन प्राप्त करने वाले पिल्ले.
वितरित चिकित्सा पर निर्भर करता है, सफल इंजेक्शन सीएनएस और परिधीय अंगों को बड़े पैमाने पर वितरण में परिणाम कर सकते हैं. एक चिकन β-actin के संकर प्रमोटर (सीबी) के साथ हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) व्यक्त स्वयं मानार्थ एडिनो से जुड़े वायरस सीरोटाइप 9 इंजेक्शन जब, ट्रांस (एक साथ "scAAV9 सीबी GFP के रूप में भेजा")जीन अभिव्यक्ति कई मस्तिष्क क्षेत्रों में glial कोशिकाओं और न्यूरॉन्स में और रीढ़ की हड्डी (आंकड़े 2A -2 सी) के भीतर पाया जाता है. ScAAV9 सीबी GFP की intravascular इंजेक्शन भी दिल और जिगर ऊतक (आंकड़े 3 ए-3D) में ध्यान देने योग्य अभिव्यक्ति के साथ, परिधि भर में व्यापक अभिव्यक्ति में यह परिणाम है.
चित्रा 1: (ए) एक absorbant पैड ("डायपर") से बने एक अस्थायी इंजेक्शन मंच 50 मिलीलीटर शंक्वाकार पैकेजिंग से एक स्टायरोफोम रैक के चारों ओर लिपटा. मंच अन्वेषक मंच के निकट मेज पर अपने हाथ को आराम करने की अनुमति देता है. इस अन्वेषक माउस पिल्ला के लिए एक चापलूसी कोण रिश्तेदार पर इंजेक्शन प्रदर्शन करने की अनुमति देता है. (बी) छवि सामने और मध्यम उंगलियों के बीच पिल्ला स्थिरीकरण दिखा. (
हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (scAAV9 सीबी GFP) के व्यक्त स्वयं पूरक AAV9 के नवजात शिशु नसों में इंजेक्शन के बाद केंद्रीय तंत्रिका तंत्र जीन अभिव्यक्ति 1 (P1) माउस पिल्ले नसों के द्वारा स्वयं की 1 एक्स 10 11 वेक्टर जीनोम (वीजी) के साथ इंजेक्शन थे प्रसव के बाद दिन: चित्रा 2. पूरक (अनुसूचित जाति) scAAV9 सीबी GFP. चार सप्ताह के बाद इंजेक्शन, चूहों बलिदान किया गया और 4% paraformaldehyde के साथ perfused. ऊतकों, एकत्र कटा हुआ और GFP अभिव्यक्ति के लिए दाग रहे थे. GFP अभिव्यक्ति पूर्वकाल स्ट्रिएटम सहित मस्तिष्क भर में देखा जाता है (ए) througएच पोंस और सेरिबैलम (बी). GFP सकारात्मक कोशिकाओं आम तौर पर न्यूरॉन्स और astrocytes हैं. GFP अभिव्यक्ति भी रीढ़ की हड्डी (सी) में पाया जाता है. रीढ़ की हड्डी में मोटर न्यूरॉन्स और पृष्ठीय रूट ganglia न्यूरॉन्स कुशलता से नवजात शिशु चतुर्थ वितरण का उपयोग transduced कर रहे हैं. GFP सकारात्मक वाहिका संरचना और astrocytes भी रीढ़ की हड्डी में ग्रे बात भर में देखा जाता है. सभी पैमाने सलाखों के 200 माइक्रोन =. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
चित्रा 3:. स्वयं के नवजात नसों में इंजेक्शन पूरक AAV9 GFP (scAAV9 सीबी GFP) के GFP के इम्यूनोफ्लोरेसेंस वयस्क माउस दिल (ए) और जिगर (सी) में पता लगाने योग्य है निम्नलिखित परिधीय अंगों में GFP अभिव्यक्ति (बी) और जिगर (डी) में अनुपस्थित है. सभी पैमाने सलाखों के 100 माइक्रोन =.
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Discussion
सीएनएस को या पूरे शरीर में एजेंटों की intravascular प्रसव रोग के नवजात murine मॉडल में मुश्किल है. वर्णित प्रोटोकॉल नसों के न्यूनतम उपकरणों की आवश्यकताओं के साथ नवजात चूहों में समाधान के लिए प्रशासन के लिए एक त्वरित, अपेक्षाकृत गैर इनवेसिव तरीका है. लौकिक चेहरे नस नग्न आंखों से देखा जा सकता है, इंजेक्शन, विशेष रूप से एक unpracticed इंजेक्टर के लिए, माइक्रोस्कोप और फाइबर ऑप्टिक प्रकाश स्रोत के उपयोग के साथ अधिक से अधिक सटीकता पड़ सकता है. नवजात चूहों में intravascular इंजेक्शन एक उच्च सफलता दर 12 है, और एएवी पारगमन injectant का हिस्सा subcutaneously दिलाई है, भले ही जल्दी पिल्ले में देखा गया है. इंजेक्शन अच्छी तरह से माउस पिल्ले द्वारा सहन, और FVB / एन या C57BL 6 / पृष्ठभूमि पर बांधों बहुत अच्छी तरह से पिल्ले के हेरफेर को सहन कर रहा है. हालांकि, दुर्लभ मामलों में बांधों पूरे litters नष्ट कर सकते हैं. इन इंजेक्शनों सफलतापूर्वक 1.6 जी के माध्यम से 0.8 ग्राम के रूप में के रूप में छोटे चूहों में किया जा सकता है. वैकल्पिक injectioएन नवजात शिशु चूहों के लिए मार्गों अमेरिका और रेट्रो कक्षीय, intrajugular और intraperitoneal 10,15,22 सहित अन्य लोगों द्वारा प्रकाशित किया गया है. यह कोई विशेष उपकरणों की आवश्यकताओं के साथ एक एकल प्रयोगकर्ता द्वारा प्रदर्शन किया जा चिकित्सकीय प्रासंगिक सक्षम है और प्रशासित किया संस्करणों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए अनुमति देता है क्योंकि हम यहाँ वर्णित इंजेक्शन मार्ग पसंद करते हैं.
इंजेक्शन प्रदर्शन कठिनाई अस्थायी नस को देखने और सुई की इसलिए गुम है जब एक आम समस्या का अनुभव किया. फाइबर ऑप्टिक प्रकाश स्रोत <90 डिग्री पर तैनात है और नस का सबसे अच्छा देखने के लिए आयोजित किया जा रहा है जब सिर पर नीचे चमक किया जाना चाहिए. Injectors उनकी आवश्यकताओं के अनुरूप प्रकाश स्रोत को समायोजित करने के लिए समय लेना चाहिए. लौकिक नस अवलोकन काफी पिल्ले भी, बड़ी 2.0 जी से इस p2 तो पुराने या अधिक से अधिक के रूप में होती हैं तो कमी आई है. सुई उठाव नस में प्रवेश किया है अगर एक दूसरी समस्या का निर्धारण किया जा सकता है. लौकिक चेहरे की नस superfi हैसामाजिक, देखभाल नस नीचे में प्रवेश करने से बचने के लिए लिया जाना चाहिए. सुई उठाव नस के समानांतर प्रवेश कर रहा है यह सुनिश्चित करना कि नस के माध्यम से puncturing पाएगा. सुई प्लेसमेंट सबसे अच्छा धीमी इंजेक्शन और नस के बाद blanching द्वारा सत्यापित है.
सतही अस्थायी नस सिर के दोनों तरफ दिख रहा है. बाएँ हाथ व्यक्तियों अन्वेषक के बाईं ओर पशु का सामना करना पड़ ergonomically बेहतर हो सकता है और प्रत्येक व्यक्ति के अन्वेषक के लिए निर्धारित किया जाना चाहिए कि मिल सकता है. नस दिखाई नहीं होना चाहिए या सिर के विपरीत दिशा में नस को लक्षित, आरंभिक प्रयास पर mistargeted है उपयुक्त है. नस सिर के दोनों ओर की हवा निकाल रहा है, तो कुछ रिसाव दूसरी साइट में इंजेक्शन के दौरान पहली साइट के माध्यम से हो सकता है. माइक्रोस्कोप का काम दूरी पर निर्भर करता है, यह पशु इंजेक्षन जिस पर एक छोटे से मंच का निर्माण करने के लिए उपयुक्त हो सकता है; 50 मिलीलीटर शंक्वाकार से उदाहरण के लिए, एक खाली स्टायरोफोम कंटेनरट्यूब पैकेजिंग (चित्रा 1). इस अन्वेषक के इंजेक्शन हाथ मेज पर सीधे आराम कर सकते हैं कि इतना अन्वेषक मंच के किनारे के पास पशु की स्थिति के लिए अनुमति देता है. इस नस में प्रवेश के कोण में सुधार लाने और प्रकाश रुकावट को कम कर सकते हैं.
इंजेक्शन की मात्रा, इंजेक्शन के लिए उम्र खिड़की और बांध प्रतिक्रिया की अनिश्चितता सहित प्रोटोकॉल की उपयोगिता के लिए कुछ सीमाएं हैं. पिल्ले के लिए इंजेक्शन संस्करणों 50 μl तक सीमित हैं. हम पहले 100 μl के साथ जानवरों dosed है, लेकिन कम मात्रा में इंजेक्शन की तुलना में वृद्धि हुई इंजेक्शन संबंधित मृत्यु दर मनाया है, लेकिन दूसरों को सफलतापूर्वक 100 μl 10,12 पहुंचाने की रिपोर्ट. इसके अलावा, यह वृद्धि हुई इंजेक्शन संस्करणों रक्त मस्तिष्क बाधा 23 नुकसान पहुंचा सकता है कि सुझाव दिया गया है. अक्सर प्रयोगात्मक अभिकर्मक एक लगातार 50 μl इंजेक्शन की मात्रा बनाए रखने के लिए पीबीएस के साथ मिलाया जाता है. हम पढ़ाई से अनजान हैं examiniनवजात शिशु चूहों भर में प्रसार पर इंजेक्शन की मात्रा के प्रभाव एनजी, और अनुभवजन्य अध्ययनों से एक दिया खुराक पर नए अभिकर्मकों के लिए इंजेक्शन की मात्रा पर प्रभाव की पहचान करने के लिए किया जाना चाहिए. एक दूसरी सीमा सतही अस्थायी नस पहले और दूसरे प्रसव के बाद के दिनों में आसानी से दिख रहा है कि है. पशु आकार, त्वचा रंजकता और मोटाई में परिवर्तन दूसरों प्रसव के बाद दिन 6 10,12 के माध्यम से नस पहुँचने रिपोर्ट हालांकि बाद में उम्र में नस अस्पष्ट करने के लिए गठबंधन. वैकल्पिक रूप से, हम पी 5 में परिसंचरण और P10 जानवरों से 4 वायरल वेक्टर देने के लिए अल्ट्रासाउंड निर्देशित हृदय इंजेक्शन का इस्तेमाल किया. अंत में, प्रक्रिया के माउस बांधों की स्वीकृति अप्रत्याशित है. हम neuromuscular रोग और आत्मकेंद्रित स्पेक्ट्रम विकारों के माउस मॉडल भर FVB / एन, C57BL 6 / और B6SJL चूहों का इलाज किया है. FVB / एन चूहों C57BL 6 / पृष्ठभूमि पर स्ट्रेन कभी-कभी व्यक्ति पिल्ले या पूरे litters नष्ट कर सकते हैं, जबकि सबसे सहिष्णु हैं, लेकिन यह एक दुर्लभ घटना. हालांकि, इसएक प्रयोग के लिए पर्याप्त N के लिए योजना बनाते समय एक विचार होना चाहिए. बांध स्वीकृति आगे क्या बीमारी माउस तनाव मॉडलिंग है से प्रभावित किया जा सकता है. उदाहरण के लिए, एक आत्मकेंद्रित स्पेक्ट्रम विकार की एक मॉडल पृष्ठभूमि तनाव के आधार पर अपेक्षा से अधिक पिल्ला अस्वीकृति का एक बहुत उच्च दर थी. बांध स्वीकृति एक चिंता का विषय है अगर पिल्ले को बढ़ावा देने के लिए एक विचार हो सकता है. अस्वीकृति को सीमित करने के अन्य तरीकों अल्ट्रासोनिक vocalizations पिल्ला करने के लिए, और बांध की नाक रगड़ और / या एक कपड़े से पिल्ले किसी भी अन्वेषक गंध मुखौटा करने के लिए 70% इथेनॉल के साथ घटा के उपयोग की सीमा को बांध से एक अलग कमरे में इंजेक्शन प्रदर्शन में शामिल हैं. पिल्ले भी स्वीकृति में सहायता करने के लिए गंदे बिस्तर के साथ मला जाना चाहिए.
इस प्रोटोकॉल सफलतापूर्वक SMA के एक माउस मॉडल के इलाज के लिए इस्तेमाल किया गया है. SMA के मुख्य रूप से रीढ़ की हड्डी के निचले मोटर न्यूरॉन्स को प्रभावित करता है कि एक बाल चिकित्सा neurodegenerative रोग है. उपचार के बिना, इस माउस मॉडल औसत पर जन्म के बाद 15 दिनों से मर जाता है. वायु सेना1 दिन पुरानी चूहों में एएवी जीन थेरेपी के आतंकवाद नसों में इंजेक्शन, अस्तित्व वर्णित इंजेक्शन प्रोटोकॉल 2,4,14 की सुरक्षा और सहनशीलता का प्रदर्शन, एक साल के लिए बढ़ा दिया गया था. इसी तरह के परिणाम भी antisense oligonucleotides के 8,9 के चतुर्थ इंजेक्शन के बाद ही SMA के माउस मॉडल में प्राप्त किया गया. भविष्य अनुप्रयोगों अन्य सेल और जीन चिकित्सा के वितरण, साथ ही exogenously एक सीडीएनए या एक आरएनएआई कैसेट 24 व्यक्त करने सीएनएस और परिधि की विकासात्मक विकारों के लिए नवजात मॉडल का निर्माण शामिल है. नसों में इंजेक्शन प्रसव के एक अनुमोदित नैदानिक विधि है; इसलिए, इस तकनीक के उपयोग के एजेंटों की एक किस्म के लिए पूर्व नैदानिक अध्ययन में फायदेमंद हो सकता है.
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
लेखकों वित्तीय सहायता के लिए SMA के NINDS, FightSMA, और परिवारों को स्वीकार करना चाहते हैं. SEGL NINDS प्रशिक्षण अनुदान # 5T32NS077984-02 द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thinpro insulin syringe | Terumo | SS30M3009 | 3/10 cc, 3/8" needle, 30 G, 1 per mouse |
| Evans blue dye | Sigma-Aldrich | E2129 | Dilute to 1% with 1x Phosphate Buffered Saline |
| Cotton tipped applicators | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Fiber optic light source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Dissecting microscope |
References
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