Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Sıçan Karotis Arter Vasküler Balon Yaralanma ve intraluminal İdaresi

Published: December 23, 2014 doi: 10.3791/52045
Automatic Translation
1, 1
1Nanobioscience, State University of New York College of Nanoscale Science and Engineering (SUNY CNSE)

Summary

Bu protokol, sıçan karotis arter üzerinde bir lümen içi yaralanmalara neden ve bundan sonra neointimal hiperplazi ortaya çıkarmak için bir balon kateter kullanır. Bu yaralanmaya yanıt olarak vasküler yeniden mekanizmalarını incelemek için iyi bilinen bir modeldir. Ayrıca yaygın potansiyel terapötik yaklaşımların geçerliliğini belirlemek için kullanılır.

Abstract

sıçanlarda karotis arter balon yaralanma modeli de iki yılı aşkın süredir kurulmuştur. Bu damar düz kas dediferansiyasyon neointima oluşumu ve vasküler yeniden katılan moleküler ve hücresel mekanizmaları incelemek için önemli bir yöntem olmaya devam etmektedir. Erkek Sprague-Dawley sıçanları bu model için en sık kullanılan hayvan bulunmaktadır. Kadın hormonları damar hastalıklarına karşı koruyucu ve dolayısıyla bu prosedür bir varyasyonu tanıtmak gibi dişi sıçanlar tercih edilmemektedir. Sol karotis tipik sağ karotid bir negatif kontrol olarak hizmet veren yaralandı. Sol karotis yaralanma endoteli denudes ve Cuz damar duvarını gerilmek şişirilmiş balon neden olur. Yaralanma sonrasında, bu tür farmakolojik bileşikler ve gen ya da shRNA transferi ya da kullanılması potansiyel terapötik stratejiler değerlendirilebilir. Tipik haliyle, gen ya da shRNA transferi için, damar lümeninin yaralı bölümü lokal olarak v 30 dakika içinde aktarılmasıyaralı damar duvarında teslimat ve ifade için bir protein veya shRNA ya kodlayan iral parçacıklar. Proliferatif vasküler düz kas hücrelerini temsil neointimal kalınlaşma genellikle yaralanma sonrası 2 hafta zirve. Gemiler, özellikle hücresel ve moleküler hücre sinyal yollarının analizi aynı zamanda gen ve protein ifadesi için bu zaman noktasında hasat edilir. Kaplar ayrıca amaçlanan deney amaçlarına bağlı olarak, özel bir protein ya da yolunun sentezlenmesi ve / veya aktivasyonu başlangıcını saptamak için, daha önceki zaman noktalarında hasat edilebilir. Kaplar histolojik lekeleme, immünohistokimya, bir protein / mRNA tahlilleri ve etkinlik tahlilleri kullanılarak karakterize edilmiş ve değerlendirilebilir. Aynı hayvandan sağlam sağ karotis arter ideal iç kontrol edilmesidir. Moleküler ve hücresel parametreleri Yaralanma kaynaklı değişimler iç Sağ kontrol artere yaralı arter karşılaştırarak değerlendirilebilir. Benzer şekilde, tedavi seçenekleri yaralayabilir karşılaştırarak değerlendirilebilirKontrol d ve tedavi arter tek arter yaralandı.

Introduction

Balon kateter bir kan damarı içinde aterom ya da trombozun tıkanma yer (ler) genişletilmesi amacıyla, anjiyoplasti prosedüründe kullanılan tıbbi cihazlardır. daralmış damar lümen şişirilmiş balon ile açmak zorunda kalır ve kan temini gibi anjin, miyokard infarktüsü ve bacak ağrısı gibi mansap iskemi belirtileri, rahatlatmak için sırayla restore edilecek. Bununla birlikte, anjiyoplasti büyük başarı gibi damar lümen (restenoz) 1 yeniden daralma vasküler barotravma (balon yaralanması), yani damar duvarı yenileme neden olan kuvvetin sonuçları gibi birçok durumda post-operatif komplikasyonlar azalmıştır.

Hayvan modellerinde bir dizi araştırmacılar balon-yaralanma ilgili damar duvarı yenileme 2 altında yatan mekanizmaları anlamak için anjiyoplasti işlemi taklit geliştirilmiştir. Modelleme için kullanılan tüm hayvan türleri arasında, sıçan, en sık kullanılan biridir. Ctavşanlar, köpekler, domuzlar grubu ile karşılaştırıldığında, sıçan avantajları düşük maliyet kullanım görece kolaylığı ve sıçan fizyolojisi mevcut bilgi bulunmaktadır. Farenin Genetik olarak manipüle edilmiş suşların geniş bir aralıkta ek bir avantaja sahipse de, fareler damar balon kateter yerleştirmek üzere, çok küçüktür. Son üç yılda, deneysel sıçan araştırmacılar 3-6 remodeling neointima oluşumunu ve damar yatan moleküler ve hücresel mekanizmaların daha iyi anlayabilmek için izin vermiş. Balon yaralanma ötesinde, vasküler remodeling ayrıca ateroskleroz 7,8, hipertansiyon 9, ve anevrizma 10 gibi en büyük damar hastalıkları, katılmaktadırlar. Böylece, bilgi balon yaralanma modeli ile kazanılan genel olarak tüm damar duvar hastalığı çalışmaları için faydalıdır.

