Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Osteoclast Derivation fra Mouse Bone Marrow

Published: November 6, 2014 doi: 10.3791/52056
* These authors contributed equally

Summary

Osteoklaster er den primære knogleresorberende celle i kroppen. En evne til at isolere osteoklaster i stort tal har resulteret i betydelige fremskridt i forståelsen af ​​osteoclast biologi. I denne protokol, beskriver vi en metode til isolering, dyrkning og kvantificere osteoklastaktivitet in vitro.

Abstract

Osteoklaster er højt specialiserede celler, der er afledt af monocyt / makrofag afstamning af knoglemarven. Deres enestående evne til at resorbere både organiske og uorganiske matricer af knogle betyder, at de spiller en central rolle i reguleringen af ​​skeletal remodeling. Sammen, osteoblaster og osteoklaster er ansvarlige for den dynamiske kobling proces, der involverer både knogleresorption og knogledannelse optræder sammen for at opretholde den normale skelet i sundhed og sygdom.

Som den primære knogleresorberende celle i kroppen, kan ændringer i osteoklastdifferentiering eller funktion resultere i dybtgående virkninger i kroppen. Sygdomme forbundet med ændret osteoklastfunktion kan variere i alvorlighed fra dødelig neonatal sygdom på grund af manglende dannelse af en marvrummet for hæmatopoiese, mere almindeligvis observeret patologier, såsom osteoporose, hvor overdreven osteoklastisk knogleresorption prædisponerer at bryde formationen.

ENT "> En evne til at isolere osteoklaster i stort tal in vitro har givet mulighed for betydelige fremskridt i forståelsen af knogleremodellering cyklus og har banet vejen for opdagelsen af nye terapeutiske strategier, der bekæmpe disse sygdomme.

Her beskriver vi en protokol til at isolere og dyrke osteoklaster fra mus knoglemarv, der vil give et stort antal osteoklaster.

Introduction

Knogleombygning er dynamisk og omfatter kobling af knogledannelse med knogleresorption 1. Denne stramt reguleret proces er ansvarlig for at vedligeholde skelettet under normal homøostase, og som reaktion på skader og sygdom.

Osteoklaster er unikke, flerkernede celler, der er i stand til at resorbere både de organiske og uorganiske matrixer af knogle. Osteoklaster afledt af monocyt / makrofag afstamning af knoglemarven 2-5. Abnormiteter i funktion eller dannelse af osteoklaster kan resultere i en række kliniske patologier, herunder almindelige tilstande som osteoporose.

Evnen til at generere osteoklaster in vitro har givet mulighed for betydelige fremskridt i vores forståelse af knogle biologi 6. Som følge heraf er nye terapeutiske midler til behandling af begyndende osteoklastlignende sygdomme, der er ansvarlige for væsentlige morbiditet og dødelighed 7 8,9. Knoglehomøostase ændres i en række sygdomme, herunder post-menopausal osteoporose, hvor den øgede osteoklastaktivitet fører til patogene tab af knoglemasse og densitet 10. Med stigende tilgængelighed af transgene murine modeller af human sygdom, er der større mulighed for at dechifrere rolle osteoklaster i human knoglesygdom 11-13.

Mange protokoller for osteoclast dyrkningsteknikker vises i litteraturen, med mange variationer beskrevet 9,12,14. Xing og kolleger beskriver lignende metodologi til protokollen beskrevet nedenfor, i deres beskrivelse af osteoclastogenic analyser fra murine knoglemarvsceller. Dog at frigive knoglemarvsceller efter lang knogle høst, Xing et al. Skylle marvkavitetsareal med α-MEM komplette medier14. Catalfamo undersøger effekten af hyperglykæmi på osteoklastfunktion og beskriver en fremgangsmåde, hvor alle celler tilvejebringes af knoglemarv skylning dyrkes i 24 timer, hvorefter de ikke-adhærente celler kasseres 12, en teknik anvendes også af Boyle et al . 9 Disse tidligere offentliggjorte protokoller nødvendiggør praksis skylning knoglemarven, en kedelig praksis, som også medfører en risiko for en kanylestiklæsion og tab af værdifuld knoglemarv, som man skal skære begge ender af knoglen. Den protokol, som vi beskriver, gennemfører anvendelse af en morter og støder for at isolere osteoklaster, som svarer til fremgangsmåden ifølge makrofag isolation beskrevet af Weischenfeldt et al. 15

Vores erfaring, er imidlertid, at osteoklast isolation og in vitro kultur under anvendelse af tidligere offentliggjorte teknikker resulterer i variable resultater i form af osteoklast-produktion, hvilket ofte resultereri en manglende evne til at dyrke osteoklaster. Derfor har vi udviklet en protokol, der giver mulighed for ensartet isolering af muse knoglemarven til at producere store antal af flerkernede osteoclaster in vitro med et omtrentligt udbytte på 70-80% af cellerne oprindeligt belagt danner makrofager og derefter osteoklaster i nærvær af osteoklast induktion medier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

BEMÆRK: Etisk erklæring: Al forskning, der involverer hvirveldyr blev udført i overensstemmelse protokoller godkendt af Stanford Administrative Panel om Laboratory Animal Care (Aplac).

1. Fremstilling

  1. Tillad 10 ml kommercielt tilgængelig densitetsgradient celleseparation medier (som indeholder polysucrose og natrium diatrizoat, justeret til en densitet på 1,077 g / ml) til at komme til stuetemperatur i en 50 ml konisk rør.
  2. Forbered flowcytometri (FACS) buffer med 1x phosphatpufret saltvand (PBS) og 2% føtalt kalveserum (FCS). Tage en 50 ml prøve og opretholde denne portion ved stuetemperatur til brug under densitetsgradient celleseparation medier trin.
  3. Har en spand is klar til at opretholde isolerede væv og celler i løbet af isolation procedure.

2. Forbered Kultur Medier

  1. Forbered basale medier: MEM (Minimal Essential Medium), uden phenolrødt (500 ml), glutamat (1x), FCS (10x), 10.000 enheder / ml penicillin (1x).
  2. Foretage basale medier med et 0,22 um filter.
  3. Forbered knoglemarv makrofag induktion medier:
    1. Tage 50 ml af de basale medier fremstillet i trin 2.1.
    2. Tilføj Prostaglandin E2 (PGE2, hr 352,465 g / mol) ved 10 -7 M slutkoncentration.
    3. Tilføj makrofag-kolonistimulerende faktor (M-CSF) 10 ng / ml.
    4. Må ikke foretage den endelige løsning af knoglemarv makrofagstimulerende medier.
  4. Forbered osteoclast induktion medier:
    1. Tage 50 ml af de basale medier fremstillet i trin 2.1.
    2. Tilføj Prostaglandin E2 (PGE2, hr 352,465 g / mol) ved 10 -7 M slutkoncentration
    3. Tilføj makrofag-kolonistimulerende faktor (M-CSF) 10 ng / ml.
    4. Tilføj RANKL ved 10 ng / ml.
    5. Må ikke foretage den endelige løsning af osteoclast induktion medier.

3. Bone Marrow Isolation

  1. Aflive en C57BL / 6 musanvendelse af carbondioxid inhalation metode efterfulgt af cervikal dislokation.
    BEMÆRK: Gnavere skal aflives af uddannet personale ved hjælp af passende teknik, udstyr og agenter.
  2. Anbring og fastgør musen på en dissektion bord, og spray med 70% alkohol.
  3. Dissekere ud lårben, skinneben, humeri og rygsøjlen.
    1. Begynd med musen i liggende stilling. Lave et snit lodret langs benet og starte med at dissekere langs længden af ​​femur og tibia ved at dividere bløde vedhæftede væv. Endelig forrykke knogler fra knæet og hofteled at frigøre knogler fuldstændigt fra skelettet.
    2. Fortsætte med at foretage et snit langs længden af ​​den øvre lemmet humerus. Forskubbe humerus ved skulder og albue leddene ved dissekering blødt fastgørelse væv kapsel.
    3. Endelig, vend musen over, således at musen ligger udsat. Lave en incision i huden langs længden af ​​rygsøjlen, i midterlinjen. Overhold paravertebrale blødevæv på hver side af rygsøjlen og incise langs knoglens kant af rygsøjlen, dissekere gennem paravertebrale blød vævsmasse. Ved hjælp af en saks, lave en vandret snit på tværs af rygsøjlen ved bunden af ​​halsen, og ved slutningen af ​​rygsøjlen, umiddelbart proksimalt til halen indsættelse, hvilket frigør rygsøjlen fra udlæg blødt væv.
  4. Når knoglerne høstes holde dem i FACS-buffer på is.
  5. Brug papirlommetørklæder til at rense muskel og blødt væv fra knoglerne.
  6. Anbring de rengjorte knogler i en morter med 3 ml FACS buffer.
  7. Knus knoglerne blidt i morter.
  8. Aspirer off væsken blodplettede og overførsel til en 50 ml konisk rør ved at passere opløsningen gennem en 70 um cellefilter.
  9. Der tilsættes 5 ml FACS buffer til den knuste knogle og knuse yderligere. Igen, fjerne væsken ved hjælp af en pipette og overføres til 50 ml konisk rør gennem en 70 um si.
  10. Typisk knuse knogler TWIce til tre gange i frisk FACS buffer under anvendelse af en morter og støder, hver gang tilsætning af yderligere 5 ml frisk FACS buffer, indtil væsken ikke farves rød.
  11. Centrifugeres knoglemarven opløsning ved 200 xg i 5 minutter ved 4 ° C til opnåelse af en cellepellet.

4. Gradient Adskillelse af knoglemarvsceller

  1. Sug supernatanten og resuspender i 10 ml FACS buffer (holdt ved stuetemperatur).
  2. Tag 50 ml koniske rør indeholdende 10 ml kommercielt tilgængelig densitetsgradient celleseparation medier (RT).
  3. Lag knoglemarven opløsningen på densitetsgradient celleseparation medier. Gør dette langsomt ved hjælp af en elektrisk pipette. Vinkel pipettespidsen mod den indre overflade i nærheden af ​​toppen af ​​den koniske rør og vippe konisk rør til omkring 30 °. Ved hjælp af en langsom hastighed indstilling på pipette forsigtigt udvise knoglemarven løsning for ikke at forstyrre densitetsgradient celleseparation medier.
    BEMÆRK: I sidste ende vil dervære en klar definition mellem de to løsninger (cellulær opløsning og massefyldegradient celleseparation medier opløsning).
  4. Ved hjælp af en RT centrifuge, centrifugeres densitetsgradienten cellesepareringspræparater medier og celle løsning på en afbalanceret centrifuge ved 200 xg i 15 min. Desuden fjerne acceleration og deceleration centrifugen for at sikre tilstrækkelig faseadskillelse ved hjælp af densitet gradient cellesepareringspræparater medier gradient.
  5. Efter centrifugering aspireres off overskyet midterste lag, som indeholder de knoglemarvsceller af interesse.
  6. Overføre disse celler i en ny konisk rør. Der tilsættes 20 ml yderligere FACS buffer (holdt på is) for at vaske cellerne.
  7. Centrifugeres ved 200 xg i 5 minutter ved 4 ° C til opnåelse af en cellepellet.
  8. Resuspender den endelige cellepellet i 1 ml makrofagstimulerende medier for at muliggøre celletælling under anvendelse af et hæmocytometer.

5. celletælling

  1. Tage 10 pi af cellen og blandmed 10 pi trypanblåt. Belastning 10 pi af den resulterende blanding onto et hæmocytometer og opnå celletal per ml opløsning.

6. celledyrkning

  1. Placer 2 ml makrofagstimulerende medier i hver brønd i en 24-brønds plade.
  2. Tilføj 200.000 celler til hver brønd.
    BEMÆRK: Det er vores erfaring, celle-klædningen tæthed er en af de mest afgørende krav til passende in vitro dyrkning af osteoklaster.
  3. Ryst forsigtigt pladen og sted i en regelmæssig inkubator ved 37 ° C.
  4. Du må ikke ændre medierne i 3 dage.
  5. Efter 3 dage i makrofagstimulerende medier, ændres mediet til osteoklast medier.
  6. Herefter ændre mediet dagligt i 5-7 dage, på hvilket tidspunkt bør store flerkernede osteoclaster være synlige på dyrkningspladen.

7. Farvning med tartratresistent sur phosphatase (TRAP)

  1. Efter 5-7 dage in vitro cultur, aspireres medierne fra kulturen godt.
  2. Brøndene vaskes forsigtigt med 1x PBS tre gange.
  3. Fikseres cellerne ved tilsætning af 4% paraformaldehyd-opløsning og henstår i 1 time ved 4 ° C.
  4. I løbet af denne tid, forberede TRAP farvning (som er kommercielt tilgængelig) ved præ-opvarmning til 37 ° C.
  5. Efter 1 time i paraformaldehyd, aspirere off paraformaldehyd og vask forsigtigt 3 gange med 1x PBS.
  6. Der tilsættes 1 ml forvarmet TRAP plet i hver brønd i pladen, der skal farves.
  7. Pladen anbringes i en inkubator ved 37 ° C i 1 time, afskærmet fra lys.
  8. Efter 1 time aspireres off TRAP pletten.
  9. Brøndene vaskes 3 gange med forvarmet deioniseret vand.
  10. Kontrastfarve brønden med Gills hematoxylin (PAS) i 1-2 min.
  11. Billede osteoklaster anvender lysfeltmikroskopi.
  12. Vask brøndene med deioniseret vand, indtil en passende farve intensitet af pletten er opnået, typisk når kerner vises blue.

8. Osteoclast Resorption Assay

  1. Bruge en kommercielt tilgængelig 24-brønds polystyren kultur fad, der er præ-belagt med enten knogle substrat eller en uorganisk krystallinsk calciumphosphat coating.
  2. Placer 2 ml makrofagstimulerende medier i hver brønd.
  3. Tilføj 200.000 frisk isolerede knoglemarvsceller opnået ved afslutningen af ​​trin 2 til hver brønd.
  4. Ryst forsigtigt pladen forud for at placere den i en inkubator ved 37 ° C i 3 dage.
  5. På dag 3, ændres mediet til osteoklastdifferentiering medier.
  6. Udføre daglige medieændringer med osteoklastdifferentiering medier i 5-7 dage.

9. Kvantificering af Osteoclast Resorption Activity

  1. Efter 5-7 dages in vitro-dyrkning i osteoklastdifferentiering medier på en mineraliseret substrat, analysere mineraliserede overflade, som beskrevet nedenfor, for at vurdere evnen af osteoklaster til dannelse resorptiom gruber, en indikator for osteoklastaktiviteten.
  2. Aspirer medier fra resorption assaypladen og tilsættes 100 pi 10% blegemiddel til hver brønd.
  3. Inkubere cellerne med 10% blegemiddel i 15 minutter ved stuetemperatur.
  4. Brøndene vaskes 3 gange med destilleret vand.
  5. Aspirere off enhver resterende vand og ryst overskydende vand fra pladen og lad det lufttørre i 3-5 timer.
  6. Counterstain pladen med en kommercielt tilgængelig Von Kossa farvningskit at give mulighed for lettere visualisering af un-resorberet substrat.
  7. Brug lysfeltmikroskopi til at tage billeder af repræsentative dele af den resorberet overflade.
  8. Anvendelse af billedanalyse software, beregne den procentdel af resorberet overflade for at muliggøre kvantificering af osteoklastisk resorptiv aktivitet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Formålet med denne fremgangsmåde var at let isolere et stort antal osteoklaster in vitro, typisk i en uge. Vellykket isolering af et stort antal osteoklaster blev bekræftet under anvendelse tartratresistent sur ​​phosphatase-farvning (figur 1A). Store osteoklaster visualiseres som store lilla celler med flere kerner (typisk ≥ 3 kerner). Anvendelse af denne protokol, er det almindeligt at isolere osteoklaster med så mange som 30 kerner per osteoclast (figur 1B).

Ved hjælp af en mineraliseret overflade anses guldstandarden metode til vurdering af osteoklast resorptiv aktivitet in vitro. Ved anvendelse af denne metode, den procentdel af mineraliseret overflade eller "resorption pits", der har dannet giver mulighed for bestemmelse af osteoklast resorptive kapacitet (figur 2).

_upload / 52.056 / 52056fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Figur 1. (A) tartratresistent sur ​​phosphatase-farvning af dyrkede knoglemarv efter 10 dage i kultur under osteoklast induktive betingelser. Lysfelt mikrograf 10X forstørrelse viser flere store flerkernede osteoclaster, der er TRAP positive (lilla farvning). Et eksempel på en stor, flercellede osteoclast er skitseret med en rød stiplet linje. (B) Bright felt mikrograf 10X forstørrelse viser en stor, flerkernede, TRAP positive osteoklaster. Et eksempel på en kerne i en flercellede osteoclast er vist ved den røde pil. Klik her for at se en større udgave af dette tal.

Figur 2
Figur 2. Bright felt mikrograf 10X forstørrelse viser resorptionsprocesser gruber dannet af osteoklastisk resorption aktivitet. Mineraliserede matrix farves med Von Kossa pletten for at tillade visualisering. Den sorte stiplede linjer skitsere et eksempel på resorberet områder af matrix. Klik her for at se en større udgave af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

En evne til let at isolere og dyrke store antal osteoklaster in vitro har været ansvarlig for at bidrage til at fremme forståelsen af knoglebiologien og osteoklast-medierede sygdomme. Det var identifikationen af RANKL, der fører til dette, da det blev for nylig identificeret som den vigtigste regulator af osteoklastdannelse, differentiering og overlevelse 16-18.

Det har været vores erfaring, at in vitro dyrkning af osteoklaster fra knoglemarv er i vid udstrækning afhængig af podningstæthed. Vi observerede, at svigt af denne protokol til at give osteoklaster er typisk på grund af en suboptimal podningstæthed når plating knoglemarvafledte celler. Således i denne protokol, anbefales det at frø 200.000 celler pr plade med 24 brønde godt. For at opnå maksimal succes med denne teknik, anbefales det desuden, at forberede osteoklast induktion medier netop som beskrevet ovenfor og til at ændre mediet på same tidspunkt hver dag, efter de første tre dage, når man ikke behøver at forstyrre dyrkningspladerne. Dette kan give en konstant koncentration af osteoklast induktion medier faktorer. Desuden har vi fundet, at anvendelsen af ​​specifikke reagenser giver også større potentiale for dyrkning af et stort antal flerkernede osteoclaster.

Denne teknik er begrænset af tilgængeligheden af ​​en RT centrifuge, hvor man kan ændre acceleration og deceleration parametre og indkøb af specifikke reagenser. Det er ellers en meget enkel protokol, som vi har haft meget succes i en række mus med forskellig alder og genetiske baggrund (f.eks C57BL / 6, CD1, NOD SCID, Lep db - / -).

Denne teknik giver en pålidelig metode til at generere osteoklaster in vitro og for at bestemme deres evne til at resorbere mineraliseret matrix. Ved hjælp af denne protokol, er det muligt at isolere et stort antal flerkernede osteoclaster i vi troo typisk i en uge. Vores erfaring er, at osteoklast isolation og in vitro kultur under anvendelse af tidligere offentliggjorte teknikker resulterer i meget varierende resultater i form af osteoclast produktion, hvilket ofte resulterer i en manglende evne til at dyrke osteoklaster 9,12,14.

Osteoklastfunktion er kompleks og knogleresorption er en meget orkestreret proces, der medieres på lokalt plan ved cross-talk mellem osteoblaster og osteoklaster 19. Ud til lokal styring af knogle balance, nye beviser tyder på, at osteoklastaktivitet styres systemisk ved faktorer relateret til immun, neuronal og andre systematiske faktorer 20-24.

Da forståelsen af osteoclast biologi fortsætter med at gøre hurtige fremskridt, herunder deres forskelligartede rolle i processer, der spænder fra knogleremodellering til deres rolle i reguleringen af kræft metastaser til knogler 25-27, vil denne protokol forskerne mulighed for at beståladende isolere store mængder af osteoklaster in vitro.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen af ​​forfatterne har videregivelse eller interessekonflikt at erklære.

Acknowledgments

Vi anerkender støtten fra NIH tilskud R01 DE021683, R01 DE019434, U01 HL099776, The Oak Foundation og Hagey Laboratorium for Pediatric regenerativ medicin.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
MEM, no glutamine, no phenol red Gibco 51200-038
M-CSF, recombinant mouse Gibco PMC2044
Recombinant Mouse TRANCE/RANK L/TNFSF11 (E. coli expressed) R&D Systems 462-TEC-010
Prostaglandin E2 Sigma-Aldrich
Histopaque-1077 Sigma-Aldrich 10771
Acid Phosphatase, Lekocyte (TRAP) kit Sigma-Aldrich 387A
Osteoassay bone resorption plates, 24 well plates Corning Life Sciences 3987

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sims, N. A., Martin, T. J. Coupling the activities of bone formation and resorption: a multitude of signals within the basic multicellular unit. BoneKEy reports. 3, 481 (2014).
  2. Kahn, A. J., Simmons, D. J. Investigation of cell lineage in bone using a chimaera of chick and quial embryonic tissue. Nature. 258, 325-327 (1975).
  3. Walker, D. G. Bone resorption restored in osteopetrotic mice by transplants of normal bone marrow and spleen cells. Science. 190, 784-785 (1975).
  4. Burger, E. H., et al. In vitro formation of osteoclasts from long-term cultures of bone marrow mononuclear phagocytes. The Journal of experimental medicine. 156, 1604-1614 (1982).
  5. Underwood, J. C. From where comes the osteoclast. The Journal of pathology. 144, 225-226 (1984).
  6. Lacey, D. L., et al. Bench to bedside: elucidation of the OPG-RANK-RANKL pathway and the development of denosumab. Nature reviews. Drug discovery. 11, 401-419 (2012).
  7. Brown, J. E., Coleman, R. E. Denosumab in patients with cancer-a surgical strike against the osteoclast. Nature reviews. Clinical oncology. 9, 110-118 (2012).
  8. Khosla, S. Minireview: the OPG/RANKL/RANK system. Endocrinology. 142, 5050-5055 (2001).
  9. Boyle, D. L., et al. Differential roles of MAPK kinases MKK3 and MKK6 in osteoclastogenesis and bone loss. PloS one. 9, (2014).
  10. Hofbauer, L. C., Heufelder, A. E. Role of receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand and osteoprotegerin in bone cell biology. Journal of molecular medicine (Berlin, Germany). 79, 243-253 (2001).
  11. Teramachi, J., et al. Increased IL-6 Expression in Osteoclasts is Necessary but not Sufficient for the Development of Paget's Disease of Bone. Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research. , (2013).
  12. Catalfamo, D. L., et al. Hyperglycemia induced and intrinsic alterations in type 2 diabetes-derived osteoclast function. Oral diseases. 19, 303-312 (2013).
  13. Schueler, J., et al. Intratibial injection of human multiple myeloma cells in NOD/SCID IL-2Rgamma(null) mice mimics human myeloma and serves as a valuable tool for the development of anticancer strategies. PloS one. 8, (2013).
  14. Xing, L., Boyce, B. F. RANKL-Based Osteoclastogenic Assays from Murine Bone Marrow Cells. Methods in molecular biology (Clifton, N.J). 1130, 307-313 (2014).
  15. Weischenfeldt, J., Porse, B. Bone Marrow-Derived Macrophages (BMM): Isolation and Applications. CSH protocols. , (2008).
  16. Yamamoto, Y., et al. Osteoblasts provide a suitable microenvironment for the action of receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand. Endocrinology. 147, 3366-3374 (2006).
  17. Yasuda, H., et al. Osteoclast differentiation factor is a ligand for osteoprotegerin/osteoclastogenesis-inhibitory factor and is identical to TRANCE/RANKL. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95, 3597-3602 (1998).
  18. Lacey, D. L., et al. Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation. Cell. 93, 165-176 (1998).
  19. Teitelbaum, S. L., Ross, F. P. Genetic regulation of osteoclast development and function. Nature reviews. Genetics. 4, 638-649 (2003).
  20. Agas, D., Sabbieti, M. G., Marchetti, L. Endocrine disruptors and bone metabolism. Archives of toxicology. 87, 735-751 (2013).
  21. Manolagas, S. C., O'Brien, C. A., Almeida, M. The role of estrogen and androgen receptors in bone health and disease. Nature Reviews Endocrinology. 9, 699-712 (2013).
  22. Martin, T. J., Udagawa, N. Hormonal regulation of osteoclast function. Trends in endocrinology and metabolism. 9, 6-12 (1998).
  23. Nakamura, T., et al. Estrogen prevents bone loss via estrogen receptor alpha and induction of Fas ligand in osteoclasts. Cell. 130, 811-823 (2007).
  24. Bellido, T., et al. Regulation of interleukin-6, osteoclastogenesis, and bone mass by androgens. The role of the androgen receptor. The Journal of clinical investigation. 95, 2886-2895 (1995).
  25. Roato, I. Interaction among cells of bone, immune system, and solid tumors leads to bone metastases. Clinica., & developmental immunology. 2013, (2013).
  26. Autio, K. A., Morris, M. J. Targeting bone physiology for the treatment of metastatic prostate cancer. Clinical advances in hematolog., & oncology. 11, 134-143 (2013).
  27. Sottnik, J. L., Keller, E. T. Understanding and targeting osteoclastic activity in prostate cancer bone metastases. Current molecular medicine. 13, 626-639 (2013).

Tags

Cellular Biology osteoclast RANKL kultur resorption assay knogleombygning knogleomsætning skelet homøostase
Osteoclast Derivation fra Mouse Bone Marrow
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tevlin, R., McArdle, A., Chan, C. K. More

Tevlin, R., McArdle, A., Chan, C. K. F., Pluvinage, J., Walmsley, G. G., Wearda, T., Marecic, O., Hu, M. S., Paik, K. J., Senarath-Yapa, K., Atashroo, D. A., Zielins, E. R., Wan, D. C., Weissman, I. L., Longaker, M. T. Osteoclast Derivation from Mouse Bone Marrow. J. Vis. Exp. (93), e52056, doi:10.3791/52056 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter