Summary
Pediatrik hastalığın hayvan modelleri erken başlangıçlı ve agresif hastalığın ilerlemesini yaşayabilirsiniz. Klinik genç fare modelleri ile ilgili tedavi teslimat teknik olarak zor olabilir. Bu protokol, yaşamın ilk iki doğum sonrası gün içinde yeni doğmuş fareler için invazif olmayan bir damar içi enjeksiyon yöntemi tarif etmektedir.
Abstract
İntravenöz enjeksiyon, terapötikleri sunmak için bir klinikte uygulanabilir tarzıdır. Yetişkin kemirgenler ve büyük hayvanlar için, intravenöz enjeksiyon teknik olarak mümkün ve rutin vardır. Ancak, bazı fare modelleri potansiyel tedavilerin uygulanması zorlaştırır hızlı ilerlemesi ile hastalığının erken başlangıçlı olabilir. Temporal (veya yüz) ven sadece farelerde kulak tomurcuk ön ve bir mikroskop kullanarak başın iki tarafında doğumdan sonra da açıkça ilk iki gün boyunca görünür durumdadır. Bu pencerede, zamansal damar 50 ul hacme kadar enjekte edilebilir. Enjeksiyonu güvenli ve iyi yavrular ve barajlar ikisi tarafından tolere edilir. Tipik bir enjeksiyon yöntemi yavru kafese bunun ardından 1-2 dakika içinde tamamlanır. Üçüncü doğum sonrası gün ven görselleştirmek için zordur ve enjeksiyon prosedür teknik güvenilmez hale gelir. Bu teknik, adeno-ilişkili virüs (AAV) Vect verilmesi için kullanılmaktadırbu da seçilen viral serotip bağlı olarak hayvanın yaşam için yaklaşık vücut geniş dengeli transgen ekspresyonunu sağlayabilir ORS.
Introduction
Pediatrik hastalığı olan kemirgen modellerinde merkezi sinir sistemi (MSS) için terapötiklere teslimi bir sorundur. Model yenidoğan hastalık durumları doğrudan merkezi sinir sistemi içinde uygun yapıların enjekte etmek zor olabilir, bu nedenle cılız ve gelişimsel olgunlaşmamış ve olduğunu fareler. Terapötik maddelerin damar içi enjeksiyonu CNS 1-5 ve 3,5-9 retinanın da dahil olmak üzere bütün vücuda hücreleri, uyuşturucu ya da viral vektörler sunmak için invazif olmayan, iyi tolere edilen bir yöntemdir. Önceki yayınlar bir diseksiyon mikroskobu 11,12 olmadan, bir transilluminator 10,11 kullanarak zamansal yüz damar enjeksiyonu tarif veya iki birey gerektiren 10 enjekte etmek. Tek tek yavrular enjekte edebilir ve ışık kaynağı zamansal damar, yavru değen bir sabit yüzeye göre bir ameliyat bandı duyulan ihtiyacı ya da bir yavru yapışmalarını ortadan kaldırmamaktadır görüntülemek için, bu protokol açıklanan enjeksiyon tekniği avantajlıBir transilluminator 11 gibi. Farelerde adeno-ilişkili viral vektör serotip 9 (AAV9) teslim beyin ve omurilik (Şekil 1) boyunca nöronlar ve astrositlerde sağlam ifadesini üretir. Yüzeysel zamansal yüz damar içine viral vektörlerin damar yoluyla verilmesi güvenilir bir çocuk nöromüsküler bozukluğun spinal kas atrofisi (SMA) 2,4,13,14 tedavi etmek için yeni doğan farelerin çeşitli çalışmalarda kullanılan ve sonunda tedavi edilen farelerin ömrünü arttırılmıştır.
Neonatal farelerin damar içi enjeksiyonu, aynı zamanda etkin bir şekilde, periferal sinir sistemi ve periferal organların (Şekil 2) hedefler. AAV enjeksiyonunun ardından, dorsal kök gangliyon, karaciğer, kalp, iskelet kası, akciğer, gut miyenterik pleksus transdüksiyon 1,3,6,7,15 gözlenmiştir. MSS ve çevrenin yaygın transdüksiyon küresel ifadesini gerektiren hastalıklar için enjeksiyon bu ideal yöntem yaparBu tür Gaucher hastalığı 16 ve diğer lizozomal depo hastalıkları 17,18, geçinmek hastalığı ve ilişkili nöronal seroıd lipofuksinoz, 19 ve Bardet-Biedl sendromu, erken çocukluk 20 meydana gelen belirtilerle başlayan bir genetik multisistemik bozukluk gibi bir transgen. Yenidoğan farelere damar içi enjeksiyonu, aynı zamanda modelleme sistem genelinde çocuk hastalıkları için yeni bir metod olarak kabul edilmelidir. Bu teknik büyük hayvan modellerinde 5,21 için tercüme edilmiştir ve damar içi enjeksiyon zaten terapötikleri teslim klinik olarak kabul edilebilir bir yöntem olarak var.
Geçerli protokol doğum sonrası 2. gün Enjeksiyon daha geç yüzeysel zamansal yüz damar yoluyla yenidoğan farelere ajanları sunan basit, etkili bir yöntem tanımlayan bir tek tamamlanabilir, bireysel uygulanan ve iyi yavrular ve barajlar ikisi tarafından iyi tolere edilir. Yavrular az sıkıntı yaşayabilirsiniz ve hızlı bir şekilde kurtarmak. ImportanTLY, Başarılı bir enjeksiyon olarak uygulanan maddenin küresel uygulanmasına neden olur. Bu protokol, viral vektörler, yeni doğmuş farelerin farmasötik maddelerin veya bir hücre sağlanması için uygun değildir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Protokolde belirtilen tüm işlemler Ohio Devlet Üniversitesi Hayvan Kullanım ve Bakım komitesi (IACUC) Enstitüsü onaylanmıştır.
Çalışma alanı hazırlanması 1.
- Çöp, bir mikroskop, 90 ° enjeksiyon (bir ışık kaynağı kullanımı bir açıyla yerleştirilmiş bir ışık kaynağından barajı ayırmak için, boş bir kafes fare yavrular uyutmak için ıslak buz toplamak enjeksiyon yerinde açı ven), enjeksiyon için hayvan yerleştirmek için temiz bir yüzey, pamuklu, 3/8 "30 G iğne (hayvan başına) ve% 1 Evans Blue Dye ile 3/10 cc insülin şırınga (gizlemektedir eğitim için fosfat tamponlu salin (PBS)) çözeltisi ile yapılır.
- Yavrular işlenirken ayrı bir kafese baraj çıkarın.
2. Enjeksiyon Yöntemi
- Hayvan uyutmak için 30-60 saniye boyunca ıslak buz üzerinde doğrudan bir tek yavru yerleştirin. T bırakmayınnedeniyle ventriküler fibrilasyon, doku hipoksi ve metabolik asidoz dahil hipotermi ile ilişkili komplikasyonların riski çok uzun buz üzerinde o hayvan.
NOT: tecrübemiz 30-60 saniyelik bir enjeksiyonu sağlamak için yavru hareketleri yavaş için yeterli olmasıdır. Derin anestezi gerekiyorsa, bu tür 1-2 izofluran% olarak inhalantların uygun olabilir. - Hayvan buz üzerinde iken, Evans mavi boya, 30 ul şırınga yükleyin.
- Hayvan tamamen uyuşturulduktan zaman, hala nefes alırken buz üzerinde hareket eksikliği tarafından onaylandıktan mikroskop altında hareket ettirin. Sağ elli bir enjeksiyon için sağa hayvanın ağzını yüz. Kulak tomurcuk parmağı ve orta parmak (Şekil 1) arasında olacak şekilde kulak tomurcuk namlu ve sol orta parmak kuyruğu üzerinde sol işaret parmağını yerleştirin.
- Sadece cilt manipüle edildiğinde hareket yüzeysel kılcal için kulak tomurcuk ön Schulabschluss. Bu kılcal Ancak, hedef değilkimlik zamansal damar tanınmasında önemlidir. Sonra, ne olursa olsun cilt pozisyon sabit kalır kılcal aşağı bir karanlık, karanlık ven bulun. Temporal damar, gölgeli görünür dorsal ventral çalışır ve juguler ven (Şekil 1) beslenir.
- Iğne konik yukarı zamansal ven girin. Doğru takılırsa, o iğne konik deri yoluyla kan ile doldurmak görmek mümkündür. Sonra yavaş yavaş piston bastırın ve not yüzün tarafında aşağı ven beyazlaşma.
- Iğne injectant geri akmasını önlemek için ilave bir 10-15 saniye ven içinde kalmasını sağlar.
3. Post-enjeksiyon
- Uygun bir enjeksiyondan sonra, yavru hemen mavi dönmelidir. İğneyi çıkarın ve kan pıhtıları kadar enjeksiyon yerinde bir pamuklu bir bez uygulamak için yumuşak güç kullanmayın.
- Sıkıntı belirtileri yavru izleyin. Yavru 2-3 dk kurtarmak ve yeniden ısıt için izin ver, ryavru kafesine dönmeden önce, bilinçli dik ve hareketli olduğunda ecognize. Kupa araştırmacının eldivenli elinde yavrular gerekirse kazanılmasında yardımcı uygun sıcaklık sağlamak için. Alternatif olarak, enjekte yavru ısınma kolaylaştırmak için evde kafes altında bir ısıtma yastığı yerleştirin. Genellikle, bir Evans mavisi enjeksiyonundan sonra, yavrular euthanize. Test malzemesi enjekte ederken boya dahil etmeyin.
- Geri eve kafese yavru yerleştirin ve yavru baraj tarafından reacceptance sağlamak için yatak ve / veya nestlet ile kaplanmış olduğundan emin olun.
- Sterilite korumak için her yavru için yeni bir şırınga ve pamuklu çubuk kullanın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Uygun bir enjeksiyon sırasında, damar anlık açık veya blanch dönmelidir. Boya enjekte Eğer tüm yavru saniye içinde mavi dönmelidir. Bir yanlış enjeksiyon meydana gelmiş ise, genellikle enjeksiyon yerinde dışarı sızabilir baş veya boyun ve injectant bir konsantre subkutan bolus var. Yanlış enjeksiyonları da boğaz çevresinde morarma görünüme neden olabilir. (Enjeksiyon tam ven teslim edilmedi yani) genellikle hiçbir kötü yan etkileri karşılaşabilirsiniz ve düzgün enjekte fareler gibi rutin tedaviye yanıt derialtı enjeksiyonu almak yavrular.
Teslim tedaviye bağlı olarak, başarılı bir enjeksiyon merkezi sinir sistemi ve periferal organların yaygın iletim sağlayabilir. Tavuk β-aktin hibrid promotör (CB), yeşil flüoresan protein (GFP) ifade kendinden ücretsiz adeno-ilişkili virüs serotipi 9 enjekte ederken, Trans diklorhidrat (hep birlikte "scAAV9 CB GFP" olarak adlandırılır)Gen tanımının birçok beyin bölgeleri boyunca, glial hücreler ve nöronlar ve omurilik (Şekil 2A-2C) içinde bulunmaktadır. ScAAV9 CB GFP damar içi enjeksiyonu, aynı zamanda, kalp ve karaciğer dokusu (Şekiller 3A-3D) dikkate değer bir ifade ile, çevre boyunca yaygın sentezlenmesi ile sonuçlanmaktadır.
Şekil 1: (A) Sıvıyı pad ("çocuk bezi") yapılmış bir eğreti enjeksiyon platformu 50 ml konik paketleme bir strafor rafa sarılı. Platform araştırmacı platformuna bitişik masaya elini dinlenmek için izin verir. Bu araştırmacı fare yavru bir düz açıda enjeksiyon gerçekleştirmesine izin verir. (B) Görüntü ön ve orta parmakları arasında yavru immobilizasyonunu gösteren. (
Yeşil floresan proteini (scAAV9 CB GFP) ifade kendinden tamamlayıcı AAV9 arasında yeni doğmuş intravenöz enjeksiyonunun ardından merkezi sinir sistemi gen ifadesi 1 (P1), fare yavrusu intravenöz benlik, 1 x 10 11 vektör genomlarının (VG) enjekte edilmiştir doğum sonrası gün: Şekil 2. tamamlayıcı (sc) scAAV9 CB GFP. Dört hafta enjeksiyon sonrası, fareler kurban edildi ve% 4 paraformaldehit ile perfüze edildi. Dokular toplandı, dilimlenmiş ve GFP ekspresyonu için boyandı. GFP tanımı, ön striatum ve beyin boyunca görülür (A) 'Through pons ve beyincik (B). GFP pozitif hücreler tipik nöronlar ve astrositler vardır. GFP tanımı da spinal kord (Cı) olarak tespit edilir. Spinal motor nöronlar ve dorsal kök gangliyon nöronları verimli yenidoğan IV teslim kullanılarak iletilir. GFP pozitif damarlar ve astrositlere da spinal gri maddenin boyunca görülür. Tüm ölçek çubukları 200 mikron =. Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3:. Kendin yenidoğan damardan enjeksiyon tamamlayıcı AAV9, GFP (scAAV9 CB GFP), GFP imüno yetişkin fare kalp (A) ve karaciğer (C) tespit edilebilen, aşağıdaki çevre organlarında GFP tanımı (B) ve karaciğer (D) 'de mevcut değildir. Tüm ölçek çubukları 100 mikron =.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Merkezi sinir sistemine veya tüm vücutta maddelerin damar yoluyla verilmesi hastalık yenidoğan sıçan modellerinde zordur. Açıklanan protokol intravenöz minimal teçhizatı gereksinimleri ile yenidoğan farelerin içine çözümleri yönetmek için hızlı, nispeten non-invaziv bir yoludur. Zamansal yüz damar çıplak gözle görülebilir rağmen, enjeksiyonlar özellikle bir unpracticed enjektör, mikroskop ve fiber-optik ışık kaynağı kullanımı ile daha doğru olabilir. Yenidoğan farelerde damar içine enjeksiyona yüksek bir başarı oranı 12 sahiptir, ve AAV transdüksiyon, enjekte parçası deri altından tatbik bile, erken yavrularında gözlenmiştir. Enjeksiyon kuyusu fare yavrular tarafından tolere, ve FVB / N veya C57BL / 6 kökenden barajlar çok iyi yavruların manipülasyon tolere edilir. Ancak, ender durumlarda barajlar tüm ibrelerin yok edebilir. Bu enjeksiyonlar başarılı bir şekilde 1.6 g ile 0.8 g kadar küçük farelerde gerçekleştirilebilir. Alternatif ve dökmen yeni doğmuş fareler için yolları bize ve retro-orbital, intrajugular ve periton 10,15,22 olmak üzere başkaları tarafından yayınlanmıştır. Hiçbir özel ekipman gereksinimleri ile tek bir deneyci tarafından yapılacak klinik, ilgili mümkün ve tatbik edilecek ciltlik geniş bir yelpazede sağlar çünkü biz burada anlatılan enjeksiyon yolu tercih.
Enjeksiyonları zorluk zamansal ven görüntüleme ve iğne bu nedenle yanlış yerleştirilmesi olduğunda ortak bir sorun yaşadı. Fiber-optik ışık kaynağı <90 ° açıda ve damarın en iyi görüntüleme için tutulan zaman baş aşağı parlayan edilmelidir. Enjektörler onların ihtiyaçlarına uygun ışık kaynağını ayarlamak için zaman almalıdır. Geçici damar gözlem anlamlı yavrular çok büyük 2.0 g daha P2 sonra eski veya daha büyük olarak karakterize olup olmadığını azalmıştır. İğne konik ven girdiğinde ikinci bir sorun belirlenmesi olabilir. Temporal yüz damar superfi olduğunuLefkoşa, bakım ven altına girmemek için alınması gerekir bu yüzden. İğne konik ven paralel giriyor sağlamak ven yoluyla delinmesiyle önleyecektir. İğne yerleştirme iyi yavaş enjeksiyon ve damar sonraki soluklaşmanın tarafından doğrulanmadı.
Yüzeysel zamansal ven başın iki tarafında görülebilir. Solak bireyler araştırmacının sola hayvan bakan ergonomik daha iyi olabilir ve her araştırmacı için belirlenen gerektiğini bulabilirsiniz. Damar görünür olmamalı veya başlığın karşı tarafındaki ven hedef ilk denemelerde yanlış yönlendirilmiştir edilir uygundur. Damar kafanın her iki tarafında delinirse, bir miktar sızıntı ikinci bölgesine enjeksiyon sırasında birinci sitesi aracılığıyla oluşabilir. Mikroskop çalışma mesafesine bağlı olarak, hayvan enjekte küçük bir platform oluşturmak için uygun olabilir; 50 ml konik örneğin, boş bir köpük konteynertüp ambalaj (Şekil 1). Bu araştırmacının enjekte eli masanın doğrudan zemine böylece araştırmacı platformun kenarına yakın hayvan konumlandırmak sağlar. Bu damara giriş açısını iyileştirmek ve hafif tıkanıklık aza indirebilirsiniz.
Enjeksiyon hacmi, enjeksiyonlar için yaşı pencere ve baraj yanıt değişkenliğine de dahil olmak üzere protokol programı için birkaç sınırlamalar vardır. Yavrular için enjeksiyon hacmi 50 ul ile sınırlıdır. Biz daha önce 100 ul ile hayvanlar dozlandı, ancak düşük ses enjeksiyonları göre artış enjeksiyona bağlı mortalite gözlemledik, ancak diğerleri başarıyla 100 ul 10,12 teslim raporu. Dahası, artan enjeksiyon hacimleriyle, kan-beyin bariyerinden 23 zarar öne sürülmüştür. Genellikle deney reaktif sabit bir 50 ul enjeksiyon hacmi muhafaza etmek için PBS ile karıştırılır. Biz çalışmaların habersiz examiniyenidoğan farelerde boyunca yayılması üzerine enjeksiyon hacminin etkisini ng ve ampirik çalışmalar belirli bir dozda yeni reaktif için enjeksiyon hacmi üzerindeki etkileri belirlemek için yapılmalıdır. İkinci sınırlama yüzeysel zamansal ven birinci ve ikinci doğum sonrası günlerde kolayca görülebilir olmasıdır. Hayvan büyüklüğü, cilt pigmentasyonu ve kalınlığı değişiklikler başkalarının doğum sonrası 6. günde 10,12 ile ven erişen raporu olsa ileriki yaşlarda damar gizlemek için birleştirir. Alternatif olarak, P5 dolaşım ve P10 hayvanlara 4 viral vektör sunmak için ultrason eşliğinde kardiyak enjeksiyonları kullanılmaktadır. Son olarak, prosedürün fare barajların kabul tahmin edilemez. Biz nöromüsküler hastalık ve otizm spektrum bozuklukları fare modelleri arasında FVB / N, C57BL / 6 ve B6SJL fareleri tedavi etmiş. FVB / N fareler C57BL / 6 arka plan üzerinde suşları bazen bireysel yavrular veya tüm ibrelerin yok ederken en hoşgörülü, ama bu nadir bir olay. Bununla birlikte, buBir deney için yeterli n planlarken bir göz olmalıdır. Baraj kabul edilmesi, ne hastalık, fare suşu modelleme olduğunu etkilenmiş olabilir. Örneğin, otizm spektrum bozukluğu bir modeli arka plan suşu dayalı beklenenden daha yavru ret çok daha yüksek bir oranı vardı. Baraj kabul bir endişe ise yavrular teşvik dikkate olabilir. Reddini sınırlamak için diğer yaklaşımlar ultrasonik sesler çıkardığını yavru için, ve baraj burnunu ovmak ve / veya bir bezle yavrular herhangi bir araştırmacı kokusunu maskelemek için% 70 etanol ile nemlendirilmiş erişimi sınırlamak için barajdan ayrı bir odada enjeksiyonları içerir. Yavrular da kabul yardımcı olmak için kirli yatak ile ovuşturdu edilmelidir.
Bu protokol başarıyla SMA bir fare modeli tedavi etmek için kullanılır olmuştur. SMA esas olarak omuriliğin alt motor nöronları etkileyen bir pediatrik nörodejeneratif bir hastalıktır. Tedavi olmadan, bu fare modeli ortalama doğumdan sonra 15 gün ölür. Af1 günlük farenin AAV gen tedavisi ter damardan enjeksiyonlar, hayatta kalma tanımlanan enjeksiyon protokolü 2,4,14 güvenliğini ve tolere edilebilirliğini gösteren, bir yıla kadar uzatılmıştır. Benzer sonuçlar, ayrıca anti-duyarlı oligonükleotitlerin 8,9 IV enjeksiyonu takiben aynı SMA fare modelinde elde edilir. Gelecekteki uygulamaları diğer hücre ve gen terapisi teslim, hem de dışsal olarak bir cDNA ya da bir RNAi kaseti 24 ifade etmek için merkezi sinir sistemi ve çevre gelişimsel bozukluklar için yeni doğan modellerinin yaratılması sayılabilir. İntravenöz enjeksiyon teslim onaylanmış bir klinik yöntem; bu nedenle, bu teknikle yapılan maddelerin çeşitli klinik öncesi çalışmalarda avantajlı olabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Yazarlar mali destek SMA NINDS, FightSMA ve aileleri kabul etmek istiyoruz. Segl NINDS eğitim bursu # 5T32NS077984-02 tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thinpro insulin syringe | Terumo | SS30M3009 | 3/10 cc, 3/8" needle, 30 G, 1 per mouse |
| Evans blue dye | Sigma-Aldrich | E2129 | Dilute to 1% with 1x Phosphate Buffered Saline |
| Cotton tipped applicators | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Fiber optic light source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Dissecting microscope |
References
- Foust, K. D., et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes. Nature. 27, 59-65 (2009).
- Dominguez, E., et al. Intravenous scAAV9 delivery of a codon-optimized SMN1 sequence rescues SMA mice. Human molecular genetics. 20, 681-693 (2011).
- Rahim, A. A., et al. Intravenous administration of AAV2/9 to the fetal and neonatal mouse leads to differential targeting of CNS cell types and extensive transduction of the nervous system. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 25, 3505-3518 (2011).
- Foust, K. D., et al. Rescue of the spinal muscular atrophy phenotype in a mouse model by early postnatal delivery of SMN. Nat Biotechnol. 28, 271-274 (2010).
- Duque, S., et al. Intravenous administration of self-complementary AAV9 enables transgene delivery to adult motor neurons. Mol Ther. 17, 1187-1196 (2009).
- Bostick, B., Ghosh, A., Yue, Y., Long, C., Duan, D. Systemic AAV-9 transduction in mice is influenced by animal age but not by the route of administration. Gene Ther. 14, 1605-1609 (2007).
- Miyake, N., Miyake, K., Yamamoto, M., Hirai, Y., Shimada, T. Global gene transfer into the CNS across the BBB after neonatal systemic delivery of single-stranded AAV vectors. Brain research. 1389, 19-26 (2011).
- Porensky, P. N., et al. A single administration of morpholino antisense oligomer rescues spinal muscular atrophy in mouse. Human molecular genetics. 21, 1625-1638 (2012).
- Hua, Y., et al. Peripheral SMN restoration is essential for long-term rescue of a severe spinal muscular atrophy mouse model. Nature. 478, 123-126 (2011).
- Kienstra, K. A., Freysdottir, D., Gonzales, N. M., Hirschi, K. K. Murine neonatal intravascular injections: modeling newborn disease. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science : JAALAS. 46, 50-54 (2007).
- Glascock, J. J., et al. Delivery of therapeutic agents through intracerebroventricular (ICV) and intravenous (IV) injection in mice. J. vis. Exp. (56), (2011).
- Sands, M. S., Barker, J. E. Percutaneous intravenous injection in neonatal mice. Laboratory animal science. 49, 328-330 (1999).
- Bevan, A. K., et al. Early heart failure in the SMNDelta7 model of spinal muscular atrophy and correction by postnatal scAAV9-SMN delivery. Human molecular genetics. 19, 3895-3905 (2010).
- Valori, C. F., et al. Systemic delivery of scAAV9 expressing SMN prolongs survival in a model of spinal muscular atrophy. Science translational medicine. 2, (2010).
- Foust, K. D., Poirier, A., Pacak, C. A., Mandel, R. J., Flotte, T. R. Neonatal intraperitoneal or intravenous injections of recombinant adeno-associated virus type 8 transduce dorsal root ganglia and lower motor neurons. Hum Gene Ther. 19, 61-70 (2008).
- Guggenbuhl, P., Grosbois, B., Chales, G. Gaucher disease. Joint, bone, spine : revue du rhumatisme. 75, 116-124 (2008).
- Daly, T. M., Vogler, C., Levy, B., Haskins, M. E., Sands, M. S. Neonatal gene transfer leads to widespread correction of pathology in a murine model of lysosomal storage disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 96, 2296-2300 (1999).
- Daly, T. M., Ohlemiller, K. K., Roberts, M. S., Vogler, C. A., Sands, M. S. Prevention of systemic clinical disease in MPS VII mice following AAV-mediated neonatal gene transfer. Gene Ther. 8, 1291-1298 (2001).
- Wang, S. Juvenile neuronal ceroid lipofuscinoses. Advances in experimental medicine and biology. 724, 138-142 (2012).
- Forsythe, E., Beales, P. L. Bardet-Biedl syndrome. European journal of human genetics. 21, 8-13 (2013).
- Bevan, A. K., et al. Systemic gene delivery in large species for targeting spinal cord, brain, and peripheral tissues for pediatric disorders. Mol Ther. 19, 1971-1980 (2011).
- Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retro-orbital injections in mice. Lab animal. 40, 155-160 (2011).
- Saunders, N. R., Joakim Ek, C., Dziegielewska, K. M. The neonatal blood-brain barrier is functionally effective, and immaturity does not explain differential targeting of AAV9. Nature biotechnology. 27, 804-805 (2009).
- Foust, K. D., et al. Therapeutic AAV9-mediated suppression of mutant SOD1 slows disease progression and extends survival in models of inherited ALS. Mol Ther. 21, 2148-2159 (2013).