Sıçan balon yaralanması modelinde genel amacı değil sadece daha fazla damar hastalıkları anlamak değil, aynı zamanda yeni ajanların gücünü test etmekhastalık kontrolü 11,12. Restenozla Güncel klinik ilaç tedavisi sağ anjiyoplasti sonrası damar lümen yoluyla yerleştirilen ilaç salınımlı stentler ile uygulanır. Hayvan modellerinde, yeni ajan test için verimli henüz daha ekonomik şekilde iyi gelişmiş yerel intraluminal perfüzyon yöntemidir. Bu yöntemle test edilmiştir Aday ajanlar küçük molekül uyuşturucuyu 13,14, sitokin içeren veya büyüme, 15,16 faktörleri gen manipüle ajanlar (cDNA klonları, siRNA'nın, vb) 17-20 ve yeni farmasötik formülasyonlar 21,22.

Şimdiye kadar, sıçan balon hasarı içeren model vasküler hastalıklar / bozuklukların araştırılması için en faydalı model biridir. Bu ilk adım in vivo in vitro hareket genellikle yatağa tezgah temel adım, ama sonuncusu olmamalıdır. fare deneylerinin sonuçları, kasıtlı ve ayrıca insan çevrilmesinden önce, özelliği gerekennedeniyle vasküler yatak ve damar anatomisi yanı sıra insan ve sıçan 23-26 arasındaki içsel tür farklar fark klinik kullanımı,. Yine, hala öteleme tıbbi araştırmalarda önemli bir araçtır. Böyle bir araştırma genetiği değiştirilmiş farelerde eksikliği ile sınırlı kullanılan iken, çinko-parmak gibi yeni genomik yaklaşımlar 29 nakavt fareler kolayca erişilebilir yaptık, 27 nükleazlara Talens 28 ve CRISPR-Cas yana, artık bir sorun olmuştur.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Not: Aşağıdaki deneyler için hayvanların kullanımı gözden ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1. Ameliyat öncesi Prosedürler

  1. Kullanmadan önce cerrahi aletler sterilize.
    1. Tüm cerrahi enstrümanlarını ameliyattan önce 24 saat ya da daha az otoklavlayın. Birden ameliyatlar aynı gün yapılırsa, ameliyatlar arasında kuru boncuk sterilizatör tarafından aletleri sterilize.
  2. -Filtre sterilize kullanmadan önce tuzlu su çözeltisi.
  3. Sıçan tartılır ve anestezi ilaçlarının (ketamin 80 mg / kg ketamin hidroklorid ve 7 mg / kg) dozu hesaplamak.
  4. Intra-peritoneal (ip) anestezi ilaçları yönetme.
    1. 5-10 dakika içinde ayak tutam tarafından sedasyon yeterliliğini doğrulayın. Sedasyon tam değilse, ilaç (ketamin 7 mg / kg ve ksilazin, 0.6 mg / kg) ilave küçük doz uygulayın.
    2. Emin olun iğne teslim ilaçlar içi başına yeterli derinitoneally periton boşluğuna tüm ilaç çözüm sunmak için başarısızlık yetersiz sedasyon neden olacaktır çünkü.
      NOT: Enjeksiyon yerinde deride Ülser ve saç dökülmesi nedeniyle yanlışlıkla subkutan (sc) ilaç solüsyon enjekte ameliyattan sonra görünür birkaç gün olacak.
  5. 3 ml steril tuzlu su çözeltisi deri altından (sc) enjekte edilir. Steril bir pamuklu çubuk kullanarak, kurumasını önlemek için kornealar hem gözlere oftalmik merhem küçük bir miktar uygulayın.
  6. Isıtma cihazları hazırlayın. Mikrodalga veya su banyosu öncesi sıcak ısı pedleri.
  7. Cerrahi platformda supinely hayvan koyun.
    1. Ventral boyun bölgesinde saç çıkarın. Bir pamuklu çubukla saç çıkarıcı uygulayın 30 saniye bekleyin ve gazlı bez ile tamamen silin.
    2. Povidon-İyot fırçalayın ve% 70 etanol ile boyun çubukla.
  8. Cüppe, saç kapağı, cerrahi maske ve gözlük gibi kişisel koruyucu donanımlar, giyin. Ster koyunSteril cerrahi aletler ve malzemeleri dokunmadan önce sonunda cerrahi eldiven Ile.
  9. Maruz kalan sadece boyun bölgesi ile steril bir cerrahi örtü ile sıçan örter.

2. Cerrahi İşlemleri

  1. Cerrahi işlem sırasında, her 15 dakikada ayak tutam tarafından hayvan sedasyon derinliğini kontrol edin. Hayvan ayak tutam yanıt verirse, ketamin ve ksilizin ek küçük doz (başlangıç ​​dozunun% 10) ekleyin.
  2. Sol ortak karotid arteri teşrih (CCA)
    1. Boyun ortasında düz bir uzunlamasına bir kesi yapmak için bir neşter kullanın. cilt kesisi yaklaşık uzunluğu arterin 1.5-2 cm bölümünü izole amacıyla, 1.5-2 cm. değişebilir uzunluğu çalışmanın amacına bağlıdır.
    2. Açık açık cilt bağ dokusunu incelemek. Forseps ipuçları tutun ve deri ya da altta yatan doku delinme değil emin olun.
    3. Uzunlamasına alon kas katmanları teşrihg trakea sol tarafında.
    4. Kas tabakası yukarı açarken, yakından bağlı vagus siniri ile sol CCA görselleştirmek. Çok dikkatli sol karotis arter az germe ile vagus siniri ayırmak için yanında açık açık teşrih.
    5. Çatallanma kadar distalde CCA ayır. Internal karotis arter (ICA) ve dış karotid arter (ECA) - dikkatlice çatallanma ve iki şube teşrih.
    6. Arterin 1.5-2 cm yaklaşık bir kısmı çevreleyen dokulardan izole kadar, CCA etrafında diseksiyon tutun.
  3. Balon yaralanması
    1. Kalıcı yaklaşık 5 mm uzaklıkta bifurkasyonundan ECA bir ligatürün yapmak. Kalıcı ECA ve ICA çatallanma yakın ECA oksipital dalı Arter. Ayrıca kalıcı çatallanma ve ECA dikilen arasındaki yerini, diğer dalları bağlayan varsa - örneğin, üstün tiroid dalı. Tüm ligatures için kullanılan dikiş 4-0 siyahipek. CCA proksimal ucu ve ICA uzak ucunda Clip.
      NOT: Şimdi, kan akımı durduruldu ya kalıcı ligasyon yoluyla (ECA on) veya geçici (CCA ve ICA üzerine) kırpma yoluyla. Çatallanma bölgesinde lümen içeriği sistemik dolaşımdan izole edilmiştir.
    2. Küçük mikro makas ile ECA bir arteriyotomi kesi yapmak. Kesi uzak dikiş düğüm yakın olduğundan emin olun. Tuzlu ve pamuklu temiz kan.
    3. ECA lümen içine Şişirilmemiş 2F balon kateteri yerleştirin. CCA lümen proksimal balon kateteri ilerletin. Klip kalır nerede ucu ulaşana kadar proksimal kateter ilerleyen tutun.
    4. 3-yollu bir dişi luer kilit balon şişirme cihazı bağlayın ve balon kateter 3-yollu erkek luer kilit takın.
    5. Yavaş yavaş çapının 1.5 kat karotid arteri gerilmek üzere, yaklaşık 1.5 atm basınçta balon şişirmek. Yavaşça dönerek geri çatallanma Balonu çekin.
    6. Balon havasını ve yakın ucuna geri ilerlemek. Tekrar şişirmek ve çekerek geri prosedür iki kez daha tekrarlayın.
    7. Arter lumeninden balon kateteri.
  4. Reaktiflerin intralüminal uygulaması (örneğin, siRNA ilaçlar)
    Not: Burada kullanılan reaktif ya da shRNA stromal etkileşim Molekül 1 (STIM1) ya da olmayan hedefleme shRNA kontrol hedef kodlayan lentiviral parçacıkları ihtiva eden bir çözelti olmaktadır. STIM1 plazma zarı Ca 2 + kanal aktivasyonu kontrol eden ER Ca 2 + sensör ve bir proliferatif göçmen fenotip 12,30-33 içine damar düz kas dediferansiyasyon sırasında regüle kadar tek bir transmembran endoplazmik retikulum (ER) proteindir.
    1. Bir şırınga (24 g, 1.6 cm) bir damar aşırı iğne kateter takın. Test Reag aspire 30 ul çözümühastalar. ECA aynı kesi içine kateter yerleştirin.
    2. CCA içine kateter ucu Advance ve kateter düzeltmek ve geçici kesi kapatmak için ECA tek düğüm ile sütür bir parça kravat.
    3. CCA lümenine test ayıracı çözeltisi enjekte edilir. 30 dakika damar lümeninde çözüm tutun. Tuzlu su ile nemli maruz doku tutun ve ıslak bir gazlı bez parçası ile örtün.
    4. İnkübasyondan sonra, kalan çözelti aspire. Bu tek düğüm gevşetin ve kateteri.
    5. Arteriyotomi kesi proksimalde dikiş bir parça ile ECA Kravat. Çatallanma mümkün olduğunca yakın düğüm yapın.
  5. Yarayı kapatın.
    1. Balon yaralanma ve kateter giriş kan damarının bir sızıntı veya delinme neden olabileceğinden, ICA klibi kaldırmak ve herhangi bir sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Kanama görülürse, gazlı bez parçası uygulamak ve kanamayı durdurmak için hafif bir baskı uygulayın.
    2. KaldırCCA diğer klip.
    3. Kanama belirtisi olmadığından emin olun ve daha sonra tüm kelepçeler ve diğer cerrahi aletler kaldırın. Aşırı sütür kes.
    4. Kapat yara kullanarak cilt sütür (4-0 siyah ipek). Povidon-İyot veya diğer anti-septik / bakterisit / virüsit maddesi ile kapalı yara her tarafta bezi. Steril tuzlu sc 3 ml enjekte

3. Ameliyat sonrası Prosedürler

  1. Ameliyat sonrası ısı yastığı sıçan tutun. Fareye intramüsküler enjeksiyon (im) ile 0.05 mg / kg buprenorfin bir dozunun tatbik edilmesi. Kurtarma işlemi sırasında, nemli hayvanların gözleri ve ağzı tutmak. Uyanık ve ayakta kadar hayvan izleyin.
  2. Tamamen iyileşti kadar herhangi yatak olmadan temiz bir kafeste hayvan yerleştirin. İyileştikten sonra, hayvan, hayvan odasına döndü ve tek tek yer olacak.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

İki hafta yaralanma sonrası, karotid arteri hasat kesit ve morfolojik analizine tabi tutulurlar. Arterler çapraz kesit ve H & E ile boyanmış olan (Şekil 1, 2b, C ve 3). Sıçan karotid arter duvar pembe çizgiler olarak görünür elastik lamina dört katmanları içerir. dış lamina, dış elastik lamina (EEL) ve içteki lamina arasındaki alan, internal elastik lamina (IEL) medya düz kas tabakası (Şekil 1). iel bir iç bölge intima, sağlam damarlarında endotel hücrelerinin tek tabakalı olduğu; yaralı kap içinde ya da neointimal hiperplazi. Yaralı karotid arter, medya düz kas hücrelerinin çoğalmasından kaynaklanan kontrol damarları daha kalındır. neointima kalınlıkları aynı arterde ortam kalınlığından daha benzer ya da daha fazladır. Adventisya aynı zamanda sağlam kollajen birikimi (Şekil 1B, D) ile kalınlaşır. Rea ile muamele arter içingent neointima formasyonunu inhibe etme kabiliyeti açısından test edilmiştir (bu durumda, STIM1 shRNA), enine kesit, neointimal alanı daha küçük kontrol yaralı arter (Şekil 2) ile karşılaştırılır. STIM1 ifade seviyesi büyük ölçüde kontrol yaralanan damar karşılaştırıldığında, yaralı damar neointimaya ve medyada azalmış gibi shRNA ile STIM1 demonte geçerliliği belliydi.

Tartışma bölümünde belirtildiği gibi, cerrahlar balon şişirmek-aşırı ve aşırı damarı zarar için dikkatli olmamalıdır. Bu damar duvarı, Şekil 3'te gösterildiği gibi, lümende ve arterde dış yüzeyi üzerinde hem de kan sızıntısı ve güçlü trombosit oluşumuna neden olan, yırtılmasına neden olacaktır.

Şekil 1,
Şekil 1: Fare karotid arter kesitleri Hematoksilen ile boyanmış Normal sıçan karotid & Eosin (H & E). (A) yaralandı (solda) CCA normal / sağlam (sağ) CCA. (B) Morfoloji Morfoloji, neointima oluşumunu ve adventisya / medya kalınlaşma gösteren. (C) Yapı arter duvar. İntima internal elastik lamina (IEL) hakkında bir dizi oluşturan endothelial hücrelerin tek bir tabakası olan. Ortam düz kas hücrelerinin ve iel ve dış esnek lamina (yılan balığı) arasında elastik dokular olup. Adventisya dış tabakasıdır. (D) Keme karotis arter duvar sağlam kalınlaşma yaralanma sonrası 2 hafta. Düz kas hücre çoğalması ve yerdeğiştirmesi neointima oluşumunun ve ortam kalınlaşmasına neden olmaktadır. Tipik eş neointima biçimlendirilmiş ve medya / adventisya balon yaralanma fenotip başarılı nesil gösteren, kalınlaşmış. Kırmızı (eozin) boyama nedeniyle sağlam kollajen sentezi, adventisyasında geliştirilmiştir. Ölçek çubukları 100 um bulunmaktadır.

s "> Şekil 2,
Şekil 2: ShRNA-STIM1 veya ShRNA kontrolü tedavisi ile sıçan karotis arterler kesitleri, iki hafta yaralanma sonrası (A) her iki grupta çapraz bölümlerde çekirdeklerin STIM1 ve DAPI boyama immünofloresan boyama.. ShRNA-STIM1 tedavi arter bölümünde STIM1 ve neointima oluşumu sergi zayıflatılmış ifadesi. (B) ShRNA-STIM1 arter bölümünün H & E boyama. neointima sınır, IEL ve EEL C. Dijital izleme, ölçme alanlarının amacıyla lümen, neointimaya ve medya. Ölçek çubuğu 100 mikron bulunmaktadır.

Şekil 3,
Şekil 3: sub-optimal ya da neointimal modelleme oluşturmak için başarısızlık örneği (A) yerine eş Neointimanın Eksantrik kurdu.yanlış balon nedeniyle. (B) (aşırı şişirilmiş bir balon ile) Aşırı yaralanma ciddi gemiye hasar ve süreksiz elastik laminalara tarafından açıktır damar duvarının rüptürü neden oldu. Şiddetli yaralanma tüm damar lümeni bloke ve adventisyanın içine genişletti trombüs, neden. Ayrıca, gelişmiş yapışma adventisya ve çevre yağ dokusu arasında meydana geldi. Ölçek çubuğu 100 mikron bulunmaktadır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

fare karotid balon zedelenmesi de. 2007 34 Tulis tarafından tarif edilmiştir Bu kapsamlı Dr Tulis bu işlemin tüm ayrıntılarını tartışılmıştır. Bu yordamı gerçekleştirmek isteyen okuyucular oldukça Tulis 'protokolü okumak için tavsiye edilir. Ancak, biz Dr Tulis ile kabul edilmez bir şey var: yerine tuzlu su veya herhangi bir sıvı ile balon şişirme, biz hava ile şişirmek için önerdi. Kişisel deneyim göre, sıvı ile şişirme pek hava kabarcıkları önleyebilirsiniz. Buna ek olarak, bu esnek yaralanma prosedürü sırasında basıncını ayarlamak için ve arter ekstra stres ve yaralanmaya neden olabilir daha zordur. Başka bir teknik ucu cerrahisi sırasında hayvanın boynunu desteklemek için (kağıt havlu veya gazlı bez yapılmış) küçük bir "yastık" kullanmaktır.

Daha önceki raporlarda ve sıçan balon yaralanma prosedürü ile deneyimi birkaç yıl dayanarak, yazarlar biraz değiştirilmiş ve basitleştirilmiş yarattıd protokolü 35. Buna ek olarak, hemen yaralanma sonrası terapötiklerin lümen içi infüzyon gösterilmiştir. Bu kabaca bu hayatta kalma cerrahi işlemin süresi iki katına ve böylece ek uygulamalı deneyim gerektirir olmuştur. uzun bir zaman periyodunda büyük endişe anestezik uçağıdır. Anestezik ilacın başlangıç ​​dozu 30-45 dakika sıçan sedasyon korumak ve böylece hayvan sık sık, özellikle 30 dk infüzyon süresi boyunca, ayak-tutam tarafından kontrol edilmelidir. belirli bu cerrahinin yerine, uçucu madde anestezi enjekte edilebilir anestezik ilaçları kullanma nedeni sıçan başının yönelimi nedeniyle majorly bir. Yazarların deneyimine göre, karotis artere balon yerleştirme sıçan en cerrah yönelik kafa yatarken yapmak çok daha kolaydır. Ameliyat yapılırken, son derece bir davlumbaz altında bunu yapmak için tavsiye edilir veya biyogüvenlik kabini lentivirüs hediyeler (potansiyel alerji önlemek için). Bu durumda, büyük ınhalation koni ve boru kaput hava akımını rahatsız, hem de erişim cerrahi alan zor olur. Ancak, hala çok cerrah iyi hayvanların başının ters yönde ile ameliyat eğer uçucu anestezi kullanılması tavsiye edilir.

Infüzyon sırasında, damar lümeninde hava kabarcıklarını önlemek için lütfen unutmayın.

Başka herhangi bir kemirgen ameliyat gibi, hipotermi, tüm işlem boyunca önemli bir husustur. Ölüme yol açabilir hipotermi hayvan acı önlemek için uygun ısıtma ekipmanları kullanın. Bu arada, aşırı ısınma / hipertermi de kaçınılmalıdır. Isı ped kullanıldığında, havlu aşırı ısınmaya karşı hayvan önlenmesi için ısı pedi ve hayvan gövdesi arasına yerleştirilmesi tavsiye edilir.

İki çözelti, tuzlu su ve lidokain hidroklorür (% 1), yüksek derecede cerrahi işlem sırasında gerekli maruz dokulara uygulanması tavsiye edilir. Olan dokularAmeliyat sırasında maruz steril tuzlu su ile nemli tutulmalıdır. Cerrahi streç sık kas spazmı ve karotis arter damar kasılmasına neden olur. Sözleşmeli bir artere balon kateterin yerleştirilmesi başarısız eğilimli olduğu; balon yerleştirilmesi, bu koşullar altında başarılı olduğunda, şiddetli germe veya arter üzerinde hasara neden olur. Topikal anestezik ilaç olarak Lidokain dinlenmek ve damar genişletmek için kullanılabilir.

Balon yaklaşık 1.5 atm basınç ile şişirilir ve uygun ayarı nedeniyle (yeniden varsa) yaşlı balon plastisite değişim ve CCA çapı değişimi, her ameliyat için gereklidir. Buna ek olarak, bazı arterler sertliğine balon şişirilir fazla ama görülemez olabilir. Bu durumda, balon şişirilir zaman, cerrah biraz arter direncini kontrol ve buna göre balon basıncını ayarlamak için kateter çekmek gerekir. Sağlam bir ciddi hasar veya parçalanmasına neden olur çekerekrtery, kan sızıntısı ve deneysel model hatası. balon kateter sürece balon hala iyi çalışıyor gibi birkaç kez tekrar edilebilir. Kazanımına amacıyla CIDEX kullanarak balon kateter dezenfekte edin. balon kateterin, doğal kauçuk lateks ve Polietilen malzemeleri Cidex ile uyumlu olacak şekilde kabul edilmiştir. Cidex tıbbi cihaz dezenfekte edilmesi için ayrıntılı protokolleri, 37 tarif edilmiştir. Cerrah Kullanmadan önce balon Kaçak her zaman kontrol etmek için önemlidir.

Sürekli dikiş desen genellikle deri kapatılması için kullanılması tavsiye edilmez. Bunun yerine, yara klipleri ve kesintiye dikiş desen genellikle tavsiye edilir. Kesi son derece aktif ve hassas gövde parçası olduğunda Ancak, boyun, bu durumda olmayabilir. Bizim deneyim göre, klipleri yara ve kesintiye dikiş desen kapatma başarısızlık yüksek oranları ile sona erdi. Hayvan çizilmeye tarafından kırılmış kayıp klipleri veya dikişler v oldunedeniyle, metal klipler veya birden dikiş uçları neden daha kaşıntı büyük olasılıkla, hangi sıklıkla ery. Sürekli dikiş deseni kullanırken, başarısızlık oranı sıçanların yüzlerce laboratuarımızda sadece% 1 oldu. Biz videoda göstermek mümkün olmasa da ek olarak, cilt kapatmak için en iyi yöntem, muhtemelen intradermal dikiş desen.

Doku bölümleri histolojik boyama için çeşitli yöntemler vardır. H & E boyama en yaygın olarak kullanılan maddedir. Okuyucular daha okuma, Tulis tarafından, bir kapsamlı tartışılan maddeye 36 adlandırılır. Laminer yapıların daha doğru bilgi elde etmek amacıyla, Van Gieson Counterstain (VVG boyama) ile Verhoeff en Elastik doku Leke şiddetle tavsiye edilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Fogarty balloon embolectomy catheters, 2 French  Edwards Lifesciences, Germany  120602F
Deltaphase Operating Board - Includes 2 Pads & 2 Insulators Braintree Scientific, Inc. 39OP
LED light source Fisher Scientific 12-563-501 
Hartmann Mosquito Forceps 4” curved Apiary Medical, Inc. San Diego, CA gS 22.1670
Crile Retractor 4” double ended Apiary Medical, Inc. gS 34.1934
Other surgical instruments Roboz Surgical Instrument Company, Inc., Gaithersburg, MD
Peripheral Intravenous (I.V.) Cannula, 24 G BD 381312
Ketamine HCl, 100 mg/ml, 10 ml Ketaset- Patterson Vet 07-803-6637 
Xylazine (AnaSed), 20 mg/ml, 20 ml Ketaset- Patterson Vet 07-808-1947
Buprenex, 0.3 mg/1 ml (5 Ampules/Box) Ketaset- Patterson Vet 07-850-2280
Nair Baby Oil Hair Removal Lotion - 9 oz Amazon/Walmart/CVS N/A
Inflation Device Demax Medical DID30
D300 3-way Stopcock B.Braun Medical Inc. 4599543
Artificial Tears Ointment  Rugby Laboratories, Duluth, GA N/A

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Landzberg, B. R., Frishman, W. H., Lerrick, K. Pathophysiology and pharmacological approaches for prevention of coronary artery restenosis following coronary artery balloon angioplasty and related procedures. Progress in Cardiovascular Diseases. 39, 361-398 (1997).
  2. Muller, D. W., Ellis, S. G., Topol, E. J. Experimental models of coronary artery restenosis. J. Am. Coll. Cardiol. 19, 418-432 (1992).
  3. Clowes, A. W., Reidy, M. A., Clowes, M. M. Kinetics of cellular proliferation after arterial injury. I. Smooth muscle growth in the absence of endothelium. Laboratory Investigation: A Journal of Technical Methods and Pathology. 49, 327-333 (1983).
  4. Clowes, A. W., Reidy, M. A., Clowes, M. M. Mechanisms of stenosis after arterial injury. Laboratory Investigation: A Journal of Technical Methods and Pathology. 49, 208-215 (1983).
  5. Clowes, A. W., Clowes, M. M. Kinetics of cellular proliferation after arterial injury. IV. Heparin inhibits rat smooth muscle mitogenesis and migration. Circulation Research. 58, 839-845 (1986).
  6. Li, G., Chen, S. J., Oparil, S., Chen, Y. F., Thompson, J. A. Direct in vivo evidence demonstrating neointimal migration of adventitial fibroblasts after balloon injury of rat carotid arteries. Circulation. 101, 1362-1365 (2000).
  7. Kiechl, S., Willeit, J. The natural course of atherosclerosis. Part II: vascular remodeling. Bruneck Study Group. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 19, 1491-1498 (1999).
  8. Yamamoto, S., et al. Derivation of rat embryonic stem cells and generation of protease-activated receptor-2 knockout rats. Transgenic Research. 21, 743-755 (2012).
  9. Intengan, H. D., Schiffrin, E. L. Vascular remodeling in hypertension: roles of apoptosis, inflammation, and fibrosis. Hypertension. 38, 581-587 (2001).
  10. Meng, H., et al. Complex hemodynamics at the apex of an arterial bifurcation induces vascular remodeling resembling cerebral aneurysm initiation. Stroke. 38, 1924-1931 (2007).
  11. Sun, C. K., Shao, P. L., Wang, C. J., Yip, H. K. Study of vascular injuries using endothelial denudation model and the therapeutic application of shock wave: a review. American Journal of Rranslational Research. 3, 259-268 (2011).
  12. Zhang, W., et al. Orai1-mediated I (CRAC) is essential for neointima formation after vascular injury. Circulation Research. 109, 534-542 (2011).
  13. Ollinger, R., et al. Bilirubin: a natural inhibitor of vascular smooth muscle cell proliferation. Circulation. 112, 1030-1039 (2005).
  14. Levitzki, A. PDGF receptor kinase inhibitors for the treatment of restenosis. Cardiovascular Research. 65, 581-586 (2005).
  15. Asahara, T., et al. Local delivery of vascular endothelial growth factor accelerates reendothelialization and attenuates intimal hyperplasia in balloon-injured rat carotid artery. Circulation. 91, 2793-2801 (1995).
  16. Lee, K. M., et al. Alpha-lipoic acid inhibits fractalkine expression and prevents neointimal hyperplasia after balloon injury in rat carotid artery. Atherosclerosis. 189, 106-114 (2006).
  17. Ji, R., et al. MicroRNA expression signature and antisense-mediated depletion reveal an essential role of MicroRNA in vascular neointimal lesion formation. Circulation Research. 100, 1579-1588 (2007).
  18. Merlet, E., et al. miR-424/322 regulates vascular smooth muscle cell phenotype and neointimal formation in the rat. Cardiovascular Research. 98, 458-468 (2013).
  19. Huang, J., Niu, X. L., Pippen, A. M., Annex, B. H., Kontos, C. D. Adenovirus-mediated intraarterial delivery of PTEN inhibits neointimal hyperplasia. Arteriosclerosis, Thrombosis, And Vascular Biology. 25, 354-358 (2005).
  20. Gonzalez-Cobos, J. C., et al. Store-independent Orai1/3 channels activated by intracrine leukotriene C4: role in neointimal hyperplasia. Circulation Research. 112, 1013-1025 (2013).
  21. Guzman, L. A., et al. Local intraluminal infusion of biodegradable polymeric nanoparticles. A novel approach for prolonged drug delivery after balloon angioplasty. Circulation. 94, 1441-1448 (1996).
  22. Lipke, E. A., West, J. L. Localized delivery of nitric oxide from hydrogels inhibits neointima formation in a rat carotid balloon injury model. Acta Biomaterialia. 1, 597-606 (2005).
  23. Osterrieder, W., et al. Role of angiotensin II in injury-induced neointima formation in rats. Hypertension. 18, II60-II64 (1991).
  24. Powell, J. S., et al. Inhibitors of angiotensin-converting enzyme prevent myointimal proliferation after vascular injury. Science. 245, 186-188 (1989).
  25. Does the new angiotensin converting enzyme inhibitor cilazapril prevent restenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty? Results of the MERCATOR study: a multicenter, randomized, double-blind placebo-controlled trial. Multicenter European Research Trial with Cilazapril after Angioplasty to Prevent Transluminal Coronary Obstruction and Restenosis (MERCATOR) Study Group. Circulation. 86, 100-110 (1992).
  26. Faxon, D. P. Effect of high dose angiotensin-converting enzyme inhibition on restenosis: final results of the MARCATOR Study, a multicenter, double-blind, placebo-controlled trial of cilazapril. The Multicenter American Research Trial With Cilazapril After Angioplasty to Prevent Transluminal Coronary Obstruction and Restenosis (MARCATOR) Study Group. J Am Coll Cardiol. 25, 362-369 (1995).
  27. Geurts, A. M., et al. Knockout rats via embryo microinjection of zinc-finger nucleases. Science. 325, 433 (2009).
  28. Tesson, L., et al. Knockout rats generated by embryo microinjection of TALENs. Nature Biotechnology. 29, 695-696 (2011).
  29. Li, D., et al. Heritable gene targeting in the mouse and rat using a CRISPR-Cas system. Nature Biotechnology. 31, 681-683 (2013).
  30. Potier, M., et al. Evidence for STIM1- and Orai1-dependent store-operated calcium influx through ICRAC in vascular smooth muscle cells: role in proliferation and migration. FASEB Journal : Official Publication Of The Federation Of American Societies For Experimental Biology. 23, 2425-2437 (2009).
  31. Aubart, F. C., et al. RNA interference targeting STIM1 suppresses vascular smooth muscle cell proliferation and neointima formation in the rat. Molecular Therapy. The Journal Of The American Society Of Gene Therapy. 17, 455-462 (2009).
  32. Berra-Romani, R., Mazzocco-Spezzia, A., Pulina, M. V., Golovina, V. A. Ca2+ handling is altered when arterial myocytes progress from a contractile to a proliferative phenotype in culture. American journal of physiology. Cell Physiology. 295, C779-C790 (2008).
  33. Bisaillon, J. M., et al. Essential role for STIM1/Orai1-mediated calcium influx in PDGF-induced smooth muscle migration. American journal of physiology. Cell Physiology. 298, C993-C1005 (2010).
  34. Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods In Molecular Medicine. 139, 1-30 (2007).
  35. Zhang, W., Trebak, M. Balloon Injury in Rats as a Model for Studying TRP Channel Contribution to Vascular Smooth Muscle Remodeling. T TRP Channels in Drug DiscoveryMethods in Pharmacology and Toxicology. Szallasi, A., Bíró, T. , Humana Press. 101-111 (2012).
  36. Tulis, D. A. Histological and morphometric analyses for rat carotid balloon injury model). Methods In Molecular Medicine. 139, 31-66 (2007).
  37. Advanced Sterilization Products. How to use Cidex OPA solution. , Available at: http://www.hopkinsmedicine.org/hse/forms/cidexopa/OPAHowToUse.pdf (2014).

Tags

Tıp Sayı 94 Fare karotid arter balon hasarı neointima vasküler hastalık bir hayvan modeli vasküler düz kas hücresi hiperplazisi vasküler duvar yeniden modelleme
Sıçan Karotis Arter Vasküler Balon Yaralanma ve intraluminal İdaresi
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zhang, W., Trebak, M. Vascular… More

Zhang, W., Trebak, M. Vascular Balloon Injury and Intraluminal Administration in Rat Carotid Artery. J. Vis. Exp. (94), e52045, doi:10.3791/52045 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter